1、實(shí)驗(yàn)技術(shù)與方法超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)動(dòng)物組織中26種-受體激動(dòng)劑殘留劉先軍基金項(xiàng)目：湖南衛(wèi)生廳科研項(xiàng)目（B2013-109） 作者簡(jiǎn)介：劉先軍 女 初級(jí)技師 研究方向：獸藥殘留 Email：wodebao002 ，王一紅 ，李幫銳 ，丁力 ，馮家力 ，陳東洋（湖南省疾病預(yù)防控制中心，湖南 長(zhǎng)沙， 410003）摘 要:： 目的 建立超高壓液相色譜-串連串聯(lián)四極桿質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）同時(shí)測(cè)定豬肝、鴨肝中26 種-受體激動(dòng)劑殘留的檢測(cè)方法。方法 樣品經(jīng)三氯乙酸溶液提取，低溫離心后，上清液用MCX 固相萃取柱凈化，Waters ACQUITY UPLCTM BEH C18 色譜柱分離

2、，以甲醇和0.1%甲酸水溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，用UPLC-MS/MS進(jìn)行測(cè)定。，基質(zhì)加標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。結(jié)果 該方法的平均回收率為76.4%115.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于RSD15.0%，方法的定量限為0.10.7 g/kg。結(jié)論 該方法操作簡(jiǎn)單，、靈敏度高，、重現(xiàn)性良好，適用于動(dòng)物性食品中-受體激動(dòng)劑殘留的快速檢測(cè)。關(guān)鍵詞: ：超高壓液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法； ；固相萃??； -受體激動(dòng)劑；肝臟；獸藥殘留；食品安全中圖分類(lèi)號(hào)：R155； 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1004-8456（2015）03-0000-00DOI：10.13590/j.cjfh.2015.03.00收稿日期：2015-0

3、3-26作者簡(jiǎn)介：劉先軍 女 初級(jí)技師 研究方向?yàn)闋I(yíng)養(yǎng)與食品 E-mail：wodebao002具體職稱Determination of 26 -agonists in liver of pigs and ducks using ultra performance liquid chromatography tandem quadrupole mass spectrometryLiu LIU Xian-jun， Wang WANG Yi-hong hong，Li LI Bang-rui rui，Ding DING Li Li，F(xiàn)eng FENG Jia-li ，ChenHEN Dong-yan

4、g(Hunan province Province Center for Disease Prevention and Control, ，Changsha 410003, ，China)Abstract: ：Objective To develop an analytical method for the determination of 26 -agonists in animal liver tissue based on ultra pressure liquid chromatography tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS). Methods

5、 Pig liver and duck liver were extracted using trichloracetic acid solution. Then the extract were purified and enriched by Oasis MCX solid phase extraction cartridges. Target compounds were separated on a Waters ACQUITY UPLCTM BEH C18 column with gradient elution using methanol and water containing

6、 0.1% formic acid. Quantification was performed with matrix-fortified standard calibration. Results Average recoveries of 26 -agonists fortified at three concentrations ranged from 76.4% to 115.4% with relative standard deviation less than 15.0%. The limits of quantitation (LOQ) for the whole method

7、 ranged from 0.1 g/kg to 0.7 g/kg. Conclusion Due to its high sensitivity and good reproducibility, the method is suitable for the determination of target agnoists in animal liver tissue.KEY Key WORDSwords: ：Ultra pressure liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS); )；solidphase ext

8、raction; ；-agonists; ；liver tissue；residue of veterinary drug；food safety-受體激動(dòng)劑( - agonists) 是一類(lèi)人工合成的苯乙醇胺類(lèi)物質(zhì)，可促進(jìn)動(dòng)物肌肉脂肪分解，增加蛋白質(zhì)的合成，上世紀(jì)中葉中期起被廣泛用于獸禽養(yǎng)殖，用其提高酮體的瘦肉率。但是該類(lèi)藥物在動(dòng)物性食品中的殘留會(huì)對(duì)消費(fèi)者造成不同程度的傷害影響，對(duì)于易感人群危害更為嚴(yán)重甚至?xí)＜吧?。我?guó)政府早在1997年就發(fā)文禁止克倫特羅等在飼料和畜牧生產(chǎn)中使用，2002年-受體激動(dòng)劑被列入“食用動(dòng)物禁用獸藥及其他化合物清單”我國(guó)政府早在1997年就將-受體激動(dòng)劑列入“食

