1、分子生物學試題一、名詞解釋1 .cDNA與cccDNA:cDNA是由mRNAB過反轉錄酶合成的雙鏈DNAcccDNA是游離于染色體之外的質粒雙鏈閉合環形DNA2 .標準折疊單位：蛋白質二級結構單元a-螺旋與3-折疊通過各種連接多肽可以組成特殊幾何排列的結構塊，此種確定的折疊類型通常稱為超二級結構。幾乎所有的三級結構都可以用這些折疊類型，乃至他們的組合型來予以描述，因此又將其稱為標準折疊單位。3 .CAP環腺甘酸（cAMP受體蛋白CRP（cAMPreceptorprotein）,cAMP與CRP結合后所形成的復合物稱激活蛋白CAP（cAMPactivatedprotein）4 .回文序列：DNA

2、片段上的一段所具有的反向互補序列，常是限制性酶切位點。5 .micRNA互補干擾RNAe稱反義RNA與mRN而列互補，可抑制mRNA（勺翻譯。6 .核酶：具有催化活性的RNA在RNA的剪接加工過程中起到自我催化的作用。7 .模體：蛋白質分子空間結構中存在著某些立體形狀和拓撲結構頗為類似的局部區域8 .信號肽：在蛋白質合成過程中N端有1536個氨基酸殘基的肽段，引導蛋白質的跨膜。9 .弱化子：在操縱區與結構基因之間的一段可以終止轉錄作用的核甘酸序列。10 .魔斑：當細菌生長過程中，遇到氨基酸全面缺乏時，細菌將會產生一個應急反應，停止全部基因的表達。產生這一應急反應的信號是鳥昔四磷酸（ppGpp）

3、和鳥昔五磷酸（pppGpp）。PpGpp與pppGpp的作用不只是一個或幾個操縱子，而是影響一大批，所以稱他們是超級調控子或稱為魔斑。11 .上游啟動子元件：是指對啟動子的活性起到一種調節作用的DNA序列，-10區的TATA-35區的TGAC破增強子，弱化子等。12 .DNA探針：是帶有標記的一段已知序列DNA用以檢測未知序列、篩選目的基因等方面廣泛應用。13 .SD序列：是核糖體與mRN砧合序列，對翻譯起到調控作用。14 .單克隆抗體：只針對單一抗原決定簇起作用的抗體。15 .考斯質粒：是經過人工構建的一種外源DNA載體，保留噬菌體兩端的COSK,與質粒連接構成。16 .藍-白斑篩選：含La

4、cZ基因（編碼3半乳糖甘酶）該酶能分解生色底物X-gal（5-澳-4-氯-3-口引味-3-D-半乳糖甘）產生藍色，從而使菌株變藍。當外源DNA插入后，LacZ基因不能表達，菌株呈白色，以此來篩選重組細菌。稱之為藍-白斑篩選。17 .順式作用元件：在DNA中一段特殊的堿基序列，對基因的表達起到調控作用的基因元件。18 .Klenow酶：DNA聚合酶I大片段，只是從DNA聚合酶I全酶中去除了5f3外切酶活性19 .錨定PCR用于擴增已知一端序列的目的DNA在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴，然后分別用多聚dC和已知的序列作為引物進行PCFT增。20 .融合蛋白：真核蛋白的基因與外源基因連接，同時

5、表達翻譯出的原基因蛋白與外源蛋白結合在一起所組成的蛋白質。二、填空1 .DNA的物理圖譜是DNA分子的（限制性內切酶酶解）片段的排列順序。2 .RNA酶的剪切分為（自體催化）、（異體催化）兩種類型。3 .原核生物中有三種起始因子分別是（IF-1）、（IF-2）和（IF-3）。4 .蛋白質的跨膜需要（信號肽）的引導，蛋白伴侶的作用是（輔助肽鏈折疊成天然構象的蛋白質）。5 .啟動子中的元件通常可以分為兩種：（核心啟動子元件）和（上游啟動子元件）。6 .分子生物學的研究內容主要包含（結構分子生物學）、（基因表達與調控）、（DNA1組技術）三部分。7 .證明DNA遺傳物質的兩個關鍵性實驗是（肺炎球菌感

6、染小鼠）、（T2噬菌體感染大腸桿菌）這兩個實驗中主要的論點證據是：（生物體吸收的外源DNA變了其遺傳潛能）。8 .hnRNAmRNQ間的差別主要有兩點：（hnRNA轉變為mRNA（勺過程中經過剪接，）、（mRNA勺5末端被加上一個m7pGppp帽子，在mRNA3末端多了一個多聚腺甘酸（polyA）尾巴）。9 .蛋白質多亞基形式的優點是（亞基對DNA的利用來說是一種經濟的方法）、（可以減少蛋白質合成過程中隨機的錯誤對蛋白質活性的影響）、（活性能夠非常有效和迅速地被打開和被關閉）。10 .蛋白質折疊機制首先成核理論的主要內容包括（成核）、（結構充實）、（最后重排）。11 .半乳糖對細菌有雙重作用；

7、一方面（可以作為碳源供細胞生長）；另一方面（它又是細胞壁的成分）。所以需要一個不依賴于cAMP-CRP的啟動子S2進行本底水平的永久型合成；同時需要一個依賴于cAMP-CRP的啟動子S1對高水平合成進行調節。有G時轉錄從（S2）開始，無G時轉錄從（S1）開始。12 .DNA重組技術也稱為（基因克隆）或（分子克隆）。最終目的是（把一個生物體中的遺傳信息DNA轉入另一個生物體）。典型的DNAt組實驗通常包含以下幾個步驟：提取供體生物的目的基因（或稱外源基因），酶接連接到另一DN6子上（克隆載體），形成一個新的重組DNA子。將這個重組DNA分子轉入受體細胞并在受體細胞中復制保存，這個過程稱為轉化。對

