1、驗證文件類另I：清潔驗證案編碼：QJ-YZ001R00頁碼：共17頁第1頁消毒劑消毒效果及使用期的驗證案目錄1 .概述2 .職責3 .驗證容3.1 消毒法及效果的驗證3.1.1 臭氧消毒3.1.1.1 概述3.1.1.2 臭氧消毒原理3.1.1.3 消毒時間確定3.1.1.4 可接受標準3.1.1.5 取樣計劃3.1.1.6 檢驗法3.1.1.7 消毒效果評價3.1.2 甲酚皂消毒劑消毒滅菌法3.1.2.1 原理3.1.2.2 取樣計劃3.1.2.3 檢驗法3.1.2.4 確定可接受限度標準3.1.3 新潔爾滅消毒劑消毒滅菌法3.1.3.1 原理3.1.3.2 取樣計劃3.1.3.3 檢驗法3

2、.1.3.4 確定可接受限度標準3.1.4 消毒劑消毒頻次，消毒劑更換頻次的驗證3.1.4.1 消毒劑消毒頻次的驗證3.1.4.1.1 原理3.1.4.1.2 沉降菌檢測取樣計劃3.1.4.1.3 沉降菌檢測法3.1.4.1.4 表面細菌檢測取樣計劃3.1.4.1.5 表面細菌檢測法3.1.4.1.6 確定可接受限度標準3.1.4.2 消毒劑更換頻次的驗證3.1.4.2.1 原理3.1.4.2.2 沉降菌檢測取樣計劃3.1.4.2.3 沉降菌檢測法3.1.4.2.4 表面細菌檢測取樣計劃3.1.4.2.5 表面細菌檢測法3.1.4.2.6 確定可接受限度標準4 .驗證實施5 .驗證報告1 .概

3、述。1.1 背景。潔凈生產廠房用于D級口服固體制劑、外用制劑、丸劑生產。設備廠房于2002年8月全面完成安裝施工。根據GMP要求，結合生產實際情況，決定于2012年10月2012年6月對其清潔消毒效果進行驗證。1.2 驗證目的。清潔消毒案及效果是否達到標準要求。2 .職責。2.1 驗證領導小組。驗證案的批準，驗證的協調工作，驗證數據及結果的審核，驗證報告的審批,發放驗證證書。2.2 生產部。制訂驗證案，并負責驗證案的實施，收集各項驗證試驗記錄，報驗證領導小組，起草潔凈區清潔消毒操作程序。2.3 質量部。驗證案的審核，按驗證案規定的取樣計劃和標準操作規程進行取樣和實驗，并報告檢驗結果；審核驗證中

4、的評價結論。2.4 工程部。儀器的校正、公用系統、設備監護等項工作提供可靠的服務。3 .驗證容。3.1 消毒法及效果的驗證。3.1.1 臭氧消毒3.1.1.1 概述：臭氧可消滅空氣中的細菌和微生物。在常溫常壓下，分子結構不穩定，很快分解成氧和單個氧原子，單個氧原子具有很強的氧化作用，可破壞細菌部氧化葡萄糖所必須的酶，從而破壞其細胞膜，將細菌和微生物殺死。臭氧通過高頻臭氧發生器來獲得。3.1.1.2 原理：將臭氧發生器通向組合式空調器，通過與空氣接觸發生臭氧而隨空氣流動進入潔凈區，保持一定的時間起到消毒的目的。3.1.1.3 口服制劑、外用劑、丸劑HVAC系統分別設有臭氧消毒功能，來完成潔凈區空

5、間的消毒工作。使用時根據潔凈區消毒后的微生物檢查情況，確定消毒時問及消毒期。3.1.1.4 可接受標準。項目可接受標準總菌落數<10個/皿3.1.1.5 取樣計劃。3.1.1.5.1 取樣地點：應選擇產塵量大、工作人員多的房間。3.1.1.5.2 取樣：每個房間2個培養皿。3.1.1.5.3 取樣時間：按規定時間通進臭氧后，迅速取樣。3.1.1.5.4 取樣部位：在距取樣點地面0.8米水平面上均勻分布，每點設培養皿1個。3.1.1.5.5 取樣點數目。外用劑潔凈區潔凈區域回積m2取樣點（個）稱量室92配液室302灌封室342洗烘瓶室402男二更92女二更92口服制劑潔凈區潔凈區域回積m2