9、用動(dòng)物禁用獸藥清單” 11。然而在利益驅(qū)使下，-受體激動(dòng)劑的濫用問(wèn)題仍然比較嚴(yán)重，近年影響最大的是2011年的某品牌發(fā)生的雙匯瘦肉精事件。目前有關(guān)動(dòng)物性食品中-受體激動(dòng)劑的分析方法主要有氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）2-4和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）5-7。GC-MS前者需要衍生化，步驟繁瑣，且不適用多種目標(biāo)物的同時(shí)檢測(cè)。LC-MS/MS法特異性強(qiáng)、靈敏度高，是現(xiàn)階段-受體激動(dòng)劑殘留檢測(cè)的最主要的技術(shù)手段8-11，邵兵SHAO B等9采用LC-MS/MS檢測(cè)了豬肝豬腎組織中的克倫特羅等16種-受體激動(dòng)劑，取得了較好較理想的效果9。，但是，以上報(bào)道的樣品處理程序較為復(fù)雜，一般包括酶

10、解、提取、固相萃?。⊿PE）等過(guò)程，有的使用2種以上不同機(jī)理的SPE小柱，費(fèi)時(shí)費(fèi)力且成本較高。2011年中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部發(fā)布的另一方面禁止在飼料和動(dòng)物飲水中使用的物質(zhì)農(nóng)業(yè)部1519號(hào)公告規(guī)定明確禁止在養(yǎng)殖等環(huán)節(jié)中非法添加班布特羅、齊帕特羅等其它9種-受體激動(dòng)劑，有必要建立更多種-受體激動(dòng)劑的同時(shí)檢測(cè)方法。本文在已有研究的基礎(chǔ)上，簡(jiǎn)化了樣品前處理步驟，采用MCX柱固相萃取和超高壓液相色譜-串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）技術(shù)建立了豬肝、鴨肝中26種-受體激動(dòng)劑同時(shí)檢測(cè)方法，可為市場(chǎng)上出現(xiàn)的新型-受體激動(dòng)劑檢測(cè)提供技術(shù)支撐。1 材料與方法1.1 儀器與試劑ACQUITYTM 超高壓液相色

11、譜儀、Xevo -TQ-S質(zhì)譜儀、Oasis MCX固相萃取（SPE）小柱（6 ml，150 mg）均購(gòu)自美國(guó)Waters（美國(guó)Waters 公司）；，漩渦混合器；，TTL-DC型氮吹儀，IKA高速組織勻漿機(jī)。；Oasis MCX 固相萃?。⊿PE）小柱(6 mL, 150 mg, 美國(guó)Waters 公司)；三氯乙酸為分析純（國(guó)藥集團(tuán)北京化學(xué)試劑公司）；，甲醇（為色譜純，美國(guó)Fisher 公司）； 甲酸(純度為99%, %，F(xiàn)luka)；IKA高速組織勻漿機(jī)26 種-受體激動(dòng)劑：西馬特羅（Cimaterol）、福莫特羅、沙丁胺醇、苯乙醇胺A (Phenylethanolamine A)、班布特

12、羅（Bambuterol）、齊帕特羅購(gòu)自美國(guó)Sigma，（Zilpaterol）、氯丙那林（Clorprenaline）、馬布特羅（Mabuterol）、溴布特羅（Brombuterol）、非諾特羅（Fenoterol）、克倫丙羅（Clenproperol）、妥布特羅(Tulobuterol)、特布它林(Terbutaline)、沙丁胺醇(Albuterol)、福莫特羅(Formoterol)、克倫特羅(Clenbuterol)、萊克多巴胺(Ractopamine,)、苯氧丙酚胺（Isolait）、克倫潘特（Clenpenterol）、克倫異潘特（Clenisopenterol）、馬噴特羅（M

