1、石蠟切片技術第1頁，共42頁。一、顯微切片技術產生的原因一、顯微切片技術產生的原因q光學顯微鏡發展到一定程度之后，渴望知道細胞光學顯微鏡發展到一定程度之后，渴望知道細胞結構結構q由于組織太厚，光線很難穿過由于組織太厚，光線很難穿過q壓片可使組織變薄，但引起變形、易位，除核外，壓片可使組織變薄，但引起變形、易位，除核外，看不到其他結構，因此需要切片變薄。看不到其他結構，因此需要切片變薄。q因細胞水多，太軟，無法切片因細胞水多，太軟，無法切片n 鑒于上述情況找到一種方法使鑒于上述情況找到一種方法使細胞水細胞水被替代，變硬，被替代，變硬，能直接切片的方法，最廣泛使用的就是石蠟切片技術能直接切片的方法

2、，最廣泛使用的就是石蠟切片技術第2頁，共42頁。二、石蠟切片技術的優點二、石蠟切片技術的優點 為什么選擇這一技術呢？主要因為它有以為什么選擇這一技術呢？主要因為它有以下優點：便于推廣、經濟、適用、簡便。下優點：便于推廣、經濟、適用、簡便。l經濟經濟, ,價格低，可反復使用；價格低，可反復使用；l技術難度不大，容易掌握，但要精通也不容易；技術難度不大，容易掌握，但要精通也不容易；l設備要求不高設備要求不高 ；l可長期保存；可長期保存；l染色容易，而且都能被染色，形成好的反差和染色容易，而且都能被染色，形成好的反差和好的選擇性。好的選擇性。第3頁，共42頁。三、石蠟切片的主要過程三、石蠟切片的主要

3、過程 殺生（取材）殺生（取材）固定固定沖洗沖洗脫水脫水保存保存透明透明石蠟透入石蠟透入包埋包埋切片切片復水復水染色染色脫水脫水封藏封藏觀察保存觀察保存n（一）取材、固定、洗滌、脫水（一）取材、固定、洗滌、脫水n（二）透明、透蠟、包埋（二）透明、透蠟、包埋n（三）切片、貼片（三）切片、貼片n（四）染色、封藏（四）染色、封藏第4頁，共42頁。（一）取材（一）取材殺生（動物）殺生（動物）n1.1.目的：目的：動物必須殺生，然后取出所需組織動物必須殺生，然后取出所需組織n2.2.方法：方法：一般采用乙醚（氯仿）麻醉后解剖，取出一般采用乙醚（氯仿）麻醉后解剖，取出所需組織。所需組織。n3.3.注意事項：

4、注意事項：q性別合適性別合適q麻醉前動物生活正常，以免影響其代謝活動，進而麻醉前動物生活正常，以免影響其代謝活動，進而影響細胞結構影響細胞結構q取材部位要準，取材部位要準， q速度快速度快第5頁，共42頁。（一）取材（一）取材 1. 1.目的目的：得到所需要的組織：得到所需要的組織 2.2.方法：方法：a.a.用剪刀剪下組織用剪刀剪下組織 b.b.沖洗動物組織，動物（生理鹽水、糜蛋白酶溶液）植物（緩沖洗動物組織，動物（生理鹽水、糜蛋白酶溶液）植物（緩沖液或水）沖洗干凈，防止失水，避免壓擠損傷，用生理鹽水、糜蛋沖液或水）沖洗干凈，防止失水，避免壓擠損傷，用生理鹽水、糜蛋白酶沖去表面的血、粘液和贓

5、物。白酶沖去表面的血、粘液和贓物。 c.c.切成小塊切成小塊 3 3注意事項：注意事項：要準要準要快要快避免損傷（方向，刀要快，不能擠壓）避免損傷（方向，刀要快，不能擠壓）n植物取材：植物取材：用剪刀剪下材料時一定要植物生活正常，不要因缺水、營用剪刀剪下材料時一定要植物生活正常，不要因缺水、營養和溫度光照發生明顯改變，影響細胞結構，同時發育程度、部位要養和溫度光照發生明顯改變，影響細胞結構，同時發育程度、部位要準。準。第6頁，共42頁。（二）固定（二）固定 1. 1.目的：目的： 為了使取樣的細胞在形態結構和成分方面為了使取樣的細胞在形態結構和成分方面保持與生活的狀態一樣，就必須迅速殺死細胞保

