1、土壤中磷的測(cè)定土壤中磷的測(cè)定本章主要內(nèi)容本章主要內(nèi)容v 概述概述v 土壤全磷的測(cè)定土壤全磷的測(cè)定v 土壤速效磷的測(cè)定土壤速效磷的測(cè)定v 土壤無(wú)機(jī)磷形態(tài)的分級(jí)測(cè)定土壤無(wú)機(jī)磷形態(tài)的分級(jí)測(cè)定v 土壤有機(jī)磷的分離測(cè)定土壤有機(jī)磷的分離測(cè)定學(xué)學(xué) 習(xí)習(xí) 要要 求求v 了解土壤全磷測(cè)定的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法了解土壤全磷測(cè)定的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法v 了解鉬蘭比色法和鉬黃比色法測(cè)定土壤了解鉬蘭比色法和鉬黃比色法測(cè)定土壤有效磷兩種方法各自的優(yōu)缺點(diǎn)。有效磷兩種方法各自的優(yōu)缺點(diǎn)。v 掌握用掌握用0.5mol.L-1NaHCO30.5mol.L-1NaHCO3法測(cè)定土壤速法測(cè)定土壤速效磷的測(cè)定條件、原理、操作步驟及注效磷的測(cè)定條件、原理

2、、操作步驟及注意事項(xiàng)。意事項(xiàng)。5-1 5-1 概述概述 土壤磷的含量、形態(tài)土壤磷的含量、形態(tài) 土壤磷的主要分析項(xiàng)目土壤磷的主要分析項(xiàng)目一、土壤磷的含量和形態(tài)一、土壤磷的含量和形態(tài)u我國(guó)土壤全磷（我國(guó)土壤全磷（P）含量在）含量在0.21.1g/kg范圍內(nèi)，范圍內(nèi)，并有從南到北漸增的地域變化趨勢(shì)。并有從南到北漸增的地域變化趨勢(shì)。u土壤含磷量主要取決于母質(zhì)類型。土壤含磷量主要取決于母質(zhì)類型。u耕地土壤受耕作施肥等人為因素的影響，全磷量耕地土壤受耕作施肥等人為因素的影響，全磷量的局部變異很大。的局部變異很大。土壤磷的形態(tài)可分為土壤磷的形態(tài)可分為無(wú)機(jī)態(tài)無(wú)機(jī)態(tài)磷和磷和有機(jī)態(tài)有機(jī)態(tài)磷兩大類。磷兩大類。1.

3、土壤有機(jī)態(tài)磷土壤有機(jī)態(tài)磷含量變化大，占土壤表層全磷的含量變化大，占土壤表層全磷的2080%。須礦化為無(wú)機(jī)磷后才能被植物吸收利用。須礦化為無(wú)機(jī)磷后才能被植物吸收利用。化學(xué)組成化學(xué)組成目前大部分未知，已知者主要有目前大部分未知，已知者主要有3種。種。u植素類植素類 植酸與鈣、鎂等離子結(jié)合而成。占植酸與鈣、鎂等離子結(jié)合而成。占土壤有機(jī)磷總量的土壤有機(jī)磷總量的2030%。u核酸類核酸類 含磷、氮的復(fù)雜有機(jī)化合物。占土含磷、氮的復(fù)雜有機(jī)化合物。占土壤有機(jī)磷總量的壤有機(jī)磷總量的110%。u磷脂類磷脂類 醇、醚溶性的有機(jī)磷化合物，容易醇、醚溶性的有機(jī)磷化合物，容易分解礦化為磷酸。約占土壤有機(jī)磷總量的分解礦化

4、為磷酸。約占土壤有機(jī)磷總量的1%。2. 土壤無(wú)機(jī)態(tài)磷土壤無(wú)機(jī)態(tài)磷（1）水溶態(tài)磷水溶態(tài)磷 土壤溶液中的磷土壤溶液中的磷包括：磷酸根離子（包括：磷酸根離子（H2PO4-、HPO42-、PO43-）、）、部分聚合態(tài)磷酸鹽和某些有機(jī)磷化合物。部分聚合態(tài)磷酸鹽和某些有機(jī)磷化合物。 土壤溶液土壤溶液pH=7.2時(shí)，時(shí)，H2PO4-和和HPO42-各占一半；各占一半； pH7.2時(shí)，以時(shí)，以H2PO4-為主；為主； pH7.2時(shí)，以時(shí)，以HPO42-為主。為主。水溶性磷離子是植物根系可直接吸收利用的磷。水溶性磷離子是植物根系可直接吸收利用的磷。由于根際微域土壤多呈酸性，主要吸收由于根際微域土壤多呈酸性，主要

5、吸收H2PO4-。（2）吸附態(tài)磷吸附態(tài)磷土壤固相表面吸附的磷酸根離子。土壤固相表面吸附的磷酸根離子。以以專性吸附（配位吸附）專性吸附（配位吸附）為主，還有非專性吸附為主，還有非專性吸附（陰離子交換吸附）。（陰離子交換吸附）。 酸性土中磷的專性吸附劑主要是鐵、鋁氧化物及其酸性土中磷的專性吸附劑主要是鐵、鋁氧化物及其水合物。石灰性土壤的方解石水合物。石灰性土壤的方解石（CaCO3）對(duì)磷的配位對(duì)磷的配位交換吸附亦為常見。交換吸附亦為常見。（3）礦物態(tài)磷礦物態(tài)磷包括含磷的原生礦物、次生礦物及其它含磷化合物。包括含磷的原生礦物、次生礦物及其它含磷化合物。占土壤無(wú)機(jī)態(tài)磷的占土壤無(wú)機(jī)態(tài)磷的99%以上。以上。

6、Ca-P（磷酸鈣鹽）（磷酸鈣鹽） 以磷灰石為主。以磷灰石為主。氟磷灰石氟磷灰石 Ca5(PO4)3F 氫氧磷灰石氫氧磷灰石 Ca5(PO4)3OH 磷酸八鈣磷酸八鈣 Ca8H2(PO4)6 磷酸三鈣磷酸三鈣 Ca3(PO4)2 磷酸二鈣磷酸二鈣 CaHPO4 Fe-P（磷酸鐵鹽）（磷酸鐵鹽） 以粉紅磷鐵礦以粉紅磷鐵礦FePO42H2O為代表為代表Al-P（磷酸鋁鹽）（磷酸鋁鹽） 以磷鋁石以磷鋁石AlPO42H2O為代表為代表O-P（閉蓄態(tài)磷）（閉蓄態(tài)磷） 氧化鐵膠膜包被的磷酸鹽。氧化鐵膠膜包被的磷酸鹽。存在形態(tài)受土壤存在形態(tài)受土壤pH的影響很大的影響很大：l酸性土壤以酸性土壤以Fe-P和和Al

7、-P為主；為主；l石灰性土壤以石灰性土壤以Ca-P為主，且隨為主，且隨Ca/P比的增加，比的增加，磷的溶解度和有效性降低；磷的溶解度和有效性降低；l中性土壤中性土壤Fe-P、Al-P、Ca-P比例相當(dāng)比例相當(dāng)(1:1:1)。我國(guó)幾種土壤的無(wú)機(jī)磷形態(tài)構(gòu)成我國(guó)幾種土壤的無(wú)機(jī)磷形態(tài)構(gòu)成（引自（引自中國(guó)土壤中國(guó)土壤P.379）土土 壤壤pH無(wú)無(wú) 機(jī)機(jī) 磷磷 形形 態(tài)態(tài) 構(gòu)構(gòu) 成成 比比 例例 （%）AlPFePCaPOP褐褐 土土8.08.5 3.46.90.00.561711220黃潮土黃潮土 7.58.5 1.64.10.00.763653135黃棕壤黃棕壤6.07.03.710252713204