13、apenterol）、利托君（Ritodrine）、丙卡特羅（Procaterol）、吡布特羅（Exirel）、溴代克倫特羅（Bromchlorbuterol）、克倫賽羅（Clencyclohexerol）、異丙喘寧(Metaproterenolmetaproterenol)、塞布特羅（Cimbuterolcimbuterol）購(gòu)自美國(guó)Sigma 或德國(guó)Dr.Ehrenstorfer GmbH哪些是美國(guó)Sigma 公司，哪些是德國(guó)Dr.Ehrenstorfer GmbH純度均均大于等于99%。1.2 方法1.2.1 肝臟樣品及前處理（什么樣品根據(jù)建議添加“肝臟”？）選取豬肝和鴨肝樣品，切塊，去

14、筋膜，經(jīng)高速組織搗碎機(jī)均勻搗碎，分別準(zhǔn)確稱取樣品5.00 g勻漿樣品（勻漿前有何處理？取什么動(dòng)物什么部位或組織？是否去除周?chē)镜龋糜?0 ml離心管內(nèi)，加入10 ml 1%三氯乙酸溶液，超聲提取15 min，取出后冷卻至室溫，再放入冷凍離心機(jī)中，4 10 000 r/min離心10 min；收集上清液，殘?jiān)儆?0 ml 1%三氯乙酸溶液提取一次，10 000 r/min離心10 min；合并上清液以10 000 r/min冷凍離心10 min，待過(guò)固相萃取小柱。MCX柱用6 ml甲醇、6 ml水活化，將上清液過(guò)柱，棄去濾液，依次用6 ml水、6 ml甲醇、6 ml 0.1%甲醇氨溶液淋

15、洗，最后用6 ml 5%甲醇氨洗脫，洗脫液用氮?dú)獯蹈珊螅?.1%甲酸水溶液定容至1.0 ml，漩渦混合1 min，微孔濾膜過(guò)濾，UPLC-MS/MS測(cè)定。1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液的配制：用甲醇分別溶解各種標(biāo)準(zhǔn)品，配制成質(zhì)量濃度為100 mg /L 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，儲(chǔ)存于-18 冰箱中，使用時(shí)根據(jù)需要配成不同質(zhì)量濃度的中間混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。標(biāo)準(zhǔn)工作液臨用前用0.1%甲酸水溶液將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液配制為0.5100.0 g/L 的標(biāo)準(zhǔn)工作液。具體濃度梯度是多少，可以寫(xiě)出來(lái)么1.2.3 檢測(cè)儀器條件色譜條件 ：色譜柱：ACQUITY UPLCTM BEH C18 柱(100 mm2.1 mm, ，1.7 m)

16、； 柱溫：40 ；進(jìn)樣體積：10 Ll；流動(dòng)相A 為含0.1%甲酸的水溶液，流動(dòng)相B 為甲醇；流速為0.35 mLml/min；流動(dòng)相線性梯度洗程序見(jiàn)表1脫：02 min，95%85%A；24 min，85%A70%A；46 min，70%A45%A；68 min，45%A32%A；88 .1 min，32%A95% A。表1 梯度洗脫程序Table 1 Gradient elution program時(shí)間/min流動(dòng)相A/%流動(dòng)相B/%0955285154703064555832688.1955質(zhì)譜條件 ：采用ESI電噴霧電離正離子的離子化模式(ESI+)；質(zhì)譜掃描方式：，進(jìn)行多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(M

17、RM)掃描；，毛細(xì)管電壓：31.5 kV；，源溫度：150 ；，脫溶劑氣溫度：550 ；，脫溶劑氣流量：800 L/h；，碰撞室壓力：3.110-3 mbar。，26種-受體激動(dòng)劑的質(zhì)譜采集參數(shù)見(jiàn)表12。請(qǐng)您核實(shí)錐孔電壓?jiǎn)挝?已核實(shí)是V表1 2 -受體激動(dòng)劑的質(zhì)譜采集參數(shù)Table 1 2 Mass acquisition parameters for -agonists analysis化合化合物Compound保留時(shí)間/minRetention time/min錐孔電壓Conevoltage/V監(jiān)測(cè)定量離子對(duì)Ion transition(m/z)碰撞能量/eV定性離子對(duì)碰撞能量Collis