6、持與生活的狀態一樣，就必須迅速殺死細胞避免失水變形，自溶破壞結構等。避免失水變形，自溶破壞結構等。 固定液的選擇：固定液的選擇：快；不溶解；不收縮膨脹；快；不溶解；不收縮膨脹；軟硬適中；增加折光度；增加染色能力；長期軟硬適中；增加折光度；增加染色能力；長期保存等保存等7 7項。項。第7頁，共42頁。2.2.方法方法n（1 1）固定劑的種類：）固定劑的種類：一般采用化學固定一般采用化學固定 單純固定：單純固定：只用一種試劑固定：只用一種試劑固定： 混合固定：混合固定：用兩種或兩種以上的試劑混用兩種或兩種以上的試劑混合在一起進行固定如：合在一起進行固定如：第8頁，共42頁。單純固定：單純固定：n福

7、爾馬林福爾馬林formalin:10%formalin:10%的甲醛（的甲醛（37%40%37%40%）n醋酸（醋酸（0.3%5%0.3%5%）n苦味酸（飽和溶液，三硝基苯酚）苦味酸（飽和溶液，三硝基苯酚）n鉻酸鉻酸0.51%0.51%n鋨酸鋨酸12%12%n升汞（氯化汞飽和水溶液約升汞（氯化汞飽和水溶液約7%7%）第9頁，共42頁。混合固定：混合固定：n用兩種或兩種以上的試劑混合在一起進行固定如：用兩種或兩種以上的試劑混合在一起進行固定如：n卡諾氏固定液卡諾氏固定液 酒精：冰醋酸（酒精：冰醋酸（3 3：1 1） 酒精：冰醋酸：氯仿（酒精：冰醋酸：氯仿（6 6：1 1：3 3）適用于動植物一般

8、組織）適用于動植物一般組織細胞。細胞。nFAAFAA 福爾馬林福爾馬林(38%(38%甲醛甲醛)5 ml: )5 ml: 冰醋酸冰醋酸5ml:70%5ml:70%酒精酒精90 ml 90 ml 幼嫩材料用幼嫩材料用50%50%酒精代替酒精代替70%70%酒精酒精, ,可防止材料收縮可防止材料收縮; ;還可加入還可加入5 ml5 ml甘油甘油( (丙三丙三醇醇) )以防蒸發和材料變硬以防蒸發和材料變硬. . n但單細胞及絲狀藻類除外，也不適于細胞學研究但單細胞及絲狀藻類除外，也不適于細胞學研究第10頁，共42頁。n卡諾氏固定液卡諾氏固定液(Carnoys Fluid)(Carnoys Fluid

9、) 適用于一般植物組織和細適用于一般植物組織和細胞的固定胞的固定, ,常用于根尖常用于根尖, ,花藥壓片及子房石蠟切片等花藥壓片及子房石蠟切片等. .有極快有極快的滲透力的滲透力, ,根尖材料固定根尖材料固定1520min1520min即可即可, ,花藥則需花藥則需1h1h左右左右, ,此液固定最多不超過此液固定最多不超過24h,24h,固定后用固定后用95%95%酒精沖洗至不含冰醋酒精沖洗至不含冰醋酸為止酸為止; ;如果材料不馬上用如果材料不馬上用, ,需轉入需轉入70%70%酒精中保存酒精中保存. .固定液固定液的重要特性是能迅速穿透細胞，將其固定并維持染色體結的重要特性是能迅速穿透細胞，

10、將其固定并維持染色體結構的完整性，還要能夠增強染色體的嗜堿性，達到優良染構的完整性，還要能夠增強染色體的嗜堿性，達到優良染色效果。色效果。 第11頁，共42頁。nF.A.AF.A.A固定液固定液 又稱標準固定液又稱標準固定液, ,萬能固定液萬能固定液. .適適用于一般根用于一般根, ,莖莖, ,葉葉, ,花藥花藥, ,子房組織切片子房組織切片. .在植在植物形態解剖研究上應用極廣物形態解剖研究上應用極廣; ;nFAAFAA固定液的優點在于：固定液的優點在于：兼有保存劑作用兼有保存劑作用, ,冰醋冰醋酸既能抵消酒精和甲醛對組織的收縮作用又是酸既能抵消酒精和甲醛對組織的收縮作用又是細胞核的優良固定

