1、2022-4-171現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一頁(yè)，共42頁(yè)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二頁(yè)，共42頁(yè)|遺傳毒理學(xué)遺傳毒理學(xué)( (Genetic ToxicologyGenetic Toxicology) )現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三頁(yè)，共42頁(yè)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四頁(yè)，共42頁(yè)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第五頁(yè)，共42頁(yè)|DNADNA與基因與基因: : 基因基因( (gene)gene) 基因組基因組( (genosome)genosome) |染色質(zhì)染色質(zhì)( (chromatin)chromatin)與染色體與染色體( (chromosome)chromosome) |體細(xì)胞體細(xì)胞( (somatic cell)somatic cell)和生殖細(xì)

2、胞和生殖細(xì)胞( (germ cell)germ cell) |基因型基因型( (genotype)genotype)與表型與表型( (pheotype)pheotype)|細(xì)胞周期細(xì)胞周期( (cell cycle)cell cycle)、有絲分裂有絲分裂( (mitosis)mitosis)與與減數(shù)分裂減數(shù)分裂( (meiosis)meiosis) 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第六頁(yè)，共42頁(yè)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第七頁(yè)，共42頁(yè)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第八頁(yè)，共42頁(yè)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第九頁(yè)，共42頁(yè)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十頁(yè)，共42頁(yè)|基因突變（基因突變（gene mutationgene mutation）|染色體畸變（染色體畸變（ch

3、romosome aberrationchromosome aberration）|非整倍體和多倍體非整倍體和多倍體 ( (aneuploidy and polyloid)aneuploidy and polyloid)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十一頁(yè)，共42頁(yè)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十二頁(yè)，共42頁(yè)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十三頁(yè)，共42頁(yè)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十四頁(yè)，共42頁(yè)|二、染色體畸變二、染色體畸變( (chromosome aberration)chromosome aberration) 指染色體的結(jié)構(gòu)改變指染色體的結(jié)構(gòu)改變 z染色單體型畸變?nèi)旧珕误w型畸變( (chromatid-type aberration)chro

4、matid-type aberration)z染色體型畸變?nèi)旧w型畸變( (chromosome aberration) chromosome aberration) 染色體畸變?nèi)旧w畸變裂隙裂隙( (gap)gap) 斷裂斷裂( (break) break) 斷片斷片( (fragment)fragment)和和缺失缺失( (deletion)deletion) 微小體微小體( (minute body)minute body) 無(wú)著絲點(diǎn)環(huán)無(wú)著絲點(diǎn)環(huán)環(huán)狀染色體環(huán)狀染色體 雙著絲點(diǎn)染色體雙著絲點(diǎn)染色體 倒位倒位( (inversion)inversion) 易位易位( (translocati

5、on)translocation) 插入插入( (insertion)insertion)和和重復(fù)重復(fù)( (duplication) duplication) 輻射體輻射體 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十五頁(yè)，共42頁(yè) 染色體缺失及環(huán)狀染色體的形成圖染色體缺失及環(huán)狀染色體的形成圖 染色體插入和重復(fù)示意圖染色體插入和重復(fù)示意圖 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十六頁(yè)，共42頁(yè) 染色體的臂間倒位染色體的臂間倒位 染色體相互易位示意圖染色體相互易位示意圖 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十七頁(yè)，共42頁(yè)|二、染色體畸變二、染色體畸變( (chromosome aberration)chromosome aberration)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十八頁(yè)，共

6、42頁(yè) z1 1非整倍體非整倍體 非整倍體非整倍體( (aneuploid)aneuploid)指細(xì)胞丟失或增加指細(xì)胞丟失或增加一條或幾條染色體。缺失一條染色體時(shí)稱為單體一條或幾條染色體。缺失一條染色體時(shí)稱為單體( (monosome)monosome)，增加一條染色體時(shí)稱為三體增加一條染色體時(shí)稱為三體( (trisome)trisome)。染色體數(shù)目的改變會(huì)導(dǎo)致基因平衡的失調(diào)，可能影響細(xì)胞的染色體數(shù)目的改變會(huì)導(dǎo)致基因平衡的失調(diào)，可能影響細(xì)胞的生存或造成形態(tài)及功能上的異常。如生存或造成形態(tài)及功能上的異常。如2121三體導(dǎo)致先天愚型三體導(dǎo)致先天愚型( (DownDown氏綜合征氏綜合征) )。z