18、ion energy/EveV吡布特羅Exirel1.952525241.1149.2*241.1122.220241.1122.22030沙丁胺醇Albuterol2.533232240.5148240.5222.5240.5148*1018240.5222.5101810特布他林Terbutaline1.982424226151.7*226125162261251620西馬特羅Cimaterol2.002424220.5202.1*220.5142.712220.5142.71224異丙喘寧Metaproterenol1.973535212.2194.4212.2152.3*1218212

19、.2194.4121812溴布特羅Brombuteol5.793030367.03292.95*367.03211.518367.03211.51830福莫特羅Formoterol5.502828345.1149.1*345.1121.018345.1121.01830溴代克倫特羅Bromchlorbuterol5.512525323249*323168183231681815馬布特羅Mabuterol5.872828311.2237.1*311.229315311.22931512克倫特羅Clenbuteol5.272525277.2203.2*277.225916277.22591610妥

20、布特羅Tulobuterol5.742424227.9171.8227.9153.8*1216227.9171.8121612氯丙那林Clorprenaline5.052020214154*214196.118214196.11812克倫賽羅Clencyclohexerol4.022828319300.9*319202.814319202.81422非諾特羅Fenoterol3.452828304.1134.8*304.110718304.11071818利托君Ritodrine3.672626288121*288270202882702014克倫丙羅Clenproperol3.6526262

21、63.5203263.5245263.5203*1418263.5245141814塞布特羅Cimbuterol2.902424234.2160234.2216.5234.2160*1016234.2216.5101610班布特羅Bambuterol6.104040368.4294.4*368.47218368.4721835苯乙醇胺APhenylethanolamineA6.802020345.2327.2345.2150345.2327.2*2212345.2150221222馬噴特羅Mapenterol6.413030325.6306.9325.6236.9325.6306.9*1812

22、325.6236.9181218萊克多巴胺Ractopamine5.962020302.1284.1*302.1163.712302.1163.71216苯氧丙酚胺Isolait5.962828302284*302150123021501218克倫潘特Clenpenterol6.052828291.2272.9291.2202.7291.2272.9*1612291.2202.7161216丙卡特羅Procaterol6.792020291273.1*291231.115291231.11520克倫異潘特Clenisopenterol6.352020291273*291188152911881

23、520齊帕特羅Zilpaterol2.472424262.1185*262.1244.225262.1244.22510*定量離子(quantification ion )定量離子1.3 樣品前處理稱取5.00g勻漿樣品，置于50 mL 離心管內(nèi)，加入10 mL 1%三氯乙酸溶液，超聲提取15min，取出后冷卻至室溫，再放入冷凍離心機(jī)中，4 10000 r/min 離心10 min。傾出上清液，殘?jiān)儆?0 mL 1%三氯乙酸溶液提取一次，10000 r/min 離心10 min, 合并上清液，用1.0mol/L的NaoH調(diào)上清液pH至4.0，以10000 r/min 冷凍離心10 min，待

24、過(guò)固相萃取小柱。MCX柱用6mL甲醇、6 mL水活化，將上清液過(guò)柱，棄去濾液，依次用6 mL 水、6 mL甲醇、6 mL 0.1%甲醇氨溶液淋洗，最后用6 mL 5%甲醇氨洗脫，洗脫液用氮?dú)獯蹈珊?，?.1%甲酸水溶液定容至1.0 mL，漩渦混合1min，微孔濾膜過(guò)濾，用于UPLC-MS/MS 測(cè)定。2 結(jié)果與討論2.1 提取條件的選擇由于-受體激動(dòng)劑的母核為苯乙胺基團(tuán)，呈弱堿性，因此，在酸性溶液中易于解離提取。文獻(xiàn)幾？文獻(xiàn)報(bào)道已知強(qiáng)酸型蛋白沉淀劑如高氯酸等對(duì)這類(lèi)物質(zhì)提取效果較好，此外，加入適量的有機(jī)溶劑可能會(huì)改善提取效率。基于以上考慮，我們比較了三3種提取液：0.2 mol/L高氯酸、1%三