8、那些吸UD了重組DNA的受體細胞進行篩選和鑒定。對含有重組DNA的細胞進行大量培養，檢測外援基因是否表達。13、質粒的復制類型有兩種：受到宿主細胞蛋白質合成的嚴格控制的稱為（嚴緊型質粒），不受宿主細胞蛋白質合成的嚴格控制稱為（松弛型質粒）。14. PCR的反應體系要具有以下條件：a、被分離的目的基因兩條鏈各一端序列相互補的DNA引物（約20個堿基左右）。b、具有熱穩定性的酶如：TagDN臊合酶。c、dNTPd、作為模板的目的DNA序列15. PCR的基本反應過程包括：（變性）、（退火）、（延伸）三個階段。16、轉基因動物的基本過程通常包括：將克隆的外源基因導入到一個受精卵或胚胎干細胞的細胞核中

9、；接種后的受精卵或胚胎干細胞移植到雌性的子宮；完成胚胎發育，生長為后代并帶有外源基因；利用這些能產生外源蛋白的動物作為種畜，培育新的純合系。17 .雜交瘤細胞系的產生是由（脾B）細胞與（骨髓瘤）細胞雜交產生的，由于（脾細胞）可以利用次黃喋吟，（骨細胞）提供細胞分裂功能，所以能在HAT培養基中生長。18 .隨著研究的深入第一代抗體稱為（多克隆抗體）、第二代（單克隆抗體）、第三代（基因工程抗體）。19 .目前對昆蟲病毒的基因工程改造主要集中于桿狀病毒，表現在引入（外源毒蛋白基因）；（擾亂昆蟲正常生活周期的基因）；（對病毒基因進行修飾）。20 .哺乳類RNAm合酶H啟動子中常見的元件TATAGGCA

10、ATW對應的反式作用蛋白因子分別是（TFIID）、（SP-1）和（CTF/NF1）。21 .RNA聚合酶H的基本車t錄因子有、TFH-A、TFH-B、TFII-D、TFn-E他們的結合順序是：（D、A、BE）。其中TFII-D的功能是（與TATA盒結合）。22 .與DNA吉合的轉錄因子大多以二聚體形式起作用，轉錄因子與DNA吉合的功能域常見有以下幾種（螺旋-轉角-螺旋）、（鋅指模體）、（堿性-亮氨酸拉鏈模體）。23 .限制性內切酶的切割方式有三種類型分別是（在對稱軸5,側切割產生5,粘端）、（在對稱軸3,側切割產生3粘端）（在對稱軸處切割產生平段）。24 .質粒DNAM有三種不同的構型分別是：

11、（SC構型）、（oc構型）、（L構型）。在電泳中最前面的是（SC構型）。25 .外源基因表達系統，主要有（大腸桿菌）、（酵母）、（昆蟲）和（哺乳類細胞表）。26 .轉基因動物常用的方法有：（逆轉錄病毒感染法）、（DNA顯微注射法）、（胚胎干細胞法）。三、簡答1 .分別說出5種以上RNA勺功能？轉運RNAtRNA轉運氨基酸；核蛋白體RNArRNA核蛋白體組成成；信使RNAmRNAf白質合成模板；不均一核RNAhnRNA成熟mRNA勺前體；小核RNAsnRNA參與hnRNA的剪接；小胞漿RNAscRNA/7SL-RNA蛋白質內質網定位合成的信號識別體的組成成分；反義RNAanRNA/micRNA對

12、基因的表達起調節作用；核酶RibozymeRNA有酶活性白RNA2 .原核生物與真核生物啟動子的主要差別？原核生物TTGACA-TATAAT起始位點-35-10真核生物增強子-GC-CAAT-TATAA5mGpp-起始位點-110-70-253 .對天然質粒的人工構建主要表現在哪些方面？天然質粒往往存在著缺陷，因而不適合用作基因工程的載體，必須對之進行改造構建：a、加入合適的選擇標記基因，如兩個以上，易于用作選擇，通常是抗生素基因。b、增加或減少合適的酶切位點，便于重組。c、縮短長度，切去不必要的片段，提高導入效率，增加裝載量。d、改變復制子，變嚴緊為松弛，變少拷貝為多拷貝。e、根據基因工程的

13、特殊要求加裝特殊的基因元件4 .舉例說明差示篩選組織特異cDNA的方法？制備兩種細胞群體，目的基因在其中一種細胞中表達或高表達，在另一種細胞中不表達或低表達，然后通過雜交對比找到目的基因。例如：在腫瘤發生和發展過程中，腫瘤細胞會呈現與正常細胞表達水平不同的mRNA因此，可以通過差示雜交篩選出與腫瘤相關的基因。也可利用誘導的方法，篩選出誘導表達的基因。5 .雜交瘤細胞系的產生與篩選？脾B細胞+骨髓瘤細胞，加聚乙二醇（PEG促進細胞融合，HAT培養基中培養（內含次黃喋吟、氨基蝶吟、T）生長出來的脾B-骨髓瘤融合細胞繼續擴大培養。細胞融合物中包含：月e-脾融合細胞：不能生長，脾細胞不能體外培養。骨-

14、骨融合細胞：不能利用次黃喋吟，但可通過第二途徑利用葉酸還原酶合成喋吟。氨基蝶吟對葉酸還原酶有抑制作用，因此不能生長。骨-脾融合細胞：在HAT中能生長，脾細胞可以利用次黃喋吟，骨細胞提供細胞分裂功能。6、利用雙脫氧末端終止法（Sanger法）測定DNA一級結構的原理與方法？原理是采用核甘酸鏈終止劑一2,3,-雙脫氧核甘酸終止DNA的延長。由于它缺少形成3/5/磷酸二脂鍵所需要的3-OH,一旦參入到DNA鏈中，此DNA鏈就不能進一步延長。根據堿基配對原則，每當DNA聚合酶需要dNM哆入到正常延長的DNA鏈中時，就有兩種可能性，一是參入ddNTP,結果導致脫氧核甘酸鏈延長的終止；二是參入dNTP,使