6、取樣點（個）粉碎室182稱量室92濕混制粒室362整粒混合室272壓片室172膠囊填充室332包衣室102男二更92女二更923.1.1.5.6取樣點布置如圖示:在房間部位均勻布置，一次與一次的取樣位置不能重復。3.1.1.5.7 取樣次數：每點一次。3.1.1.5.8 取樣器具應無菌。取樣操作遵循無菌操作法。取樣員應穿無菌服并套上無菌腳套，以防污染。3.1.1.6 檢驗法。將已準備好的肉湯瓊脂培養皿置于取樣點，打開培養皿，使培養基表面暴露0.5h,再蓋上蓋。按照中國藥典（2010年版二部）附錄XIJ微生物限度檢查法項下平皿菌落計數法檢測菌落數。檢驗結果以算術平均值計算。并跟蹤檢驗三個批次。檢

7、驗結果與可接受限度標準相比較，消毒效果達到預期標準并且照射時間最短的時間即為所要選的最佳照射時間。結果計算：C1+C2AxAxx室：為XX室的平均菌落數Cl：為第一取樣點取樣菌落數。C2：為第二取樣點取樣菌落數。3.1.1.7 取樣期：每次消毒后連續取樣10天進行檢測；共計進行三次消毒和取樣。3.1.1.8 結果判定：3.1.1.8.1 消毒效果判定：根據已知的臭氧消毒量、消毒時間，根據取樣檢測的微生物結果，判定消毒效果是否符合標準。3.1.1.8.2 消毒期判定：根據已知的臭氧消毒量、消毒時間，根據取樣檢測的微生物結果，以微生物出現不合格或不合格邊沿線的時間為基準，縮短三天后的時間既定為消毒

8、期。3.1.1.9 消毒效果評價及期確定：根據連續三個期檢測結果，由質量管理部做出臭氧消毒效果評價，并確定消毒期及確認每次消毒時間。3.1.2 甲酚皂消毒劑消毒滅菌法。3.1.2.8 原理。甲酚皂溶液溶于水，呈堿性反應，有除垢作用，并能破壞細菌的細胞膜，導致細胞物質外滲或漏出，從而呈現出抑菌或殺菌作用。其殺菌作用與濃度有著直接的關系。所以通過對甲酚皂消毒液濃度的確認并與規定的可接受限度標準相比較，若在可接受限度標準圍之，則可判定該消毒法的有效性及穩定性。具體法為：在潔凈區指定幾個房間，然后設定3個濃度梯度，分別為1.5%、2.5%、3.5%,按照濃度梯度，配制好相應濃度的甲酚皂溶液。然后用不同

9、濃度的甲酚皂溶液擦拭潔凈區墻壁（指定位置），并在擦拭后的對應位置上分別取樣，做潔凈區房間表面污染試驗。根據試驗結果以及潔凈區最大允微生物濃度限度標準來確認最佳消毒濃度。3.1.2.9 取樣計劃。3.1.2.9.1 取樣地點：應選擇產塵量大、工作人員多的房間。3.1.2.9.2 取樣面積：2inch2/每個棉簽。3.1.2.9.3 取樣時間：用規定濃度的甲酚皂溶液充分擦拭地面，10分鐘后取樣。3.1.2.9.4 取樣部位：地面。3.1.2.9.5 取樣點數目。30萬級潔凈區（液體制劑車間）潔凈區域回積m2取樣點（個）稱量室92配液室302灌封室342洗烘瓶室402男二更92女二更9230萬級潔凈

