1、DN 碾取中各種實驗試劑作用原理1、STE 是 Tris-Hcl、EDTANacl 的混合液。其總體作用是為 DN 砒供保護環境，在此環境下 DNA 可以呈穩定態，最少限度地受到破壞。Tris.HCl 提供緩沖體系，DNAS 這一體系中呈穩定態。EDTA 是 DNAB 的抑制劑，可以防止細胞破碎后 DNAB 降解 DNANaCl,有利于 DNA 的溶解。2、SDS 的作用：利用高濃度的陰離子去垢劑 SDS（十二烷基磺酸鈉，Sodiumdodecylsulfate）使 DNA 與蛋白質分離，在高溫（5565C）條件下裂解細胞，使染色體離析，蛋白變性，釋放出核酸，然后采用提高鹽濃度及降低溫度的方法

2、使蛋白質及多糖雜質沉淀，離心后除去沉淀，3、苯酚的作用：使蛋白質變性，同時抑制了 DNase 的降解作用。用苯酚處理勻漿液時，由于蛋白與 DNA 聯結鍵已斷，蛋白分子表面又含有很多極性基團與苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而 DNA 溶于水相。使用酚的優點：1.有效變性蛋白質；2.抑制了 DNase 的降解作用。缺點：1.能溶解 10-15%的水，從而溶解一部分 poly（A）RNA2.不能完全抑制 RNase 的活性。Tris 酚的顏色，一般為黃色。如果變成粉紅色，說明被氧化，不能再用。4、氯仿的作用克服酚的缺點；加速有機相與液相分層。最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的跡量酚。（酚易溶于氯仿中

3、）5、異戊醇：減少蛋白質變性操作過程中產生的氣泡。異戊醇可以降低表面張力，從而減少氣泡產生。另外，異戊醇有助于分相，使離心后的上層含 DNA 的水相、中間的變性蛋白相及下層有機溶劑相維持穩定。6、用乙醇沉淀 DNAM,為什么加入單價的陽離子？用乙醇沉淀 DNAM,通常要在溶液中加入單價的陽離子， 如 NaCl或 NaAc,Na+中和 DNA子上的負電荷，減少 DNA 分子之間的同性電荷相斥力，而易于聚集沉淀。7.為什么在保存或抽提 DNA程中，一般采用 TE 緩沖液？在基因操作實驗中，選擇緩沖液的主要原則是考慮 DNA 的穩定性及緩沖液成分不產生干擾作用。磷酸鹽緩沖系統（pKa=7.2）和硼酸

4、系統（pKa=9.24）等雖然也都符合細胞內環境的生理范圍(pH),可作 DNA 勺保存液，但在轉化實驗時，磷酸根離子的種類及數量將與 Ca2+產生 Ca3(PO4)2 沉淀，在 DN 版應時，不同的酶對輔助因子的種類及數量要求不同，有的要求高離子濃度，有的則要求低鹽濃度，采用 Tris-HCl(pKa=8.0)的緩沖系統，由于緩沖液是 TrisH+/Tris,不存在金屬離子的干擾作用，故在提取或保存 DNA 時，大都采用 Tris-HCl系統，而 TE 緩沖液中的 EDT 心能穩定。8、STE 是 Tris-Hcl、EDTANacl 的混合液。其總體作用是為 DNAj供保護環境，在此環境下

5、DNA 可以呈穩定態，最少限度地受到破壞。Tris.HCl 提供緩沖體系，DNAS 這一體系中呈穩定態。EDTA 是 DNAB 的抑制劑，可以防止細胞破碎后 DNAB 降解 DNANaCl,有利于 DNA 的溶解。9、SDS 的作用：利用高濃度的陰離子去垢劑 SDS(十二烷基磺酸鈉，Sodiumdodecylsulfate)使 DNA 與蛋白質分離，在高溫(5565C)條件下裂解細胞，使染色體離析，蛋白變性，釋放出核酸，然后采用提高鹽濃度及降低溫度的方法使蛋白質及多糖雜質沉淀，離心后除去沉淀，10、苯酚的作用：使蛋白質變性，同時抑制了 DNase 的降解作用。用苯酚處理勻漿液時，由于蛋白與 D

