1、河南農(nóng)業(yè)大學(xué)考研專業(yè)課現(xiàn)代分子生物學(xué)課程試卷（含答案）學(xué)_年第 _學(xué)期考試類型：（ 閉卷）考試考試時間 ： 90 分鐘年級專業(yè)學(xué)號姓名1、分析題（ 5 分，每題5 分）1. 根據(jù) A 基因序列設(shè)計原核表達引物。A基因序列如下：ATGTCCGAAGTAATCGAAGAACATCTTCTCAGCGATAATTCTGATGATTCCAGCTCGGATGACTTCTACGGACGAACCACGAAGAGACGATATTAApET28a多克隆位點如下引物設(shè)計必須滿足：要求在引物兩端分別加上 BamHI （GGATQC和EcoRI（ GAATT）。要求表達的重組蛋白 C端帶His標(biāo)簽。答案： 設(shè)計引物時應(yīng)

2、注意：（1 ）酶切位點前后亦須添加16個保護堿基，以提咼限制性核 酸內(nèi)切酶的接合效率。（2） His 標(biāo)簽地處酶切位點的下游，且靠近終止密碼子，且 mRNA 的翻譯方向是由 N 端向 C 端，所以目的片段接上時的插入順序不顛倒。(3 )引物長度一般在1827bp，且與目的片段有合適的互補厚 度以保證引物可以順利合適結(jié)合。上游引物可為(5 3端1端)：CGCGGATCCGCGATGTCCGAAGTA 。下游引物可為(5 3端1端)：GGCCTTAAGGCCAATTATAGCAGA 。解析：2、判斷題( 55 分，每題 5 分)1. 一個基因就是一個轉(zhuǎn)錄單位。( )答案：錯誤解析：轉(zhuǎn)錄單位是一段可

3、被 RNA 聚合酶轉(zhuǎn)錄成一條連續(xù)的 mRNA 的 DNA ，包括轉(zhuǎn)錄起始和終止信號。轉(zhuǎn)錄單位不同于基因，轉(zhuǎn)錄單位蛋 白質(zhì)或許同時包含一個基因，也可能同時包含幾個基因，另外，轉(zhuǎn)錄 區(qū)縣還包含啟動子，非編碼序列等。所以，轉(zhuǎn)錄單位包含的 DNA 范圍 比基因廣。基因工程的一個必需步驟是利用限制性內(nèi)切核酸酶切割目的基因 使其產(chǎn)生黏性末端，然后連接到載體上。() 答案：錯誤解析：利用限制性內(nèi)切核酸酶切割目的基因，可以產(chǎn)生黏性末端也可 以產(chǎn)生平末端，二者均可與傳播方式連接。2. 堿基的替換有兩類即轉(zhuǎn)換( transition )和顛換(transversion ) , A被T替換是轉(zhuǎn)換，而C被G替換則是顛

4、換。()答案：錯誤解析：堿基的替換有兩類即轉(zhuǎn)換( transition )和顛換( transversion )，同類堿基替代是轉(zhuǎn)換，而嘌呤被吡啶替換則是顛換3. 轉(zhuǎn)座( transposition )是轉(zhuǎn)座元拷貝從基因組的一處轉(zhuǎn)移到另 一處的過程。( )答案：錯誤解析：轉(zhuǎn)座是由可移位因子介導(dǎo)的遺傳物質(zhì)重排現(xiàn)象。轉(zhuǎn)座類型有兩 種：復(fù)制轉(zhuǎn)座和非復(fù)制轉(zhuǎn)座。復(fù)制轉(zhuǎn)座：整個轉(zhuǎn)座子被復(fù)制，所移 動和轉(zhuǎn)位的僅僅是原轉(zhuǎn)座子的拷貝。非復(fù)制轉(zhuǎn)座：原始轉(zhuǎn)座子作為 一個可移動的本體直接被移位，IS、Mu 及 Tn5 等都是通過這種方式進行轉(zhuǎn)座。非復(fù)制轉(zhuǎn)座的結(jié)果是在原來的位置上丟失了轉(zhuǎn)座因子，而 在插入位置上增加了轉(zhuǎn)

5、座因子。4. 病毒基因組的組成和其他生物一樣都含有DNA ()答案：錯誤解析：有一部分病毒基因組的組成只有 RNA，沒有DNA。5. 葉綠體的rRNA核糖體是由16S、5S、23S、5.8S組成的。(答案：錯誤 解析：葉綠體蛋白昂尚合成所有的核糖體的沉降系數(shù)為 70S ，由大小 不等的兩個亞基（50S和30S）組成，大不相同和原核生物的核糖體 十分相似。葉綠體核糖體的小亞基含有一個拷貝的 16S rRNA ，大亞基 至少含有 2 個 rRNA 亞基，每個位點一個拷貝： 23S 和 5S。6. 癌基因僅存在于腫瘤細(xì)胞中，正常細(xì)胞一旦表達即引起細(xì)胞的惡 變。（ ）答案：錯誤解析：癌基因不僅僅存在中

