1、1(重慶調研測試)透明質酸酶在臨床上常用作藥物滲透劑，目前主要從動物組織中提取。科研人員嘗試將透明質酸酶基因轉入大腸桿菌，使其得到高效表達。下圖中Nco和Xho為限制酶，重疊延伸PCR是一種定點突變技術。據圖回答下列問題：(1)步驟的目的是為了保護_，PCR的原理是_；PCR擴增的過程是：目的基因DNA受熱變性后解鏈為單鏈，引物與單鏈相應互補序列結合，然后_，如此重復循環。(2)若圖中的透明質酸酶基因來自cDNA文庫，則在進行步驟之前需在其前、后端分別接上特定的_，否則該基因就不能轉錄。步驟需要用_(酶)切割質粒。(3)圖中A是_；早期實驗人員利用大腸桿菌作為受體，后來發現用毛霉或酵母菌作受體

2、更具優勢，從生物體結構角度分析，最可能的原因是_。(4)目的基因導入受體細胞后，是否可以穩定地維持和表達其遺傳特性，只有通過檢測和鑒定才能知道。檢測轉基因生物DNA上是否插入了目的基因的方法是_。解析：(1)分析圖解可知，圖中目的基因的中間存在Nco限制酶的切割位點，因此步驟的目的是為了保護透明質酸酶基因，防止Nco限制酶破壞目的基因；PCR擴增的過程是：目的基因DNA受熱變性后解鏈為單鏈，引物與單鏈相應互補序列結合，然后在DNA聚合酶作用下延伸，如此重復循環。(2)基因表達載體的組成：目的基因啟動子終止子標記基因。啟動子位于目的基因的首端，終止子位于目的基因的尾端，因此在進行步驟之前需在透明

3、質酸酶基因前、后端分別接上特定的啟動子、終止子，否則該基因就不能轉錄。步驟需要用Nco和Xho切割質粒。(3)據圖可知，圖中A是基因表達載體，早期實驗人員利用大腸桿菌作為受體，后來發現用毛霉或酵母菌作受體更具優勢，從生物體結構角度分析，最可能的原因是毛霉或酵母菌是真核細胞，有內質網和高爾基體加工。(4)目的基因導入受體細胞后，是否可以穩定地維持和表達其遺傳特性，只有通過檢測和鑒定才能知道。檢測轉基因生物DNA上是否插入了目的基因的方法是利用目的基因制作成的探針進行DNA分子雜交。答案：(1)透明質酸酶基因，防止Nco限制酶破壞目的基因DNA雙鏈復制在DNA聚合酶作用下延伸(2)啟動子、終止子N

4、co和Xho(3)基因表達載體毛霉或酵母菌是真核細胞，有內質網和高爾基體加工(4)利用目的基因制作成的探針進行DNA分子雜交2(山東、湖北部分重點中學高三模擬)如圖所示為培育二倍體轉基因抗蟲玉米的兩種思路。EcoR、Sma、BamH為限制酶(箭頭所指為酶切位點)。回答下列問題：(1)據圖，獲取目的基因時不能選擇Sma的原因是_。選擇EcoR和BamH的優點是可避免目的基因與質粒_連接。(2)與思路1相比，思路2的最大優點是獲得的轉基因抗蟲玉米_。(3)培育轉基因抗蟲玉米的核心步驟是_，其目的是使目的基因在受體細胞中_。(4)將重組質粒導入受精卵，采用最多的方法是農桿菌轉化法，這跟農桿菌的_有關

5、。(5)操作常用的方法是_。解析：(1)題圖顯示：目的基因中存在Sma的識別位點。若使用Sma切割外源DNA，則會破壞外源DNA中的目的基因的結構，因此獲取目的基因時不能選擇Sma切割。EcoR和BamH的識別位點不同，形成的黏性末端不同，因此選擇EcoR和BamH切割質粒和外源DNA，其優點是可避免目的基因與質粒反向連接。(2)思路1是將重組質粒導入玉米的受精卵中，由該受精卵發育成的植株不一定都是純合子，思路2是將重組質粒導入由花粉經過脫分化形成的愈傷組織中，由該愈傷組織形成的單倍體幼苗2再經過人工誘導，使其染色體加倍，最終得到的玉米株都是純合子。可見，與思路1相比，思路2的最大優點是獲得的