8、557紅紅 壤壤 4.55.5 0.35.715261.5165283磚紅壤磚紅壤 4.55.5 0.01.52.5140.95.38494二、土壤磷的主要分析項(xiàng)目二、土壤磷的主要分析項(xiàng)目1. 土壤全磷量土壤全磷量2. 土壤有效磷含量土壤有效磷含量3. 土壤無(wú)機(jī)磷的分級(jí)測(cè)定土壤無(wú)機(jī)磷的分級(jí)測(cè)定4. 土壤有機(jī)磷含量及分組土壤有機(jī)磷含量及分組土壤有效磷土壤有效磷土壤中對(duì)植物有效的那部分磷。土壤中對(duì)植物有效的那部分磷。包括水溶態(tài)磷、部分或全部吸附態(tài)磷和易礦化有效態(tài)有包括水溶態(tài)磷、部分或全部吸附態(tài)磷和易礦化有效態(tài)有機(jī)磷以及某些易溶解的沉淀態(tài)磷酸鹽。機(jī)磷以及某些易溶解的沉淀態(tài)磷酸鹽。土壤有效磷在化學(xué)分析

9、上的意義土壤有效磷在化學(xué)分析上的意義 能與能與32P進(jìn)行同位素交換或被某些化學(xué)試劑提取的磷。進(jìn)行同位素交換或被某些化學(xué)試劑提取的磷。（模擬植物吸收模擬植物吸收，以定量估計(jì)化學(xué)形態(tài)上對(duì)植物有效的，以定量估計(jì)化學(xué)形態(tài)上對(duì)植物有效的磷。）磷。） 其實(shí)，其實(shí)，“有效磷有效磷”的化學(xué)涵義并不確定，因?yàn)橥坏幕瘜W(xué)涵義并不確定，因?yàn)橥煌寥烙貌煌瘜W(xué)試劑提取的土壤用不同化學(xué)試劑提取的“有效磷有效磷”含量差異很大，含量差異很大，由此提出的土壤有效磷的豐缺指標(biāo)也不相同。由此提出的土壤有效磷的豐缺指標(biāo)也不相同。不同方法（提取劑）測(cè)定的土壤有效磷豐不同方法（提取劑）測(cè)定的土壤有效磷豐缺指標(biāo)比較（缺指標(biāo)比較（P，mg

10、/kg）有效磷分級(jí)有效磷分級(jí)碳酸氫鈉法碳酸氫鈉法鹽酸鹽酸-氟化銨法氟化銨法 施磷肥反應(yīng)施磷肥反應(yīng)低低515顯顯 著著中等中等5101524較顯著較顯著較高較高10182430不顯著不顯著高高182530無(wú)無(wú) 效效注意：注意：1. 土壤磷含量的表示方法（土壤磷含量的表示方法（P2O5/2P2.29） 2. 有效磷含量須說(shuō)明測(cè)定方法有效磷含量須說(shuō)明測(cè)定方法全國(guó)各地區(qū)表層土壤速效磷各含量級(jí)的面積全國(guó)各地區(qū)表層土壤速效磷各含量級(jí)的面積5-2 5-2 土壤全磷的測(cè)定土壤全磷的測(cè)定方法概述方法概述HClO4H2SO4消煮消煮鉬銻抗比色法鉬銻抗比色法 NaOH熔融熔融鉬銻抗比色法鉬銻抗比色法 一、方法概述一

11、、方法概述1. 土壤樣品的分解土壤樣品的分解(1) 目的：目的：u使有機(jī)磷氧化成無(wú)機(jī)磷使有機(jī)磷氧化成無(wú)機(jī)磷u(yù)使礦物質(zhì)分解，釋放出難溶性磷使礦物質(zhì)分解，釋放出難溶性磷u(yù)使無(wú)機(jī)磷全部溶解使無(wú)機(jī)磷全部溶解(2) 方法：方法：u堿熔法：堿熔法：Na2CO3、NaOHu強(qiáng)酸消煮法：強(qiáng)酸消煮法：HClO4H2SO4、HFHClO4u干灰化法：高溫灼燒后再用酸浸提干灰化法：高溫灼燒后再用酸浸提 堿熔融法堿熔融法 原理：原理： 土壤硅酸鹽的溶解度決定于硅和金屬元素的比例以及金土壤硅酸鹽的溶解度決定于硅和金屬元素的比例以及金屬元素的堿度。硅和金屬元素的比例愈小，金屬元素的堿屬元素的堿度。硅和金屬元素的比例愈小，

12、金屬元素的堿性愈強(qiáng)，則硅酸鹽的溶解度愈大。性愈強(qiáng)，則硅酸鹽的溶解度愈大。用用Na2CO3 或或NaOH熔化土熔化土樣，即增加樣品中堿金屬的比例，促進(jìn)硅酸鹽的分解，以樣，即增加樣品中堿金屬的比例，促進(jìn)硅酸鹽的分解，以利于各種元素的溶解。利于各種元素的溶解。 特點(diǎn)：特點(diǎn)：樣品分解完全，常作為標(biāo)準(zhǔn)方法。樣品分解完全，常作為標(biāo)準(zhǔn)方法。 Na2CO3熔融法需要昂貴的熔融法需要昂貴的鉑金坩堝鉑金坩堝，操作較繁、費(fèi)時(shí)，操作較繁、費(fèi)時(shí)，但樣品分解完全，是標(biāo)準(zhǔn)方法。但樣品分解完全，是標(biāo)準(zhǔn)方法。 NaOH熔點(diǎn)熔點(diǎn)(321)比比Na2CO3(853)低，可在較低的溫度下低，可在較低的溫度下分解土樣，縮短熔化所需要的

13、時(shí)間。分解土樣，縮短熔化所需要的時(shí)間。NaOH堿熔法可在堿熔法可在銀或銀或鎳坩堝鎳坩堝中分解土壤全磷或全鉀，樣品分解比較完全，操作中分解土壤全磷或全鉀，樣品分解比較完全，操作簡(jiǎn)便，已列為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法。簡(jiǎn)便，已列為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法。HClO4 H2SO4消煮法消煮法 原理：原理： 高氯酸：氧化有機(jī)質(zhì)，分解礦物質(zhì)；高氯酸：氧化有機(jī)質(zhì)，分解礦物質(zhì)； 抑制硅和鐵對(duì)磷的比色測(cè)定的干擾抑制硅和鐵對(duì)磷的比色測(cè)定的干擾 濃硫酸：提高消化溫度；防止溶液蒸干濃硫酸：提高消化溫度；防止溶液蒸干 特點(diǎn)：特點(diǎn)： 操作簡(jiǎn)便，是目前應(yīng)用最普遍的方法。操作簡(jiǎn)便，是目前應(yīng)用最普遍的方法。 分解率分解率(9798%)不及熔融法，但已

14、達(dá)分析要求。不及熔融法，但已達(dá)分析要求。 對(duì)高度分化的土壤對(duì)高度分化的土壤（紅壤、磚紅壤）（紅壤、磚紅壤）或有包裹態(tài)磷灰或有包裹態(tài)磷灰石存在時(shí)，可能提取不完全，使測(cè)定結(jié)果偏低。石存在時(shí)，可能提取不完全，使測(cè)定結(jié)果偏低。 對(duì)有機(jī)質(zhì)含量高的土壤，需注意有機(jī)質(zhì)去除完全。對(duì)有機(jī)質(zhì)含量高的土壤，需注意有機(jī)質(zhì)去除完全。2. 樣品溶液中磷的測(cè)定樣品溶液中磷的測(cè)定正磷酸正磷酸磷鉬雜多酸磷鉬雜多酸鉬酸鉬酸鉬酸銨鉬酸銨磷鉬酸銨磷鉬酸銨 (黃色沉淀黃色沉淀)容量法容量法重量法重量法偏釩酸銨偏釩酸銨磷釩鉬雜多酸磷釩鉬雜多酸（黃色）（黃色）鉬黃比色法鉬黃比色法還原劑還原劑“鉬藍(lán)鉬藍(lán)”（藍(lán)色）（藍(lán)色）鉬藍(lán)比色法鉬藍(lán)比色法

15、 （含磷量（含磷量高高時(shí)）時(shí)）（含磷量（含磷量中等中等時(shí)）時(shí)） （含磷量（含磷量低低時(shí)）時(shí)）鉬藍(lán)比色法鉬藍(lán)比色法（1）原理：）原理：PO43-H3PMo12O40H3PO410MoO3Mo2O5或或H3PO48MoO32Mo2O5還原劑還原劑一定酸度下，溶液中的一定酸度下，溶液中的正磷酸根與鉬酸銨絡(luò)合正磷酸根與鉬酸銨絡(luò)合生成磷鉬雜多酸。生成磷鉬雜多酸。 在還原劑的作用下，在還原劑的作用下，磷鉬雜多酸中的一部磷鉬雜多酸中的一部分分Mo6+被還原為被還原為Mo5+，生成生成 “鉬藍(lán)鉬藍(lán)” 。 藍(lán)色的深淺與溶液中磷酸溶液的濃度成正比，在藍(lán)色的深淺與溶液中磷酸溶液的濃度成正比，在700nm處用分光光度

