1、二 實驗原理 本世紀初，D.Kostoff用壓片法首先在果蠅（Drosophila melanogaster）幼蟲的唾液腺細胞核中發現了特別巨大的染色體唾液腺染色體（salivary gland chromosomes）。由于它具有許多重要特點而成為細胞遺傳學、發生遺傳學、進化遺傳學和分子遺傳學研究中不可多得的好材料。果蠅是雙翅目昆蟲，幼蟲期具有很大的唾腺細胞，其中的染色體是巨大的唾液腺染色體。唾液腺染色體不斷地進行自我復制而不分開，經過許多次的復制形成約10004000拷貝的染色體絲，合起來達5mm寬，400mm長，比普通中期相染色體大得多（約100150倍），所以又稱為多線染色體。唾液腺染

2、色體具有許多重要特征，為遺傳學研究的許多方面，如染色體結構、化學組成、基因差別表達等提供了獨特的研究材料。 果蠅種間或種內不同品系與近緣種之間的遺傳差異常表現為唾液腺染色體不聯會，形成泡（puff）、縊痕（constrictions）、間帶區（interband）的伸縮性以及頂體（telomere）的形態等多方面的變異，特別重要的是可觀察是否產生了倒位、染色體的斷裂、融合或重排，據此研究其基因序列的差異。因此，無論從細胞遺傳學的角度研究基因與突變性狀之間的關系，還是從進化遺傳學方面研究染色體的系統發育，探討近緣種間的遺傳差異和生殖隔離機制等，唾液腺染色體的分析研究都是十分重要的。果蠅唾液腺染色

3、體已廣泛用于種內系統發育和種間親緣關系的研究中。 普通果蠅（2n=2x=8）唾腺染色體的特點表現在：各染色體著絲點附近異染色質區相互結合形成染色很深的染色中心，第、對染色體呈形（中著絲粒），各有兩臂，染色體呈棒狀，第對染色體呈粒狀，觀察時可見五條臂由染色中心向外蜿蜒伸展。三 實驗材料果蠅三齡幼蟲活體。四 實驗器具、藥品試劑 顯微鏡，生化培養箱；果蠅培養瓶，鑷子，解剖針，載玻片，蓋玻片，吸水紙等。 0.7氯化鈉（NaCl），1mol/L HCl；改良苯酚品紅染色液；果蠅培養基等。五 實驗方法1培養果蠅三齡幼蟲 將果蠅放在營養豐富的培養基中，1518下飼養，幼蟲要生長肥大，才能獲得較大的唾腺。培養

4、要求：飼料松軟，含水量較高，營養豐富，發酵良好（建議配方：玉米粉10g，紅糖13g，瓊脂1g，酵母粉2g，丙酸34滴，加蒸餾水100120ml）。追加酵母液。在一齡幼蟲出現后，將成蟲移入另一培養瓶中，在飼料表面滴加低濃度的酵母液（24.5），每天滴加12滴；2齡3齡幼蟲時期適當增加酵母液的濃度（約10左右）；滴加的量以覆蓋在飼料表面薄薄的一層為宜。控制幼蟲的密度。一般情況下，半磅牛奶瓶中10對成蟲交配后在12h左右必須將成蟲轉移，一般要求每cm2培養基表面2040只幼蟲左右。低溫培養：稍低的溫度有利于幼蟲的充分生長發育，一般1518較為合適。 2取唾腺 挑選生長肥大的三齡幼蟲放入表面皿中用0.

5、7的生理鹽水盡量洗去幼蟲體表所沾附的培養基，然后將幼蟲置載玻片上，滴2滴0.7生理鹽水，找到具有口器的頭部（有一小黑點），一手用解剖針刺入（或壓住）頭部，將蟲固定，一手用攝子夾緊幼蟲下半部（尾端1/3處），輕輕向兩端拉開，唾腺隨頭部拉出。唾腺是一對透明的棒狀腺體，外有白色的脂肪組織（不透明）。去除幼蟲其它組織部分，并把唾腺周圍的白色脂肪剝離干凈。唾液腺解剖針解剖針 在低倍顯微鏡下，調節好光亮度觀察，可見一對半透明、隱約可見細胞界限的囊狀物唾腺。移去蟲體其余部份，用解剖針剔除附在唾腺一側深色泡沫狀的脂肪體，以保證制片質量。若載片上雜質較多，可用生理鹽水適當沖洗，用吸水紙吸去多余的生理鹽水。注意：

6、在整個剝離過程中，不能讓載片上的生理鹽水干涸，否則唾腺收縮而不易剝離；沖洗殘渣和吸去多余水液時，要避免唾腺被吸水紙吸走。 3解離 將剝好的唾腺移到載片中央，加一滴1 mol/L HCl于腺體上，解離min，使組織疏松，以便壓片時細胞分散，染色體展開。4染色 用吸水紙吸去HCl，加1滴蒸餾水輕輕沖洗后，小心吸干。加12滴改良苯酚品紅或其它染液，染色1015min。5壓片 染色完成后，蓋上干凈的蓋片，并覆一層濾紙。將片子放在實驗臺上，用大拇指均勻用力壓片。（注意不要使蓋片移動。） 注意：壓片時適當多加些染液有利于染色體臂的伸展，但要防止染液過多而造成材料隨染液而溢出。6鏡檢 在低倍鏡選擇唾腺細胞多

7、且染色體分散好的視野，換高倍鏡仔細觀察唾腺染色體的染色中心、染色體臂和橫紋以及可能有的疏松區、裴氏環、或因易位而形成的十字形圖象和因倒位而形成的倒位環等各種結構。六 注意事項1. 一定加生理鹽水，否則唾腺易干。2. 將脂肪組織清除干凈。3. 水不可太多，否則幼蟲會漂浮而且活躍。4. 染色時間不可過長，否則背景也著色。5. 壓片時要揉，用力要均勻。6. 染色完以后，將舊的染色液吸去，加新的染色液，再壓片。 7. 吸水時勿將唾腺一起吸走。七 作業制效果較好的唾腺染色體臨時片1張。繪出你所觀察到的果蠅唾腺染色體略圖，并仔細描繪各染色體臂末端條橫紋。果蠅是雙翅目昆蟲，幼蟲期具有很大的唾腺細胞，其中的染

8、色體是巨大的唾液腺染色體。唾液腺染色體不斷地進行自我復制而不分開，經過許多次的復制形成約10004000拷貝的染色體絲，合起來達5mm寬，400mm長，比普通中期相染色體大得多（約100150倍），所以又稱為多線染色體。唾液腺染色體具有許多重要特征，為遺傳學研究的許多方面，如染色體結構、化學組成、基因差別表達等提供了獨特的研究材料。控制幼蟲的密度。一般情況下，半磅牛奶瓶中10對成蟲交配后在12h左右必須將成蟲轉移，一般要求每cm2培養基表面2040只幼蟲左右。低溫培養：稍低的溫度有利于幼蟲的充分生長發育，一般1518較為合適。 5壓片 染色完成后，蓋上干凈的蓋片，并覆一層濾紙。將片子放在實驗臺上，用大拇指均勻用力壓片。（注意不要使蓋片移動。） 注意：壓片時適當多加些染