25、氯乙酸以及70%乙腈（三氯乙酸調(diào)節(jié)使pH=1.0）超聲提取。三3種處理?xiàng)l件進(jìn)行比較，結(jié)果表明用高氯酸提取時(shí)，異丙喘寧、西布特羅和特布它林的回收率均低于20%，苯乙醇胺A的回收率為25%，其余22種目標(biāo)化合物的回收率為42%94%。樣品經(jīng)三氯乙酸提取后過(guò)柱測(cè)定，樣品的回收率則為55%95%，異丙喘寧、西布特羅和特布它林的提取效率與不加三氯乙酸前者相比有明顯改善，且基質(zhì)抑制率有所降低；70%乙腈提取的效果，大部分目標(biāo)藥物的回收率低于50%。部分目標(biāo)藥物在動(dòng)物組織中以葡糖醛酸苷結(jié)合態(tài)存在，如萊克多巴胺12等12，因此樣品要先進(jìn)行水解，使待測(cè)物游離或從組織中釋放以進(jìn)行后續(xù)的提取。常用的水解方法有酶水解

26、、酸水解和堿水解。本研究采用酸解方式，因?yàn)楦呗人?三氯乙酸可以起到水解軛合物的作用，同時(shí)具有較強(qiáng)的蛋白沉淀能力，減少酶水解中酶制劑本身及其水解后的樣品中產(chǎn)生的蛋白類(lèi)物質(zhì)對(duì)目標(biāo)化合物的干擾1313。根據(jù)以上結(jié)果。但是，周煒用萊克多巴胺和沙丁胺醇陽(yáng)性樣品比較了酶解與不酶解效果，結(jié)果表明：兩種處理結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異所以，本實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)采用1%三氯乙酸直接超聲提取的方法，簡(jiǎn)化了操作步驟，節(jié)省了試實(shí)驗(yàn)時(shí)間，能更好地滿足快速確證檢測(cè)的需求。2.2 富集凈化條件的優(yōu)化本實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)采用混合型強(qiáng)陽(yáng)離子交換小柱MCX固相萃取柱對(duì)提取液中的目標(biāo)化合物進(jìn)行富集和凈化。采用標(biāo)準(zhǔn)加入法加標(biāo)法考察了洗脫液中氨水的濃度：。分別配制不

27、同濃度的甲醇-氨水溶液(0.05%、0.10%、0.20%、0.5%、1.0%、2.0%、5.0%和10%)，依次取6 mL ml洗脫已上樣的MCX 柱，結(jié)果表明甲醇氨中氨水的濃度為0.10%時(shí)，沒(méi)有目標(biāo)化合物流出，隨著氨水濃度的增加，目標(biāo)化合物逐漸流出，濃度為5.0%時(shí)所有待測(cè)物均被洗脫下來(lái)，因此將0.10%氨水-甲醇氨溶液前者作確定為淋洗液，5.0%氨水-甲醇氨溶液作后者為洗脫液。2.3 定容試劑的選擇樣品測(cè)定時(shí)，定容液中甲醇的比例會(huì)直接影響到目標(biāo)化合物的色譜峰形及靈敏度14。本實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)分別用甲醇體積含量0%、2%、5%、10%、20%和50%的0.1%甲酸水溶液配制1.0 g/L 的標(biāo)準(zhǔn)