16、法比色測(cè)定。處用分光光度法比色測(cè)定。 0.40.6mol(H+)/L分光光度法分光光度法(NH4)2MoO4（2）影響因素）影響因素 還原劑的種類：還原劑的種類：l無(wú)機(jī)還原劑：氯化亞錫無(wú)機(jī)還原劑：氯化亞錫（SnCl2）、亞硫酸氫鈉、亞硫酸氫鈉l有機(jī)還原劑：抗壞血酸有機(jī)還原劑：抗壞血酸（Vc）、硫酸聯(lián)氨、硫酸聯(lián)氨、 1, 2, 4-胺基萘酚磺酸胺基萘酚磺酸氯化亞錫氯化亞錫 靈敏度最高，顯色快，但生成的顏色不靈敏度最高，顯色快，但生成的顏色不 穩(wěn)定。常用于土壤速效磷的速測(cè)方法。穩(wěn)定。常用于土壤速效磷的速測(cè)方法。抗壞血酸抗壞血酸 生成的顏色穩(wěn)定，干擾離子的影響小，生成的顏色穩(wěn)定，干擾離子的影響小，

17、適用范圍廣，但顯色慢，需要加溫。適用范圍廣，但顯色慢，需要加溫。 是目前應(yīng)用最廣泛的一種還原劑。是目前應(yīng)用最廣泛的一種還原劑。目前使用最普遍的是目前使用最普遍的是鉬銻抗混合指示劑鉬銻抗混合指示劑。其中含有：其中含有：鉬酸銨鉬酸銨 (NH4)6Mo7O244H2O 與磷酸反應(yīng)與磷酸反應(yīng)酒石酸氧銻鉀酒石酸氧銻鉀 K(SbO)C4H4O6 加快顯色反應(yīng)加快顯色反應(yīng)抗壞血酸抗壞血酸 C6H8O5，Vc 還原劑還原劑硫酸硫酸 H2SO4 提供所需的酸度提供所需的酸度注：銻的存在大大加速了抗壞血酸的還原反應(yīng)，且注：銻的存在大大加速了抗壞血酸的還原反應(yīng)，且在室溫下也能顯色。這是因?yàn)椋轰R與磷鉬酸反應(yīng)生在室溫下

18、也能顯色。這是因?yàn)椋轰R與磷鉬酸反應(yīng)生成磷銻鉬三元雜多酸，抗壞血酸在室溫下就能迅速成磷銻鉬三元雜多酸，抗壞血酸在室溫下就能迅速將磷銻鉬三元雜多酸還原為藍(lán)色的絡(luò)合物。將磷銻鉬三元雜多酸還原為藍(lán)色的絡(luò)合物。 試劑濃度試劑濃度（尤其是酸度）（尤其是酸度）：u鉬酸銨濃度和還原劑用量要適宜，使一定濃鉬酸銨濃度和還原劑用量要適宜，使一定濃度的磷產(chǎn)生最深、最穩(wěn)定的顏色。度的磷產(chǎn)生最深、最穩(wěn)定的顏色。u如果酸度過(guò)低，雖然顯色快，但穩(wěn)定時(shí)間較如果酸度過(guò)低，雖然顯色快，但穩(wěn)定時(shí)間較短；如果酸度過(guò)大，則顯色變慢。因而在用短；如果酸度過(guò)大，則顯色變慢。因而在用鉬藍(lán)比色法測(cè)磷時(shí)，鉬藍(lán)比色法測(cè)磷時(shí)，酸度的控制非常重要酸度的

19、控制非常重要。u不同方法所要求的適宜試劑濃度不同。參照不同方法所要求的適宜試劑濃度不同。參照教材教材PP.73表表5-1中三種鉬藍(lán)法的各種試劑在比中三種鉬藍(lán)法的各種試劑在比色液中的最終濃度。色液中的最終濃度。 特別關(guān)注一下特別關(guān)注一下鉬銻抗體系鉬銻抗體系中各試劑在比色液中的中各試劑在比色液中的最終濃度：顯色酸度最終濃度：顯色酸度 0.35 0.55 molL-1，H+； 鉬酸銨鉬酸銨 1.0 gL-1； 抗壞血酸抗壞血酸 0.81.5 gL-1； 酒石酸氧銻鉀酒石酸氧銻鉀 0.0240.05 gL-1。 鉬銻抗體系是目前使用最普遍的，原因是：鉬銻抗體系是目前使用最普遍的，原因是：u靈敏度較高，

20、接近靈敏度較高，接近SnCl2H2SO4體系；體系；u顯色最穩(wěn)定，顯色的溫度范圍最寬；顯色最穩(wěn)定，顯色的溫度范圍最寬；u受干擾離子的影響小；受干擾離子的影響小；u還原劑與鉬酸銨配成了一種鉬銻抗混合溶液，也就還原劑與鉬酸銨配成了一種鉬銻抗混合溶液，也就是：鉬酸銨是：鉬酸銨酒石酸氧銻鉀酒石酸氧銻鉀抗壞血酸抗壞血酸硫酸混合硫酸混合溶液，一次加入，簡(jiǎn)單方便。溶液，一次加入，簡(jiǎn)單方便。 干擾離子的影響：干擾離子的影響：u Si 硅酸硅酸(H4SiO4) 能與鉬酸結(jié)合生成雜多酸。能與鉬酸結(jié)合生成雜多酸。 干擾的避免：調(diào)節(jié)溶液的酸度。因?yàn)榱足f酸在較干擾的避免：調(diào)節(jié)溶液的酸度。因?yàn)榱足f酸在較高的酸度高的酸度(

21、0.40.6 molL-1, H+)下形成，而硅鉬酸在較下形成，而硅鉬酸在較低的酸度低的酸度(0.10.24 molL-1, H+)下形成。下形成。uAs 砷酸砷酸(H3AsO4) 能與鉬酸結(jié)合生成雜多酸。能與鉬酸結(jié)合生成雜多酸。 干擾的避免：在加鉬酸銨試劑之前先將砷還原成干擾的避免：在加鉬酸銨試劑之前先將砷還原成亞砷酸。（雖然砷的干擾比較難克服，但一般不亞砷酸。（雖然砷的干擾比較難克服，但一般不會(huì)影響土壤磷的測(cè)定結(jié)果。）會(huì)影響土壤磷的測(cè)定結(jié)果。）uFe3+ 影響溶液的氧化還原勢(shì)，抑制藍(lán)色生成。影響溶液的氧化還原勢(shì)，抑制藍(lán)色生成。 干擾的避免：選用抗壞血酸作為還原劑，因?yàn)榭垢蓴_的避免：選用抗壞

22、血酸作為還原劑，因?yàn)榭箟难崮芘c壞血酸能與Fe3+絡(luò)合，保持溶液的氧化還原勢(shì)。絡(luò)合，保持溶液的氧化還原勢(shì)。（用（用SnCl2作還原劑時(shí)，溶液中作還原劑時(shí)，溶液中Fe3+20mgkg-1）二、二、HClO4-H2SO4消煮消煮鉬銻抗比色法鉬銻抗比色法1. 原理原理 在高溫條件下，土壤中含磷礦物及有機(jī)磷化在高溫條件下，土壤中含磷礦物及有機(jī)磷化合物與高沸點(diǎn)的合物與高沸點(diǎn)的H2SO4和強(qiáng)氧化劑和強(qiáng)氧化劑HClO4作用，使作用，使之完全分解，全部轉(zhuǎn)化為正磷酸鹽而進(jìn)入溶液。之完全分解，全部轉(zhuǎn)化為正磷酸鹽而進(jìn)入溶液。 在一定酸度下，正磷酸根與鉬酸銨作用生成磷在一定酸度下，正磷酸根與鉬酸銨作用生成磷鉬雜多酸，