6、其腫瘤細(xì)胞中，在正常細(xì)胞也有存在和傳 達，只有在多種誘因存在時，細(xì)胞才會發(fā)生癌變。7. 有信號肽的蛋白質(zhì)都能分泌到細(xì)胞外。（）答案：錯誤解析：完整的信號肽是保證蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運的必要條件；僅有信號肽 不足以保證蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運發(fā)生；信號序列的切除并非轉(zhuǎn)運所必需的； 并非所有的運轉(zhuǎn)蛋白都有可降解的信號肽。8. 表觀遺傳效應(yīng)是不可遺傳的。（ ）答案：錯誤解析：表觀遺傳現(xiàn)象是指對基因表達發(fā)生改變但不涉及 DNA 序列的變 化，能夠在代與代之間傳遞。也就是說表觀遺傳怪象變異是可以遺傳 的。9. 設(shè)一條DNA鏈上的A+ G與T+ C的比值為0.5，那么，整個DNA分子上的這個比值也是 0.5。（）答案：錯誤解析：根

7、據(jù)堿基互補重新排列定律，在雙鏈 DNA 分子中， A 與 T 互補 配對， G 與 C 互補配對，因此， A 的含量等于 T 的含量， G 的含量等 于C的含量，所以，A + G = T+ C。A + G與T+ C的比值為1。10. 紫外線引起DNA損傷的結(jié)果是導(dǎo)致胸腺嘧啶二聚體的形成。（ ） 揚州大學(xué) 2019 研答案：正確解析：紫外線照射后 DNA ，發(fā)現(xiàn)有幾個變化，其中最明顯的變化聯(lián)結(jié) 同一鏈上的八個鄰接嘧啶核苷酸的共價是，形成嘧啶二聚體。3 、名詞解釋（ 50 分，每題 5 分）1. 岡崎片段答案：岡崎片段是指在 DNA 半不連續(xù)復(fù)制中，沿著后隨鏈的模板鏈 合成的新 DNA 片段，隨后

8、能被連接形成一條完整的 DNA 鏈。岡崎片 段的長度在真核與原核生物中存在差別，真核生物的岡崎片段長度約為100200核苷酸殘基，而原核生物的為 10002000核苷酸殘基。解析：空2. microsatellite DNA寧波大學(xué) 2019研答案： microsatellite DNA 的中文名稱是微衛(wèi)星 DNA ，是指一類高 度重復(fù)序列 DNA ，是指在介質(zhì)氯化銫中作密度梯度離心（離心速度可 以高達每分鐘幾萬轉(zhuǎn)）時， DNA 分子將按其大小分布在離心管內(nèi)不同 密度的氯化銫介質(zhì)相同中，不同層面的 DNA 形成的不同的六條條一 個或多個小的衛(wèi)星帶中的 DNA 。這種 DNA 的片段含有異常高或

9、低的 GC 含量，常會在主要 DNA 帶附近相伴一個次帶，其浮力密度出現(xiàn) 在主帶的前面或后面。解析：空3. RNA 剪接答案： RNA 剪接是指從 DNA 模板鏈轉(zhuǎn)錄出的最初轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中除去內(nèi) 含子，已連續(xù)并將外顯子相連形成一個連續(xù)的 RNA 分子的過程。解析：空4. RNA 干擾 暨南大學(xué) 2018研答案： RNA 干擾是指在進化過程整個過程中高度保守的、由雙鏈RNA （dsRNA ）誘發(fā)的、同源 mRNA 高效特異性降解的現(xiàn)象。積極 作用機制是較長雙鏈RNA經(jīng)過Dicer加工被降解形成2125個核 苷酸的 siRNA ，并定位目標(biāo) mRNA 。由 siRNA 中的反義鏈指引合成 RISC（R

10、NA 無腺的沉默復(fù)合體）的核蛋白體，再由 RISC 介導(dǎo)切割目 的 mRNA 分子中與 siRNA 反義鏈互補的區(qū)域，從而同時實現(xiàn)干擾靶 基因表達的功能。解析：空蛋白質(zhì)磷酸化答案：蛋白質(zhì)磷酸化是指由蛋白質(zhì)激酶催化的把ATP或GTP上丫位的磷酸基轉(zhuǎn)移到蛋白質(zhì)氨基酸殘基上的過程，為可逆過程，是生物體 內(nèi)存在的普遍的調(diào)節(jié)方式，在細(xì)胞信號的傳遞過程中占有極其重要的 地位。蛋白質(zhì)磷酸化是調(diào)節(jié)和控制蛋白質(zhì)活力和功能的最基本、最普 遍，也是最重要的機制。解析：空5. RTPCR ( reverse transcription PCR)答案：RTPCR是指對聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR )的一類廣泛應(yīng)用的變形 PC

11、R 技術(shù)。在 RTPCR 中，一條 RNA 鏈被逆轉(zhuǎn)錄成為互補 DNA ，再 以此為模板通過 PCR 進行 DNA 擴增，從而獲取目的遺傳或檢測基因 表達。一般用于分析基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，克隆 cDNA ，及合成 cDNA 探 針，改造 cDNA 序列等。解析：空6. 扣除雜交( substrate hybridization ) 答案：扣除雜交，又稱扣除 cDNA 克隆，指用一般細(xì)胞的 mRNA 與 特殊細(xì)胞的 cDNA 雜交，兩類細(xì)胞共有的 cDNA 形成雙鏈，而特異的 cDNA 保持單鏈狀態(tài)，回收單鏈的 cDNA 進行克隆，用于制備文庫或 探針，分離特異的基因的技術(shù)，它是通過構(gòu)建扣除文庫得以

