1、黃芪破壁粉粒增強免疫功能及抗疲勞作用的研究唐勇（江西省中醫院，南昌，330006）摘要 目的：研究黃芪破壁粉粒對免疫功能的影響及抗疲勞的作用，并與黃芪飲片進行比較。方法：采用炭粒廓清法、免疫器官重量法測定免疫指標，采用小鼠負重游泳試驗觀察抗疲勞作用。結果：黃芪破壁粉粒能夠增強巨噬細胞的吞噬能力并能顯著增加免疫器官的重量；能夠顯著延長小鼠負重游泳時間。結論：黃芪破壁粉粒具有增強免疫、抗疲勞的功能。關鍵詞：黃芪；破壁粉粒；增強免疫；抗疲勞Study on Immue-improving and Anti-fatigue Effect of Astragali Radix Ultramicro Po

2、wderLijun1 Cheng jinle2 Huang ping3 Deng wen2（1. Jiangxi University of TCM ,Nanchang,330006 2.Zeus Medicine Group,Zhongshan,528437, 3.Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou,510006）ABSTRACT:OBJECTIVE:Study on Immue-improving and Anti-fatigue effect of Astragalis Radix Ultramicro Powder,an

3、d compare with common Astragalis Radix.METHOD:To measure the immune index by carbon powder clearance method and immune organ weight method;to explore the anti-fatigue effect by swimming model of weight loading mice.RESULT:Astragalis Radix Ultramicro Powder can improve phagocytosing functiong of monn

4、uclear phagocyte cell and the weight of immune organ;swimming durationg of weight loading mice were porlonged by Astragalis Radix Ultramicro Powder.CONCLUSION:Astragalis Radix Ultramicro Powder possesses the function of Immue-improving and Anti-fatigue .Keyword: Astragali Radix；Ultramicro Powder；Imm

5、ue-improving；Anti-fatigue 超微粉碎技術是近年來國際上興起的一種新型物料加工技術，該技術是一種純物理過程，中藥的超微粉碎是指以生物細胞破壁為目的的粉體作業，它不以粉體的細度為目的，而是追求細胞的破壁率。超微粉碎后的藥材細粉，半徑很小，藥物的表面積相應增大，從而提高了有效成分的溶出率。由于細胞壁在粉碎過程中大量被破壞，有效成分不需要通過細胞壁和細胞膜就能釋放出來，這樣就提高了藥物的釋放量和釋放速度。因此小劑量的超微粉碎破壁細粉即可達到大劑量普通藥材的藥效【1-2】。 本文觀察了黃芪破壁粉粒對免疫功能的影響及抗疲勞作用，并與黃芪飲片進行了比較，為黃芪破壁粉粒的臨床應用提供一

6、定的理論依據。1、材料 1.1 試劑與儀器碳酸鈉：天津富晨化學試劑廠生產，批號20080627；注射用環磷酰胺，上海生物制藥有限公司產品，批號08010521；氯化鈉注射液，太極集團西南藥業有限公司生產，批號08060010；墨汁，北京一得閣墨業有限責任公司生產；JA1203N型電子天平，上海精密儀器有限公司產品；WFJ7200型可見光分光光度計，尤尼柯（上海）儀器有限公司產品。1.2 藥物黃芪破壁粉粒，由中山中智藥業集團提供，批號20090501。黃芪飲片，由中山中智藥業集團提供，批號20090501。黃芪飲片使用常規的煎煮法提取，黃芪破壁粉粒使用前以蒸餾水制成混懸液，4保存。生脈膠囊，正大

7、青春寶藥業有限公司生產，批號0812003。1.3動物KM種小鼠，SPF級，合格證號：SCXK（粵）2008-0020粵監證字2008A00031.4 統計方法所有實驗數據均以 ±s表示。計量數據采用SPSS 13.0統計軟件進行方差分析及組間檢驗。2、方法與結果 2.1 對小鼠炭粒吞噬廓清能力的影響【3 】 取SPF級KM種小鼠，隨機分為正常對照組，模型對照組，黃芪飲片組（2.0g·kg-1）和生脈膠囊組（0.9g·kg-1），黃芪破壁粉粒分為2.0g·kg-1、1.0g·kg-1、0.5g·kg-1、0.25g·kg-1