15、DN頌仍可繼續延長，直至參入下一個ddNTR根據這一方法，就可得到一組以ddNTP結尾的長短不一的DNA段。方法是分成四組分別為ddAMRddGMPddCMRddTMP反應后，聚丙烯酰胺凝膠電泳按泳帶可讀出DNA列。7、激活蛋白（CAB對轉錄的正調控作用？環腺甘酸（cAMP受體蛋白CRP（cAMPreceptorprotein）,cAMP與CRP結合后所形成的復合物稱激活蛋白CAP（cAMPactivatedprotein）。當大腸桿菌生長在缺乏葡萄糖的培養基中時，CAP合成量增加，CAP具有激活乳糖（Lac）等啟動子的功能。一些依賴于CRP的啟動子缺乏一般啟動子所具有的典型的-35區序列特征

16、（TTGACA。因此RNA聚合酶難以與其結合。CAP的存在（功能）：能顯著提高酶與啟動子結合常數。主要表現以下二方面：CAP通過改變啟動子的構象以及與酶的相互作用幫助酶分子正確定向，以便與-10區結合，起到取代-35區功能的作用。CAP還能抑制RNAm合酶與DNA中其它位點的結合，從而提高與其特定啟動子結合的概率。8、典型的DNA1組實驗通常包括哪些步驟？a、提取供體生物的目的基因（或稱外源基因），酶接連接到另一DNA分子上（克隆載體），形成一個新的重組DNA分子。b、將這個重組DN6子轉入受體細胞并在受體細胞中復制保存，這個過程稱為轉化。c、對那些吸收了重組DNA的受體細胞進行篩選和鑒定。d

17、、對含有重組DNA勺細胞進行大量培養，檢測外援基因是否表達。9、基因文庫的構建對重組子的篩選舉出3種方法并簡述過程。抗生素抗性篩選、抗性的插入失活、蘭-白斑篩選或PCRW選、差式篩選、DN琳針多數克隆載體均帶有抗生素抗性基因（抗氨芳青霉素、四環素）。當質粒轉入大腸桿菌中后，該菌便獲得抗性，沒有轉入的不具有抗性。但不能區分是否已重組。在含有兩個抗性基因的載體中，如果外源DNM段插入其中一個基因并導致該基因失活，就可用兩個分別含不同藥物的平板對照篩選陽性重組子。如pUC質粒含LacZ基因（編碼3半乳糖甘酶）該酶能分解生色底物X-gal（5-澳-4-氯-3-口引味-3-D-半乳糖甘）產生藍色，從而使

18、菌株變藍。當外源DNA插入后，LacZ基因不能表達，菌株呈白色，以此來篩選重組細菌。10、說明通過胚胎干細胞獲得轉基因動物的基本過程？胚胎干細胞（embryonicstemcell,ES）:是胚胎發育期的胚細胞，可以人工培養增殖并具有分化成其它類型細胞的功能。ES細胞的培養：分離胚泡的內層細胞團進行培養。ES在無飼養層中培養時會分化為肌細胞、N細胞等多種功能細胞，在含有成纖維細胞中培養時ES將保持分化功能。可以對ES進行基因操作，不影響它的分化功能可以定點整合，解決了隨機整合的問題。向胚胎干細胞導入外源基因，然后植入到待孕雌鼠子宮，發育成幼鼠，雜交獲得純合鼠。蛋白質的生物合成（一）名詞解釋1

19、.翻譯（translation）:以mRN朋模板，氨酰-tRNA為原料直接供體，在多種蛋白質因子和酶的參與下，在核糖體上將mRNA子上的核甘酸順序表達為有特定氨基酸順序的蛋白質的過程。2 .密碼子（codon）:mRNA3堿基順序與蛋白質中氨基酸順序的對應關系是通過密碼實現的，mRNA中每三個相鄰的堿基決定一個氨基酸，這三個相鄰的堿基稱為一個密碼子。3 .密碼的簡并性（degeneracy）:一個氨基酸具有兩個以上密碼子的現象。4 .同義密碼子（synonymcodon）:為同一種氨基酸編碼的各個密碼子，稱為同義密碼了。5 .變偶假說（wobblehypothesis）:指反密碼子的前兩個堿基

20、（3-端）按照標準與密碼子的前兩個堿基（5-端）配對，而反密碼子中的第三個堿墓則有某種程度的變動，使其有可能與幾種不同的堿基配對。6 .移碼突變（frame-shiftmutation）:在mRNM,若插入或刪去一個核甘酸，就會使讀碼發錯誤，稱為移碼，由于移碼而造成的突變、稱移碼突變。7,同功受體（isoacceptor）:轉運同一種氨基酸的幾種tRNA稱為同功受體。8 .反密碼子（anticodon）:指tRNA反密碼子環中的三個核甘酸的序列，在蛋白質合成過程中通過堿基配對，識別并結合到mRNA勺特殊密碼上。9 .多核糖體(polysome):mRNAJ時與若干個核糖體結合形成的念珠狀結構，

21、稱為多核糖體。(二)問答題1 .參與蛋白質生物合成體系的組分有哪些？它們具有什么功能？mRNA蛋白質合成的模板；tRNA:蛋白質合成的氨基酸運載工具；核糖體：蛋白質合成的場所；輔助因子：(a)起始因子一-參與蛋白質合成起始復合物形成；(b)延長因子一-肽鏈的延伸作用；(c)釋放因子一-終止肽鏈合成并從核糖體上釋放出來。2 .遺傳密碼是如何破譯的？提示：三個突破性工作(1)體外翻譯系統的建立；(2)核糖體結合技術；(3)核酸的人工合成。3 .遺傳密碼有什么特點？(1)密碼無標點：從起始密碼始到終止密碼止，需連續閱讀，不可中斷。增加或刪除某個核甘酸會發生移碼突變。(2) 密碼不重疊：組成一個密碼的