28、溶液進(jìn)行分析，其色譜譜圖結(jié)果顯示定容液為0.1%甲酸水溶液時(shí)峰形及響應(yīng)值最好，加入2%甲醇時(shí)異丙喘寧、吡布特羅和特布他林的峰開(kāi)始前伸和展寬，且出現(xiàn)了與溶劑共流出現(xiàn)象。，所以樣品定容液選為0.1%甲酸水溶液。2.4 方法的準(zhǔn)確性分別稱取豬肝、鴨肝陰性樣品5.00 g，根據(jù)26種藥物的信號(hào)強(qiáng)弱，加入不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)系列，按1.2.1部分進(jìn)行處理后檢測(cè)分析。以定量離子峰面積為縱坐標(biāo)，相應(yīng)藥物濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸分析。兩種基質(zhì)中所有目標(biāo)物在相應(yīng)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)時(shí)均具有較好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r0.99。藥物的方法檢出限(LOD)和定量限(LOQ)分別以最低加標(biāo)濃度試樣中被分析物質(zhì)的定量離子信噪比為

29、3和10時(shí)計(jì)算所得。豬肝中異丙喘寧和克倫潘特的LOQ為0.5 g/kg，非諾特羅和塞布特羅為0.7 g/kg；鴨肝中異丙喘寧和非諾特羅的LOQ分別為0.5和0.25 g/kg，塞布特羅和克倫潘特的LOQ均為0.7 g/kg，其余22種目標(biāo)物在這兩種基質(zhì)中的LOQ均為0.1 g/kg。設(shè)置3個(gè)加標(biāo)水平1、2、5 g/kg考察方法的準(zhǔn)確性和精密度，每個(gè)濃度水平重復(fù)6次。3個(gè)加標(biāo)水平下，豬肝和鴨肝中26種-受體激動(dòng)劑類(lèi)藥物的平均回收率為76.4%115.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為4.3%14.7%，滿足國(guó)際上動(dòng)物性食品中獸藥殘留檢測(cè)的要求，見(jiàn)圖1，表3、4。 SHAPE * MERGEFORMA

30、T 注：26張色譜圖的橫坐標(biāo)均為t/min，縱坐標(biāo)均為相對(duì)豐度（%） 圖1 加標(biāo)豬肝樣品色譜圖(加標(biāo)濃度為2.0 g/kg)Fig. ure 1 UPLC-MS/MS chromatograms of 26 -agonists in a spiked liver sample2.4 線性范圍、回收率、精密度及檢出限分別稱取豬肝、鴨肝陰性樣品5.00g，根據(jù)26種藥物的信號(hào)強(qiáng)弱，加入不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)系列，按“1. 3樣品前處理”進(jìn)行處理后上機(jī)分析。以定量離子峰面積為縱坐標(biāo)，相應(yīng)藥物濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸分析。表2給出了26種 -受體激動(dòng)劑的線性范圍和定量限，兩種基質(zhì)中所有目標(biāo)物在相應(yīng)質(zhì)量濃度

31、范圍內(nèi)時(shí)均具有較好的線性關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)大于0.99。藥物的方法檢出限(LOD)和定量限(LOQ)分別以最低加標(biāo)濃度試樣中被分析物質(zhì)的定量離子信噪比為3和10 時(shí)計(jì)算所得。豬肝中異丙喘寧和克倫潘特的LOQ為0.5 g/kg，非諾特羅和塞布特羅為0.7 g/kg；鴨肝中異丙喘寧和非諾特羅的LOQ分別為0.5 g/kg 和0.25 g/kg，塞布特羅和克倫潘特的LOQ均為0.7 g/kg，其余22種目標(biāo)物在這兩種基質(zhì)中的LOQ均為0.1 g/kg。設(shè)置三個(gè)加標(biāo)水平1、2、5 g/kg 考察方法的準(zhǔn)確性和精密度，每個(gè)濃度水平重復(fù)6次。圖1 給出了加標(biāo)濃度為2.0 g/kg 時(shí)豬肝樣品的LC-MS/M

32、S 譜圖。26種目標(biāo)藥物的回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)見(jiàn)表3。三個(gè)加標(biāo)水平下，豬肝和鴨肝中26種-受體激動(dòng)劑類(lèi)藥物的平均回收率為76.4%115.4%, 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.3%14.7%，滿足國(guó)際上動(dòng)物性食品中獸藥殘留檢測(cè)的要求。表23 26種-受體激動(dòng)劑在豬肝、鴨肝中的26種-受體激動(dòng)劑定量限、線性范圍和相關(guān)系數(shù)(r)Table 2 3 Limits of quantification(LOQ )，linear ranges and correlation coefficients (r)of the 26 analytes in liver of pig and duck化合物化合物Co