10、區（固體制劑車間）潔凈區域回積m2取樣點（個）粉碎室182稱量室92制粒室362整粒混合室272壓片室172膠囊填充室332包衣室102男二更92女二更923.1.2.2.6取樣點布置如圖示:在地面上均勻布置。3.1.2.2.7 取樣次數：每點一次。3.1.2.2.8 取樣器具應無菌。取樣操作遵循無菌操作法。3.1.2.3 檢驗法。用滅菌生理鹽水潤濕的滅菌脫脂棉按規定取樣面積充分擦拭取樣部位，然后放入裝有生理鹽水的滅菌容器，充分振搖。按照中國藥典（2000年版二部）附錄XIJ微生物限度檢查法項下平皿菌落計數法檢測浸出液的含菌量即可。并做空白試驗。檢驗結果以算術平均值計算。并跟蹤檢驗三個批次。檢

11、驗結果與可接受限度標準相比較，消毒效果達到預期標準并且消毒濃度最低的濃度即為所要選的最佳消毒濃度。結果計算：C1+C2Ax2Axx室：為XX室的平均菌落數。C1：為第一取樣點取樣菌落數。C2：為第二取樣點取樣菌落數3.1.2.4 確定可接受限度標準。項目可接受標準菌落數<10CFU/inch23.1.2.5 消毒效果及期評價。3.1.3 新潔爾滅消毒劑消毒滅菌法。3.1.3.2 原理。新潔爾滅為陽離子型表面活性劑，能吸附于細胞表面，改變細胞壁的通透性，從而呈現出強大的殺菌作用。其殺菌作用與濃度有著直接的關系。所以通過對新潔爾滅消毒液濃度的確認并與規定的可接受限度標準相比較，若在可接受限度

12、標準圍之，則可判定該消毒法的有效性及穩定性。具體法為：在潔凈區指定幾個房間，然后設定3個濃度梯度，分別為0.05%、0.10%、0.15%,按照濃度梯度，配制好相應濃度的新潔爾滅溶液。然后用不同濃度的新潔爾滅溶液擦拭潔凈區墻壁（指定位置），并在擦拭后的對應位置上分別取樣，做潔凈區房間表面污染試驗。根據試驗結果以及潔凈區最大允微生物濃度限度標準來確認最佳消毒濃度。3.1.3.3 取樣計劃。3.1.3.2.1 取樣地點：應選擇產塵量大、工作人員多的房間。3.1.3.2.2 取樣面積：2inch2/每個棉簽。3.1.3.2.3 取樣時間：用規定濃度的新潔爾滅溶液充分擦拭墻壁，10分鐘后取樣。3.1.

13、3.2.4 取樣部位：墻壁。3.1.3.2.5 取樣點數目。30萬級潔凈區（液體制劑車間）潔凈區域回積m2取樣點（個）稱量室92配液室302灌封室342洗烘瓶室402男二更92女二更9230萬級潔凈區（固體制劑車間）潔凈區域回積m2取樣點（個）粉碎室182稱量室92制粒室362整粒混合室272壓片室172膠囊填充室332包衣室102男二更92女二更923.1.3.2.6取樣點布置如圖示:在墻壁的水平面上均勻布置。3.1.3.2.7 取樣次數：每點一次。3.1.3.2.8 取樣器具應無菌。取樣操作遵循無菌操作法。3.1.3.3 檢驗法。用滅菌生理鹽水潤濕的滅菌脫脂棉按規定取樣面積充分擦拭取樣部位

14、，然后放入裝有生理鹽水的滅菌容器，充分振搖。按照中國藥典（2000年版二部）附錄XIJ微生物限度檢查法項下平皿菌落計數法檢測浸出液的含菌量即可。并做空白試驗。檢驗結果以算術平均值計算。并跟蹤檢驗三個批次。檢驗結果與可接受限度標準相比較，消毒效果達到預期標準并且消毒濃度最低的濃度即為所要選的最佳消毒濃度。結果計算：C1+C2Ax2Axx室：為XX室的平均菌落數。C1：為第一取樣點取樣菌落數。C2：為第二取樣點取樣菌落數。3.1.3.4 確定可接受限度標準：項目可接受標準總菌落數<30CUF/inch23.1.3.5 消毒效果評價。3.2 消毒劑消毒頻次、消毒劑更換頻次的驗證。3.2.3 消