6、轉基因抗蟲玉米都是純合子(或答不發生性狀分離)。(3)培育轉基因抗蟲玉米采用的是基因工程技術，該技術的核心步驟是基因表達載體的構建。構建基因表達載體的目的是：使目的基因在受體細胞中穩定存在并可遺傳給下一代，同時使目的基因能夠表達和發揮作用。(4)農桿菌的Ti質粒上具有TDNA，TDNA可轉移至受體細胞，并整合到受體細胞的染色體上。在培育轉基因植物時，采用最多的方法是農桿菌轉化法，正是利用了農桿菌的Ti質粒上具有的TDNA的這一特點。(5)操作是人工誘導染色體數目加倍，常用的方法是用秋水仙素處理幼苗。答案：(1)它會破壞目的基因的結構反向(2)都是純合子(或答不發生性狀分離)(3)基因表達載體的

7、構建穩定存在并可遺傳給下一代，同時使目的基因能夠表達和發揮作用(4)Ti質粒上具有TDNA(5)用秋水仙素處理幼苗3(遼寧大連渤海中學模擬)人類的遺傳性疾病是很難用一般藥物進行治療的，基因工程的興起迎來了基因治療的曙光，SCID是一種重癥聯合免疫缺陷病，病因是人細胞的一個常染色體上編碼腺苷酸脫氨酸(簡稱ADA)的基因(ada)發生了突變。下圖為對SCID患者進行基因治療的步驟，據圖分析回答下列問題：(1)若圖中細菌為人類基因文庫的受體菌，則由該基因文庫中獲取ada基因時，一般要根據ada基因的有關信息，如：基因的核苷酸序列、基因的_、基因在_上的位置，以及基因的轉錄或翻譯產物；SCID患者出現

8、病癥的根本原因是_。(2)逆轉錄病毒在基因治療中充當_(工具)，其行使功能是利用病毒_的特性。(3)若乙來自脾臟，則乙最可能是有缺陷的_細胞；過程為_。(4)基因治療的方法除上圖所示外，還有_；其中，操作復雜，但效果較為可靠的是_。解析：(1)由該基因文庫中獲取目的基因時，一般要根據目的基因的有關信息，如：基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色體上的位置、基因的轉錄產物mRNA，以及基因的表達產物蛋白質等；由題干信息可知，SCID患者出現病癥的根本原因是ada基因發生了突變。(2)由圖可知，逆轉錄病毒相當于基因工程中的工具運載體，利用了病毒能侵染宿主細胞的特性。(3)由于SCID屬于免疫缺陷

9、病，需要進行基因治療的應該是免疫細胞，因此，乙可能是有缺陷的T淋巴細胞；過程代表2個細胞生成4個細胞的過程，即細胞增殖的過程。(4)基因治療的方法包括：體外基因治療和體內基因治療，題圖所示的是體外基因治療；兩種方法相比，體外基因治療雖然操作復雜，但效果較為可靠。答案：(1)功能染色體ada基因發生突變(無正常的ada基因)(2)運載體侵染宿主細胞(3)T淋巴細胞增殖(或有絲分裂)(4)體內基因治療體外基因治療4(黑龍江哈爾濱三中模擬)草莓是無性繁殖的作物，感染的病毒很容易傳播給后代，病毒在作物體內逐年積累，就會導致產量變低，品質變差。可以利用細胞工程培育脫毒草莓或利用基因工程培育抗病毒草莓。回

10、答下列問題：(1)為了獲得脫毒草莓，外植體往往取自植物分生區附近(如莖尖)，其原因是_。利用植物組織培養，能獲得試管苗，其原理是細胞具有全能性，細胞具有全能性的原因是_。(2)植物組織培養過程中可出現不同的結果，這些結果的出現主要與培養基中兩種激素有關，這兩種激素是_；在培養形成完整新植株過程中，對這兩種激素的調控關鍵是_。(3)構建的基因表達載體除了含有標記基因外，還必須有_。草莓是雙子葉植物，將目的基因導入受體細胞采用最多的方法是_。(4)要檢測轉基因生物的DNA上是否插入了目的基因，檢測方法是_。用_作為探針與草莓基因組DNA雜交，如果_，就表明目的基因已插入染色體DNA中。解析：(1)