8、四個劑量組。實驗第1天，動物按20g/kg體重灌胃給藥，連續7天，每天1次，正常對照組灌胃蒸餾水。實驗第4天，除正常對照組外，各組分別以50mg/kg體重腹腔注射環磷酰胺，連續3天，造成動物免疫抑制模型。于末次給藥后24h，于小鼠尾靜脈注射50中華墨汁0.1ml/10g體重。于注入墨汁第30sec及6min，用微量移液器取小鼠眼眶血液0.025ml，立即注入盛有2ml的0.1NaCO3溶液中，吸管于該液中吸入、吹出數次，以充分洗出吸管壁附著的血液，取血完畢，以0.025ml正常小鼠血溶于2ml的0.1NaCO3（碳酸鈉）溶液校零，于分光光度計上675nm處比色。取血完畢后，立即取肝臟和脾臟稱重

9、（取血前需稱小鼠體重）。按下式計算吞噬指數K及吞噬系數： K= =式中C為血中炭粒濃度即吸光度，T為時間，W為體重，WLS為肝脾合重。結果表明，與正常對照組比較，模型對照組吞噬指數和吞噬系數均明顯小于對照組（P0.01）。與模型對照組比較，黃芪破壁粉粒2g·kg-1能顯著提高小鼠的吞噬指數（P0.05）。同等給藥劑量比較，黃芪破壁粉粒優于飲片組。見表1。2.2 對免疫抑制小鼠免疫器官重量的影響【3 】 取SPF級KM種小鼠，分組、給藥及造模方法同2.1。于末次給藥后1h處死動物，稱量體重，并解剖取胸腺和脾臟稱重，計算臟器指數。結果顯示，與正常對照組比較，模型對照組脾臟指數和胸腺指數都

10、明顯小于正常對照組（P0.01）。與模型對照組比較，黃芪破壁粉粒2.0、1.0、0.5、0.25g·kg-1均能顯著增加小鼠的脾臟指數和胸腺指數（P0.050.01）。見表2。臟器指數=×100% 2.3 對小鼠負重游泳時間的影響【3 】 取SPF級KM種小鼠隨機分為對照組，黃芪飲片組（2.0g·kg-1）和生脈膠囊組（0.9g·kg-1），黃芪破壁粉粒分為2.0g·kg-1、1.0g·kg-1、0.5g·kg-1、0.25g·kg-1四個劑量組。1g/kg）、中劑量組（2g/kg）、高劑量組（4g/kg），黃芪飲

11、片組（4g/kg）和生脈膠囊組（0.9g/kg）。實驗第1天，動物按20g/kg體重灌胃給藥，連續7天，每天1次，對照組灌胃等量蒸餾水。于末次給藥30min后，小鼠尾部負荷10體重的鐵絲，放入水中游泳（水溫25，水深20cm），觀察小鼠游泳至力竭（在水下10秒鐘不能上浮），該時間為小鼠的游泳時間。結果顯示，與對照組比較，黃芪破壁粉粒2.0、1.0、0.5g·kg-1均能顯著延長小鼠的游泳時間（P0.050.01），具有抗疲勞作用，并具有劑量依賴性。見表3。表1：對細胞吞噬功能的影響（x±s）組別劑量（g·kg-1）N（只）吞噬指數K吞噬系數正常對照組-100.01

12、44±0.00245.32±0.47模型對照組-100.0084±0.00224.37±0.45黃芪飲片組2.0100.0102±0.00224.70±0.88黃芪破壁粉粒組2.0100.0105±0.0022*4.69±0.54 黃芪破壁粉粒組1.0100.0098±0.00194.09±0.42 黃芪破壁粉粒組0.5100.0094±0.00244.18±0.41 黃芪破壁粉粒組0.25100.0092±0.00244.16±0.53生脈膠囊組0.91

13、00.0097±0.00234.01±0.53注:示與正常對照組相比，P<0.05，示與正常對照組相比，P<0.01；*示與模型對照組相比，P<0.05；*示與模型對照組相比，P<0.01。（下同）表2、對免疫器官重量的影響（x±s）組別劑量（g·kg-1）N脾臟指數（mg/10g體重）胸腺指數（mg/10g體重）正常對照組-103.46±0.834.49±4.50模型對照組-101.45±0.231.37±0.40黃芪飲片組2.0101.77±0.46*1.91±0.5