12、努力實現(xiàn) 的。扣除法的本質(zhì)是除去那些普遍共同存在的或是非誘發(fā)產(chǎn)生的cDNA 序列，從而使欲分離的目的基因的序列得到有效的富集，提高 了分離的一般而言。解析：空7. Gene expression 寧波大學(xué) 2019 研 暨南大學(xué) 2018 研 答案： Gene expression 的拼法是基因表達，是指基因經(jīng)過轉(zhuǎn)錄、翻 譯，將來自基因的遺傳信息合成具有特異生物化學(xué)分子的蛋白質(zhì)功能 或 RNA 分子的過程。存儲在 DNA 圣索弗朗代蘭縣中其的遺傳密碼通 過基因表達得到“翻譯”，并且會帶來基因表達的特性產(chǎn)生生物體的 表型。因此，基因表達的顯而易見調(diào)節(jié)對于生物體的發(fā)育至關(guān)重要。 解析：空8. 蛋白

13、質(zhì)組學(xué) 答案：蛋白質(zhì)組學(xué)本質(zhì)上指的是在大規(guī)模水平上蛋白質(zhì)的特征，包括 蛋白質(zhì)的表達水準(zhǔn)，翻譯后的修飾，蛋白與蛋白相互作用等，由此獲 得蛋白質(zhì)水平上所的關(guān)于疾病發(fā)生，細(xì)胞代謝等過程的線粒體整體而 全面的認(rèn)識。其所研究的蛋白質(zhì)包括一種細(xì)胞乃至一種生物所表達的 全部蛋白質(zhì)。解析：空9. nested PCR 寧波大學(xué) 2019 研答案：nested PCR的譯音是巢式PCR，指一種優(yōu)化的聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)，通過使用兩對PCR引物擴增詳盡的片段。第一對 PCR引 物擴增片段和普通 PCR 相似。第二對引物稱為巢式引物在第一次 PCR 產(chǎn)物內(nèi)部，使得第二次 PCR 擴增段落短于第一次擴增。巢式 PC

14、R 的優(yōu)點在于，如果第四次擴增產(chǎn)生了錯誤片段，則第二次能在錯誤片段 上進行引物配對并擴增的概率極低，大大提高了擴增的特異性。解析：空4、填空題（ 40 分，每題 5 分）1. 免疫細(xì)胞包括、和。答案：淋巴細(xì)胞 |巨噬細(xì)胞|抗原體呈細(xì)胞 |漿細(xì)胞|粒細(xì)胞|肥大細(xì)胞 解析：免疫細(xì)胞是指所有參與免疫應(yīng)答或與免疫應(yīng)答有關(guān)的細(xì)胞及其 前體，包括造血干細(xì)胞、抗原提呈細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、粒細(xì)胞、肥大細(xì) 胞和巨噬細(xì)胞等。2. 遺傳密碼的特點包括：、。答案：連續(xù)性 |不重疊性 |簡并性|擺動性 |通用性|終止密碼子 解析：遺傳密碼是一組規(guī)則，將 DNA 或 RNA 序列以三個核苷酸為一 組的密碼子轉(zhuǎn)譯為蛋白質(zhì)序列氨

15、基酸的，以用于蛋白質(zhì)合成。遺傳密 碼的特點等等：連續(xù)性、不重疊性、簡并性、擺動性、通用性、終止 密碼子3. 在基因表達的調(diào)節(jié)控制過程中，效應(yīng)物包括誘導(dǎo)物和共阻遏物， 誘導(dǎo)物起作用，共阻遏物起作用。答案：正調(diào)控 |負(fù)調(diào)控解析：基因表達調(diào)控是生物體內(nèi)基因表達的調(diào)節(jié)控制，使細(xì)胞中基因表達的過程在時間、空間上處于有序狀態(tài)，并對環(huán)境條件錯綜復(fù)雜的 變化作出反應(yīng)的復(fù)雜過程。在基因表達的調(diào)節(jié)控管處理過程過程中， 效應(yīng)物共有包括誘導(dǎo)物和共阻遏物，其中誘導(dǎo)物起正調(diào)控措施作用， 共阻遏物起負(fù)調(diào)控作用。4. DNA的合成方向，RNA勺轉(zhuǎn)錄方向，蛋白質(zhì)合成方向。答案：53 ' |5 '端C3 端 |N

16、解析： DNA 的合成是按照預(yù)定核苷酸的順序，將脫氧核苷酸逐個相連連接合成DNA鏈，其方向為5 3RNA的轉(zhuǎn)錄是以雙鏈DNA中 的確定的一條鏈為模板，以 ATP、CTP、GTP、UTP 四種核苷三磷酸 為原料，在RNA聚合酶催化下合成RNA的過程，轉(zhuǎn)錄方向為5 ' - 3 ' 蛋白質(zhì)的合成為N端C端。5. 真核生物mRNA專錄后的成熟步驟主要包括、。答案：加帽 |加尾|剪接|編輯解析：mRNA前體的加工包括：加帽，加尾，剪接，RNA編輯。加帽：5 '端的帽子結(jié)構(gòu)是n7GpppG。加尾：poly (A)聚合酶形成 3 ' poly A(尾。剪接：除去并連接 DNA