23、以適當(dāng)?shù)倪€原劑將其還原成鉬雜多酸，以適當(dāng)?shù)倪€原劑將其還原成“鉬藍(lán)鉬藍(lán)”，使溶液呈藍(lán)色。使溶液呈藍(lán)色。 磷的含量與溶液藍(lán)色的深淺成正比，可用分光磷的含量與溶液藍(lán)色的深淺成正比，可用分光光光度法于光光度法于700nm處測(cè)定。處測(cè)定。2. 儀器設(shè)備：儀器設(shè)備：分光光度計(jì)，消煮爐分光光度計(jì)，消煮爐3. 試劑：試劑：（1）濃）濃H2SO4（2）70%-72%HClO4（3）0.2% 2, 6-二硝基酚二硝基酚(或或2, 4-二硝基酚二硝基酚) 指示劑指示劑 變色點(diǎn)約變色點(diǎn)約pH=3；pH3無(wú)色；無(wú)色；pH3 黃色。黃色。（4）磷標(biāo)準(zhǔn)溶液（）磷標(biāo)準(zhǔn)溶液（=5.00g/mL)（5）鉬銻貯存溶液）鉬銻貯存溶液

24、：（6）鉬銻抗顯色劑）鉬銻抗顯色劑：先配制鉬銻混合液（貯存液），臨用前再加入抗先配制鉬銻混合液（貯存液），臨用前再加入抗壞血酸。壞血酸。現(xiàn)配現(xiàn)用現(xiàn)配現(xiàn)用，有效期，有效期24小時(shí)；小時(shí)；貯存于棕色試劑瓶中，最好放在冰箱中保存。貯存于棕色試劑瓶中，最好放在冰箱中保存。含有：含有：10gL-1鉬酸銨鉬酸銨 (NH4)6Mo7O244H2O 0.5gL-1酒石酸氧銻鉀酒石酸氧銻鉀 K(SbO)C4H4O6 15gL-1抗壞血酸抗壞血酸 C6H8O5，Vc 硫酸硫酸 5.5molL-1, H+4. 操作步驟操作步驟（1）消化：）消化： 稱樣（過(guò)稱樣（過(guò)100目篩）目篩）0.5000 g 加少量水潤(rùn)濕加少

25、量水潤(rùn)濕 加濃硫酸加濃硫酸8 ml 搖勻搖勻（最好放置過(guò)夜）（最好放置過(guò)夜） 加加7072%高氯酸高氯酸10滴滴 搖勻搖勻 管口加一個(gè)小漏斗管口加一個(gè)小漏斗 加熱消煮加熱消煮 至溶液開始轉(zhuǎn)白后，繼續(xù)消煮至溶液開始轉(zhuǎn)白后，繼續(xù)消煮20min 定容至定容至50 ml 靜置過(guò)夜取上清液或用靜置過(guò)夜取上清液或用干燥的無(wú)磷濾紙干燥的無(wú)磷濾紙過(guò)濾。過(guò)濾。（同時(shí)做空白試驗(yàn)）（同時(shí)做空白試驗(yàn)）（2）溶液中磷的比色測(cè)定：）溶液中磷的比色測(cè)定： 移取濾液移取濾液210 ml于于50ml容量瓶中容量瓶中 要求所吸取的待測(cè)液中要求所吸取的待測(cè)液中含含P 525g 。可做。可做預(yù)備實(shí)驗(yàn)，預(yù)備實(shí)驗(yàn)，根據(jù)顯色液的顏色深度估

26、算出應(yīng)吸取的毫升數(shù)根據(jù)顯色液的顏色深度估算出應(yīng)吸取的毫升數(shù)。 加水至約加水至約30 ml 加二硝基酚指示劑加二硝基酚指示劑2滴滴 用用8mol/L Na2CO3溶液或溶液或2mol/L NaOH溶液及溶液及0.5mol/L H2SO4調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)pH至溶液剛呈微黃色至溶液剛呈微黃色 因?yàn)殂f銻抗法要求控制顯色液的酸度，所以因?yàn)殂f銻抗法要求控制顯色液的酸度，所以如果待測(cè)如果待測(cè)液中原有酸度不確定，必須先行中和液中原有酸度不確定，必須先行中和。 不用不用NH4OH調(diào)節(jié)酸度調(diào)節(jié)酸度，因?yàn)槿芤褐校驗(yàn)槿芤褐蠳H4OH濃度如果超濃度如果超過(guò)過(guò)10gL-1，就會(huì)使鉬藍(lán)色迅速消退。，就會(huì)使鉬藍(lán)色迅速消退。 如果如

27、果待測(cè)液中錳的含量較高時(shí)，最好用待測(cè)液中錳的含量較高時(shí)，最好用Na2CO3溶液來(lái)溶液來(lái)調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)pH，以免產(chǎn)生氫氧化錳沉淀。，以免產(chǎn)生氫氧化錳沉淀。 加鉬銻抗試劑加鉬銻抗試劑5 ml 搖勻搖勻 定容定容 放置放置半小時(shí)（高于半小時(shí)（高于15） 要求顯色溫度為要求顯色溫度為1560。如果室溫低于。如果室溫低于15，可放置，可放置在在3040的培養(yǎng)箱中保溫的培養(yǎng)箱中保溫30min，取出冷卻后比色。，取出冷卻后比色。 700nm比色比色（3）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 分別準(zhǔn)確移取分別準(zhǔn)確移取5.00g . mL-1磷標(biāo)準(zhǔn)溶液磷標(biāo)準(zhǔn)溶液0, 1, 2, 3, 4, 5, 6mL于于50mL容量瓶中。容

28、量瓶中。同上操作。同上操作。 以吸光度為縱坐標(biāo)，磷的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)以吸光度為縱坐標(biāo)，磷的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制工作曲線。繪制工作曲線。5. 結(jié)果計(jì)算結(jié)果計(jì)算三、三、NaOH熔融熔融鉬銻抗比色法鉬銻抗比色法1. 方法原理方法原理 土壤樣品與土壤樣品與NaOH熔融，使土壤中含磷礦熔融，使土壤中含磷礦物及有機(jī)磷化合物全部轉(zhuǎn)化為可溶性的正物及有機(jī)磷化合物全部轉(zhuǎn)化為可溶性的正磷酸鹽，用水和稀硫酸溶解熔塊，在規(guī)定磷酸鹽，用水和稀硫酸溶解熔塊，在規(guī)定條件下樣品溶液與鉬銻抗顯色劑反應(yīng)，生條件下樣品溶液與鉬銻抗顯色劑反應(yīng)，生成磷鉬藍(lán)，用分光光度法定量測(cè)定。成磷鉬藍(lán)，用分光光度法定量測(cè)定。2. 儀器設(shè)備：儀器設(shè)備

29、：鎳（或銀）坩堝，高溫電爐，分光光度計(jì)鎳（或銀）坩堝，高溫電爐，分光光度計(jì)3. 試劑：試劑：（1） NaOH（2）無(wú)水乙醇無(wú)水乙醇（3）100gL-1NaCO3溶液溶液（4）50mLL-1H2SO4溶液溶液（5）3molL-1H2SO4溶液溶液其余同鉬銻抗比色法其余同鉬銻抗比色法4. 操作步驟操作步驟（1）熔樣熔樣 準(zhǔn)確稱取風(fēng)干樣品準(zhǔn)確稱取風(fēng)干樣品0.25g，精確到，精確到0.0001g，小心放入鎳（或銀）坩堝底部，切勿粘在壁上，小心放入鎳（或銀）坩堝底部，切勿粘在壁上，加入無(wú)水乙醇加入無(wú)水乙醇34滴，濕潤(rùn)樣品，在樣品上平鋪滴，濕潤(rùn)樣品，在樣品上平鋪2g氫氧化鈉，將坩堝（處理大批樣品時(shí)，暫放入