7、2 2整倍體整倍體 整倍體整倍體( (euploid)euploid)指染色體數(shù)目的異常是以指染色體數(shù)目的異常是以染色體組為單位的增減，如形成三倍體染色體組為單位的增減，如形成三倍體( (triploid)triploid)、四倍四倍體體( (tetroploid)tetroploid)等。在人體，等。在人體，3 3n n為為6969條染色體，條染色體，4 4n n為為9292條條染色體。在腫瘤細(xì)胞及人類自然流產(chǎn)的胎兒細(xì)胞中染色體。在腫瘤細(xì)胞及人類自然流產(chǎn)的胎兒細(xì)胞中可有三倍體細(xì)胞的存在。發(fā)生于生殖細(xì)胞的整倍體可有三倍體細(xì)胞的存在。發(fā)生于生殖細(xì)胞的整倍體改變，幾乎都是致死性的。改變，幾乎都是致

8、死性的。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十九頁(yè)，共42頁(yè)|一、一、DNADNA損傷與突變損傷與突變|( (一一) )堿基損傷堿基損傷z1. 堿基錯(cuò)配堿基錯(cuò)配z2. 嵌入嵌入DNA鏈鏈z3. 堿基類似物的取代堿基類似物的取代z4. 堿基的化學(xué)結(jié)構(gòu)改變或破壞堿基的化學(xué)結(jié)構(gòu)改變或破壞 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十頁(yè)，共42頁(yè)|一、一、DNADNA損傷與突變損傷與突變|（二）（二）DNADNA鏈?zhǔn)軗p鏈?zhǔn)軗p 1. 1. 二聚體的形成二聚體的形成 2. 2. DNADNA加合物（加合物（DNA adductsDNA adducts）形成形成 3. 3. DNA-DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)物蛋白質(zhì)交聯(lián)物( (DNA-ProteinDNA-Pr

9、otein crosslinks crosslinks，DPC)DPC)形成形成 |二、二、引起突變的細(xì)胞分裂過(guò)程的改變（對(duì)紡引起突變的細(xì)胞分裂過(guò)程的改變（對(duì)紡 鍾體的毒作用）鍾體的毒作用）|三、其他的改變?nèi)⑵渌母淖?對(duì)對(duì)DNADNA合成和修復(fù)有關(guān)的酶系統(tǒng)作用可間接導(dǎo)致合成和修復(fù)有關(guān)的酶系統(tǒng)作用可間接導(dǎo)致 DNADNA損傷，誘發(fā)基因突變或染色體畸變。損傷，誘發(fā)基因突變或染色體畸變。 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十一頁(yè)，共42頁(yè) 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十二頁(yè)，共42頁(yè)|一、一、機(jī)體修復(fù)機(jī)體修復(fù)DNADNA損傷的機(jī)制可分為兩大類：損傷的機(jī)制可分為兩大類： 1.損傷耐受機(jī)制：指損傷耐受機(jī)制：指DNA遺傳可繞過(guò)那些

10、阻止遺傳可繞過(guò)那些阻止DNA 復(fù)制復(fù)制的的DNA損傷。損傷。 2. 修復(fù)機(jī)制：修復(fù)機(jī)制：DNA修復(fù)修復(fù)直接修復(fù)直接修復(fù)切除修復(fù)切除修復(fù)O6甲基鳥(niǎo)嘌呤修復(fù)甲基鳥(niǎo)嘌呤修復(fù)光修復(fù)光修復(fù)錯(cuò)配堿基修復(fù)錯(cuò)配堿基修復(fù)堿基切除修復(fù)堿基切除修復(fù)核苷酸切除修復(fù)核苷酸切除修復(fù)復(fù)制后修復(fù)復(fù)制后修復(fù)呼救性修復(fù)呼救性修復(fù)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十三頁(yè)，共42頁(yè)|二、遺傳因素對(duì)致突變作用的影響：二、遺傳因素對(duì)致突變作用的影響： z ( (一一) )代謝酶遺傳多態(tài)性代謝酶遺傳多態(tài)性 z ( (二二) )修復(fù)功能的個(gè)體差異修復(fù)功能的個(gè)體差異 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十四頁(yè)，共42頁(yè)|一、觀察項(xiàng)目的選擇一、觀察項(xiàng)目的選擇z 1 1觀察的效應(yīng)終點(diǎn)