11、劑，沉淀核蛋白，且對免疫細胞核的優良固定劑，沉淀核蛋白，且對免疫組化無礙更無掉片之理。組化無礙更無掉片之理。FAAFAA固定液具有強大固定液具有強大的固定效能，較之單純固定更科學更快更好！的固定效能，較之單純固定更科學更快更好！對染色體的觀察效果較差對染色體的觀察效果較差. .第12頁，共42頁。（2 2）固定方法）固定方法n靜置固定：靜置固定：將組織塊放入盛有固定液的小的稱量瓶、將組織塊放入盛有固定液的小的稱量瓶、小燒杯或青霉素瓶中，在室溫或低溫（小燒杯或青霉素瓶中，在室溫或低溫（0404）固定）固定一段時間，不斷搖動能增加固定效果，植物和動物經一段時間，不斷搖動能增加固定效果，植物和動物經

12、常使用這種方法。常使用這種方法。n灌注固定：灌注固定：常用于動物，將固定液通過已麻醉的常用于動物，將固定液通過已麻醉的動物血管中，讓血液流動，固定所需細胞，該方動物血管中，讓血液流動，固定所需細胞，該方法有點，固定均勻，不出現自溶現象，但較繁瑣。法有點，固定均勻，不出現自溶現象，但較繁瑣。第13頁，共42頁。3.3.固定時應注意的事項固定時應注意的事項固定條件的選擇：固定條件的選擇：種類、濃度、溫度和時間種類、濃度、溫度和時間固定要快否則會自溶：固定要快否則會自溶：組織快，不能太多，否則固定不透：組織快，不能太多，否則固定不透：第14頁，共42頁。（三）沖洗（三）沖洗 1.沖洗的目的沖洗的目的

13、 除去固定劑，主要是防止固定的毒害作用，除去固定劑，主要是防止固定的毒害作用，固定時間太長，組織收縮變脆。固定時間太長，組織收縮變脆。第15頁，共42頁。2.2.沖洗的方法沖洗的方法 沖洗液隨固定液而定，沖洗的選擇：沖洗液隨固定液而定，沖洗的選擇：不形不形變提取，不反應，有效除去固定液。變提取，不反應，有效除去固定液。n固定液為水溶液時，以水或低濃度的酒精沖固定液為水溶液時，以水或低濃度的酒精沖洗；洗；n 固定液是酒精多以不同濃度的酒精沖洗，固定液是酒精多以不同濃度的酒精沖洗，以酒精沖洗，濃度要低于固定液的酒精濃度。以酒精沖洗，濃度要低于固定液的酒精濃度。材料與酒精的比例一般為材料與酒精的比例

14、一般為1 1：1010（加入的體積）（加入的體積） （70%70%乙醇換洗乙醇換洗3 3次，每次次，每次2060min 2060min ）第16頁，共42頁。（2 2）沖洗方法）沖洗方法n靜置沖洗：靜置沖洗：加入沖洗液，靜置一段時間，倒出加入沖洗液，靜置一段時間，倒出該液，加入新的沖洗液，反復幾次（該液，加入新的沖洗液，反復幾次（5656次），次），每次每次3030分鐘左右，振蕩有好處。（時間開始一分鐘左右，振蕩有好處。（時間開始一次為次為20302030分鐘，以后幾次可延長分鐘，以后幾次可延長12h12h，）具，）具體時間與材料性質、大小和溫度有關。體時間與材料性質、大小和溫度有關。n流水沖

15、洗：流水沖洗：將小瓶用紗布蒙住，放入盆中，流將小瓶用紗布蒙住，放入盆中，流水沖洗，效果較靜置沖洗為好，時間為水沖洗，效果較靜置沖洗為好，時間為1224h1224h，但流水不能太大太急，也不能太長，太長使組但流水不能太大太急，也不能太長，太長使組織變軟腫脹，沖洗時間有時長達織變軟腫脹，沖洗時間有時長達24h24h左右，如左右，如木本植物的木質部。木本植物的木質部。第17頁，共42頁。3.3.注意事項注意事項 (1) (1) 沖洗徹底沖洗徹底否則收縮、變硬、抽取否則收縮、變硬、抽取 (2)(2)不能時間太長太急不能時間太長太急變軟，腫脹（吸水）變軟，腫脹（吸水） (3) (3) 搖動有利于沖洗干凈