33、mpound豬肝 Pig liver鴨肝 Duck liver定量限LOQ/ (g/kg)線性范圍Linear range/ (g/kg)r定量限LOQ/ (g/kg)線性范圍Linear range/ (g/kg)r吡布特羅Exirel0.10.1-100.999 20.10.1-100.999 5沙丁胺醇Albuterol0.10.1-100.999 80.10.1-100.999 9特布他林Terbutaline0.10.1-100.990 90.10.1-100.996 5西馬特羅Cimaterol0.10.1-100.999 60.10.1-100.997 2異丙喘寧Metaprot

34、erenol0.50.5-500.992 60.50.5-500.997 7溴布特羅Brombuteol0.10.1-100.999 40.10.1-100.999 1福莫特羅Formoterol0.10.1-100.999 10.10.1-100.999 6溴代克倫特羅Bromchlorbuterol0.10.1-100.996 30.10.1-100.995 8馬布特羅Mabuterol0.10.1-100.999 50.10.1-100.998 6克倫特羅Clenbuteol0.10.1-100.999 80.10.1-100.999 1妥布特羅Tulobuterol0.10.1-100

35、.999 20.10.1-100.999 7氯丙那林Clorprenaline0.10.1-100.999 70.10.1-100.997 9克倫賽羅Clencyclohexerol0.10.1-100.998 90.10.1-100.999 2非諾特羅Fenoterol0.70.7-700.997 8 0.250.25-250.999 4利托君Ritodrine0.10.1-100.999 90.10.1-100.998 1克倫丙羅Clenproperol0.10.1-100.999 50.20.2-200.996 6塞布特羅Cimbuterol0.70.7-700.999 40.70.7-

36、700.998 3班布特羅Bambuterol0.10.1-100.999 60.10.1-100.999 9苯乙醇胺APhenylethanolamineA0.10.1-100.999 10.10.1-100.999 7馬噴特羅Mapenterol0.10.1-100.999 80.10.1-100.999 2萊克多巴胺Ractopamine0.10.1-100.999 30.10.1-100.999 9苯氧丙酚胺Isolait0.10.1-100.999 90.10.1-100.997 8克倫潘特Clenpenterol0.50.5-500.996 70.70.7-700.994 3丙卡特

37、羅Procaterol0.10.1-100.998 10.10.1-100.999 5克倫異潘特Clenisopenterol0.10.1-100.999 20.10.1-100.999 7齊帕特羅Zilpaterol0.10.1-100.999 90.10.1-100.999 8表34 26種-受體激動(dòng)劑在豬肝、鴨肝中26種-受體激動(dòng)劑在經(jīng)過(guò)不同加標(biāo)水平下的加標(biāo)回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（%，n=6）Table 3 4 Recoveries and RSDs of 26 compounds in liver of pig and duck（n=6）化合物Compound豬肝 pig liver/%鴨

38、肝 duck liver/%化合物加標(biāo) spiked 1.0 ug/kg1加標(biāo) spiked 2.0 ug/kg1加標(biāo) spiked 5.0 ug/kg1加標(biāo) spiked 1.0 ug/kg2加標(biāo) spiked 2.0 ug/kg2加標(biāo) spiked 5.0 ug/kg2回收率RecoveryRSD回收率RecoveryRSD回收率RecoveryRSD回收率RecoveryRSD回收率RecoveryRSD回收率RecoveryRSD吡布特羅Exirel85.313.692.811.596.69.481.712.586.47.398.49.6沙丁胺醇Albuterol79.414.786.