15、毒劑消毒頻次的驗證。3.2.3.2 原理。不同級別的潔凈區有不同等級的潔凈度要求。潔凈度受到人員、環境、設備等諸多因素的影響。潔凈區工作人員每日雖按SOP對潔凈區環境進行全面清潔，但卻不能保證把進入室人員或物品散發的細菌全部殺死或清除出潔凈區。所以潔凈區應定期進行消毒。通過對潔凈區沉降菌及表面污染細菌這兩項指標的跟蹤檢測（一天一次，連續十天），以出現不符合可接受限度標準（一個指標不符合即為不符合）的那一天（dx）為界，統計dx以前的天數，此天數即為消毒劑消毒頻次確定的理論依據，從而判定該消毒頻次確定的有效性及合理性。3.2.3.3 沉降菌檢測取樣計劃。3.2.1.2.1 取樣地點：應選擇產塵量

16、大、工作人員多的房間。3.2.1.2.2 取樣時間：潔凈區凈化空調系統正常運行30分鐘后取樣。3.2.1.2.3 取樣點數目。30萬級潔凈區（液體制劑車間）潔凈區域回積m2取樣點（個）稱量室92配液室302灌封室342洗烘瓶室402男二更92女二更9230萬級潔凈區（固體制劑車間）潔凈區域回積m2取樣點（個）粉碎室182稱量室92濕混制粒室362整粒混合室272壓片室172膠囊填充室332包衣室102男二更92女二更923.2.1.2.4取樣點布置如圖示:3.2.1.2.4.1 取樣點在離地0.8米高的水平面上均勻布置。3.2.1.2.4.2 布置取樣點時，應避開回風口。3.2.1.2.5取樣

17、器具應無菌。取樣操作遵循無菌操作法。3.2.1.3 沉降菌檢測法。3.2.1.3.1 將已準備好的肉湯瓊脂培養皿置于取樣點，打開培養皿蓋，使培養基表面暴露0.5h,再將培養皿蓋蓋上。3.2.1.3.2 全部取樣結束后，將培養皿倒置于30-35C恒溫培養箱中培養48小時。3.2.1.3.3 按中國藥典（2000年版二部）附錄XIJ微生物限度檢查法項下平皿菌落計數法計數。3.2.1.3.4 結果計算：1號培養皿菌落數+2號培養皿菌落數A=2其中A為各個室的平均菌落數。3.2.1.4 表面細菌檢測取樣計劃：3.2.1.4.1 取樣地點：應選擇產塵量大、工作人員多的房間。見4.5項下所列表格。3.2.

18、1.4.2 取樣部位：墻壁。3.2.1.4.3 取樣面積：2inch2/每個棉簽。3.2.1.4.4 取樣時間：潔凈區凈化空調系統正常運行30分鐘后取樣。3.2.1.4.5 取樣點數目。30萬級潔凈區（液體制劑車間）潔凈區域回積m2取樣點（個）稱量室92配液室302灌封室342洗烘瓶室402男二更92女二更9230萬級潔凈區（固體制劑車間）潔凈區域回積m2取樣點（個）粉碎室182稱量室92制粒室362整粒混合室272壓片室172膠囊填充室332包衣室102男二更92女二更923.2.1.4.6取樣點布置如圖示:00在墻壁的水平面上均勻布置。3.2.1.4.7 取樣次數：每點一次。3.2.1.4