11、類型觀察的效應(yīng)終點(diǎn)類型基因突變和染色體畸變的檢測(cè)可直接反基因突變和染色體畸變的檢測(cè)可直接反映化學(xué)毒物的致突變性，是評(píng)價(jià)化學(xué)毒映化學(xué)毒物的致突變性，是評(píng)價(jià)化學(xué)毒物致突變性唯一可靠的方法。還有許多物致突變性唯一可靠的方法。還有許多試驗(yàn)所觀察到的現(xiàn)象并不反映基因突變、試驗(yàn)所觀察到的現(xiàn)象并不反映基因突變、染色體畸變和染色體分離異常，而僅反染色體畸變和染色體分離異常，而僅反映致突變過(guò)程中發(fā)生的其他事件。因此，映致突變過(guò)程中發(fā)生的其他事件。因此，將試驗(yàn)觀察到的現(xiàn)象所反映的各種事件將試驗(yàn)觀察到的現(xiàn)象所反映的各種事件統(tǒng)稱為統(tǒng)稱為遺傳學(xué)終點(diǎn)遺傳學(xué)終點(diǎn)( (genetic endpoint)genetic end

12、point)。 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十五頁(yè)，共42頁(yè)|一、觀察項(xiàng)目的選擇一、觀察項(xiàng)目的選擇z遺傳學(xué)終點(diǎn)分為遺傳學(xué)終點(diǎn)分為5 5類：類：DNADNA完整性的改變完整性的改變( (形成加合物，斷裂，形成加合物，斷裂，交聯(lián)交聯(lián)) )；DNADNA重排或交換；重排或交換；DNADNA堿基序列改變；堿基序列改變；染色體完整性改變；染色體完整性改變；染色體分離改變。染色體分離改變。l其中實(shí)際上指基因突變，指染色體其中實(shí)際上指基因突變，指染色體畸變。畸變。 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十六頁(yè)，共42頁(yè)|2 2成套的觀察項(xiàng)目成套的觀察項(xiàng)目z遺傳毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序通常為一組體內(nèi)、外遺傳毒理學(xué)試驗(yàn)。遺傳毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序通常為一組體內(nèi)、

13、外遺傳毒理學(xué)試驗(yàn)。因?yàn)椋阂驗(yàn)椋夯瘜W(xué)毒物的種類和結(jié)構(gòu)多種多樣，其致突變的機(jī)制不盡相同，化學(xué)毒物的種類和結(jié)構(gòu)多種多樣，其致突變的機(jī)制不盡相同，作用的靶細(xì)胞也不一樣，有的是體細(xì)胞，或生殖細(xì)胞，或兩者作用的靶細(xì)胞也不一樣，有的是體細(xì)胞，或生殖細(xì)胞，或兩者兼而有之，故在成套觀察項(xiàng)目中既要用體細(xì)胞檢測(cè)又要用生殖兼而有之，故在成套觀察項(xiàng)目中既要用體細(xì)胞檢測(cè)又要用生殖細(xì)胞；除了從分子水平還要從細(xì)胞水平來(lái)檢測(cè)化學(xué)毒物的遺傳細(xì)胞；除了從分子水平還要從細(xì)胞水平來(lái)檢測(cè)化學(xué)毒物的遺傳毒性。毒性。致突變物中僅少數(shù)具有直接致突變作用，大多數(shù)為間接致突致突變物中僅少數(shù)具有直接致突變作用，大多數(shù)為間接致突變作用，即需要在體內(nèi)代

14、謝活化后，才具有致突變作用。體內(nèi)變作用，即需要在體內(nèi)代謝活化后，才具有致突變作用。體內(nèi)試驗(yàn)具有完整的活化系統(tǒng)，而體外試驗(yàn)則通過(guò)加入模擬代謝系試驗(yàn)具有完整的活化系統(tǒng)，而體外試驗(yàn)則通過(guò)加入模擬代謝系統(tǒng)，如統(tǒng)，如S S9 9來(lái)彌補(bǔ)缺乏活化系統(tǒng)的不足。這是體內(nèi)與體外試來(lái)彌補(bǔ)缺乏活化系統(tǒng)的不足。這是體內(nèi)與體外試驗(yàn)的主要差別。驗(yàn)的主要差別。化學(xué)毒物的致突變性有強(qiáng)，也有弱；有的在某一檢測(cè)系統(tǒng)化學(xué)毒物的致突變性有強(qiáng)，也有弱；有的在某一檢測(cè)系統(tǒng)中是強(qiáng)致突變物，而在另一系統(tǒng)中可能是弱的致突變物。對(duì)中是強(qiáng)致突變物，而在另一系統(tǒng)中可能是弱的致突變物。對(duì)于弱致突變物在某些系統(tǒng)中比較容易漏檢，即出現(xiàn)假陰性。于弱致突變物在