22、三個核甘酸只代表一個氨基酸，只使用一次，不重疊使用。(3) 密碼的簡并性：在密碼子表中，除Met、Trp各對應一個密碼外，其余氨基酸均有兩個以上的密碼，對保持生物遺傳的穩定性具有重要意義。(4) 變偶假說：密碼的專一性主要由頭兩位堿基決定，第三位堿基重要性不大，因此在與反密碼子的相互作用中具有一定的靈活性。(5) 通用性及例外：地球上的一切生物都使用同一套遺傳密碼，但近年來已發現某些個別例外現象，如某些哺乳動物線粒體中的UGM是終止密碼而是色氨酸密碼子。(6) 起始密碼子AUG同時也代表Met,終止密碼子UAAUAGUG砸用頻率不同。4 .簡述三種RNA在蛋白質生物合成中的作用。(1)mRNA

23、DNA的遺傳信息通過轉錄作用傳遞給mRNAmRNA乍為蛋白質合成模板，傳遞遺傳信息，指導蛋白質合成。(2)tRNA:蛋白質合成中氨基酸運載工具，tRNA的反密碼子與mRNAh的密碼子相互作用，使分子中的遺傳信息轉換成蛋白質的氨基酸順序是遺傳信息的轉換器。(3)rRNA核糖體的組分，在形成核糖體的結構和功能上起重要作用，它與核糖體中蛋白質以及其它輔助因子一起提供了翻譯過程所需的全部酶活性。5 .簡述核糖體的活性中心的二位點模型及三位點模型的內容。(1)二位點模型A位：氨酰-tRNA進入并結合的部位；P位：起始氨酰-tRNA或正在延伸的肽基-tRNA結合部位，也是無載的tRNA從核糖體上離開的部位

24、。(2)三位點模型大腸桿菌上的70S核糖體上除A位和P位外，還存在第三個結合tRNA的位點，稱為E位，它特異地結合無負載的tRNA及無負載的tRNA最后從核糖體上離開的位點。6 .氨基酸在蛋白質合成過程中是怎樣被活化的？催化氨基酸活化的酶稱氨酰-tRNA合成酶，形成氨酰-tRNA,反應分兩步進行：(1)活化需Mg2保口Mn2+,由ATP供能，由合成酶催化，生成氨基酸-AMP-酶復合物。，(2)轉移在合成酶催化下將氨基酸從氨基酸一AMP-酶復合物上轉移到相應的tRNA上，形成氨酰-tRNA。7 .簡述蛋白質生物合成過程。蛋白質合成可分四個步驟，以大腸桿菌為例：(1) 氨基酸的活化：游離的氨基酸必

25、須經過活化以獲得能量才能參與蛋白質合成，由氨酰-tRNA合成酶催化，消耗1分子ATP,形成氨酰-tRNAo(2) 肽鏈合成的起始：由起始因子參與，mRNAf30S小亞基、50S大亞基及起始甲酰甲硫氨酰-tRNA(fMet-tRNAt)形成70S起始復合物，整個過程需GTP水解提供能量。(3) 肽鏈的延長：起始復合物形成后肽鏈即開始延長。首先氨酰-tRNA結合到核糖體的A位，然后，由肽酰轉移酶催化與P位的起始氨基酸或肽酰基形成肽鍵，tRNAf或空載tRNA仍留在P位.最后核糖體沿mRNA5-3方向移動一個密碼子距離，A位上的延長一個氨基酸單位的肽酰-tRNA轉移到P位，全部過程需延伸因子EF-T

26、u、EF-Ts,能量由GT艱供。(4) 肽鏈合成終止，當核糖體移至終止密碼UAAUAGUGA寸，終止因子RF-1、RF-2識別終止密碼，并使肽酰轉移酶活性轉為水解作用，將P位肽酰-tRNA水解，釋放肽鏈，合成終止。8 .蛋白質合成中如何保證其翻譯的正確性？提示：(1)氨基酸與tRNA的專一結合，保證了tRNA攜帶正確的氨基酸；(2)攜帶氨基酸的tRNA對mRNA勺識別，mRNA上的密碼子與tRNA上的反密碼子的相互識別，保證了遺傳信息準確無誤地轉譯；(3)起始因子及延長因子的作用，起始因子保證了只有起始氨酰-tRNA能進入核糖體P位與起始密碼子結合，延伸因子的高度專一性，保證了起始tRNA攜帶

27、的fMet不進入肽鏈內部；(4)核糖體三位點模型的E位與A位的相互影響，可以防止不正確的氨酰-tRNA進入A位，從而提高翻譯的正確性；(5)校正作用：氨酰-tRNA合成酶和tRNA的校正作用；對占據核糖體A位的氨酰-tRNA的校對；變異校對即基因內校對與基因間校對等多種校正作用可以保證翻譯的正確。9 .原核細胞和真核細胞在合成蛋白質的起始過程有什么區別。(1)起始因子不同：原核為IF-1,IF-2,IF-2,真核起始因子達十幾種。(2)起始氨酰-tRNA不同：原核為fMet-tRNAf,真核Met-tRNAi（3）核糖體不同：原核為70S核粒體，可分為30S和50S兩種亞基，真核為80S核糖體