17、、RNA或多肽鏈片段，形 成新的微觀遺傳重組體或改變原有的遺傳結(jié)構(gòu)的過程，切除內(nèi)含子， 并把保留的mRNA連接起來。編輯：通過核苷酸的替換、插入或刪 除初生轉(zhuǎn)錄物特定部位的堿基而改變其中的核苷酸序列，使其發(fā)生不 同于模板 DNA 的變化，導(dǎo)致 DNA 所編碼的遺傳信息發(fā)生改變。6. 常規(guī)PCR的產(chǎn)物并不是平末端的，而是在擴增產(chǎn)物的3'有一個堿基，為了對PCR產(chǎn)物進行高效的克隆，人們開發(fā)出了一種專門用于 PCF產(chǎn)物克隆的載體，即。答案：突出的 A|T 載體 解析：一般PCR所用的DNA聚合酶具有在PCR產(chǎn)物3 '端添加一個堿 基 A 的特性。也就是說，實際上常規(guī) PCR 的產(chǎn)物并

18、不是平末端的，而 是有一個突出的 A 堿基。為了對 PCR 產(chǎn)物進行高效的克隆，人們開發(fā) 技術(shù)出了一種專門用于PCR產(chǎn)物克隆的載體T載體。T載體是一個線 性化的載體，其末端是一個突出的 T,正好與PCR產(chǎn)物上突出的A配 對。7. 在光復(fù)活過程中，光復(fù)活酶作用于，使它復(fù)原為。 答案：嘧啶二聚體 |嘧啶解析：光復(fù)活作用是一種高度專一的 DNA 直接修復(fù)過程，只著用于起 因于由于紫外線已引起的DNA嘧啶二聚體（主要為TT），使其復(fù)原 為嘧啶。8. 常用的定點突變方法一般有、及。 答案：寡核苷酸引物介導(dǎo)的定點突變 |PCR 介導(dǎo)的定點突變 |盒式突變 解析：定點突變是指聚合酶通過寡核苷酸引物介導(dǎo)、 P

19、CR 介導(dǎo)、盒式 突變等方法向目的 DNA 片段中才引入所需變化，包括堿基的添加、刪 除、點突變等。定點突變能迅速、高效的提高 DNA 所表達的目的蛋白 的性狀及表征，是基因研究工作中一種非常有用的手段。5、簡答題（ 35 分，每題 5 分）1. 蛋白質(zhì)磷酸化如何改變酶的活性？答案：蛋白質(zhì)磷酸化是指由蛋白質(zhì)激酶催化的把 ATP或GTP 丫位的磷酸基轉(zhuǎn)移到底物蛋白質(zhì)氨基酸殘基（絲氨酸、蘇氨酸）上的過 程，是生物體內(nèi)一種普通的自我調(diào)節(jié)方式，在過程細(xì)胞介導(dǎo)的過程中 起重要作用。蛋白質(zhì)磷酸化通過以下幾種方式改變酶的活性：（ 1 ）單一部位的磷酸化導(dǎo)致單一的功能變化。（ 2 ）單一部位的磷酸化導(dǎo)致功能的

20、不同變化。 （3）多個部位的磷酸化加劇單一功能變化。（ 4 ）多個部位的磷酸化分別導(dǎo)致不同的功能變化。 （5）磷酸化改變蛋白表面金屬表面假若，靜電力使得構(gòu)象發(fā)生變 化，暴露活性位點。解析：空2. 說明報告基因的用途。答案： 報告基因是指一種編碼可被檢測的蛋白質(zhì)或酶的基因，也 是一個其蛋白表達產(chǎn)物非常容易被鑒定的基因。報告基因的用途如下：（1）可以用來觀察細(xì)胞中基因的表達情況，便于分析基因的調(diào)節(jié)。（2）在轉(zhuǎn)基因領(lǐng)域用于檢測轉(zhuǎn)基因是否成功。（3）用于鑒定啟動子，為了鑒定某個基因的基本啟動子元件，把該基因5 '側(cè)翼序列的各缺失片段構(gòu)建含有某報告基因的重組質(zhì)粒。用 這些攜帶報告基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化受

21、體細(xì)胞，然后檢測該報告基因的產(chǎn)物。解析：空3. 以乳糖操縱子（ Lac operon ，由 lacI 、 lacP 、lacO、lacZ 、lacY 、 lacA 組成）為例，說明何為順式作用元件和反式作用因子，以及它們 各自如何起作用？ 浙江海洋大學(xué) 2019研答案：（ 1）順式作用器件是指序列于基因旁側(cè)序列中能影響基因表達的存在，主要包括啟動子、增強子、調(diào)控序列和可誘導(dǎo)元件等。 順式促進作用元件酵素本身不編碼任何蛋白質(zhì)，僅僅提供一個轉(zhuǎn)錄因 子的結(jié)合位點，與反式作用大分子相互作用參與基因表達的調(diào)控。乳 糖操縱子中的 lacP 、lacO 上均屬于順式作用元件，它們的作用只限于 影響同一條 D