30、氫氧化鈉，將坩堝（處理大批樣品時(shí)，暫放入大干燥器中以防吸潮）放入高溫電爐，升溫。當(dāng)大干燥器中以防吸潮）放入高溫電爐，升溫。當(dāng)溫度升至溫度升至400左右時(shí)，切斷電源，暫停左右時(shí)，切斷電源，暫停15min。然后繼續(xù)升溫至然后繼續(xù)升溫至720，并保持，并保持15min，取出冷卻，取出冷卻，加入約加入約80的水的水10mL和用水多次洗坩堝，洗滌液和用水多次洗坩堝，洗滌液也一并移入該容量瓶，冷卻，定容，用無(wú)磷定量也一并移入該容量瓶，冷卻，定容，用無(wú)磷定量濾紙過(guò)濾或離心澄清，同時(shí)做空白試驗(yàn)。濾紙過(guò)濾或離心澄清，同時(shí)做空白試驗(yàn)。 （2）樣品溶液中磷的定量）樣品溶液中磷的定量顯色：準(zhǔn)確吸取待測(cè)樣品溶液顯色：準(zhǔn)

31、確吸取待測(cè)樣品溶液210 mL（含磷（含磷0.041.0g）于）于50 mL容量瓶中，用水稀釋至總體容量瓶中，用水稀釋至總體積約積約3/5處，加入二硝基酚指示劑處，加入二硝基酚指示劑23滴，并用滴，并用100gL-1碳酸鈉溶液或碳酸鈉溶液或50mLL-1硫酸溶液調(diào)節(jié)溶液硫酸溶液調(diào)節(jié)溶液至剛呈微黃色，準(zhǔn)確加入至剛呈微黃色，準(zhǔn)確加入5 mL鉬銻抗顯色劑，搖鉬銻抗顯色劑，搖勻，加水定容，室溫勻，加水定容，室溫15以上，放置以上，放置30min。比色：顯色的樣品溶液在分光光度計(jì)上，用比色：顯色的樣品溶液在分光光度計(jì)上，用700nm、1cm光徑比色皿，以空白試驗(yàn)為參比液光徑比色皿，以空白試驗(yàn)為參比液調(diào)節(jié)

32、儀器零點(diǎn)，進(jìn)行比色測(cè)定，讀取吸光度，從調(diào)節(jié)儀器零點(diǎn)，進(jìn)行比色測(cè)定，讀取吸光度，從校準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的含磷量。校準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的含磷量。 5. 結(jié)果計(jì)算結(jié)果計(jì)算5-3 5-3 土壤速效磷的測(cè)定土壤速效磷的測(cè)定 方法概述方法概述 土壤有效磷的化學(xué)浸提方法土壤有效磷的化學(xué)浸提方法 NaHCO3法法 HCl NH4F 法法 其它方法其它方法一、方法概述一、方法概述土壤有效磷土壤有效磷 土壤中能被當(dāng)季作物吸收利用的磷。土壤中能被當(dāng)季作物吸收利用的磷。 土壤磷的有效性涉及到土壤磷供應(yīng)的強(qiáng)度因素土壤磷的有效性涉及到土壤磷供應(yīng)的強(qiáng)度因素（土壤溶液中磷的濃度）、容量因素（土壤固相中（土壤溶液中磷的濃度）、容量

33、因素（土壤固相中磷的量）、供應(yīng)速度等方面。磷的量）、供應(yīng)速度等方面。磷位磷位= 1/2 pCa + pH2PO4 磷位表示土壤吸持磷的能力，或固相磷進(jìn)入溶液磷位表示土壤吸持磷的能力，或固相磷進(jìn)入溶液的難易。它是用能量的觀點(diǎn)來(lái)表示土壤的供磷強(qiáng)度。的難易。它是用能量的觀點(diǎn)來(lái)表示土壤的供磷強(qiáng)度。磷位越高，土壤吸持磷的能力越高，磷對(duì)植物的有磷位越高，土壤吸持磷的能力越高，磷對(duì)植物的有效性越低。效性越低。 到目前為止，還無(wú)法真正測(cè)定土壤有效磷的到目前為止，還無(wú)法真正測(cè)定土壤有效磷的數(shù)量。通常所謂的土壤有效磷只是指用某一特定數(shù)量。通常所謂的土壤有效磷只是指用某一特定方法所測(cè)出的土壤中的磷量。方法所測(cè)出的土

34、壤中的磷量。只有當(dāng)測(cè)出的磷量只有當(dāng)測(cè)出的磷量與植物生長(zhǎng)狀況具有顯著相關(guān)的情況下，這種測(cè)與植物生長(zhǎng)狀況具有顯著相關(guān)的情況下，這種測(cè)定才具有實(shí)際意義。定才具有實(shí)際意義。因此，土壤有效磷并不是指因此，土壤有效磷并不是指土壤中某一特定形態(tài)的磷，也不是指土壤中土壤中某一特定形態(tài)的磷，也不是指土壤中“真真正正”有效磷的有效磷的“絕對(duì)含量絕對(duì)含量”，它只是一個(gè)，它只是一個(gè)相對(duì)指相對(duì)指標(biāo)標(biāo)，應(yīng)用不同方法在同一土壤上可以得到不同的，應(yīng)用不同方法在同一土壤上可以得到不同的有效磷數(shù)量。它可以相對(duì)地說(shuō)明土壤的供磷水平，有效磷數(shù)量。它可以相對(duì)地說(shuō)明土壤的供磷水平，可以作為判斷是否需要施用磷肥一個(gè)指標(biāo)。可以作為判斷是否需

35、要施用磷肥一個(gè)指標(biāo)。土壤有效磷的測(cè)定方法：土壤有效磷的測(cè)定方法：n生物方法：生物方法：最可靠最可靠n化學(xué)（浸提）方法化學(xué)（浸提）方法： 應(yīng)用最普遍，快速簡(jiǎn)便應(yīng)用最普遍，快速簡(jiǎn)便n同位素方法：同位素方法：標(biāo)準(zhǔn)方法標(biāo)準(zhǔn)方法n陰離子交換樹脂法：陰離子交換樹脂法：與植物生長(zhǎng)相關(guān)性較高與植物生長(zhǎng)相關(guān)性較高 方法選擇的依據(jù)：方法選擇的依據(jù)：現(xiàn)有的測(cè)定土壤有效磷的方法雖然有一定的理現(xiàn)有的測(cè)定土壤有效磷的方法雖然有一定的理論依據(jù)，但仍帶有很大的論依據(jù)，但仍帶有很大的“經(jīng)驗(yàn)性經(jīng)驗(yàn)性”。因此，。因此，選擇方法的基本依據(jù)是各種方法在實(shí)踐中的表選擇方法的基本依據(jù)是各種方法在實(shí)踐中的表現(xiàn)，即：現(xiàn)，即：測(cè)定結(jié)果和植物生長(zhǎng)

36、狀況的相關(guān)性。測(cè)定結(jié)果和植物生長(zhǎng)狀況的相關(guān)性。二、土壤有效磷的化學(xué)浸提二、土壤有效磷的化學(xué)浸提1. 提取劑的種類提取劑的種類（1）水）水理論根據(jù)：植物從土壤中吸收的磷（主要是理論根據(jù)：植物從土壤中吸收的磷（主要是H2PO4-）主要來(lái)自于土壤溶液，水溶）主要來(lái)自于土壤溶液，水溶性磷是土壤磷的強(qiáng)度因素。性磷是土壤磷的強(qiáng)度因素。缺點(diǎn)：缺點(diǎn)： 不易獲得澄清的濾液；緩沖能力弱，不易獲得澄清的濾液；緩沖能力弱，提取液提取液pH容易改變；提取能力弱。容易改變；提取能力弱。適用范圍：較少使用。僅適用于砂性土壤，因?yàn)檫m用范圍：較少使用。僅適用于砂性土壤，因?yàn)樯靶酝寥乐械牧滓运苄粤诪橹鳌Ｉ靶酝寥乐械牧滓运苄粤?/p>

37、為主。（2）飽和以）飽和以CO2的水的水理論根據(jù)：植物根分泌理論根據(jù)：植物根分泌CO2，根際，根際pH約為約為5。適用范圍：石灰性土壤，因?yàn)槭倚酝寥乐辛椎倪m用范圍：石灰性土壤，因?yàn)槭倚酝寥乐辛椎娜芙舛入S著水溶液中溶解度隨著水溶液中CO2濃度的增加濃度的增加而增加。而增加。（3）有機(jī)酸溶液）有機(jī)酸溶液理論根據(jù)：植物根系分泌有機(jī)酸，其溶解能力相理論根據(jù)：植物根系分泌有機(jī)酸，其溶解能力相當(dāng)于飽和以當(dāng)于飽和以CO2的水。的水。常用的有機(jī)酸有：檸檬酸、乳酸、醋酸等。常用的有機(jī)酸有：檸檬酸、乳酸、醋酸等。（4）無(wú)機(jī)酸溶液）無(wú)機(jī)酸溶液主要是從分析方法的方便來(lái)考慮的。主要是從分析方法的方便來(lái)考慮的。一般采

