1、低浸透油藏微生物驅(qū)油實(shí)驗(yàn)研討低浸透油藏微生物驅(qū)油實(shí)驗(yàn)研討 指點(diǎn)教師：褚慶忠指點(diǎn)教師：褚慶忠 課題組長(zhǎng)：劉志文課題組長(zhǎng)：劉志文 課題組員：楊震、毛雨涵、蔣志宇課題組員：楊震、毛雨涵、蔣志宇工程研討步驟該工程主要分為兩個(gè)階段： 一、培育細(xì)菌，并挑選出可以耐高溫高壓的產(chǎn)多糖的細(xì)菌，并對(duì)菌種進(jìn)展保藏。對(duì)所得細(xì)菌進(jìn)展探求性研討。 二、利用所挑選出來(lái)的菌種，進(jìn)展生物驅(qū)油實(shí)驗(yàn)。第一階段細(xì)菌的制備與探求性研討 一、研討的根本內(nèi)容，擬處理的主要問(wèn)題 1.研討的根本問(wèn)題 本研討主要從海水中培育以及挑選產(chǎn)多糖的細(xì)菌，經(jīng)過(guò)分別純化，以及菌種的初篩、復(fù)篩、菌種的鑒定，挑選出可以耐高溫高壓的產(chǎn)多糖的細(xì)菌，并對(duì)菌種進(jìn)展保藏

2、。并對(duì)挑選的高溫高壓的產(chǎn)多糖的細(xì)菌進(jìn)展探求研討。 2.擬處理的主要問(wèn)題 經(jīng)過(guò)從海水中挑選富集細(xì)菌，來(lái)挑選出可以耐高溫高壓的產(chǎn)多糖的細(xì)菌，并經(jīng)過(guò)鑒定區(qū)分菌種，并進(jìn)一步探求出挑選出的耐高溫高壓的產(chǎn)多糖的細(xì)菌的運(yùn)用價(jià)值。微生物獲取過(guò)程 微生物的挑選 測(cè)定含糖量，挑選最適微生物。 測(cè)試所選微生物性質(zhì)并記錄。第一階段任務(wù)成果 產(chǎn)多糖菌的初篩 分別從秦皇島淺水灣和燕大食堂下水道污泥中取樣，將樣品經(jīng)過(guò)梯度稀釋后分別涂布于LB固體培育基上，培育2天后察看發(fā)現(xiàn)兩種菌源的平板上都長(zhǎng)滿了菌落，如以以下圖：產(chǎn)多糖菌的復(fù)篩 對(duì)初篩分別的純種菌接種到液體發(fā)酵培育基中，分別對(duì)應(yīng)編號(hào)1-7號(hào)，經(jīng)過(guò)搖床震蕩培育4天，取出1-7

3、號(hào)的錐形瓶，察看發(fā)酵液的粘稠情況和多糖顏色以及沉淀情況。詳細(xì)結(jié)果如右表：編號(hào)顏色沉淀物粘度1無(wú)色無(wú)不粘2淡黃微量不粘3暗紅很多粘稠4淡黃微量微粘5暗紅很多粘稠6淺褐色多粘稠7淡黃微量微粘 仔細(xì)察看菌落團(tuán)中的不同菌落，選定外觀比較粘稠的菌落，經(jīng)過(guò)鏡檢確定各個(gè)菌落的形狀特征，用接種針挑出形狀不一致的細(xì)菌，挑選的菌落多為無(wú)色菌落且在挑取的情況下能構(gòu)成延續(xù)的拉絲，在LB培育基平板上劃線培育，反復(fù)兩次，得到純種。編號(hào)分別為1、2、3、4、5、6、7 如以以下圖：規(guī)范曲線： 苯酚-濃硫酸規(guī)范曲線的制備 取1.9g烘干的分析純葡萄糖溶于1L蒸餾水，制成1.9mg/mL的規(guī)范溶液。然后取規(guī)范溶液1mL、2mL