22、NA 鏈上的基因。（2）反式作用因子是指能夠直接或間接與作用元件特異性識別或 結(jié)合而調(diào)控相應(yīng)基因表達單糖的氨基酸（多數(shù)為蛋白質(zhì)）或 RNA 。絕 大多數(shù)真核轉(zhuǎn)錄控制因子由某一基因表達后，通過與特異的順式作用 元件相互作用（直接或間接識別和結(jié)合轉(zhuǎn)錄上游區(qū)段 DNA ），影響另 一基因的轉(zhuǎn)錄。乳糖操縱子中的 lacA 、 lacI 、lacZ 、 lacY 均屬于反式 抑制作用因子。解析：空4. 科學(xué)家發(fā)現(xiàn)一種新的野生植物，如何制備相應(yīng)的cDNA文庫？答案： 制備 cDNA 文庫的步驟如下：（1）cDNA獲得方法：植物總RNA的提取；mRN的分離； cDNA雙鏈合成：Superscipt 合成第一

23、鏈，cDNA 第二鏈的合成，雙鏈 cDNA 末端補平， EcoR I 接頭的連接，雙鏈 cDNA 末端的磷酸化及限制性內(nèi)切核酸酶酶切，膠回收 cDNA 。（2）克隆方法：載體制備：pBlueScript的提取, pBlueScript 的雙酶切消化，載體去磷酸化，載體效率檢測； cDNA雙鏈和載體的連接：連接，檢測(PCR方法)；電轉(zhuǎn)化： 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的制備，連接產(chǎn)物純化，電轉(zhuǎn)化；快速鑒定、菌 落 PCR : pBlueScript cDNA 文庫擴增。( 3 )文庫質(zhì)量定義：評價一個文庫是否有實用價值大小在于文庫 的含量和插入片段的主要兩個方面。所構(gòu)建的文庫中必須有足夠多的 克隆數(shù)，這樣

24、才能確保基因組 cDNA 中的每一個序列至少有一個拷貝 存在于重組文庫中，為達到這一要求，文庫的容量應(yīng)不小于1.7 X 105 ,同時為保證 cDNA 片段的完整性，插入片段的平均大小應(yīng)相片不相等 1kb 。解析：空5. 為什么被RNA聚合酶皿識別的啟動子不常見？答案： 被RNA聚合酶皿識別的啟動子不不必少見的原因如下：(1) RNA聚合酶皿負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)錄一類具有轉(zhuǎn)錄物不編碼蛋白質(zhì)和基 因通常以多拷貝存在兩種特征基因。(2) RNA 聚合酶皿負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)錄的基因有 5S rRNA 和tRNA 基因。 與其他基因的啟動子不同，在研究 5S rRNA的基因5 '端的時發(fā)現(xiàn)這 類基因的啟動子位于基因的內(nèi)

25、部。該基因的前 50 對核苷酸完全缺失， 對轉(zhuǎn)錄起始毫無影響；同樣地， 84 以后序列的缺失對轉(zhuǎn)錄起始也沒 有影響。因此， 50 到84 間的序列為 5S rRNA 基因的啟動子。(3) 更少見的是， tRNA 基因的啟動子被分成 A 和 B 兩部分，它們之間的序列缺失不影響啟動子的效率。解析：空6. 簡述蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運的機制。答案： 蛋白質(zhì)合成后定向地被輸送到其執(zhí)行功能的場所的過程叫 做靶向運輸。大多數(shù)情況下，被應(yīng)搬運的蛋白質(zhì)分子需穿過膜結(jié)構(gòu)， 才能飛到特定的部位。蛋白質(zhì)的運輸機制包括翻譯一運轉(zhuǎn)后機制和翻 譯同步運轉(zhuǎn)機制。(1) 翻譯：運轉(zhuǎn)同步機制：蛋白質(zhì)合成之初，一旦信號肽序列的 N 端暴露在

26、核糖體外，該序列(包括核糖體)就迅速與信號識別顆粒(SRP)相結(jié)合，誘發(fā)SRP與GTP相結(jié)合形成SRP復(fù)合物，暫停新 生肽的進一步延伸(此時新生肽一般長約 70 個殘基)。受到位于 ER 外膜上的 SRP 受體及核酸受體( DP )的牽引，這個復(fù)合物( GTPSRP 核糖體 mRNA 新生肽)立即向 ER 外膜靠攏， GTP 水解 釋放 SRP 并轉(zhuǎn)入新一輪循環(huán)，肽鏈重新開始嵌入，并通過肽鏈鹽運鹽 運復(fù)合物進入 ER 內(nèi)腔，信號肽被切除(某些蛋白質(zhì)的信號肽被保留)。( 2)線粒體蛋白質(zhì)跨膜運轉(zhuǎn)：分子伴侶 HSP70 或線粒體輸入激 活因子( MSF )核苷酸等先與待運轉(zhuǎn)多肽結(jié)合使多肽鏈解折疊，

27、然后 它們與線粒體外膜上的外膜轉(zhuǎn)運酶( TOM )受體復(fù)合物結(jié)合，通過 TOM 和內(nèi)膜轉(zhuǎn)運酶( TIM )組成的膜通道進入線粒體的內(nèi)腔，蛋白酶 水解前導(dǎo)肽，最后多肽重新折疊為成熟的線粒體盡早蛋白質(zhì)。( 3 )葉綠體蛋白質(zhì)跨膜運轉(zhuǎn)：與線粒體蛋白質(zhì)跨膜運轉(zhuǎn)相似。( 4 )核定位酵素的運轉(zhuǎn)：脂質(zhì)的核定位是通過多個蛋白的共同作 用來實現(xiàn)的。Importi n (a,B亞基)的作用有點像SRP受體。核定 位序列( NLS )蛋白 importin 復(fù)合物停留在核孔上，并在RanGTPase 的作用下所通過核孔。蛋白質(zhì)中的核定位序列一般不被 切除。解析：空7. 在染色體步移中，用哪些方法獲得克隆的末端？答