38、用緩沖溶液。常用的有：一般采用緩沖溶液。常用的有：HOAc NaOAc溶液，溶液，pH4.80.001 molL-1 H2SO4 (NH4)2SO4，pH 30.025 molL-1 HCl 0.03 molL-1 NH4F0.05 molL-1 HCl 0.025 molL-1 (1/2 H2SO4)適用范圍：用于酸性土壤，不適用于石灰性土壤。適用范圍：用于酸性土壤，不適用于石灰性土壤。 （5）堿溶液）堿溶液用得最多最廣的是：用得最多最廣的是：0.5molL-1 NaHCO3(pH8.5)溶液溶液適用范圍：主要用于中性和石灰性土壤，也可以用適用范圍：主要用于中性和石灰性土壤，也可以用于酸性土

39、壤。于酸性土壤。 2. 影響有效磷提取的因素：影響有效磷提取的因素：(1) 提取劑的種類與濃度提取劑的種類與濃度各提取劑中的陰離子從土壤顆粒上置換磷酸根的各提取劑中的陰離子從土壤顆粒上置換磷酸根的能力不同：能力不同： F-檸檬酸檸檬酸HCO3-CH3COO-SO42-Cl-提取液的種類、濃度、提取液的種類、濃度、pH等都會(huì)影響到提取磷的等都會(huì)影響到提取磷的多少。多少。(2) 水土比水土比常用：常用：5 : 1，7 : 1，20 : 1水土比越大，提取的磷越多。但不是越大越好。水土比越大，提取的磷越多。但不是越大越好。 (3) 振蕩時(shí)間振蕩時(shí)間常用：常用：1，5，30分鐘。分鐘。震蕩時(shí)間越長(zhǎng)，提

40、取的磷越多。但不是時(shí)間越長(zhǎng)震蕩時(shí)間越長(zhǎng)，提取的磷越多。但不是時(shí)間越長(zhǎng)越好。越好。(4) 溫度溫度提取和顯色過(guò)程受溫度的影響比較大，一般要控提取和顯色過(guò)程受溫度的影響比較大，一般要控制在室溫制在室溫2025。在比較多個(gè)樣品間的有效磷含量時(shí)，要特別注意在比較多個(gè)樣品間的有效磷含量時(shí)，要特別注意控制提取和測(cè)定條件的一致。控制提取和測(cè)定條件的一致。三、三、NaHCO3法法1. 方法原理方法原理 用用0.5 molL-1 NaHCO3 （pH 8.5）提取土壤有效提取土壤有效磷。溶液中的磷用鉬銻抗比色法測(cè)定。磷。溶液中的磷用鉬銻抗比色法測(cè)定。 由于碳酸根的由于碳酸根的同離子效應(yīng)同離子效應(yīng)，堿性的碳酸鹽溶

41、，堿性的碳酸鹽溶液降低了碳酸鹽的溶解，也就降低了溶液中鈣離液降低了碳酸鹽的溶解，也就降低了溶液中鈣離子的濃度，這樣就有利于子的濃度，這樣就有利于CaP的提取。中性土的提取。中性土壤中壤中CaP、AlP、FeP都占有一定的比例。由都占有一定的比例。由于碳酸鹽溶液降低了鋁離子和鐵離子的活性，這于碳酸鹽溶液降低了鋁離子和鐵離子的活性，這樣就有利于樣就有利于AlP和和FeP的提取。此外，碳酸氫的提取。此外，碳酸氫鈉堿溶液中存在著鈉堿溶液中存在著OH-、HCO3-、CO32-等陰離子，等陰離子，這樣就有利于吸附態(tài)磷的置換。這樣就有利于吸附態(tài)磷的置換。2. 儀器設(shè)備：儀器設(shè)備：往復(fù)式振蕩機(jī)，分光光度計(jì)往復(fù)

42、式振蕩機(jī)，分光光度計(jì)3. 試劑：試劑：（1） 0.5 molL-1 NaHCO3 （pH 8.5）浸提劑浸提劑（2）無(wú)磷活性炭無(wú)磷活性炭其余同鉬銻抗比色法其余同鉬銻抗比色法NaHCO3 法不僅適用于石灰性土壤，也適用于法不僅適用于石灰性土壤，也適用于中性和微酸性土壤速效磷的提取，是目前使用中性和微酸性土壤速效磷的提取，是目前使用最多最廣的一種方法。最多最廣的一種方法。4. 操作步驟操作步驟（1）浸提）浸提 稱樣稱樣(過(guò)過(guò)20目篩目篩)5.00 g 加入加入NaHCO3 浸提劑浸提劑100ml加一勺加一勺無(wú)磷活性炭無(wú)磷活性炭 有關(guān)活性炭的幾個(gè)問題：有關(guān)活性炭的幾個(gè)問題：土壤浸提液中有色物質(zhì)對(duì)比色

43、有影響，可加入活性炭吸土壤浸提液中有色物質(zhì)對(duì)比色有影響，可加入活性炭吸附有色物質(zhì)及其它懸浮物，以消除干擾。附有色物質(zhì)及其它懸浮物，以消除干擾。活性炭常含有磷，應(yīng)在樣品分析前做活性炭常含有磷，應(yīng)在樣品分析前做空白試驗(yàn)空白試驗(yàn)，檢驗(yàn)是，檢驗(yàn)是否有磷存在。否有磷存在。無(wú)磷活性炭的處理方法（見教材無(wú)磷活性炭的處理方法（見教材PP.83）：鹽酸浸泡）：鹽酸浸泡多多次洗滌次洗滌0.5 molL-1NaHCO3浸泡浸泡抽氣過(guò)濾，多次淋洗抽氣過(guò)濾，多次淋洗直至檢查無(wú)磷。直至檢查無(wú)磷。 活性炭對(duì)活性炭對(duì)PO43-有一定的吸附作用，當(dāng)活性炭顆粒表面被有一定的吸附作用，當(dāng)活性炭顆粒表面被溶液中同時(shí)大量存在的溶液中同

44、時(shí)大量存在的HCO3-飽和了以后，就抑制了活性飽和了以后，就抑制了活性炭對(duì)炭對(duì)PO43-的吸附作用。的吸附作用。活性炭加入量不能太多活性炭加入量不能太多，一般，一般0.3g左右。左右。 恒溫（恒溫（2025）振蕩）振蕩30 min 浸提及顯色過(guò)程受溫度的影響很大，浸提及顯色過(guò)程受溫度的影響很大，最好保持恒溫最好保持恒溫（室（室溫溫2525），尤其對(duì)于分批多次樣品的測(cè)定，更要保證提），尤其對(duì)于分批多次樣品的測(cè)定，更要保證提取和測(cè)定過(guò)程溫度的一致，這樣結(jié)果才有可比性。取和測(cè)定過(guò)程溫度的一致，這樣結(jié)果才有可比性。 無(wú)磷濾紙過(guò)濾無(wú)磷濾紙過(guò)濾（同時(shí)做空白試驗(yàn)）（同時(shí)做空白試驗(yàn)）（2）溶液中磷的比色測(cè)定：

45、）溶液中磷的比色測(cè)定：移取濾液移取濾液x ml 于于150 ml三角瓶三角瓶中中 加提取劑加提取劑 (10-x) ml 加水加水35ml 本法中最后顯色液的酸度為本法中最后顯色液的酸度為0.45molL-1(H+)，仍然在鉬藍(lán)，仍然在鉬藍(lán)法要求控制的顯色液酸度范圍法要求控制的顯色液酸度范圍(0.350.55 molL-1，H+)內(nèi)，內(nèi)，所以可省略調(diào)節(jié)濾液酸堿度這一步驟所以可省略調(diào)節(jié)濾液酸堿度這一步驟 加鉬銻抗試劑加鉬銻抗試劑5ml 因?yàn)殂f銻抗試劑為酸性，會(huì)使濾液中的提取劑因?yàn)殂f銻抗試劑為酸性，會(huì)使濾液中的提取劑NaHCO3發(fā)生水解，產(chǎn)生大量的發(fā)生水解，產(chǎn)生大量的CO2氣體。如果選用瓶口較小的氣