15、某些系統(tǒng)中比較容易漏檢，即出現(xiàn)假陰性。 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十七頁(yè)，共42頁(yè)|2 2成套的觀察項(xiàng)目成套的觀察項(xiàng)目|關(guān)于遺傳毒理學(xué)成套觀察項(xiàng)目中那些試驗(yàn)可入選的原關(guān)于遺傳毒理學(xué)成套觀察項(xiàng)目中那些試驗(yàn)可入選的原則有：則有：z選擇的遺傳毒性試驗(yàn)應(yīng)包括選擇的遺傳毒性試驗(yàn)應(yīng)包括5 5種類型的遺傳學(xué)種類型的遺傳學(xué)終點(diǎn)。終點(diǎn)。z通常的實(shí)驗(yàn)材料有病毒、細(xì)菌、真菌、培養(yǎng)的通常的實(shí)驗(yàn)材料有病毒、細(xì)菌、真菌、培養(yǎng)的哺乳細(xì)胞、植物、昆蟲(chóng)及哺乳動(dòng)物等。哺乳細(xì)胞、植物、昆蟲(chóng)及哺乳動(dòng)物等。z體內(nèi)試驗(yàn)與體外試驗(yàn)配合。體內(nèi)試驗(yàn)與體外試驗(yàn)配合。z應(yīng)包括生殖細(xì)胞和體細(xì)胞。應(yīng)包括生殖細(xì)胞和體細(xì)胞。z通常，對(duì)于一種受試物應(yīng)當(dāng)先用原核細(xì)胞或

16、體細(xì)胞通常，對(duì)于一種受試物應(yīng)當(dāng)先用原核細(xì)胞或體細(xì)胞的體外試驗(yàn)按遺傳學(xué)終點(diǎn)合理配套進(jìn)行試驗(yàn)，并對(duì)的體外試驗(yàn)按遺傳學(xué)終點(diǎn)合理配套進(jìn)行試驗(yàn)，并對(duì)有陽(yáng)性結(jié)果的遺傳學(xué)終點(diǎn)驗(yàn)證其在體內(nèi)的真實(shí)性，有陽(yáng)性結(jié)果的遺傳學(xué)終點(diǎn)驗(yàn)證其在體內(nèi)的真實(shí)性，再行選用生殖細(xì)胞致突變?cè)囼?yàn)進(jìn)行遺傳危害的評(píng)價(jià)。再行選用生殖細(xì)胞致突變?cè)囼?yàn)進(jìn)行遺傳危害的評(píng)價(jià)。 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十八頁(yè)，共42頁(yè)|二、常用的致突變?cè)囼?yàn)二、常用的致突變?cè)囼?yàn) z( (一一) )細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)( (AmesAmes試驗(yàn)試驗(yàn)) ) 鼠傷寒沙門氏菌原鼠傷寒沙門氏菌原養(yǎng)型養(yǎng)型(his+)組氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型突組氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株。變株。(his-)正向

17、突變正向突變回復(fù)突變回復(fù)突變代謝活化系統(tǒng)代謝活化系統(tǒng)受試物受試物現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十九頁(yè)，共42頁(yè)|二、常用的致突變?cè)囼?yàn)二、常用的致突變?cè)囼?yàn)z( (二二) )微核試驗(yàn)微核試驗(yàn) 微核微核( (Micronucleus)Micronucleus)的產(chǎn)生與染色體損傷有關(guān)，的產(chǎn)生與染色體損傷有關(guān)，是染色體或染色單體的無(wú)著絲點(diǎn)斷片或紡錘絲受損傷是染色體或染色單體的無(wú)著絲點(diǎn)斷片或紡錘絲受損傷而丟失的整個(gè)染色體，在細(xì)胞分裂后期遺留在細(xì)胞質(zhì)而丟失的整個(gè)染色體，在細(xì)胞分裂后期遺留在細(xì)胞質(zhì)中，末期之后，單獨(dú)形成一個(gè)或幾個(gè)規(guī)則的次核，包中，末期之后，單獨(dú)形成一個(gè)或幾個(gè)規(guī)則的次核，包含在子細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)，因比主核小，故稱