28、案： 染色體步移是指由生物基因組或基因組文庫中的已知序列 出發(fā)逐步探知其旁鄰的未知序列或和已知序列呈線性關(guān)系的目的序列 的核苷酸的技術(shù)。在染色體步移中，可以用來下讓方法獲得克隆的末 端：（1 ）運用靈活運用載體克隆位點的通用多肽，如 T3 和 T7 啟動 子引物。（2 ）假如克隆位點兩側(cè)不能 T3 和 T7 啟動子，可用克隆的酶識 別的 DNA 序列和隨機引物去擴增末端。（3）假如已知兩個克隆的重疊部分，反之亦然可直接把重疊部分 切下來進行符號，然后用這個探針成功進行篩選。解析：空6、論述題（ 20 分，每題 5 分）1. 說明基因芯片的工作原理及其在生物學(xué)研究中的意義。答案： 基因芯片的原型

29、是 20 世紀(jì) 80 年代中期提出的，中所是目 前生物芯片家族中最完善、應(yīng)用最廣泛傳播的芯片。基因芯片的原理 是基于核酸分子堿基之間（ ATCG ）互補配對的原理，利用分子生物學(xué)、 基因組學(xué)、信息技術(shù)、微電子、精密機械和光電子等技術(shù)將基因或 DNA 分子排列在特定固體物表面構(gòu)成的其微點陣。然后，將標(biāo)記的樣 品分子與微點陣上的 DNA 雜交，以實現(xiàn)多到數(shù)千人工授精個分子之 間的雜交反應(yīng)，高通量大規(guī)模地分析檢測樣品中多個基因的表達狀況 或者特定基因（ DNA ）分子的存在。基因芯片可以用于基因的功能研究和基因組研究、疾病的臨床診 斷和檢測等眾多方面，其在生物學(xué)研究中的意義在于： 基因表達檢測：人類

30、基因組編碼 2000025000個不同的功能 基因，只知道基因序列內(nèi)部信息資料，想像要理解其基因功能是遠遠 不夠的，因此具有監(jiān)測網(wǎng)大量 mRNA 的實驗工具很重要。基因芯片技 術(shù)可清楚直接快速地檢測出以 1 ： 300000 水平出現(xiàn)的 mRNA ，且易 于基因同時監(jiān)測成千上萬的基因組。 DNA 測序：人類基因組計劃的促進了更高效率的、能夠自動化 操作的測序方法的發(fā)展，而基因芯片在測序發(fā)展過程中發(fā)揮了重要作用，如芯片技術(shù)中其雜交測序（SBH ）技術(shù)和鄰堆雜交（CSH）技術(shù) 安全可靠都是新的高效快速測序方法，如使用美國 Affymetrix 公司 1998 年生產(chǎn)出的帶有 13.5 萬個基因探針

31、的芯片可以使人類 DNA 解 碼速度提高 25 倍。 突變體和多態(tài)性的檢測：基因芯片技術(shù)還可大規(guī)模地檢測和分析 DNA 的變異及多態(tài)性。有關(guān)實驗結(jié)果已經(jīng)表明 DNA 芯片技術(shù)可快 速、準(zhǔn)確地研究大量樣品中特定基因所有可能的雜合變異。 人類疾病的診斷：基因芯片技術(shù)所具有的高靈敏度、高特異性 以及操作簡便、自動化程度高、結(jié)果客觀性強等特點使其在人類病原 體病原體診斷、遺傳病診斷等方面診治得到了廣泛的應(yīng)用。 尋找新基因：有關(guān)實驗表明在缺乏任何序列信息的條件下，基 因芯片也可用于基因發(fā)現(xiàn)，如黑色素瘤生長刺激因子就是通過基因芯 片技術(shù)發(fā)現(xiàn)的。解析：空2. 試述DNA的主要理化性質(zhì)。答案： DNA 的主要

32、理化性質(zhì)如下：（1）核酸的時帶電荷性質(zhì) 無論是 DNA 還是 RNA ，核苷酸鏈內(nèi)既有酸性的磷酸基又有堿 性的含氮雜環(huán)堿基，因此核酸是異性戀電解質(zhì)。 由于磷酸基的酸性極強，核酸通常表現(xiàn)為酸性。 在中性或堿性溶液中，核酸帶負(fù)電荷，在外加電場作用下向陽 極移動。 核酸的時帶電荷性質(zhì)可用于分離分子質(zhì)量大小不同的核酸。帶 負(fù)電荷的核酸與帶正電荷的金屬離子成鹽，在有硫酸氨或異丙醇存在 時核酸即可從溶液中沉淀析出。 常用氯化鈉、乙酸鈉、乙酸鉀或乙酸銨等氯化鈉鹽溶液來制備 核酸。（2）核酸的高分子性質(zhì) 核酸是分子質(zhì)量很大的高分子化合物，因此核酸溶液具有較大 核酸的接觸面。 溶液的黏性與分子的不對稱性有關(guān)，分