14、2*黃芪破壁粉粒組2.0101.96±0.84*2.00±0.83* 黃芪破壁粉粒組1.0101.68±0.27*2.19±0.42*黃芪破壁粉粒組0.5101.58±0.192.06±0.22*黃芪破壁粉粒組0.25101.89±0.30*2.46±0.43*生脈膠囊組0.9101.64±0.451.68±0.37*表3、對小鼠游泳時間的影響（x±s）組別劑量（g·kg-1）N游泳時間（sec）對照組10116.44±42.51黃芪飲片組2.010145.30&#

15、177;28.19*黃芪破壁粉粒組2.010185.30±107.07* 黃芪破壁粉粒組1.010176.40±78.10* 黃芪破壁粉粒組0.510194.70±81.42* 黃芪破壁粉粒組0.2510145.50±56.34生脈膠囊組0.910189.60±98.37*3、討論中藥發揮藥效的主要有效成分一般存在于植物的細胞壁中，傳統中藥飲片其入藥形狀大都有一個毫米以上的厚度，細胞破壁率據推算不到3%，儲藏在細胞內的中藥有效成分要發揮作用，必須穿過數個甚至幾十個細胞壁才能溶解到溶媒中，因此，傳統中藥飲片的有效成分的利用率是很低的。本研究所用的

16、黃芪破壁粉粒系采用超微粉碎技術將中藥飲片粉碎后，細胞破壁率將達到 86.7%，有效成分利用率在90%以上，使細胞內各種有效成分充分溶出，促進和提高中藥材多種有效成分的溶解及釋放。藥物在體內釋放后，與胃腸粘膜的接觸面積增大，能更好地分散、溶解在胃腸液中，更易被胃腸道吸收，藥效明顯增強【1】【2】【4】。黃芪為豆科類植物蒙古黃芪或膜莢黃芪的干燥根，黃芪具有補氣生血、益衛固表、斂瘡生肌等功效。主要用于脾肺氣虛、中氣下陷、食少便溏及氣血不足所致癰疽不潰等。黃芪中主要含有黃芪多糖、黃酮類化合物、三萜類成分及黃芪大豆皂苷、氨基酸、生物堿和微量元素等【5】。呂氏研究發現【6】，黃芪多糖腹腔注射，能明顯升高正

17、常小鼠和環磷酰胺致免疫功能低下小鼠的單核巨噬細胞的吞噬能力、血清溶血素抗體水平、脾臟指數等。張建新【7】研究發現黃芪可使刀豆素A（ConA）激發的T淋巴細胞增殖反應明顯，同時對T細胞功能具有增強作用，對B淋巴細胞免疫功能也有明顯的增強作用。徐明【8】等研究也發現，黃芪總提取物能夠促進ConA或LPS誘導的細胞增殖反應，同時對環磷酰胺所致免疫功能低下小鼠的DTH反應有增強作用。黃芪具有一定抗應激耐疲勞的作用，宋強【9】等報道黃芪冰凍微粉能夠顯著延長小鼠負重游泳時間，具有明顯的耐疲勞作用，佟欣【10】等對黃芪、黨參對小鼠抗應激作用進行了對比研究發現，黃芪和黨參水煎劑均能顯著增強小鼠抗應激反應的能力

18、，黃芪提高小鼠抗應激的作用優于黨參，其中在抗熱刺激和耐缺氧實驗中黃芪作用明顯優于黨參，而在低溫游泳實驗中黃芪和黨參的作用無明顯差別。 本研究表明，黃芪破壁粉粒能夠升高免疫抑制小鼠巨噬細胞的吞噬功能，并能顯著提高免疫抑制小鼠的免疫器官重量，顯著延長小鼠負重游泳的時間。實驗結果提示，黃芪破壁粉粒具有增強免疫功能及耐疲勞抗應激的作用。與黃芪飲片比較，黃芪破壁粉粒較低劑量即可達到黃芪飲片的效果。實驗結果為黃芪破壁粉粒工藝的合理性、確定用藥劑量等提供了參考。參考文獻：1侯連兵.中藥細胞級微粉碎技術在中藥藥劑中的應用.中藥材,2001,24(10):765-766.2史萬玉,包永占,林德貴,等.微粉中藥黃藿散對免疫抑制小鼠非特異性免疫功能的影響.中國獸醫藥雜志,2007,43(12):45-46.3陳奇.中藥藥理研究方法學.北京:人民衛生出版,2006,777-778.4黃昆,舒朝暉,劉根凡.中藥飲片粉碎粒度研究進展.中國中醫藥信息雜志,2005,12(4):97-98.5吳清和.中藥藥理學.北京:高等教育出版社,2007,219.