18、微核。含在子細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)，因比主核小，故稱微核。在細(xì)在細(xì)胞質(zhì)中微核來(lái)源有二：斷片或無(wú)著絲粒染色體在細(xì)胞胞質(zhì)中微核來(lái)源有二：斷片或無(wú)著絲粒染色體在細(xì)胞分裂后期不能定向移動(dòng)，而遺留在細(xì)胞質(zhì)中；有絲分分裂后期不能定向移動(dòng)，而遺留在細(xì)胞質(zhì)中；有絲分裂毒物的作用使個(gè)別染色體或帶苔絲粒的染色體環(huán)和裂毒物的作用使個(gè)別染色體或帶苔絲粒的染色體環(huán)和斷片在細(xì)胞分裂后期被留在細(xì)胞質(zhì)中。斷片在細(xì)胞分裂后期被留在細(xì)胞質(zhì)中。微核試驗(yàn)微核試驗(yàn)( (Micronucleus testMicronucleus test，MNT)MNT)是觀察受試物能否產(chǎn)生微核是觀察受試物能否產(chǎn)生微核的試驗(yàn)。的試驗(yàn)。其主要可檢出其主要可檢出DN

19、ADNA斷裂劑和非整倍體誘變斷裂劑和非整倍體誘變劑。劑。 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十頁(yè)，共42頁(yè)(二二)微核試驗(yàn)微核試驗(yàn)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十一頁(yè)，共42頁(yè)MNNCE現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十二頁(yè)，共42頁(yè)|二、常用的致突變?cè)囼?yàn)二、常用的致突變?cè)囼?yàn)z(三三)染色體畸變分析染色體畸變分析 z(四四)姐妹染色單體交換試驗(yàn)（姐妹染色單體交換試驗(yàn)（SCE） 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十三頁(yè)，共42頁(yè)|二、常用的致突變?cè)囼?yàn)二、常用的致突變?cè)囼?yàn)z(五五)果蠅伴性隱性致死試驗(yàn)果蠅伴性隱性致死試驗(yàn)z(六六)顯性致死試驗(yàn)顯性致死試驗(yàn)z(七七)程序外程序外DNA合成試驗(yàn)合成試驗(yàn) z(八八)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物致突變?cè)囼?yàn)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物致突變?cè)囼?yàn)z(九九)哺乳

20、動(dòng)物細(xì)胞基因突變?cè)囼?yàn)哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因突變?cè)囼?yàn)z(十十)SCCE試驗(yàn)試驗(yàn)z(十一十一)熒光原位雜交技術(shù)熒光原位雜交技術(shù)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十四頁(yè)，共42頁(yè)|三、致突變?cè)囼?yàn)中的一些問(wèn)題三、致突變?cè)囼?yàn)中的一些問(wèn)題 z(一一)陰性和陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)立陰性和陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)立 1 1陰性對(duì)照陰性對(duì)照 它是空白對(duì)照，即不加任何處理。或者是它是空白對(duì)照，即不加任何處理。或者是溶劑對(duì)照。陰性對(duì)照除了無(wú)處理因素外，與實(shí)驗(yàn)組完全溶劑對(duì)照。陰性對(duì)照除了無(wú)處理因素外，與實(shí)驗(yàn)組完全相同。其目的是獲得實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。例如，相同。其目的是獲得實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。例如，AmesAmes試驗(yàn)試驗(yàn)的陰性對(duì)照可了解所用的細(xì)菌的自發(fā)回復(fù)突變率；證實(shí)