33、子不對稱性愈大，其黏 度也就愈大，不規(guī)則分子比球形分子溶液的粘度大，線性分子溶液的酸度更大。 DNA 分子的長度與其直徑之比可達 107 ，因此極稀的 DNA 溶 液也有較大的黏度。 RNA 溶液的黏度較 DNA 小。當(dāng)核酸溶液在受熱或酸堿等因素 下用作用下發(fā)生變性時，核酸不對稱性變小，溶液黏度下降。因此可 用沸點測定作為 DNA 變性的指標(biāo)。（3）核酸的紫外吸收核酸分子的堿基中含有的共軛雙鍵具有吸收紫外線的性質(zhì)。蛋白質(zhì)的最大吸收折射率為 280nm ，而核酸的最大紫外吸收波 長為 260nm 。 利用核酸的紫外吸收特性可鑒別核酸樣品中的蛋白質(zhì)雜質(zhì)，對 核酸進行定性、定量分析。也最大利用核酸的

34、可以紫外吸收受分子中 間結(jié)構(gòu)影響極大的特性研究核酸的變性。（4）核酸的變性和復(fù)性 核酸的變性是指在極端的 pH 和受熱前提下核酸分子中的氫鍵 二聚體斷裂、雙螺旋結(jié)構(gòu)解開的現(xiàn)象。因為變性時堿基對彼此間的氫 鍵斷開，堆積力也遭受重創(chuàng)，但不伴有共價鍵的斷裂，所以變性以后 的核酸在 260nm 的光吸收增強，稱為增色效應(yīng)。 變性核酸經(jīng)退火恢復(fù)原狀的過程稱為變性 DNA 的復(fù)性。一定 條件下核酸的彎果是可逆的。熱變性的 DNA 溶液慢慢冷卻，可使解 開的兩條互補單鏈重新締合而形成雙螺旋結(jié)構(gòu)，即退火。如果將熱變 性的 DNA 溶液驟然冷卻至低溫，則變性的 DNA 很難復(fù)性。伴隨復(fù)性 會出現(xiàn)核酸溶液紫外光不

35、會吸收減弱的現(xiàn)象，稱為核酸的減色效應(yīng)。解析：空3. 如果想讓人的胰島素基因在細(xì)菌中表達生產(chǎn)人胰島素，你認(rèn)為至 少應(yīng)當(dāng)滿足哪些條件？答案： 欲在細(xì)菌生產(chǎn)能力中表達生產(chǎn)人的生長激素，需要將人的 胰島素基因克隆到一個細(xì)菌表達上，然后誘導(dǎo)表達，分離純化獲得核 酸。在克隆過程中需要滿足以下條件：（1）將胰島素基因的編碼序列置于含有核糖體結(jié)合位點和起始密 碼子 ATG 的細(xì)菌強啟動子的下游，因為細(xì)菌的 RNA 聚合酶不能識別 真核生物的啟動子；（2 ）使用胰島素基因的 cDNA 編碼序列，因為大多數(shù)真核基因 有內(nèi)含子，轉(zhuǎn)錄后被切除形成成熟 mRNA ，而細(xì)菌細(xì)胞不能切除真核 基因的內(nèi)含子；（3）選用合適的

36、突變型宿主，如蛋白酶缺失的亞型，防止產(chǎn)生的 真核蛋白質(zhì)產(chǎn)物被細(xì)菌的蛋白酶所識別和降解；（ 4 ）人的胰島素由 A 、B 兩個肽鏈組成，是由胰島素原（無活性） 切除連接 A 鏈和 B 鏈的 C 肽后已經(jīng)形成有活性的胰島素。可以分別克 隆 A 、 B 兩鏈的編碼序列，在體外加工形成側(cè)鏈；或者克隆胰島素原 的編碼序列，在體外切除 C 肽，加工而成。解析：空什么是蛋白質(zhì)組學(xué)？蛋白組學(xué)研究哪些主要內(nèi)容，采用什么技術(shù)， 并簡述原理。答案： （ 1）蛋白質(zhì)組學(xué)是以蛋白質(zhì)組為研究對象，研究細(xì)胞、組 織或生物體蛋白質(zhì)組成及其變化規(guī)律的科學(xué)。蛋白質(zhì)組學(xué)源于蛋白質(zhì) 和基因組學(xué)兩個詞的雜合，是指在蛋白質(zhì)組水平上蛋白質(zhì)

37、的特征，包 括蛋白質(zhì)的表達發(fā)展水平、翻譯與修飾、蛋白與蛋白相互作用等，并 由此獲得關(guān)于疾病發(fā)生、發(fā)展戰(zhàn)略及細(xì)胞代謝戰(zhàn)略目標(biāo)等過程的整體 認(rèn)識。（2）研究的主要內(nèi)容：蛋白質(zhì)組學(xué)的包括研究素材不僅包括對各 種蛋白質(zhì)的識別和定量化，還包括選定它們在細(xì)胞排定內(nèi)外的定位、 修飾、相互反應(yīng)、活性和最終確定它們的基本功能，如蛋白質(zhì)與疾病 的關(guān)聯(lián)性。隨著學(xué)科的發(fā)展，蛋白質(zhì)組學(xué)的研究內(nèi)容也在不斷完善和 擴充。目前涉及如下幾個方面：蛋白質(zhì)：如蛋白質(zhì)組作圖、蛋白質(zhì) 組成分司法鑒定、蛋白質(zhì)差異顯示、同工體比較、蛋白質(zhì)發(fā)掘和蛋白 質(zhì)組數(shù)據(jù)庫構(gòu)建等；基因：如完善功能基因組投資計劃，可進行基 因產(chǎn)物（蛋白質(zhì)）識別、進一步成