16、搖動有利于沖洗干凈加快分子運動加快分子運動第18頁，共42頁。（四）脫水（四）脫水1. 1. 目的：目的： 因石蠟與水不混合，在用石蠟透入前必須將細因石蠟與水不混合，在用石蠟透入前必須將細胞中的水徹底脫掉，否則石蠟進不去材料，無胞中的水徹底脫掉，否則石蠟進不去材料，無法讓細胞變硬，無法進行切片。法讓細胞變硬，無法進行切片。第19頁，共42頁。2.2.方法方法q脫水劑的選擇脫水劑的選擇 原則：原則：凡與水和石蠟親和性好的凡與水和石蠟親和性好的且不使細胞劇烈收縮膨且不使細胞劇烈收縮膨脹，脹，不能大量抽提細胞成分均可作為脫水劑。常用的是乙醇不能大量抽提細胞成分均可作為脫水劑。常用的是乙醇和丙酮，使用

17、乙醇最多，此外還有叔丁醇、正丁醇等。和丙酮，使用乙醇最多，此外還有叔丁醇、正丁醇等。q脫水的一般過程：脫水的一般過程：多采用靜止脫水多采用靜止脫水15%35%50%15%35%50%70%83%95%100%70%83%95%100%（2323次），丙酮較酒精快，濃度次），丙酮較酒精快，濃度相應低一些。起始濃度的選擇主要根據材料的性質而定，動物相應低一些。起始濃度的選擇主要根據材料的性質而定，動物和幼嫩植物一半從和幼嫩植物一半從15%15%或或35%35%開始；老的或木質成分多從開始；老的或木質成分多從15%15%或或70%70%開始。如木本植物的莖。開始。如木本植物的莖。q脫水時間：脫水時間

18、：每次脫水時間也是根據細胞的老嫩即含水量和組每次脫水時間也是根據細胞的老嫩即含水量和組織塊大小及溫度而定，原則是嫩短老長，嫩的織塊大小及溫度而定，原則是嫩短老長，嫩的15-30m15-30m，老的，老的30m-4h30m-4h，還可長達，還可長達8-12h8-12h，如洋蔥一般為，如洋蔥一般為1h1hq脫水的溫度：脫水的溫度：室溫和室溫和0-40-4C C兩種，前者時間短，后者緩慢兩種，前者時間短，后者緩慢一些。一些。第20頁，共42頁。3.注意事項：注意事項：n脫水一定要脫干凈，徹底，脫水一定要脫干凈，徹底，否則石蠟很難進入而導致不否則石蠟很難進入而導致不能切片。能切片。n脫水時間長短要合適

19、，脫水時間長短要合適，太短脫不干凈，太長低濃度容太短脫不干凈，太長低濃度容易細胞變軟，膨脹；太長高濃度則細胞收縮，變脆，易細胞變軟，膨脹；太長高濃度則細胞收縮，變脆，提取嚴重，影響切片。提取嚴重，影響切片。n梯度不能太大，梯度不能太大，負責拉傷，最后負責拉傷，最后100%100%乙醇脫水要乙醇脫水要2-32-3次，以保證脫水完全。次，以保證脫水完全。n保存，只能在保存，只能在70%70%酒精中保存（酒精中保存（0404）若時間不夠可若時間不夠可暫時保存在暫時保存在70%70%酒精中過夜，第二天再繼續實驗。也可長期酒精中過夜，第二天再繼續實驗。也可長期保存幾個月，在保存幾個月，在1 1：1 1：