46、體。如果選用瓶口較小的容量瓶，在向?yàn)V液中加入鉬銻抗試劑時(shí)就要特別仔細(xì)，容量瓶，在向?yàn)V液中加入鉬銻抗試劑時(shí)就要特別仔細(xì)，動(dòng)作要慢，并動(dòng)作要慢，并邊加邊邊加邊緩慢地?fù)u動(dòng)容量瓶緩慢地?fù)u動(dòng)容量瓶，否則，很容，否則，很容易使試劑易使試劑噴出瓶口噴出瓶口產(chǎn)生損失，引起測(cè)定誤差。所以，產(chǎn)生損失，引起測(cè)定誤差。所以，可以改用可以改用三角瓶三角瓶來(lái)克服這個(gè)缺點(diǎn)。但是，三角瓶不能來(lái)克服這個(gè)缺點(diǎn)。但是，三角瓶不能定容，可以采用準(zhǔn)確加入濾液定容，可以采用準(zhǔn)確加入濾液x ml 、提取劑、提取劑 (10-x) ml、水水35ml 、鉬銻抗試劑、鉬銻抗試劑5ml，使總體積為，使總體積為50ml的辦法來(lái)的辦法來(lái)解決這個(gè)問題。

47、解決這個(gè)問題。 搖勻至無(wú)氣泡搖勻至無(wú)氣泡 顯色顯色30 min 700 nm比色比色 （3）制作標(biāo)準(zhǔn)曲線）制作標(biāo)準(zhǔn)曲線5. 結(jié)果計(jì)算結(jié)果計(jì)算Olsen-P mg Pkg-1作物對(duì)施磷肥的反應(yīng)作物對(duì)施磷肥的反應(yīng)3無(wú)磷肥，一切作物難以立苗無(wú)磷肥，一切作物難以立苗45一切作物施磷肥均有顯著增產(chǎn)一切作物施磷肥均有顯著增產(chǎn)610水稻一般不增產(chǎn)，其它作物增產(chǎn)水稻一般不增產(chǎn)，其它作物增產(chǎn)1115谷類作物可能不增產(chǎn)谷類作物可能不增產(chǎn)1620通常只有豆科和十字花科作物有反應(yīng)通常只有豆科和十字花科作物有反應(yīng)20一般作物不需施磷肥一般作物不需施磷肥根據(jù)國(guó)內(nèi)大量的研究結(jié)果，土壤有效磷水平的臨根據(jù)國(guó)內(nèi)大量的研究結(jié)果，土

48、壤有效磷水平的臨界值（即在此值以上作物對(duì)施磷無(wú)反應(yīng)）視作物、界值（即在此值以上作物對(duì)施磷無(wú)反應(yīng)）視作物、氣候、土壤而不同，特別是作物。下表（魯如坤，氣候、土壤而不同，特別是作物。下表（魯如坤，1980）可供南方參考，北方臨界值一般略高于下）可供南方參考，北方臨界值一般略高于下表：表：四、四、HCl NH4F 法法1. 方法原理：方法原理：uHClNH4F通過(guò)兩種作用釋放土壤中的有效磷：通過(guò)兩種作用釋放土壤中的有效磷： 一方面，一方面，F(xiàn)-能與能與Fe-P、Al-P中的中的Fe、Al在酸性條件在酸性條件下下形成絡(luò)合物，促進(jìn)了形成絡(luò)合物，促進(jìn)了Fe-P和和Al-P的溶解；的溶解； 另一方面，稀酸可

49、溶解部分磷。另一方面，稀酸可溶解部分磷。uHClNH4F主要提取主要提取酸溶性磷和吸附態(tài)磷酸溶性磷和吸附態(tài)磷，包括，包括大部分的磷酸鈣和一部分磷酸鋁和磷酸鐵。大部分的磷酸鈣和一部分磷酸鋁和磷酸鐵。 溶液中磷與鉬酸銨作用，生成磷鉬雜多酸，在溶液中磷與鉬酸銨作用，生成磷鉬雜多酸，在一定酸度下，被適當(dāng)?shù)倪€原劑（一定酸度下，被適當(dāng)?shù)倪€原劑（SnCl2或或Vc）還）還原成鉬藍(lán)，藍(lán)色深淺與磷的濃度成正比。原成鉬藍(lán)，藍(lán)色深淺與磷的濃度成正比。HClNH4F法的適用范圍：法的適用范圍：適用于酸性土壤，而不適用于石灰性土壤。適用于酸性土壤，而不適用于石灰性土壤。因?yàn)椋阂驗(yàn)椋河糜谑倚酝寥罆r(shí)，提取劑中的酸在水土比

50、不大用于石灰性土壤時(shí)，提取劑中的酸在水土比不大時(shí)很容易被石灰中和；另外，有可能形成時(shí)很容易被石灰中和；另外，有可能形成CaF2，導(dǎo)致磷的再沉淀或再吸附，使結(jié)果偏低。導(dǎo)致磷的再沉淀或再吸附，使結(jié)果偏低。兩種方法：兩種方法：0.03 molL-1NH4F 0.025 molL-1HCl法（法（Bray I 法）法）適用于適用于風(fēng)化程度中等的酸性土壤風(fēng)化程度中等的酸性土壤0.03 molL-1NH4F 0.1 molL-1HCl法（法（Bray II 法）法）適用于適用于風(fēng)化程度較高的強(qiáng)酸性土壤風(fēng)化程度較高的強(qiáng)酸性土壤2. 儀器設(shè)備：儀器設(shè)備：往復(fù)式振蕩機(jī)，分光光度計(jì)往復(fù)式振蕩機(jī)，分光光度計(jì)3. 試

51、劑：試劑：（1） 浸提劑浸提劑 0.03 molL-1NH4F 0.025 molL-1HCl 0.03 molL-1NH4F 0.1 molL-1HCl 貯存于塑料瓶中。貯存于塑料瓶中。（2） 0.8 molL-1硼酸溶液硼酸溶液其余同鉬銻抗比色法其余同鉬銻抗比色法4. 操作步驟操作步驟（1）浸提）浸提 稱樣稱樣(過(guò)過(guò)20目篩目篩)5.00 g 于于150ml塑料瓶中塑料瓶中 加入加入HClNH4F 浸提劑浸提劑50ml 振蕩振蕩30 min （2025） 過(guò)濾于塑料瓶中過(guò)濾于塑料瓶中（同時(shí)做空白試驗(yàn)）（同時(shí)做空白試驗(yàn)）（2）溶液中磷的比色測(cè)定：）溶液中磷的比色測(cè)定：移取濾液移取濾液1020

52、 ml 于于50 ml容量瓶中容量瓶中 加加10ml硼酸溶液硼酸溶液鉬銻抗比色法測(cè)定鉬銻抗比色法測(cè)定 顯色過(guò)程中氟化物可能會(huì)產(chǎn)生干擾，可以加硼酸，和氟顯色過(guò)程中氟化物可能會(huì)產(chǎn)生干擾，可以加硼酸，和氟離子形成絡(luò)合物以避免干擾。在大多數(shù)情況下，無(wú)此必離子形成絡(luò)合物以避免干擾。在大多數(shù)情況下，無(wú)此必要，除非對(duì)于少數(shù)酸性砂土。要，除非對(duì)于少數(shù)酸性砂土。 5. 結(jié)果計(jì)算結(jié)果計(jì)算五、其它方法五、其它方法1. 陰離子交換樹脂法：陰離子交換樹脂法：土壤土壤P 樹脂樹脂P 溶液溶液P 樹脂樹脂Cl土壤土壤ClNaCl樹脂樹脂Cl方法原理：通過(guò)陰離方法原理：通過(guò)陰離子交換樹脂中陰離子子交換樹脂中陰離子和土壤中的吸