38、功進行基因功能鑒定、基因調(diào)控協(xié) 調(diào)機制分析；重要生命活動的分子機制：包括細(xì)胞周期、細(xì)胞分化 與發(fā)育、腫瘤發(fā)生與發(fā)展、環(huán)境反應(yīng)與調(diào)節(jié)、物種進化等；醫(yī)藥靶 分子探尋與分析：靶分子水分子類型包括新形態(tài)藥物靶分子、腫瘤惡 性標(biāo)志，微生物病理介導(dǎo)分子、病原菌毒性成分。（3）采用的技術(shù)及其原理：蛋白質(zhì)組學(xué)研究的核心技術(shù)是雙向電 泳和質(zhì)譜。雙向電泳（2DE ）是蛋白質(zhì)組學(xué)分離蛋白質(zhì)的最重要的 方法之一，一直是分離高度復(fù)雜蛋白混合物的方法。雙向電泳實際上 是兩種不同分離方法的實際上緊密結(jié)合。首先，根據(jù)等電點用等電聚 焦（ I EF ）分離蛋白質(zhì)，然后在聚丙烯酰胺凝膠上電泳進一步分離螢光 聚焦的蛋白質(zhì)。雙向電泳

39、在第一相異向離子交換是根據(jù)等電點的不同， 第二向電泳根據(jù)分子的不同分離蛋白質(zhì)。質(zhì)譜分析法是通過對樣品 離子的質(zhì)量和強度的測定，來進行成分和結(jié)構(gòu)分析的一種。被分析的 樣品首先要離子化，然后利用離子在電場或磁場中的運動性質(zhì)，把離 子按質(zhì)荷比（ mz ）大小依次排列成譜波記錄下來，稱為質(zhì)譜。進行實 施質(zhì)譜分析的設(shè)備稱為質(zhì)譜儀。解析：空7、選擇題（ 12 分，每題 1 分）1. 蛋白質(zhì)的翻譯后修飾主要包括（ ）。A 上述各種修飾B 乙酰化C 糖基化D 磷酸化答案：A解析：蛋白質(zhì)翻譯隨后的修飾方式與 N 修飾有所不同，包含磷酸化、 糖基化、乙酰化以及巰基化等尿嘧啶多種修飾方式。2. 下面哪一個是蛋白合成

40、的起始密碼子？（） 揚州大學(xué) 2019研A UGAB AUGC UAGD UAA答案：B解析：三項， U、UG 和 UG 是終止密碼子；項， UG 是起始密碼子。 因此答案選。3. 用于研究DNA蛋白質(zhì)相互作用的技術(shù)是（）。A 原位雜交B 基因芯片C Southern 雜交D 凝膠阻滯分析答案： D解析：項， Southern 雜交是進行基因組 N 特定序列定位的通用方法。 項，原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切 片中核酸進行雜交，從而對某一特定核酸順序進行精確定量定位的過 程。項，基因芯片指將大量的探針分子固定于支持物上后與標(biāo)記的樣 品分子進行雜交，通過檢測每個探針分子

41、的雜交信號強度延遲時間進 而獲取樣品分子的數(shù)量和序列信息。項，凝膠阻滯分析是用來研究 N 與特異性蛋白的相互作用，通常是放射性標(biāo)記的 N 片段與純化蛋白， 或提取物中的蛋白混合物相結(jié)合，然后在非變性凝膠中分析該產(chǎn)物。 與游離 N 相比，蛋白 N 復(fù)合物的遷移率將降低，因此，與游離 N 相 對應(yīng)，人們將觀察到帶中的“阻滯”。4. ShineDalgarno 順序是指（ ）。A. 在mRN分子的起始密碼子上游813個核苷酸處的順序B. 在DNA分子上轉(zhuǎn)錄起始點前813個核苷酸處的順序C. 16S rRNA3端富含嘧啶的互補順序D. 啟動基因的順序特征答案：A解析：S序列，原核生物mRN中核糖體結(jié)合位點序列。S序列通常坐 落于翻譯起始密碼子 UG 上游約 8 個堿基位置，幫助招募核糖體 RN， 并將核糖體比對并結(jié)合到信使 RN（mRN ）的起始密碼子，從而開始 糖類合成，因此答案選。5. 蛋白質(zhì)翻譯后的修飾主要包括（ ）。A. 上述各種修飾B. 乙酰化C. 磷酸化D. 糖基化答案： A解析：蛋白質(zhì)翻譯后的修飾包括：氨基酸側(cè)鏈的共價修飾：磷酸化、 乙酰化、糖基化（N、0）;蛋白質(zhì)前體的切割和成熟：蛋白質(zhì)前體 蛋白質(zhì)，例：胰島素的成熟。6. 與tRNA中的反密碼子為 GCU配對的mRN沖的密碼子是（）A.