4、、3mL、4mL、5mL、6mL、7mL、8mL分別稀釋到100mL，制成濃度為19g、38g、57g、76g、95g、114g、133g、152g/mL的溶液，取各溶液0.6mL置于枯燥的干凈試管中，參與50 mg/mL的苯酚溶液1.2 mL，混合均勻，迅速參與6.0 mL濃硫酸，混合均勻，室溫靜置30 min，于波長(zhǎng)490 nm測(cè)定吸光度，蒸餾水作為空白管對(duì)照。以糖濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)得規(guī)范曲線，根據(jù)該曲線可以測(cè)定寡糖或多糖中的糖含量。 待測(cè)樣品多糖的測(cè)定與計(jì)算 分別取1-7號(hào)錐形瓶發(fā)酵液1mL，稀釋100倍，取稀釋液0.6mL，參與50mg/mL的苯酚溶液1.2mL，混合均勻，

5、迅速參與6.0mL濃硫酸，混合均勻，室溫靜置30min，于波長(zhǎng)490nm測(cè)定吸光度，蒸餾水作為空白管。讀出吸光度數(shù)值之后于規(guī)范曲線上即可查出對(duì)應(yīng)的糖濃度。 經(jīng)過(guò)讀數(shù)可得1-7號(hào)稀釋樣品的平均吸光度值依次為0.213、0.408、0.958、0.423、0.882、0.647、0.502。在規(guī)范曲線上查詢可知1-7號(hào)稀釋樣品的葡萄糖濃度分別為31.93、42.38、148.72、45.64、125.75、82.23、52.64g/mL。因此1-7號(hào)發(fā)酵液中的多糖濃度依次為3.29、4.24、14.87、4.56、12.58、8.22、5.26 mg/mL。以下是所用分光光度計(jì)型號(hào)： 由察看可知3

6、號(hào)和5號(hào)顏色最深且發(fā)酵液粘稠，再由以上測(cè)定數(shù)據(jù)可知3號(hào)發(fā)酵液中多糖含量最大，由此可以知道3號(hào)菌株產(chǎn)多糖量最大，最符合實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹＞N初步鑒定 菌種菌落形狀察看 對(duì)經(jīng)過(guò)LB平板挑選到的3號(hào)純種菌株進(jìn)展形狀察看得到如下結(jié)果：工程形態(tài)干濕外表透明度高度黏度顏色邊緣結(jié)果桿狀濕光滑不透明平滑粘稠乳白色 不整齊菌種生理生化特征分析 革蘭氏染色實(shí)驗(yàn) 菌株3號(hào)經(jīng)過(guò)革蘭氏染色后顯微鏡下察看，菌體為桿狀，呈紫色，故為革蘭氏陽(yáng)性菌。如以以下圖： 淀粉水解實(shí)驗(yàn) 將菌株3接種到淀粉水解培育基上，37下培育24 h后，翻開(kāi)平板蓋子，滴入少量盧戈氏碘液，菌苔周?chē)霈F(xiàn)無(wú)色透明圈，所以菌株3的淀粉水解實(shí)驗(yàn)呈陽(yáng)性，能產(chǎn)生胞外淀粉酶

7、。 石蕊牛奶實(shí)驗(yàn) 將菌株3接種到石蕊牛奶培育基中，35下培育36h，試管底部變白，所以菌株3能復(fù)原石蕊。 甲基紅實(shí)驗(yàn) 將菌株3接入到甲基紅培育基中，37下培育48h，參與甲基紅指示劑2滴，培育基變黃，故菌株3的甲基紅實(shí)驗(yàn)呈陰性，葡萄糖作碳源不能產(chǎn)生有機(jī)酸，甲酸、乙酸、乳酸等等。 吲哚實(shí)驗(yàn) 將菌株3接入到蛋白胨水培育基中，37下培育48 h，參與指示劑后，在乙醚和培育基之間沒(méi)有產(chǎn)生紅色環(huán)狀物，故菌株3不產(chǎn)生色氨酸酶，不能產(chǎn)生吲哚，呈陰性。 V-P實(shí)驗(yàn) 將菌株3接入到葡萄糖蛋白胨水培育基中，37下培育48 h，參與指示劑后培育基出現(xiàn)無(wú)紅色景象，故菌株3的V-P實(shí)驗(yàn)呈陰性，不能利用葡萄糖產(chǎn)生非羧酸或