11、植物分生區附近的病毒極少，甚至無病毒，因此為了獲得脫毒草莓，外植體往往取自植物分生區附近。草莓細胞具有全能性的原因是：具有草莓全部遺傳信息。(2)植物組織培養過程中，培養基中生長素和細胞分裂素的用量比例不同，可出現不同的結果。當生長素和細胞分裂素用量的比值低時，有利于芽的分化、抑制根的形成，高時，有利于根的分化、抑制芽的形成，比例適中時促進愈傷組織生長；可見，在培養形成完整新植株過程中，對這兩種激素的調控關鍵是：恰當調控好不同的培養期培養基中生長素與細胞分裂素的濃度和比例。(3)構建的基因表達載體除了含有標記基因外，還必須有啟動子、終止子、目的基因。草莓是雙子葉植物，將目的基因導入受體細胞采用

12、最多的方法是農桿菌轉化法。(4)要檢測轉基因生物的DNA上是否插入了目的基因，可采用DNA分子雜交技術進行檢測。用放射性同位素標記的目的基因作為探針與草莓基因組DNA雜交，如果顯示出雜交帶，就表明目的基因已插入染色體DNA中。答案：(1)分生區附近的病毒極少，甚至無病毒具有草莓全部遺傳信息(2)生長素和細胞分裂素恰當調控好不同的培養期培養基中生長素與細胞分裂素的濃度和比例(3)啟動子、終止子、目的基因農桿菌轉化法(4)DNA分子雜交技術放射性同位素標記的目的基因顯示出雜交帶5(安徽淮南二中期中)請根據單克隆抗體的制備過程回答下列問題：(1)單克隆抗體技術是_技術中最重要的用途。將特定的抗原注入

13、小鼠體內，其目的是使小鼠產生_細胞。(2)單克隆抗體的化學本質是_；合成與分泌單克隆抗體涉及的細胞器是_、_、_、_。(3)骨髓瘤細胞與某些淋巴細胞混合在一起，細胞融合完成后，在培養基中有_種兩兩融合的細胞，融合的方法除了電激外，還可以用化學誘導劑_或滅活的_處理。解析：(1)單克隆抗體技術是動物細胞融合技術中最重要的用途。將特定的抗原注入小鼠體內，其目的是使小鼠產生漿細胞。(2)單克隆抗體的化學本質是蛋白質，屬于分泌蛋白，合成與分泌單克隆抗體涉及的細胞器是核糖體、內質網、高爾基體、線粒體。(3)骨髓瘤細胞與某些淋巴細胞混合在一起，細胞融合完成后，在培養基中有三種兩兩融合的細胞，分別是瘤瘤細胞

14、，BB細胞，瘤B細胞。動物細胞融合的方法除了電激外，還可以用化學誘導劑聚乙二醇(PEG)或滅活的病毒處理。答案：(1)動物細胞融合漿(2)球蛋白(或蛋白質)核糖體內質網高爾基體線粒體(3)三聚乙二醇(PEG)病毒6(福建福州高三模擬)在畜牧業中，為了生產的需要，利用胚胎工程擴大畜群數量，需要對移植的胚胎進行性別鑒定。請根據所學知識，回答下列問題：(1)對移植的胚胎進行性別鑒定，最好選擇被測胚胎_(填寫相關的胚胎時期及部位)為材料，這樣選材的好處是_。(2)可對材料進行細胞的核型分析，通過觀察_判斷其性別。(3)目前最有應用前景的方法是SRYPCR法，SRY基因是位于Y染色體上的性別決定基因。進

15、行鑒定時，首先要提取_作為模板，根據_合成引物，進行PCR擴增。擴增產物可以用_技術進行檢測，出現陽性反應者，胚胎為雄性，反之為雌性。(4)在PCR的引物設計中，要注意引物長度不宜過短，主要原因是_，引物中GC的含量相差不宜過大，否則會影響_的溫度設置。解析：(1)胚胎工程中一般取囊胚期的滋養層細胞，這種選材方法不損傷內細胞團，減少對胚胎發育的影響，也不會破壞胚胎。(2)XY型性別決定的雌性個體的性染色體組成是XX，雄性個體的性染色體組成是XY，因此可對材料進行細胞的核型分析，通過觀察性染色體的大小與形態判斷其性別。(3)用SRYPCR法鑒定胚胎性別需要充足的材料并保證被測胚胎的活性，因此首先