20、1=1=甘油：蒸餾水：甘油：蒸餾水：95%95%酒精中保存酒精中保存最好（低溫）最好（低溫）第21頁，共42頁。（五）透明（五）透明n1.1.目的：目的： 為了使石蠟更好進入組織，解決乙醇與石蠟親為了使石蠟更好進入組織，解決乙醇與石蠟親和性較差的問題，并能增加遮光系數，且與封和性較差的問題，并能增加遮光系數，且與封藏劑很好混合；藏劑很好混合；第22頁，共42頁。2.2.方法：方法：n（1 1）透明劑的種類）透明劑的種類 a.a.選擇的原則：選擇的原則：與乙醇和石蠟均有較好的親和性，與乙醇和石蠟均有較好的親和性，又不又不破壞細胞結構（形態、結構）破壞細胞結構（形態、結構）不能大量提取細胞成分不能

21、大量提取細胞成分 b.b.種類：二甲苯、氯仿、香柏油，苯胺油，其中以二甲苯種類：二甲苯、氯仿、香柏油，苯胺油，其中以二甲苯最好最好n（2 2）透明過程）透明過程 （乙醇：二甲苯）（乙醇：二甲苯）2:11:11:22:11:11:2純（二甲苯）純（二甲苯）但有時也只用但有時也只用1 1：1 1和純的二甲苯即可，時間要長（和純的二甲苯即可，時間要長（1h1h）純的二甲苯要多換幾次保證去乙醇完全。純的二甲苯要多換幾次保證去乙醇完全。n（3 3）時間：隨）時間：隨組織塊大而異，也與溫度有關。一般為組織塊大而異，也與溫度有關。一般為30m2h30m2h，如洋蔥根尖為每次如洋蔥根尖為每次1h1hn（4 4

22、）溫度：）溫度：多常溫。多常溫。第23頁，共42頁。3.3.注意事項注意事項n（1 1）透明要完全徹底除去乙醇或丙酮）透明要完全徹底除去乙醇或丙酮n（2 2）時間過長會使組織變硬變脆，出現收縮，）時間過長會使組織變硬變脆，出現收縮，過短，透明不徹底，乙醇除不盡，石蠟進入不過短，透明不徹底，乙醇除不盡，石蠟進入不好，會出現空洞。好，會出現空洞。n（3 3）換二甲苯是要快，因二甲苯易揮發使濃）換二甲苯是要快，因二甲苯易揮發使濃度改變度改變n（4 4）蓋嚴防止水分和空氣（）蓋嚴防止水分和空氣（COCO2 2）進入，出現）進入，出現混濁和酸度變化因而受酸影響。混濁和酸度變化因而受酸影響。第24頁，共4

23、2頁。（六）石蠟透入（六）石蠟透入1.1.目的：目的： 讓石蠟透入細胞，代替二甲苯支持細胞，增加讓石蠟透入細胞，代替二甲苯支持細胞，增加強度，防止在切片時細胞變形和破碎，便于切強度，防止在切片時細胞變形和破碎，便于切片。片。第25頁，共42頁。2.2.透蠟透蠟 （1 1）對石蠟的要求）對石蠟的要求 （2 2）透蠟的過程）透蠟的過程第26頁，共42頁。（1 1）對石蠟的要求）對石蠟的要求熔點已知熔點已知質量：結構細膩，質量：結構細膩，光滑均勻光滑均勻無灰塵和揮發物；無灰塵和揮發物；a a透明：透明：b b無不透明的物；無不透明的物；c c 無氣無氣泡泡n種類：種類：石蠟熔點在石蠟熔點在42604

24、260之間，包埋石蠟在之間，包埋石蠟在50605060之間，可分為兩種之間，可分為兩種軟石蠟軟石蠟52565256（動物）（動物）硬石蠟硬石蠟54585458（植物）（植物）浸片（浸片（4um4um以下）用以下）用56605660為好。為好。第27頁，共42頁。n石蠟好壞可用以下方法辨別：石蠟好壞可用以下方法辨別： a.a.熔入紙盒中無氣泡（揮發物；）熔入紙盒中無氣泡（揮發物；） b.b.無不透明顆粒（灰塵），斷裂處無顆粒無不透明顆粒（灰塵），斷裂處無顆粒（灰塵，切片無細小顆粒（灰塵）（灰塵，切片無細小顆粒（灰塵） C.C.在在30-3530-35放置放置2424小時無氣泡或不透明結小時無氣泡

