1、離心技術(shù)內(nèi)容3離心技術(shù)的原理1離心分離的常用方法2離心機(jī)的種類離心機(jī)的使用與注意事項43離心技術(shù)概念：是利用離心機(jī)的轉(zhuǎn)子高速旋轉(zhuǎn)時產(chǎn)生的強(qiáng)大的離心力，使置于該旋轉(zhuǎn)體中的懸浮顆粒發(fā)生沉降或漂浮，從而使某些顆粒達(dá)到濃縮或與其他顆粒分離的目的。是用于分離、純化細(xì)胞、病毒、蛋白、核酸和酶的最方便最有效的工具。離心力 Centrifugal force (Fc ) 物體作圓周運(yùn)動時形成的一種迫使物體脫離圓周運(yùn)動中心的力。離心技術(shù)基本原理 離心力 Fc = ma = m2r m：為沉降粒子的質(zhì)量: 旋轉(zhuǎn)角速度 r : 旋轉(zhuǎn)體離旋轉(zhuǎn)軸的距離 (rad/sec) n：轉(zhuǎn)子每分鐘的轉(zhuǎn)數(shù)(rpm或r/min)離心

2、技術(shù)基本原理相對離心力relative centrifugal force（RCF） 由于過程在離心中微粒的質(zhì)量往往不需要知道，因此實際應(yīng)用時往往是相對離心力，它代表了離心力與該微粒所受重力的比值。RCF的單位: 重力加速度g （980cm/s2）,或數(shù)字乘“g”來表示。一般情況下低速離心用rpm表示，超速離心則以g表示。離心技術(shù)基本原理沉降系數(shù)sedimentation coefficient（S） 顆粒在單位離心力場中粒子移動的速度。 沉降系數(shù)與顆粒的大小、形狀、密度、介質(zhì)密度和粘度等有關(guān)，用S表示，1S=110-13秒。當(dāng)生物高分子或亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的化學(xué)組成或分子量不了解時，常用沉降系數(shù)來描

3、述其結(jié)構(gòu)特征，如1.6S、23S和70S核蛋白體RNA等。沉降系數(shù)越大，相對分子量越大。離心分離的常用方法-1沉淀離心法：是指介質(zhì)密度約1g/mL，選用一種離心速度，使懸浮溶液中的懸浮顆粒在離心力的作用下完全沉淀下來。 差速離心法：采用不同的離心速度和離心時間，使沉降速度不同的顆粒分步分離的方法。 差速離心法示意圖密度梯度區(qū)帶離心法速率區(qū)帶離心法：具有不同沉降速度的粒子在離心力作用下，各自以一定的速度沉降，離心后不同沉降速度的粒子處于不同的密度梯度層，從而在密度梯度介質(zhì)的不同區(qū)域上形成幾條分開的樣品區(qū)帶的方法。 離心分離的常用方法-2速率區(qū)帶離心法示意圖離心分離的常用方法-3等密度區(qū)帶離心法：

4、當(dāng)不同顆粒存在浮力密度差時，在離心力場下，顆粒或向下沉降，或向上浮起，一直沿梯度移動到它們密度恰好相等的位置上（即等密度點(diǎn)）, 形成幾條不同的區(qū)帶。 等密度區(qū)帶離心法示意圖離心機(jī)的分類-1制備型離心機(jī) 主用于對不同密度，不同形態(tài)的物質(zhì)微粒進(jìn)行分離提純。按轉(zhuǎn)速高低可分為：低速離心機(jī)：最大轉(zhuǎn)速6 000rpm左右，最大相對離心力近6000g。 用途：分離細(xì)胞、細(xì)胞碎片、培養(yǎng)基殘渣及粗結(jié)晶等較大顆粒。高速離心機(jī)：轉(zhuǎn)速最高達(dá)25 000rpm，最大相對離心力為89000g。 用途：分離各種沉淀物、細(xì)胞碎片及較大的細(xì)胞器等。超速離心機(jī)：超速離心機(jī)轉(zhuǎn)速可達(dá)50 00080 000 rpm以上，相對離心力最

5、大可達(dá)510000g。用途：亞細(xì)胞器分級分離，并用于蛋白質(zhì)、核酸分子量的測定等。超速離心機(jī)主要由驅(qū)動和速度控制、溫度控制、真空系統(tǒng)和轉(zhuǎn)頭四部分組成 。分析型離心機(jī)短時間內(nèi)、用少量樣品就能夠確定生物大分子是否存在，其大致的含量，計算生物大分子的沉降系數(shù)，結(jié)合界面擴(kuò)散，估計分子的大小，檢測分子的不均一性及混合物中各組分的比例，測定生物大分子的分子質(zhì)量，還可以檢測生物大分子的構(gòu)象變化等。分析型離心機(jī)都是超速離心機(jī)。離心機(jī)的分類-2離心機(jī)操作步驟準(zhǔn)備、檢查 明確最大轉(zhuǎn)速，需低溫要提前制冷適宜加樣量 約管的2/3體積配平、對稱放置 一定要嚴(yán)格執(zhí)行 離心過程留意觀察、不能隨意打開蓋門離心完畢將轉(zhuǎn)頭和儀器擦干凈 使用完畢后登記儀器使用登記本 離心操作注意事項 及其維護(hù)保養(yǎng) 離心機(jī)如有噪音或機(jī)身振動時，應(yīng)立即切斷電源，即時排除故障。離心管必須對稱放入套管中，防止機(jī)身振動，若只有一支樣品管另外一支要用等質(zhì)量的水代替。啟動離心機(jī)時，應(yīng)蓋上離心機(jī)頂蓋后，方可慢慢啟動