1、細胞生物學實驗2016-031遵守實驗紀律，按時到達實驗室，避免遲到或早退。實驗中途因故需外出時，向老師請假。保持實驗室安靜，禁止大聲喧嘩、打鬧。嚴肅認真地進行實驗，如實做好各項觀察與記錄。實驗過程中要愛護儀器設備，如遇儀器損壞等現象，及時上報。實驗材料、藥品及水、電等要節約，取用時不可過量。取用試劑后，要及時蓋上瓶蓋，取出的藥品或溶液不得倒回瓶內。滴管等不可混用。實驗中注意安全。使用有毒試劑要嚴格按照操作規程。易燃物品遠離火源。嚴禁濕手接觸電源。保持實驗室內清潔整齊。實驗結束后，各組清理自己的實驗臺，將器材清洗后清點數目，擺放整齊。實驗室衛生由課代表安排各組輪流，經老師檢查允許后方可離開。實

2、驗室規則2在仔細觀察的基礎上，選擇典型結構進行描繪，要求真實、準確，注意各部結構的比例關系。用鉛筆繪圖，線條要明確清晰，圖的深淺明暗一律以點的疏密來表示，不得涂陰影或進行其它美術加工。 各部分結構名稱要在一側引直線注明，各引線要平行不得交叉，在圖的下方要注明圖名，放大倍數。每幅圖的大小、位置在紙面上須安排得當并注意紙面的整潔。細胞生物學實驗繪圖方法與要求3實驗一 特殊顯微鏡的使用生命科學學院細胞生物學實驗4右手握住鏡臂，左手托住底座正確取鏡姿勢普通光學顯微鏡家蠶中腸細胞（40）5常見特殊顯微鏡解剖鏡倒置顯微鏡熒光顯微鏡掃描電鏡透射電鏡6藍曼龍的胚胎發育過程倒置相差顯微鏡7TEMOMSEM1m=

3、103mm=106m=109nm分辨極限0.2 m放大倍數1040倍分辨極限0.2 nm放大倍數 數萬倍1mm100m1cm10m1m100nm10nm1nm0.1nm肉眼分辨0.2mm電子顯微鏡掃描隧道顯微鏡光學顯微鏡8掃描隧道顯微鏡用STM拍下的血細胞用STM拍下的DNA9一、暗視野顯微鏡的使用二、熒光相差顯微鏡的使用 了解暗視野顯微鏡、相差顯微鏡和熒光顯微鏡的工作原理和使用方法。實驗目的：實驗內容：101 暗視野顯微鏡根據丁達爾效應原理設計的一種在黑色背景條件下觀察被檢物體的顯微鏡觀察到明場看不到的極其微小的物體最高分辨率可達0.004微米人血細胞（40 ）人血細胞（40 ）111.1

4、原理 丁達爾現象 微粒發光原理1.2 結構特點 使用中央遮光板或暗視野聚光器光源的中央光束被阻擋光線傾斜照射在觀察的標本上，標本遇光發生反射或散射，散射的光線投入物鏡內整個視野是黑暗的。1 暗視野顯微鏡121.3 優缺點 可分辨0.004um以上的微粒的存在和運動 可用以觀察活細胞的結構和細胞內微粒的運動 只能看到物體的存在和運動，不能辨清物體的細微結構1.4 應用 微小粒子、細菌形態、細菌記數，透明標本觀察等。1.5 暗場顯微鏡的要求 要求載玻片和蓋玻片必須無疵痕和灰塵 物鏡前透鏡必須清潔無塵 載玻片和蓋玻片厚度必須絕對符合要求1 暗視野顯微鏡132 熒光相差顯微鏡 人的眼睛只能感覺光波的波

5、長（顏色）和振幅（亮度）的變化。因此難以看到無色透明的活細胞。 相差顯微鏡：把透過標本不同部分的可見光（通過環形光闌形成的環狀入射光）的光程差轉變成振幅差（光強度），從而提高各種結構間的對比度，使各種結構變得清晰可見。用途：主要用于觀察活細胞或不染色的組織切片，有時也可用于觀察缺少反差的染色樣品。2.1 原理及用途相差顯微鏡光路圖14熒光顯微鏡：利用一個高發光效率的點光源，經過濾色系統發出一定波長的光(如紫外光365nm或紫藍光420nm)作為激發光，激發標本內的熒光物質發射出各種不同顏色的熒光后，再通過物鏡和目鏡的放大進行觀察。這樣在強烈的對襯背景下，即使熒光很微弱也易辨認，敏感性高。用途：

6、主要用于細胞結構和功能以及化學成分等的研究。熒光顯微鏡光路原理15什么是熒光？ 物質中的電子吸收光的能量由低能狀態轉變為高能狀態，再回到低能狀態時釋放出的光，是非溫度輻射光冷光。即：物質吸收短波光，發射出長波光。熒光的種類：自發熒光（固有熒光）：生物體中有些化學成分在短波譜線照射下可自發地發出熒光。例如某些種類的維生素(VB6)、生物色素（葉綠素）、彈力纖維等，但顯色效應和顯像效應很微弱。二次熒光（次生熒光）：生物標本用熒光色素處理之后，在短波譜線照射下可以激發出熒光，顯色效應和顯像效應極為強烈。16熒光光源 一般采用超高壓汞燈(50一200W)，它可發出各種波長的光，但每種熒光物質都有一個產

7、生最強熒光的激發光波長，所以需加用激發濾片（一般有紫外、紫色、藍色和綠色激發濾片），僅使一定波長的激發光透過照射到標本上，而將其他光都吸收掉。 每種物質被激發光照射后，在極短時間內發射出較照射波長更長的可見熒光。熒光具有專一性，一般都比激發光弱。17熒光幾乎都較弱，應在較暗的室內進行。打開燈源，超高壓汞燈要預熱515min，待光源穩定，眼睛適應暗室環境后再開始觀察標本。觀察過程中為防止紫外線對眼睛造成損害，應避免直視紫外光源。檢查時間每次以12h為宜，超過90min，超高壓汞燈發光強度逐漸下降，熒光減弱；標本受紫外線照射35min后，熒光也明顯減弱。啟動高壓汞燈后，不得在1 5min內將其關閉

8、，一經關閉，必須待汞燈冷卻后方可再開啟。嚴禁頻繁開閉，2.2 使用方法及注意事項18 熒光顯微鏡照片（微管呈綠色、微絲紅色、核藍色） 目前，熒光顯微鏡更廣泛用于免疫細胞化學研究，即用異硫氰酸（FITC,綠色）或羅丹明（TRITC，紅色）等熒光素標記抗體（一抗或二抗）直接或間接地與細胞內的相應抗原結合，以檢測該抗原的存在與分布。19取洋蔥內表皮細胞制作臨時裝片，在普通顯微鏡、暗視場顯微鏡分別比較觀察。取牙垢涂在滴有生理鹽水的潔凈載玻片上，蓋上蓋玻片，用濾紙條吸去多余水分，制成臨時裝片，用暗視野顯微鏡觀察。取洋蔥內表皮細胞制作臨時裝片，在普通顯微鏡、相差顯微鏡分別比較觀察。制作水綿、羊毛、維生素B6、棉花、青霉素以及花粉粒臨時裝片，先用普通光學顯微鏡觀