39、3 9.489.37.883.59.295.56.891.96.8特布他林Terbutaline88.19.386.410.194.311.378.413.293.39.1100.710.2西馬特羅Cimaterol76.412.181.9 9.786.310.583.77.891.810.588.57.3異丙喘寧Metaproterenol78.914.586.511.396.810.880.69.393.68.495.18.4溴布特羅Brombuteol83.49.790.7 9.695.411.379.68.798.211.0105.46.1福莫特羅Formoterol81.911.29

40、5.412.598.310.885.111.4103.113.4110.89.5溴代克倫特羅Bromchlorbuterol86.713.296.7 8.6105.311.281.58.298.78.6101.87.2馬布特羅Mabuterol81.610.788.3 7.995.712.679.910.392.96.5105.210.4克倫特羅Clenbuteol104.210.698.7 9.4110.611.693.812.1107.311.5115.48.7妥布特羅Tulobuterol82.89.193.510.497.67.586.410.996.89.2103.99.9氯丙那林C

41、lorprenaline79.67.984.9 9.188.96.480.57.587.45.896.45.8克倫賽羅Clencyclohexerol82.413.791.811.396.79.286.711.595.67.9106.911.2非諾特羅Fenoterol77.911.386.913.593.510.882.89.193.610.5108.312.4利托君Ritodrine90.411.396.8 9.7113.58.586.510.897.57.1110.712.1克倫丙羅Clenproperol80.99.493.411.697.97.276.68.585.84.996.38

42、.4塞布特羅Cimbuterol90.310.295.512.5103.89.186.310.5101.710.4108.413.8班布特羅Bambuterol94.29.4101.813.199.37.892.811.6100.87.698.89.6苯乙醇胺APhenylethanolamineA91.68.995.6 8.9106.410.293.15.599.84.3105.66.8馬噴特羅Mapenterol93.77.7106.311.898.56.892.24.8110.28.7103.29.4萊克多巴胺Ractopamine92.19.697.4 6.6105.47.596.67

43、.3107.35.4110.48.6苯氧丙酚胺Isolait108.612.3104.511.599.66.9106.26.7105.88.6110.810.5克倫潘特Clenpenterol90.811.596.8 7.9103.87.6100.19.498.64.8113.76.6丙卡特羅Procaterol79.86.984.6 8.592.77.383.27.192.87.998.48.5克倫異潘特Clenisopenterol94.57.7103.811.4106.37.895.04.8113.310.5101.97.9齊帕特羅Zilpaterol91.68.4102.112.511

44、0.79.595.69.2107.812.1115.210.2注：1表示動(dòng)物組織為豬肝時(shí)用不同加標(biāo)濃度進(jìn)行的加標(biāo)回收試驗(yàn)，2表示動(dòng)物組織為鴨肝時(shí)用不同加標(biāo)濃度進(jìn)行的加標(biāo)回收試驗(yàn)3 結(jié) 論小結(jié)本研究建立了基于1%三氯乙酸水解法對(duì)豬肝鴨肝中-受體激動(dòng)劑殘留的提取，在沉淀蛋白的同時(shí)可減少傳統(tǒng)酶水解法中酶制劑本身及其水解后的樣品中產(chǎn)生的蛋白類(lèi)物質(zhì)對(duì)目標(biāo)化合物的干擾，本研究采用MCX 固相萃取柱濃縮凈化，UPLC-MS/MS法同時(shí)檢測(cè)豬肝、鴨肝中26 種-受體激動(dòng)劑，方法回收率和精密度符合痕量分析的要求，操作簡(jiǎn)便、分析效率高，可用于相關(guān)樣品的日常檢測(cè)及殘留監(jiān)控。參考文獻(xiàn)：1中華人民共和國(guó) 農(nóng)業(yè)部.中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告 第193號(hào) 食品動(dòng)物禁用的獸藥及其它化合物清單(中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部第193號(hào)公告)S. 2002.2 Hernandez-Carrasquilla M. Gas chromatography-mass spectrometry analysis of 2-agonists in bovine retina J . J Anal Chim Acta, ，2000, ，408（1-2）: ：285-290.期？3 甘平順，朱惠揚(yáng)，于鴻，等. GC -MS 法測(cè)定動(dòng)物性食品中15種興奮劑殘留量J .中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志， 2012，22（11）：2544-2549.4 林維宣，