21、的陰性對(duì)照可了解所用的細(xì)菌的自發(fā)回復(fù)突變率；證實(shí)除處理因素外無(wú)任何使回復(fù)突變率增加或減少的因素。除處理因素外無(wú)任何使回復(fù)突變率增加或減少的因素。 2 2陽(yáng)性對(duì)照陽(yáng)性對(duì)照 是用某種已知能產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)的物是用某種已知能產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)的物質(zhì)作為對(duì)照。其目的是通過(guò)對(duì)陽(yáng)性物質(zhì)的試驗(yàn)證明質(zhì)作為對(duì)照。其目的是通過(guò)對(duì)陽(yáng)性物質(zhì)的試驗(yàn)證明實(shí)驗(yàn)方法的可靠；驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)者在本實(shí)驗(yàn)條件下，完實(shí)驗(yàn)方法的可靠；驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)者在本實(shí)驗(yàn)條件下，完成技術(shù)和鑒定致突變物的能力；證實(shí)經(jīng)一段時(shí)間后，成技術(shù)和鑒定致突變物的能力；證實(shí)經(jīng)一段時(shí)間后，本實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性。例如，本實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性。例如，AmesAmes試驗(yàn)中陽(yáng)性對(duì)照未試驗(yàn)中陽(yáng)性對(duì)照未出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)

22、果，應(yīng)考慮突變菌株可能發(fā)生問(wèn)題，出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，應(yīng)考慮突變菌株可能發(fā)生問(wèn)題，另一種可能是代謝活化能力不足。所以，當(dāng)陽(yáng)性另一種可能是代謝活化能力不足。所以，當(dāng)陽(yáng)性對(duì)照結(jié)果未呈陽(yáng)性，其實(shí)驗(yàn)組的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可靠性對(duì)照結(jié)果未呈陽(yáng)性，其實(shí)驗(yàn)組的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可靠性亦大大降低。亦大大降低。 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十五頁(yè)，共42頁(yè)|三、致突變?cè)囼?yàn)中的一些問(wèn)題三、致突變?cè)囼?yàn)中的一些問(wèn)題z(二二)體外試驗(yàn)的活化系統(tǒng)體外試驗(yàn)的活化系統(tǒng) 1 1哺乳動(dòng)物細(xì)胞介導(dǎo)哺乳動(dòng)物細(xì)胞介導(dǎo) 使用完整的細(xì)胞，特別是大使用完整的細(xì)胞，特別是大鼠肝原代細(xì)胞，與測(cè)試細(xì)菌或細(xì)胞一起培養(yǎng)。這也鼠肝原代細(xì)胞，與測(cè)試細(xì)菌或細(xì)胞一起培養(yǎng)。這也是一種活化系統(tǒng)。它有完

23、整的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和各種酶及是一種活化系統(tǒng)。它有完整的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和各種酶及內(nèi)源性輔助因子，代謝能力優(yōu)于無(wú)細(xì)胞系統(tǒng)如內(nèi)源性輔助因子，代謝能力優(yōu)于無(wú)細(xì)胞系統(tǒng)如S9S9，但不如體內(nèi)活化系統(tǒng)。但不如體內(nèi)活化系統(tǒng)。 2 2S9 S9S9 S9指經(jīng)酶誘導(dǎo)劑處理后制備的肝勻漿，再經(jīng)指經(jīng)酶誘導(dǎo)劑處理后制備的肝勻漿，再經(jīng)90009000g g離心分離所得上清液，加上適當(dāng)?shù)木彌_液和輔助離心分離所得上清液，加上適當(dāng)?shù)木彌_液和輔助因子。它主要含有混合功能氧化酶因子。它主要含有混合功能氧化酶( (MFO)MFO)，是國(guó)內(nèi)常規(guī)是國(guó)內(nèi)常規(guī)應(yīng)用于體外致突變?cè)囼?yàn)的代謝活化系統(tǒng)，其缺點(diǎn)是應(yīng)用于體外致突變?cè)囼?yàn)的代謝活化系統(tǒng)，其缺點(diǎn)是S9S

24、9隨實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬或器官不同而有差異；隨實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬或器官不同而有差異；S9S9含有的大量親含有的大量親核物質(zhì)有可能影響試驗(yàn)的敏感性。核物質(zhì)有可能影響試驗(yàn)的敏感性。 3 3純化酶和基因工程純化酶和基因工程 應(yīng)用純化細(xì)胞色素應(yīng)用純化細(xì)胞色素P-450P-450、谷谷胱苷肽轉(zhuǎn)移酶及過(guò)氧化物水解酶，可嚴(yán)格控制代謝產(chǎn)物誘發(fā)胱苷肽轉(zhuǎn)移酶及過(guò)氧化物水解酶，可嚴(yán)格控制代謝產(chǎn)物誘發(fā)突變的條件，但技術(shù)難度大。利用基因工程，將人的細(xì)胞色突變的條件，但技術(shù)難度大。利用基因工程，將人的細(xì)胞色素素P-450P-450基因，插入組合細(xì)胞內(nèi)，用上述細(xì)胞進(jìn)行致突變基因，插入組合細(xì)胞內(nèi)，用上述細(xì)胞進(jìn)行致突變?cè)囼?yàn)，使細(xì)胞具有代謝活