25、或不透明結晶狀小點。晶狀小點。n不好石蠟的利用不好石蠟的利用： 加熱至開始冒煙后移至火焰較小的的燈上，加熱至開始冒煙后移至火焰較小的的燈上，再加熱數小時，除去揮發物和水分；再加熱數小時，除去揮發物和水分； 冷卻后雜質下沉可除去，所以使用過的石冷卻后雜質下沉可除去，所以使用過的石蠟可再重復利用切效果較好。蠟可再重復利用切效果較好。第28頁，共42頁。透蠟的過程透蠟的過程n植物：植物：二甲苯二甲苯: :石蠟石蠟純石蠟純石蠟n50ml50ml燒杯燒杯2 2個個n1/21/2二甲苯二甲苯1/21/2石蠟石蠟石蠟石蠟石蠟，根據組石蠟，根據組織塊的大小，每步織塊的大小，每步20min60min20min6

26、0min，溫度，溫度6262n換蠟的方法：換蠟的方法：A A：移材料：移材料：n B:B:倒石蠟倒石蠟n動植物材料在透蠟的過程中前者時間短后者動植物材料在透蠟的過程中前者時間短后者時間長，透蠟時以換蠟不轉移材料為好。時間長，透蠟時以換蠟不轉移材料為好。n動物：動物：從透明劑中取出從透明劑中取出透明劑石蠟混合透明劑石蠟混合液（液（1520min1520min）純石蠟純石蠟換一次新鮮換一次新鮮石蠟。（透蠟時間為石蠟。（透蠟時間為11.5h11.5h）洋蔥根尖為）洋蔥根尖為1h1h。第29頁，共42頁。3.注意事項：注意事項：n（1）透蠟要完全不能殘留二甲苯；n（2）溫度恒定，以較低溫度為好，較高溫

27、度提取嚴重，因為二甲苯和石蠟都是脂類物質容物；n（3）時間合適，較短為好，否則會變硬變脆出現收縮。第30頁，共42頁。（七）包埋（七）包埋 1.1.目的：目的：以石蠟代替細胞中水分變硬，形成含有材料的石蠟以石蠟代替細胞中水分變硬，形成含有材料的石蠟塊，體積增大，便于切片也便于保存；塊，體積增大，便于切片也便于保存； 2.2.方法：方法： （1 1）石蠟選擇同包埋，讓透蠟后的組織塊包埋在石蠟中，）石蠟選擇同包埋，讓透蠟后的組織塊包埋在石蠟中，形成一定的形狀。形成一定的形狀。 （2 2）準備：折紙盒，準備溫臺（或電熱板）和酒精等及新）準備：折紙盒，準備溫臺（或電熱板）和酒精等及新鮮石蠟，解剖針、標

28、簽和一盆冷水鮮石蠟，解剖針、標簽和一盆冷水 （3 3）倒蠟）倒蠟 （4 4） 冷卻冷卻第31頁，共42頁。操作：操作： 紙盒紙盒標簽標簽加組織加組織倒石蠟倒石蠟撥正撥正組織塊組織塊放入水盆放入水盆沉底沉底n盆中放滿冷水，點燃溫臺下的酒精燈或（電熱盆中放滿冷水，點燃溫臺下的酒精燈或（電熱板），放板），放3 3個解剖針和紙盒在溫臺上個解剖針和紙盒在溫臺上. .n將標簽放入盒底，文字朝下將標簽放入盒底，文字朝下n將溫箱中取出的石蠟杯，將材料撥入紙盒內，將溫箱中取出的石蠟杯，將材料撥入紙盒內，再倒入新鮮的石蠟，將材料撥到適當位置。再倒入新鮮的石蠟，將材料撥到適當位置。n將紙盒輕輕提取放入盆面，表面凝固

29、后傾斜使將紙盒輕輕提取放入盆面，表面凝固后傾斜使冷水進入盒中，立即沉入水中迅速冷卻，冷水進入盒中，立即沉入水中迅速冷卻，30min1h30min1h可取出，取出蠟條備用。可取出，取出蠟條備用。第32頁，共42頁。3.3.注意問題：注意問題：（1 1）包埋時石蠟不能過早冷卻（放在溫臺上）包埋時石蠟不能過早冷卻（放在溫臺上）（2 2）冷卻要快）冷卻要快（3 3）若出現白色、渾濁結晶，可能是由于：）若出現白色、渾濁結晶，可能是由于： a.a.脫水不干凈；脫水不干凈； b.b.組織內部或石蠟中混有透明劑；組織內部或石蠟中混有透明劑； c.c.組織塊倒入時，周圍蠟已凝固：組織塊倒入時，周圍蠟已凝固： d