53、附磷酸和土壤中的吸附磷酸根相交換，從而使磷根相交換，從而使磷從土壤固相不斷釋放從土壤固相不斷釋放（這部分磷對(duì)作物是（這部分磷對(duì)作物是有效的）。經(jīng)過(guò)一段有效的）。經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后，用氯化鈉將時(shí)間后，用氯化鈉將吸附在樹脂上的磷置吸附在樹脂上的磷置換下來(lái)進(jìn)行測(cè)定。換下來(lái)進(jìn)行測(cè)定。陰離子交換樹脂：強(qiáng)鹽基型陰離子交換樹脂：強(qiáng)鹽基型 Cl-飽和飽和 顆粒小于顆粒小于30目大于目大于50目。目。 土壤固相表面的磷與溶液中的磷之間的交換作土壤固相表面的磷與溶液中的磷之間的交換作用有快有慢，用有快有慢，快交換作用的磷為土壤速效磷，慢快交換作用的磷為土壤速效磷，慢交換作用的磷為緩效磷。交換作用的磷為緩效磷。可利用交

54、換作用的速度可利用交換作用的速度將土壤磷進(jìn)行分級(jí)，同時(shí)可以說(shuō)明土壤磷的供應(yīng)將土壤磷進(jìn)行分級(jí)，同時(shí)可以說(shuō)明土壤磷的供應(yīng)強(qiáng)度、容量、釋放速率等因素。所以，本方法還強(qiáng)度、容量、釋放速率等因素。所以，本方法還可以用來(lái)測(cè)定土壤磷的可以用來(lái)測(cè)定土壤磷的緩沖能力緩沖能力，研究土壤磷的，研究土壤磷的解吸或釋放規(guī)律。解吸或釋放規(guī)律。 2. 同位素稀釋法測(cè)定同位素稀釋法測(cè)定“A”值值方法原理：方法原理： 土壤中施入一定量的標(biāo)記土壤中施入一定量的標(biāo)記32P的過(guò)磷酸鈣，進(jìn)行的過(guò)磷酸鈣，進(jìn)行盆缽試驗(yàn)，分析植物樣品中全磷含量和放射性強(qiáng)度，盆缽試驗(yàn)，分析植物樣品中全磷含量和放射性強(qiáng)度，即可求得植物從肥料中吸收的磷即可求得植

55、物從肥料中吸收的磷b和植物體內(nèi)總磷和植物體內(nèi)總磷量量(a+b)。假定土壤中有效磷含量為。假定土壤中有效磷含量為A，由肥料施，由肥料施入土壤的有效磷為入土壤的有效磷為B，那么：，那么： A = (100-y) B / y 其中，其中，y = b/(a+b)b 植物從肥料吸收的磷（從植物樣品放射性強(qiáng)度求得）植物從肥料吸收的磷（從植物樣品放射性強(qiáng)度求得） (a+b)植物樣品全磷含量（從化學(xué)分析求得）植物樣品全磷含量（從化學(xué)分析求得） 5-4 5-4 土壤無(wú)機(jī)磷的分級(jí)測(cè)定土壤無(wú)機(jī)磷的分級(jí)測(cè)定一、概述一、概述主要方法有：主要方法有：Jackson-Chang法（法（1957年）年） 蔣柏藩、顧益初法（蔣

56、柏藩、顧益初法（1990年）年） Hedley 法法 （1982年）年） Guppy 法（法（2000年）年）n都是通過(guò)一系列的選擇性浸提劑的提取來(lái)逐級(jí)都是通過(guò)一系列的選擇性浸提劑的提取來(lái)逐級(jí)分離土壤中各種形態(tài)的無(wú)機(jī)磷酸鹽。分離土壤中各種形態(tài)的無(wú)機(jī)磷酸鹽。n各無(wú)機(jī)磷組分的植物有效性仍需謹(jǐn)慎地分析和各無(wú)機(jī)磷組分的植物有效性仍需謹(jǐn)慎地分析和評(píng)價(jià)。評(píng)價(jià)。二、張守敬和二、張守敬和Jackson法（法（1957）0.1mol/L NH4Cl 水溶性磷和松結(jié)合態(tài)磷水溶性磷和松結(jié)合態(tài)磷0.5mol/L NH4F（pH8.2） Al-P0.1mol/L NaOH Fe-P0.3mol/L檸檬酸鈉和檸檬酸鈉和N

57、a2S2O4O-P0.25mol/L H2SO4 Ca-P特點(diǎn)：特點(diǎn)：適用于酸性土壤適用于酸性土壤。不適用于石灰性土壤，因。不適用于石灰性土壤，因?yàn)樵谟脼樵谟肗H4F溶液浸提時(shí)，會(huì)因產(chǎn)生溶液浸提時(shí)，會(huì)因產(chǎn)生CaF2而導(dǎo)致磷而導(dǎo)致磷的沉淀或吸附，從而使得的沉淀或吸附，從而使得Al-P偏低，偏低，F(xiàn)e-P偏高，偏高，對(duì)對(duì)Al-P、Fe-P難以達(dá)到清楚分組的目的。難以達(dá)到清楚分組的目的。特點(diǎn)：將石灰性土壤中磷酸鈣分為特點(diǎn)：將石灰性土壤中磷酸鈣分為Ca2-P、Ca8-P和和Ca10-P三種形態(tài)；用混合型浸提劑提取磷酸鐵鹽，三種形態(tài)；用混合型浸提劑提取磷酸鐵鹽，能將土壤中能將土壤中Fe-P、O-P 進(jìn)行

58、很好的分離。進(jìn)行很好的分離。此方法能更好地反應(yīng)石灰性土壤無(wú)機(jī)磷狀況，此方法能更好地反應(yīng)石灰性土壤無(wú)機(jī)磷狀況，是目是目前石灰性土壤無(wú)機(jī)磷分組的最常用的測(cè)定方法前石灰性土壤無(wú)機(jī)磷分組的最常用的測(cè)定方法。 三、蔣柏藩、顧益初法（三、蔣柏藩、顧益初法（1990）0.25 molL-1 NaHCO3Ca2-P 1 mo lL-1 NH4AcCa8-P 0.5 molL-1 NH4F Al-P 0.1 molL-1 NaOH-Na2CO3 Fe-P 0.3 molL-1 檸檬酸三鈉檸檬酸三鈉-Na2S2O4-NaOH O-P 0.5 molL-1 H2SO4Ca10-P四、四、Hedley法（法（1982

59、）是目前較為合理、較具說(shuō)服力的土壤磷素分級(jí)方法。是目前較為合理、較具說(shuō)服力的土壤磷素分級(jí)方法。 樹脂交換態(tài)磷樹脂交換態(tài)磷(Resin-P)用陰離子交換樹脂代換出的磷，這一部分磷是與土壤溶用陰離子交換樹脂代換出的磷，這一部分磷是與土壤溶液磷處于平衡狀態(tài)的土壤固相無(wú)機(jī)磷，構(gòu)成了土壤活性液磷處于平衡狀態(tài)的土壤固相無(wú)機(jī)磷，構(gòu)成了土壤活性磷的大部分。磷的大部分。 NaHCO3提取態(tài)磷提取態(tài)磷(NaHCO3-P)包括無(wú)機(jī)態(tài)和有機(jī)態(tài)兩部分。前者主要是吸附在土壤表包括無(wú)機(jī)態(tài)和有機(jī)態(tài)兩部分。前者主要是吸附在土壤表面的磷，后者主要是易于礦化的可溶性有機(jī)磷。面的磷，后者主要是易于礦化的可溶性有機(jī)磷。 微生物細(xì)胞磷微生物細(xì)胞磷先用氯仿處理，將土壤中微生物細(xì)胞中的磷溶解出來(lái)，先用氯仿處理，將土壤中微生物細(xì)胞中的磷溶解出來(lái)，再用再用NaHCO3溶液提取，然后減去溶液提取，然后減去NaHCO3溶液磷的差值。溶液磷的差值。這部分的磷主要是溶解的微生物細(xì)胞磷，也包括有機(jī)和這部分的磷主要是溶解的微生物細(xì)胞磷，也包括有機(jī)和無(wú)機(jī)兩部分。在某些條件下，它們可以較快的礦化后為無(wú)機(jī)兩部分。在某些條件下，它們可以較快的礦化后為作物利用。作物利用。 NaOH溶性磷：溶性磷：用用0.1mol/ L Na