25、化系統(tǒng)。試驗(yàn)，使細(xì)胞具有代謝活化系統(tǒng)。 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十六頁(yè)，共42頁(yè)|三、致突變?cè)囼?yàn)中的一些問(wèn)題三、致突變?cè)囼?yàn)中的一些問(wèn)題z(三三)致突變?cè)囼?yàn)與致癌試驗(yàn)的關(guān)系致突變?cè)囼?yàn)與致癌試驗(yàn)的關(guān)系 已知大多數(shù)化學(xué)致癌物具有致突變作用，遺傳已知大多數(shù)化學(xué)致癌物具有致突變作用，遺傳學(xué)改變?cè)谠┗蚣せ詈鸵职┗蚴Щ钌掀鹬饕獙W(xué)改變?cè)谠┗蚣せ詈鸵职┗蚴Щ钌掀鹬饕饔茫掳┪镎T致關(guān)鍵靶基因遺傳改變的直接作作用，致癌物誘致關(guān)鍵靶基因遺傳改變的直接作用等在哺乳動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中證實(shí)。用等在哺乳動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中證實(shí)。發(fā)現(xiàn)人類接觸致癌物與發(fā)現(xiàn)人類接觸致癌物與DNADNA加合物，同其腫瘤中加合物，同其腫瘤中癌基因和抑癌基因的特異

26、堿基對(duì)突變之間具有相關(guān)癌基因和抑癌基因的特異堿基對(duì)突變之間具有相關(guān)性。性。傳統(tǒng)的長(zhǎng)期致癌試驗(yàn)，花費(fèi)大，周期長(zhǎng)，不能適傳統(tǒng)的長(zhǎng)期致癌試驗(yàn)，花費(fèi)大，周期長(zhǎng)，不能適應(yīng)化學(xué)物質(zhì)快速增長(zhǎng)的需要。此外，致癌試驗(yàn)所用應(yīng)化學(xué)物質(zhì)快速增長(zhǎng)的需要。此外，致癌試驗(yàn)所用動(dòng)物數(shù)量有限，難以檢出弱的致癌物。需要發(fā)展多動(dòng)物數(shù)量有限，難以檢出弱的致癌物。需要發(fā)展多種體內(nèi)和體外短期試驗(yàn)，用于對(duì)化學(xué)物質(zhì)致癌性進(jìn)種體內(nèi)和體外短期試驗(yàn)，用于對(duì)化學(xué)物質(zhì)致癌性進(jìn)行篩檢。行篩檢。 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十七頁(yè)，共42頁(yè)|三、致突變?cè)囼?yàn)中的一些問(wèn)題三、致突變?cè)囼?yàn)中的一些問(wèn)題z(四四)試驗(yàn)結(jié)果在毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)中的作用試驗(yàn)結(jié)果在毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)中的

27、作用 陰性結(jié)果判定條件：陰性結(jié)果判定條件：最高劑量應(yīng)包括受試物溶解度許可或灌胃量許可的最高劑量應(yīng)包括受試物溶解度許可或灌胃量許可的最大劑量。如該劑量毒性很大，則體內(nèi)試驗(yàn)和細(xì)菌試最大劑量。如該劑量毒性很大，則體內(nèi)試驗(yàn)和細(xì)菌試驗(yàn)應(yīng)為最大耐受量。使用哺乳動(dòng)物細(xì)胞進(jìn)行體外試驗(yàn)，驗(yàn)應(yīng)為最大耐受量。使用哺乳動(dòng)物細(xì)胞進(jìn)行體外試驗(yàn)，常選常選LDLD5050或或LDLD8080為最大劑量。溶解度大、毒性低的化為最大劑量。溶解度大、毒性低的化學(xué)物，在細(xì)菌試驗(yàn)中可以學(xué)物，在細(xì)菌試驗(yàn)中可以50005000gg皿作為最高劑量。皿作為最高劑量。各劑量組的組間差距不應(yīng)過(guò)大，以防漏檢僅在各劑量組的組間差距不應(yīng)過(guò)大，以防漏檢僅