6、NA 聯結鍵已斷，蛋白分子表面又含有很多極性基團與苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而 DNA 溶于水相。使用酚的優點：1.有效變性蛋白質；2.抑制了 DNase 的降解作用。缺點：1.能溶解 10-15%的水，從而溶解一部分 poly(A)RNA2.不能完全抑制 RNase 的活性。Tris 酚的顏色，一般為黃色。如果變成粉紅色，說明被氧化，不能再用。11、氯仿的作用克服酚的缺點；加速有機相與液相分層。最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的跡量酚。(酚易溶于氯仿中)5、異戊醇：減少蛋白質變性操作過程中產生的氣泡。異戊醇可以降低表面張力，從而減少氣泡產生。另外，異戊醇有助于分相，使離心后的上層含 DN

7、A 的水相、中間的變性蛋白相及下層有機溶劑相維持穩定。12、用乙醇沉淀 DNA 寸，為什么加入單價的陽離子？用乙醇沉淀 DNAM,通常要在溶液中加入單價的陽離子，如 NaCl 或 NaAc,Na+中和 DNA子上的負電荷，減少 DNA 分子之間的同性電荷相斥力，而易于聚集沉淀。Tris中文品名：三羥甲基氨基甲烷；氨基丁三醇；緩血酸胺NH2八。HHO，Tris 結構式英文品名：Tris;Tris(Hydroxymethyl)aminomethane英文別名：2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediolTHAM;Trisbase;Trometamol通用 CA

8、S:77-86-1產品純度：100%(USP 藥典級)/99.9%(實驗室技術級)產品級別：USP 藥典級，符合 USP/EP/cGMP 寸藥物賦形劑的要求分子式：NH2c(CH2OH)3分子量：121.14使用用途：生物制藥，體外診斷，個人護理及化妝品原料等保存溫度：常溫密封避光保存TRIS 是一種最常用的生物緩沖液，常配成 PH 值為 6.8,7.4,8.0,8.8。其 PH 值隨溫度變化很大。一般來說，溫度每升高一度，PH 值下降 0.03。1MTRIS-HCl6.8 和 1.5MTRIS-HCl8.8 是 SDS-PAGEt 常用的試劑。而由 TRIS 配成的 TAE,TBE 等是 D

9、NA 電泳最常用的試劑，TE(PH8.0)主要用于溶解 DNATE 為 Tris 力口 EDTA稱。緩沖特性：Tris 為弱堿，在室溫(25C)下，它的晅為 8.1;根據緩沖理論，Tris 緩沖液的有效緩沖范圍在pH7.0 到 9.2 之間。Tris 堿的水溶液 pH 在 10.5 左右，一般加入鹽酸以調節 pH 值至所需值，即可獲得該 pH 值的緩沖液。但同時應注意溫度對于 Tris 的 pKa 的影響。衍生緩沖液：由于 Tris 緩沖液為弱堿性溶液，DNA 在這樣的溶液中會被去質子化，從而提高其溶解性。人們常常在 Tris 鹽酸緩沖液中加入 EDTA 制成“TE 緩沖液:TE 緩沖液被用于 DNA 勺穩定和儲存。如果將調節 pH 值的酸溶液換成乙酸，則獲得“TAE 緩沖液”(Tris/Acetate/EDTA),而換成硼酸則獲得“TBE緩沖液”(Tris/Borate/EDTA)。這兩種緩沖液通常用于核酸電泳實驗中。制備：Tris 可以由兩步反應生成：先由硝基甲烷生成中間體三羥甲基硝基甲烷(HOCH2)3CNO2,然后再由該中間體還原得到 Tris。用途：Tris 緩沖液不僅被廣泛用作核酸和蛋白質白溶劑，還有許多重要