28、，分40S和60S兩種亞基10 .蛋白質合成后的加工修飾有哪些內容？提示：（1）水解修飾；（2）肽鍵中氨基酸殘基側鏈的修飾；（3）二硫鍵的形成；（4）輔基的連接及亞基的聚合。11 .蛋白質的高級結構是怎樣形成的？提示：蛋白質的高級結構是由氨基酸的順序決定的，不同的蛋白質有不同的氨基酸順序，各自按一定的方式折疊而成該蛋白質的高級結構。折疊是在自然條件下自發進行的，在生理條件下，它是熱力學上最穩定的形式，同時離不開環境因素對它的影響。對于具有四級結構的蛋白質，其亞基可以由一個基因編碼的相同肽鏈組成，也可以由不同肽鏈組成，不同肽鏈可以通過一條肽鏈加工剪切形成，或由幾個不同單順反子mRN葡譯，或由多順

29、反子mRN葡譯12 .真核細胞與原核細胞核糖體組成有什么不同？如何證明核糖體是蛋白質的合成場所？原核細胞：70S核糖體由30S和50S兩個亞基組成；真核細胞：80S核糖體由40S和60S兩個亞基組成。利用放射性同位素標記法，通過核糖體的分離證明之。13 .已知一種突變的噬菌體蛋白是由于單個核甘酸插入引起的移碼突變的，將正常的蛋白質和突變體蛋白質用胰蛋白酶消化后，進行指紋圖分析。結果發現只有一個肽段的差異，測得其基酸順序如下：正常肽段Met-Val-Cys-Val-Arg突變體肽段Met-Ala-Met-Arg（1）什么核甘酸插入到什么地方導致了氨基酸順序的改變？（2）推導出編碼正常肽段和突變體

30、肽段的核昔酸序列提示：有關氨基酸的簡并密碼分別為Val:GUUGUCGUAGUGArg:CGUCGCCGACGAGAAGGCys:UGUUGCAla:GCUGCCGCACGC提示：（1）在正常肽段的第一個Val的密碼GUA勺G后插入了一個C;（2）正常肽段的核甘酸序列為：AUGGUAJGCGU-CG；突變體肽段的核甘酸序列為：AUGGCUAUGCGU14 .試列表比較核酸與蛋白質的結構。核酸(Nucleicacids)蛋白質（Proteins）DNARNA一級結構Primarystructure核甘酸序列AGTTCT或AGUUCU的排歹U順序3,5,-磷酸二酯鍵氨基酸排列順序肽鍵二級結構Sec

31、ondarystructure雙螺旋主要是氫鍵，堿基堆積力配對（莖-環結構）（同左）有規則重復的構象(a-helix,3一sheet,3-turn)氫鍵三級結構Tertiarystructure超螺旋RNA空間構象一條肽鏈的空間構象范德華力氫鍵疏水作用鹽橋二硫鍵等四級結構Quaternarystructure多條肽鏈（或小同蛋白）15 .試比較原核生物與真核生物的翻譯。原核生物與真核生物的翻譯比較如下：僅述真核生物的，原核生物與此相反。（1） .起始Met不需甲酰化；（2）.無SD序列，但需要一個掃描過程；（3）.tRNA先于mRNAf核糖體小亞基結合；（4） .起始因子比較多；（5）.只一個

32、終止釋放因子。（三）填空題1 .蛋白質的生物合成是以mRNA為模板，以氨酰-tRNA為原料直接供體,以核糖體為合成楊所。2 .生物界共有64個密碼子,其中61個為氨基酸編碼，起始密碼子為AUG;終止密碼子為UAA、UAG、UGA。3 .原核生物的起始tRNA以tRNAf表示,真核生物的起始tRNA以tRNAi表示,延伸中的甲硫氨酰tRNA以tRNAm表示。4 .植物細胞中蛋白質生物合成可在核糖體、線粒體和葉綠體三種細胞器內進行。5 .延長因子T由Tu和Ts兩個亞基組成，Tu為對熱不穩定蛋白質，Ts為對熱穩定蛋白質。6 .原核生物中的釋放因子有三種，其中RF-1識別終止密碼子UAA、UAG;RF

33、-2識別UAA、UGA;真核中的釋放因子只有RF一種。7 .氨酰-tRNA合成酶對氨基酸和相應的tRNA有高度的詵擇性。8 .原核細胞的起始氨基酸是甲酰甲硫氨酸,起始氨酰-tRNA是甲酰甲硫氨酰-tRNA9.原核細胞核糖體的小亞基上的16SrRNA協助辨認起始密碼子。10.每形成一個肽鍵要消耗4個高能磷酸鍵，但在合成起始時還需多消耗1個高能磷酸鍵。11.肽基轉移酶在蛋白質生物合成中的彳乍用是催化_肽鍵_形成和肽酰-tRNA_的水解。12.肽鏈合成終止時，_終止因子進人A”位，識別出終止密碼子,同時終止因子使肽基轉移酶的催化作用轉變為_水解彳用_13.原核生物的核糖體由30S小亞基和O50S大業

34、基組成，真核生物核糖體由40S小業基和_60S大業基組成。14.蛋白質中可進行磷胺化修飾的氨基酸殘基主要為Ser、Thr、Tyr。（四）選擇題1 .蛋白質生物合成的方向是（）。從8N端定點雙向進行從N端、C端同時進行從NHC端2 .不能合成蛋白質的細胞器是（）。線粒體葉綠體高爾基體核糖體3 .真核生物的延伸因子是（）。EFTuEF-2EF-GEF一14 .真核生物的釋放因子是（）。RFRF1RF2RF35 .能與tRNA反密碼子中的I堿基配又的是（）。A、GC、UUU、C、A6 .蛋白質合成所需能量來自（）。ATPGTPATRGTPGTP7 .tRNA的作用是（）O將一個氨基酸連接到另一個氨基