28、在非常狹窄范圍內(nèi)才有突變能力的某些化學(xué)毒物。非常狹窄范圍內(nèi)才有突變能力的某些化學(xué)毒物。滿足上述條件，仍為陰性，才慎重下結(jié)論。滿足上述條件，仍為陰性，才慎重下結(jié)論。 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十八頁(yè)，共42頁(yè)|三、致突變?cè)囼?yàn)中的一些問(wèn)題三、致突變?cè)囼?yàn)中的一些問(wèn)題z(四四)試驗(yàn)結(jié)果在毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)中試驗(yàn)結(jié)果在毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)中的作用的作用陽(yáng)性結(jié)果應(yīng)具有劑量陽(yáng)性結(jié)果應(yīng)具有劑量反應(yīng)關(guān)系，即隨反應(yīng)關(guān)系，即隨劑量增加，致突變作用增加；和在一組劑量增加，致突變作用增加；和在一組或多組的觀察值與陰性對(duì)照比較有顯著或多組的觀察值與陰性對(duì)照比較有顯著性差異。陽(yáng)性結(jié)論，即表明受試物具有性差異。陽(yáng)性結(jié)論，即表明受試物具有致突

29、變性，而不同致突變?cè)囼?yàn)的遺傳學(xué)致突變性，而不同致突變?cè)囼?yàn)的遺傳學(xué)終點(diǎn)不同，其所表示的含義不一。如基終點(diǎn)不同，其所表示的含義不一。如基因突變是具有導(dǎo)致遺傳性疾病的突變，因突變是具有導(dǎo)致遺傳性疾病的突變，DNADNA修復(fù)的實(shí)際后果尚不明確。修復(fù)的實(shí)際后果尚不明確。 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十九頁(yè)，共42頁(yè)|美國(guó)美國(guó)EPA毒物處毒物處(1936)提出了一個(gè)三階段的試驗(yàn)方案，把遺傳毒性檢提出了一個(gè)三階段的試驗(yàn)方案，把遺傳毒性檢測(cè)和生殖細(xì)胞致突變性驗(yàn)證分階段進(jìn)行。測(cè)和生殖細(xì)胞致突變性驗(yàn)證分階段進(jìn)行。z第一階段測(cè)試化學(xué)物的遺傳毒性，包括第一階段測(cè)試化學(xué)物的遺傳毒性，包括Ames試驗(yàn)、體外哺乳動(dòng)物試驗(yàn)、體外哺乳動(dòng)物

30、細(xì)胞基因突變?cè)囼?yàn)、體內(nèi)骨髓染色體損傷試驗(yàn)細(xì)胞基因突變?cè)囼?yàn)、體內(nèi)骨髓染色體損傷試驗(yàn)(微核試驗(yàn)或染色微核試驗(yàn)或染色體畸變?cè)囼?yàn)體畸變?cè)囼?yàn))；z第二階段測(cè)試對(duì)生殖細(xì)胞的致突變作用；第二階段測(cè)試對(duì)生殖細(xì)胞的致突變作用；z第三階段為哺乳動(dòng)物生殖細(xì)胞致突變性標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)。第三階段為哺乳動(dòng)物生殖細(xì)胞致突變性標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)。z在遺傳危害性評(píng)價(jià)時(shí)，在體外基因突變?cè)囼?yàn)中呈陽(yáng)性的化學(xué)物應(yīng)進(jìn)行與哺在遺傳危害性評(píng)價(jià)時(shí)，在體外基因突變?cè)囼?yàn)中呈陽(yáng)性的化學(xué)物應(yīng)進(jìn)行與哺乳類性腺乳類性腺DNA相互作用的試驗(yàn)，包括睪丸細(xì)胞的相互作用的試驗(yàn)，包括睪丸細(xì)胞的SCE、UDS、染色體畸變?nèi)旧w畸變及堿性洗脫試驗(yàn)等，也可進(jìn)行顯性致死試驗(yàn)，在第二階段中出現(xiàn)及堿性洗脫試驗(yàn)等，也可進(jìn)行顯性致死試驗(yàn)，在第二階段中出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)，需進(jìn)行小鼠特異座位試驗(yàn)，可觀察形態(tài)改變或生化改陽(yáng)性反應(yīng)，需進(jìn)行小鼠特異座位試驗(yàn)，可觀察形態(tài)改變或生化改變；在體內(nèi)骨髓細(xì)胞染