8、中性末端產(chǎn)物。生理生化實(shí)驗(yàn)特征總結(jié)詳細(xì)情況如以以下圖：試驗(yàn)工程結(jié)果實(shí)驗(yàn)工程結(jié)果淀粉水解試驗(yàn)+吲哚試驗(yàn)-石蕊牛奶試驗(yàn)復(fù)原V-P試驗(yàn)-甲基紅試驗(yàn)-第二階段生物驅(qū)油實(shí)驗(yàn) 一、含水率的變化 微生物驅(qū)與水驅(qū)對(duì)比曲線 模擬注水開(kāi)發(fā)后，含水上升較快，含水上升率最高到達(dá)8.43%。施行微生物驅(qū)油期間，油井含水上升明顯減緩，含水上升率延續(xù)7天低于1%，含水上升得到有效的抑制。含水率曲線在微生物驅(qū)油和空氣輔助微生物驅(qū)施行1520天以后，分別出現(xiàn)2個(gè)不同特點(diǎn)的降水“漏斗，與水驅(qū)產(chǎn)生的降水“漏斗相比，微生物驅(qū)出現(xiàn)的降水“漏斗口寬底淺，繼續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，上升緩慢，并且隨著采出程度添加含水上升趨勢(shì)減緩，闡明微生物對(duì)油藏的改善作

9、用較化學(xué)驅(qū)提高采收率方法要溫暖，耐久性較好。 二、剩余油變化 注微生物前后巖心剩余油飽和度對(duì)比 由上圖可以看出，注微生物后巖心的剩余油飽和度比注微生物前明顯減小，分析以為由于微生物代謝產(chǎn)生的生物表活劑具有超低界面張力，潤(rùn)濕角變小，乳化剝落原油，擴(kuò)展涉及體積 當(dāng)向油藏中注入活性水之后，由于表活劑的兩親作用 親水 親油 使油水界面張力降低，超低界面張力減小了油滴經(jīng)過(guò)狹窄孔頸時(shí)的形變功，減少毛細(xì)管阻力，使孔隙介質(zhì)中的油滴從巖石外表拉開(kāi)的形變功大大減小，添加了其在地層孔隙中的挪動(dòng)速度 活性水注入油層后可以乳化剝落原油構(gòu)成小液滴被驅(qū)替液驅(qū)替出來(lái)，隨注入液流向消費(fèi)井，從而提高了原油的采收率?；钚运奈⒘？?/p>

10、以暫時(shí)堵塞一些小的孔道，擴(kuò)展涉及體積。 三、絕對(duì)浸透率的變化 注微生物前后巖心絕對(duì)浸透率對(duì)比 注微生物后巖心的絕對(duì)浸透率變化不大，兩者的差別根本在巖心分析實(shí)驗(yàn)允許的誤差范圍之內(nèi)。注微生物后巖心絕對(duì)浸透率呈現(xiàn)兩種變化趨勢(shì)，注微生物后，3 /5 巖心絕對(duì)浸透率降低，2/5 巖心絕對(duì)浸透率添加。這是由于一方面微生物代謝產(chǎn)生生物表活劑等物質(zhì)，乳化了原油，降低了原油黏度，使油的滲流才干加強(qiáng)，絕對(duì)浸透率添加；另一方面由于微生物在巖石孔壁上的吸附以及在孔喉處的滯留減少了孔隙流動(dòng)空間和流道斷面，妨礙了流體的浸透，使巖心絕對(duì)浸透率減小。這兩方面的要素決議了注微生物后巖心絕對(duì)浸透率的變化特征。當(dāng)前一方面起主導(dǎo)作用時(shí)，注微生物后巖心絕對(duì)浸透率增大；當(dāng)后一方面起主導(dǎo)作用時(shí)，注微生物后巖心絕對(duì)浸透率減??；當(dāng)兩方面作用相近時(shí)，注微生物前后巖心絕對(duì)浸透率變化不大。結(jié)論與認(rèn)識(shí) 1 與注微生物前相對(duì)浸透曲線相比，注微生物后