35、酸上把氨基酸帶到mRN期置上將mRN酸到核糖體上增加氨基酸的有效濃度8 .關于核糖體的移位，敘述正確的是（）。空載tRNA的脫落發生在“A”位上核糖體沿mRNA勺3-5方向相對移動核糖體沿mRNA勺5-3方向相對移動核糖體在mRNAh一次移動的距離相當于二個核甘酸的長度9 .在蛋白質合成中，下列哪一步不需要消耗高能磷酸鍵（）。肽基轉移酶形成肽鍵氨酰一tRNA與核糖體的“A；位點結合核糖體沿mRN能動fMettRNAf與mRNA勺起始密碼子結合以及與大、小亞基的結合10 .在真核細胞中肽鏈合成的終止原因是（）。已達到mRNA子的盡頭具有特異的tRNA識別終止密碼子終止密碼子本身具有酯酶作用，可水

36、解肽酰與tRNA之是的酯鍵終止密碼子被終止因子（RF）所識別11 .蛋白質生物合成中的終止密碼是（）。UAAUAUUACUAGUGA12 .根據擺動假說，當tRNA反密碼子第1位堿基是I時，能夠識別哪幾種密碼子（）ACGTU13 .下列哪些因子是真核生物蛋白質合成的起始因子（）。IF1IF2eIF2eIF4elF4A14 .蛋白質生物合成具有下列哪些特征（）。氨基酸必須活化需要消耗能量每延長一個氨基酸必須經過進位、轉肽、移位、稅落四個步驟合成肽鏈由C端向N端不斷延長新生肽鏈需加工才能成為活性蛋白質15 .下列哪些內容屬于蛋白質合成后的加工、修飾（）切除N-端Met（）。氨酰tRNA進入核糖體A

37、位切除內含子，連接外顯子切除信號肽形成二硫鍵氨的側鏈修飾16 .蛋白質生物合成過程中，下列哪些步驟需要消耗能量氨基酸分子的活化70S起始復合物的形成肽鍵形成核糖體移位17 .原核生物的肽鏈延伸過程有下列哪些物質參與（）。肽基轉移酶鳥昔三磷酸mRNA甲酰甲硫氨酰-tRNAEF-Tu、EF-Ts、EF-G18.Shine-Da1garno順序（SD-順序）是指：（）在mRNA子的起始碼上游8-13個核甘酸處的順序在DN冊子上轉錄起始點前8-13個核甘酸處的順序16srRNA3端富含喀咤的互補順序啟動基因的順序特征以上都正確19 .在研究蛋白合成中,可利用喋吟霉素，這是因為它：（）防止多核糖體形成以

38、使大小亞基解聚使肽鏈提前釋放抑制氨基酰-tRNA合成酶活性上都正確20 .氨基酸活化酶：（）活化氨基酸的氨基利用GTP作為活化氨基酸的能量來源催化在tRNA的5磷酸與相應氨基酸間形成酯鍵每一種酶特異地作用于一種氨基酸及相應的tRNA以上都不正確（五）是非題1 .DNA僅決定遺傳性狀，而且還直接表現遺傳性狀。（2 .密碼子在mRNAk的閱讀方向為5f3。（V）3 .每一種氨基酸都有兩種以上密碼子。（X）(V)mRNA吉合。(X)mRNA吉合。(V)4 .一種tRNA只能識別一種密碼子。（X）5 .線粒體和葉綠體的核糖體的亞基組成與原核生物類似。6 .大腸桿菌的核糖體的小亞基必須在大亞基存在時，才

39、能與7 .大腸桿菌的核糖體的大亞基必須在小亞存在時，才能與8 .在大腸桿菌中，一種氨基酸只對應于一種氨酰-tRNA合成酶。（V）9 .氨基酸活化時，在氨酰-tRNA合成酶的催化下，由ATP供能，消耗一個高能磷酸鍵。（X）10 .線粒體和葉綠體內的蛋白質生物合成起始與原核生物相同。（V）11 .每種氨基酸只能有一種特定的tRNA與之對應。（X）12 .AUG既可彳為fMet-tRNAf和Met-tRNAi的密碼子，又可作為肽鏈內部Met的密碼子。（V）13 .構成密碼子和反密碼子的堿基都只是A、U、CGo（X）14 .核糖體大小亞基的結合和分離與Mg2+的濃度有關。（V）15 .核糖體的活性中心

40、“A”位和“P”位都主要在大亞基上。（X）16 .E.coli中，DnaA與復制起始區DNA吉合，決定復制的起始。（V）核酸的生物合成（一）名詞解釋1 .中心法則（centraldogma）:生物體遺傳信息流動途徑。最初由Crick（1958）提出，經后人的不斷補充和修改，現包括反轉錄和RNAM制等內容。2 .半保留復制（簡稱復制）（semiconservativereplication）:親代雙鏈DNA以每條鏈為模板，按堿基配對原則各合成一條互補鏈，這樣一條親代DNA螺旋，形成兩條完全相同的子代DNA1旋，子代DNA分子中都有一條合成的“新”鏈和一條來自親代的舊鏈，稱為半保留復制。3 .DN

41、A聚合酶（DNApolymerase）:指以脫氧核甘三磷酸為底物，按5-3方向合成DNA勺一類酶，反應條件：4種脫氧核甘三磷酸、Mg+模板、引物。DNA聚合酶是多功能酶，除具有聚合作用外，還具有其它功能，不同DNA聚合酶所具有的功能不同。4 .解旋酶（helicase）:是一類通過水解ATP提供能量，使DNA雙螺旋兩條鏈分開的酶，每解開一對堿基，水解2分子ATP。5 .拓撲異構酶（topoisomerase）:是一類引起DN麗撲異構反應的酶，分為兩類：類型I的酶能使DNA的一條鏈發生斷裂和再連接，反應無需供給能量，類型n的酶能使DNA勺兩條鏈同時發生斷裂和再連接，當它引入超螺旋時，需要由ATP