19、.8 取樣器具應無菌。取樣操作遵循無菌操作法。3.2.1.5 表面細菌的檢測法。用滅菌生理鹽水潤濕的滅菌脫脂棉按規定取樣面積充分擦拭取樣部位，然后放入裝有生理鹽水的滅菌容器，充分振搖。按照中國藥典（2000年版二部）附錄XIJ微生物限度檢查法項下平皿菌落計數法檢測浸出液的含菌量即可。檢驗結果以算術平均值計算。結果計算：C1+C2Ax2Axx室：為XX室的平均菌落數。C1：為第一取樣點取樣菌落數。C2：為第二取樣點取樣菌落數。3.2.1.6 確定可接受限度標準：項目可接受標準沉降菌<15CFU/皿表面細菌<30CFU/inch23.2.1.7 消毒頻次dx值確定：根據檢測結果，確定消

20、毒劑消毒頻次dx值。3.2.1.8 消毒頻次評價報告。3.2.2消毒劑更換頻次的驗證。3.2.2.1 原理。細菌與其它生物一樣，存在著遺傳與變異。細菌的變異按其本質原因可分為遺傳型變異與非遺傳型變異兩大類型。其中與消毒滅菌有很大關系的就是耐藥性變異。耐藥性變異是指細菌對多藥物（包括消毒劑）是敏感的，但在使用一段時間后，細菌會對該種藥物（包括消毒劑）產生抵抗力，從而影響到療效或者消毒滅菌效果。所以潔凈區使用的消毒劑品種應定期更換，以防耐藥菌株產生。通過使用一種消毒劑（甲酚皂或新潔爾滅溶液）按照SOP要求對潔凈區環境定期消毒（消毒頻次已驗證過），每消毒一次，對潔凈區環境沉降菌與表面細菌這兩項指標就

21、取樣檢測一次。連續消毒檢測幾個期（以為單位，共設定12個時間期，分別為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12）,然后將檢測結果與潔凈區沉降菌、可接受限度標準相比較，以出現不符合可接受限度標準（一項指標不合格即為不合格）的那一個消毒期（Wx）為界，統計Wx以前的消毒期，此期即為消毒劑更換頻次確定的理論依據，從而判定該消毒劑更換頻次確定的有效性及合理性。3.2.2.2 沉降菌檢測取樣計劃。3.2.2.2.1 取樣地點：應選擇產塵量大、工作人員多的房間。3.2.2.2.2 取樣時間：按清潔SOP對各房間全面消毒后取樣。3.2.2.2.3 取樣點數目。30萬級潔凈區（液體制劑車間）潔凈區

22、域回積m2取樣點（個）稱量室92配液室302灌封室342洗烘瓶室402男二更92女二更9230萬級潔凈區（固體制劑車間）潔凈區域回積m2取樣點（個）粉碎室182稱量室92濕混制粒室362干燥整粒混合室272壓片室172膠囊填充室332包衣室102男二更92女二更923.2.2.2.4取樣點布置如圖示:003.2.2.2.4,1取樣點在離地0.8米高的水平面上均勻布置。3.2.2.2.4.2布置取樣點時，應避開回風口。3.2.2.2.5取樣器具應無菌。取樣操作遵循無菌操作法。3.2.2.3 沉降菌檢測法。3.2.2.3.1 將已準備好的肉湯瓊脂培養皿置于取樣點，打開培養皿蓋，使培養基表面暴露0.

23、5h,再將培養皿蓋蓋上。3.2.2.3.2 全部取樣結束后，將培養皿倒置于30-35C恒溫培養箱中培養48小時。3.2.2.3.3 按中國藥典（2000年版二部）附錄XIJ微生物限度檢查法項下平皿菌落計數法計數。3.2.2.3.4 結果計算：1號培養皿菌落數+2號培養皿菌落數A=2其中A為各個室的平均菌落數。3.2.2.4 表面細菌檢測取樣計劃：3.2.2.4.1 取樣地點：應選擇產塵量大、工作人員多的房間。見4.5項下所列表格。3.2.2.4.2 取樣部位：墻壁。3.2.2.4.3 取樣面積：2inch2/每個棉簽3.2.2.4.4 取樣時間：按清潔SOP對各房間全面消毒后取樣。3.2.2.4.5 取樣點數目。30萬級潔凈區（液體制劑