16、從被測胚胎細胞中提取DNA，以此DNA作為模板，然后根據SRY基因的一段脫氧核苷酸序列合成引物，進行PCR擴增。擴增產物可以用DNA分子雜交技術進行檢測。出現陽性反應者，胚胎為雄性，反之為雌性。(4)引物序列過短，導致其特異性差，不能保證其與模板的特定部位結合，因此在PCR的引物設計中，要注意引物長度不宜過短。引物中GC的含量相差不宜過大，否則會影響退火(或者復性)的溫度設置。答案：(1)囊胚期的滋養層細胞不損傷內細胞團，減少對胚胎發育的影響(2)Y(或者性)染色體的大小和形態(3)被測胚胎細胞的DNASRY基因的一段堿基序列DNA分子雜交(4)引物序列過短，導致其特異性差，不能保證其與模板的

17、特定部位結合退火(或者復性)7珠江三角洲的“桑基魚塘”一個水陸交換的人工生態系統，成就了當地的富饒，其具體模式如下圖所示。請回答下列有關問題：(1)相對于一般的農業生態系統而言，此生態系統能提高經濟效益，主要原因是充分利用了_中的能量，形成“無廢棄物農業”，這主要是遵循生態工程的_原理。通過飼養家畜、池塘養魚、桑葉養蠶，提高農民經濟收入，使保護環境和發展經濟相互協調，主要體現了生態工程的_原理。(2)通過基因工程提高傳統生態工程的效益，將人干擾素基因導入家蠶細胞并大規模培養，可以提取干擾素用于制藥。此過程需要的工具酶是_，可通過_技術將目的基因導入家蠶的受精卵中，若要檢測目的基因是否表達出相應

18、的蛋白質，則可以用抗原抗體雜交技術進行檢測，其依據的原理是_。(3)采用胚胎移植技術大量繁殖良種豬時，常用_激素對母豬做超數排卵處理。在進行早期胚胎移植時，必需移植到同種的、_的其他雌性動物子宮中，才可能移植成功。解析：(1)相對一般農業生態系統而言，此生態系統能提高經濟效益，主要原因是它充分利用蔗葉、蠶沙等廢物中的能量，實現能量的多級利用，提高能量利用率。該生態系統形成了“無廢棄物農業”，各級“廢棄物”都得到了充分利用，主要是遵循生態工程的物質循環再生原理。通過飼養家畜、池塘養魚、桑葉養蠶，提高農民經濟收入，使保護環境和發展經濟相互協調，主要體現了生態工程的整體性原理。(2)用基因工程將人干

19、擾素基因導入家蠶細胞并大規模培養，可以提取干擾素用于制藥。此過程需要的工具酶是限制性核酸內切酶、DNA連接酶。將目的基因導入受體細胞的方法有很多種，每種方法各有利弊，適用于不同的受體細胞，而將目的基因導入動物細胞采用最多的方法是顯微注射法。檢測目的基因是否表達出相應的蛋白質，從轉基因生物中提取蛋白質，用相應的抗體(對抗體進行同位素標記)進行抗原抗體雜交；如果出現雜交帶，表明目的基因已形成蛋白質產品，其依據的原理是抗原、抗體可特異性結合。(3)在胚胎移植中，需要對供體和受體進行同期發情處理，同時給供體母豬注射促性腺激素，使其超數排卵。在進行早期胚胎移植時，必需移植到同種的、生理狀態相同(或同期發情處理)的其他雌性動物子宮中，才可能移植成功。答案：(1)蔗葉、蠶沙等廢物物質循環再生整體性(2)限制性核酸內切酶、DNA連接酶顯微注射抗原、抗體可特異性結合(3)促性腺生理狀態相同(或同期發情處理)8(東北三省四市教研聯合體高考模擬)2018年1月25日，我國研究人員在世界上率先利用去甲基化酶(Kd4d)的mRNA，經體細胞核移植技術培育出第一批靈長類動物食蟹猴，可作為研究癌癥等人類疾病的動物模型。下圖為體細胞核移植技術培育食蟹猴的操作過程，請回答下列問題：(1)2001年，美國科學家已經培育出胚胎細胞核移植猴。獲得食蟹猴的體細胞核移植技術難度明顯高于胚胎細胞核移植，原因是_。(