42、供給能量。6 .單鏈DNA吉合蛋白（single-strandbindingprotein,SSB）:是一類特異性和單鏈區DNA吉合的蛋白質。它的功能在于穩定DNAB開的單鏈，阻止復性和保護單鏈部分不被核酸酶降解。7 .DNA連接酶（DNAligase）:是專門催化雙鏈DNA中缺口共價連接的酶，不能催化兩條游離的單鏈DNA鏈間形成磷酸二酯鍵。反應需要能量。8 .引物酶及引發體（primase&primosome）:以DNA）勺模板，以核糖核甘酸為底物，在DNA合成中，催化形成RNA引物的酶稱為引物酶及引物體。大腸桿菌的引物酶單獨沒有活性，只有與其它蛋白質結合在一起，形成一個復合體，即引發體才有

43、生物活性。9 .復制叉（replicationfork）:復制中的DNA分子，末復制的部分是親代雙螺旋，而復制好的部分是分開的，由兩個子代雙螺旋組成，復制正在進行的部分呈Y狀叫做復制叉。10 .復制眼。結構：在一段DNA,正在復制的部分形成眼斗結構。復制眼在環狀DNA形成的結構與希臘字母。相象，所以叫。結構。11 .前導鏈（1eadingstrand）:在DNAM制過程中，以親代鏈（3-5為模板時，子代鏈的合成（5-3）是連續的.這條能連續合成的鏈稱前導鏈。12 .岡崎片段（Okazakifragment）、后隨鏈（1aggingstrand）:在DNAM制過程中，以親代鏈（5-3）為模板時，

44、子代鏈的合成不能以3-5方向進行，而是按5-3方向合成出許多小片段，因為是岡崎等人研究發現，因此稱岡崎片段。由許多岡崎片段連接而成的子代鏈稱為后隨鏈。13 .半不連續復制(Semidiscontinuousreplication):在DNA復制過程中，一條鏈的合成是連續的，另一條鏈的合成是不連續的，所以叫做半不連續復制。14 .逆轉錄(reversetranscription):以RNW模板合成DNA勺過程。15 .逆轉錄酶(reversetranseriptase):催化以RNA為模板合成DNA的逆轉錄過程的酶。Temin(1960)首次從勞氏肉瘤病毒中發現。逆轉錄酶具有多種酶活性：依賴RN

45、A的DNA聚合酶活性；依賴DNA勺DNA聚合酶活性，RNAzK解酶活性，DNA合成方向5-3合成時需要引物與模板。16 .突變(mutation):基因組DNAW序上的任何一種改變都叫做突變。分點突變和結構畸變。17 .點突變(Pointmutation):是指一個或幾個堿基對被置換(replacement),這種置換又分兩種形式：轉換(transition)-指用一個喋吟堿置換另一個喋吟堿，一個喀咤堿置換另一個喀咤堿；顛換(transversion)-指用喋吟堿置換喀咤堿或用喀咤堿置換喋吟堿。18 .結構畸變：基因中的缺口、或插入(insertion)或缺失(deletion)某些堿基造成移

46、碼突變使DNA的模板鏈失去功能。19 .誘變劑(mutagen):使基因組發生突變的物理、化學、生物因素叫誘變劑。20 .修復(repair):除去DNA上的損傷，恢復DNA的正常結構和功能是生物機體的一種保護功能。21 .光裂合酶修復(又稱光復活)(photoreactivation):可見光將光裂合酶激活，它分解DNA上由紫外線照射而形成的喀咤二聚體，使它們恢復成兩個單獨的喀咤堿。22 .切除修復(excisionrepair):在一系列酶的作用下，將DNA分子中受損傷部分切除，以互補鏈為模板，合成出空缺的部分，使DNA恢復正常結構的過程。23 .重組修復(rebinationrepair

47、):DNM有損傷的情況下也可以復制，復制時子代鏈躍過損傷部位并留下缺口，通過分子間重組，從完整的另一條母鏈上將相應的核甘酸序列片段移至子鏈缺口處，然后用再合成的多核甘酸的序列補上母鏈的空缺，此過程稱重組修復。24 .誘導修復和應急反應(inductionrepairandSOSresponse)(SOS修復)：由于DNA受到損傷或復制系統受到抑制所誘導引起的一系列復雜的應急效應，稱為應急反應。SOS反應主要包括兩個方面：DNA員傷彳復(SOS修復或稱誘導修復)和誘變效應。SOS復是一種易出差錯的修復過程，雖能修復DNA的損傷而避免死亡。但卻帶來高的變異率。25 .DNA重組(rebinatio

48、n):DNA重組是指在真核生物減數分裂過程中，細菌細胞的轉化中、病毒轉導中等發生的DNM段的交換或插入。26 .基因工程(又稱基因重組技術)(gene/geneticengineering):是將外源基因經過剪切加工，再插入到一個具有自我復制能力的載體DNA中，將新組合的DNA專移到一個寄主細胞中，外源基因就可以隨著寄主細胞的分裂進行繁殖，寄主細胞也借此獲得外源基因所攜帶的新特性。27 .轉錄(transcription):由依賴于DNA的RNA聚合酶催化，以DNA的一條鏈的一定區段為模板，按照堿基配對原則，合成一條與DNAB1互補的RNA鏈的過程。28 .模板鏈(templatestrand

49、)又稱負(-)鏈，反意義鏈(antisensestrand):轉錄過程中用作模板的這條DNA鏈，稱模板鏈。29 .非模板鏈(nontemplatestrand)又稱正(+)鏈，編碼鏈(codingstrand),有意義鏈(sensestrand):與模板鏈互補白那條DNA鏈，稱非模板鏈。30 .不對稱轉錄(asymmetrictranscription):因為RNA的轉錄只在DNA勺任一條鏈上進行，所以把RNA的合成叫做不對稱轉錄。31 .啟動子(promoter):DN頌上能指示RNA專錄起始的DNA列稱啟動子。32 .轉錄單位(transcriptionunit):RNA勺轉錄只在DNA的

50、一個片段上進行，這段DNA列叫轉錄單位。33 .內含子(intron):真核生物基因中，不為蛋白質編碼的、在mRNAl工過程中消失的DN際列，稱內含子。34 .外顯子(exon):真核生物基因中，在mRNAh出現并代表蛋白質的DN際列，叫外顯子。35 .轉錄加工(post-transcriptionalprocessing):細菌中很多RNA分子和幾乎全部真核生物的RNA在合成后都需要不同程度的加工，才能形成成熟的RNA子，這個過程叫轉錄后加工。36 .核內不均一RNA(hnRNA)是真核生物細胞核內的mRN廁體分子，分子量較大，并且不均一，含有許多內含子。37 .RNA勺復制(RNArepl

51、ication):某些病毒RN徵可以做為模板合成病毒蛋白質又可在RNA復制酶(RNAreplicase)的催化下，以自身RNW模板，合成互補的RNA新鏈，合成方向5-3,這一過程叫RNAM制。(二)問答題1 .試述Meselson和Stahl關于DNA半保留復制的證明實驗。提示：將E.coli放入以15NH4Cl為唯一氮源的培養基中連續培養十幾代，使所有DNA子標記上15N;將15N標記的E.coli再放入普通的14N培養基中培養，在細胞生長一代、二代、n代的時間間隔內采樣；采用氯化葩密度梯度離心分離DNA并用紫外照相技術檢測DNA所在位置；結果如下：其結果確切地證明DNA半保留方式復制。2

52、.描述大腸桿菌DNA聚合酶I在DNA生物合成過程中的作用。E.coliDNA聚合酶I是多功能酶，具有：DNA聚合酶活性，能按模板要求，以5-3方向合成DNA在DNA復制中，常用以填補引物切除后留下的空隙；5-3外切酶活性，DNAM制后期，用于切除RNA引物；3-5外切酶活性，用以校對復制的正確性，當出現錯配堿基時，切除錯配堿基直到正確配對為止；DNA聚合酶I不是DNA復制和校正中的主要聚合酶，它的功能主要是修復。3.試述DNA復制過程，總結DNAM制的基本規律。以E.coli為例，DNAM制過程分三個階段；起始：從DNA上控制復制起始的序列即起始點開始復制，形成復制叉，復制方向多為雙向，也可以

53、是單向，若以雙向進行復制，兩個方向的復制速度不一定相同。由于DNA聚合酶不能從無到有合成新鏈，所以DNAM制需要有含3-OH的引物，引物由含有引物酶的引發體合成一段含310個核甘酸的RNA片段；延長：DNAM制時，分別以兩條親代DNA鏈為模板，當復制叉沿DNA動時，以親代3一5鏈為模板時，子鏈的合成方向是5-3,可連續進行，以親代5一3鏈為模板時，子鏈不能以3-5方向合成，而是先合成出許多5-3方向的岡崎片段，然后連接起來形成一條子鏈；終止：當一個岡崎片段的3-OH與前一個岡崎片段的5-磷酸接近時，復制停止，由DNAm合酶I切除引物，填補空隙，連接酶連接相鄰的DNM段。DNA復制時，由DNAB

54、旋酶（又稱解鏈酶）通過水解ATP獲得能量來解開DNA雙鏈，并沿復制叉方向移動，所產生的單鏈很快被單鏈結合蛋白所覆蓋，防止DNA的變性并保護其單鏈不被降解，復制叉前進過程中，雙螺旋產生的應力在拓撲異構酶的作用下得到調整。DNA復制基本規律：復制過程為半保留方式；原核生物單點起始，真核生物多點起始，復制方向多為雙向，也有單向；復制方式呈多樣性，（直線型、Q型、滾動環型一等）；新鏈合成需要引物，引物RNA長度一般為幾個10個核甘酸，新鏈合成方向5一3,與模板鏈反向，堿基互補；復制為半不連續的，以解決復制過程中，兩條不同極性的鏈同時延伸問題，即一條鏈可按5一3方向連續合成稱為前導鏈，另一條鏈先按5一3

55、方向合成許多不連續的岡崎片段（原核生物一般長1000-2000個核甘酸，真核生物一般長100-200個核甘酸），再通過連接酶連接成完整鏈，稱后隨鏈，且前導鏈與后隨鏈合成速度不完全一致，前者快，后者慢；復制終止時，需切除前導鏈、岡崎片段的全部引物，填補空缺，連接成完整DNA1;修復和校正DNAM制過程出現的損傷和錯誤，以確保DNA復制的精確性。4.什么是逆轉錄？病毒中的單鏈RNA如何利用逆轉錄酶合成雙鏈DNA并整合到寄主細胞的基因組中？提示：見名詞解釋“逆轉錄”。病毒的單鏈RNA在病毒進入寄主細胞后被釋放出來，此RNA帶有與模板互補的tRNA引物，病毒的逆轉錄酶以此RNA為模板，從引物的3-OH端，按堿基互補原則以5-3方向合成DNA鏈（-）,形成RNA-DNA雜交分子，然后逆轉酶發揮RNA水解酶活性，水解雜交分子中的RNA,最后以新合成的DNAB1（-）為模板，合成另一條DNA鏈（+）,形成雙鏈DNA分子（為病毒）整合到寄主基因組中，隨寄主細胞的轉錄，產生病毒RNA（+）,此RNA可翻譯病毒蛋白質，可作為后代病毒RNA5.DNA的損傷原因是什么？提示：自身復制過程中發生的錯誤：外界環境的影響，如物理因素（紫外線、X一射線輻射等），化學因素（各種誘變劑、抗菌素等）。造成喀咤堿基形成聚合體，發生堿基錯配