30、.d.石蠟冷卻太慢；石蠟冷卻太慢； e.e.石蠟質量不好。石蠟質量不好。第33頁，共42頁。（八）切片（八）切片1. 1. 目的：目的：將觀察的材料變薄，光線容易穿過；將觀察的材料變薄，光線容易穿過；2 2方法：方法： （1 1）固定：）固定：取出蠟塊，修整材料長條形，避取出蠟塊，修整材料長條形，避免損傷。然后將底部粘于金屬和滲蠟木塊上。免損傷。然后將底部粘于金屬和滲蠟木塊上。 （2 2）修塊：）修塊：修塊使切片成蠟帶而不彎曲，組修塊使切片成蠟帶而不彎曲，組織便于鏡檢，組織塊需要修整齊，最好為梯形、織便于鏡檢，組織塊需要修整齊，最好為梯形、長方形、正方形。長方形、正方形。 組織塊必須組織塊必須

31、上下平行，上下平行，但左右的蠟、上下但左右的蠟、上下的蠟不要太多或太少；的蠟不要太多或太少；正方形或長方形，可正方形或長方形，可各切去一角，以便識別。各切去一角，以便識別。第34頁，共42頁。切片：切片： 切片機切片機 結構：結構： A A：微動裝置（調節切片厚薄）：微動裝置（調節切片厚薄） B B：夾刀部分；：夾刀部分； C C：夾物部分。：夾物部分。 兩類：兩類： 滑行切片機：滑行切片機：劃刀部分是滑動的；夾物部分是固劃刀部分是滑動的；夾物部分是固定不變的，但可升降；定不變的，但可升降； 旋轉式切片機：旋轉式切片機：則是夾物部分上下向前移動，而夾刀則是夾物部分上下向前移動，而夾刀部分固定不

32、動，最薄切部分固定不動，最薄切2um2um，最厚，最厚40um40um。n 第35頁，共42頁。 切片刀：切片刀： 雙平面刀（兩面平，兩種機型均可）雙平面刀（兩面平，兩種機型均可） 平凹刀（一面平，一面內凹）平凹刀（一面平，一面內凹） 雙凹刀（兩面都凹）雙凹刀（兩面都凹） 保安刀片保安刀片 玻璃刀玻璃刀 第36頁，共42頁。切片方法切片方法 將切片材料的木塊夾在刀夾上，厚度一般將切片材料的木塊夾在刀夾上，厚度一般612um612um，連續轉，連續轉40504050次，用毛筆挑起蠟帶，次，用毛筆挑起蠟帶，平放在蠟光紙上，平放在蠟光紙上，靠刀的一面較光滑，應向下。靠刀的一面較光滑，應向下。 鏡檢組

33、織細胞是否完整，有無空洞，皺褶，鏡檢組織細胞是否完整，有無空洞，皺褶，碎裂等。碎裂等。第37頁，共42頁。貼片貼片n將燙板加熱到將燙板加熱到3535度左右；度左右；n載玻片涂上載玻片涂上蛋白甘油蛋白甘油，用手涂抹（蛋清：甘油，用手涂抹（蛋清：甘油1 1：1 1，加，加1%1%的麝香草；滴加蒸餾水數滴，放上的麝香草；滴加蒸餾水數滴，放上蠟帶切斷，應短于載玻片的蠟帶切斷，應短于載玻片的1/51/5或或2/52/5）將載玻）將載玻片移置燙板上，使片展平；片移置燙板上，使片展平；n除去多余水分再放至燙板（除去多余水分再放至燙板（3535度）度）23h23h后即可。后即可。第38頁，共42頁。3.3.切

34、片中經常出現的問題及其原因切片中經常出現的問題及其原因n隔片隔片（太軟，刀太鈍）（太軟，刀太鈍）n刀痕刀痕（刀有缺口，石蠟中有硬的顆粒）（刀有缺口，石蠟中有硬的顆粒）n脫片脫片（不干凈；粘片劑變質；切片光面未向下；切片太（不干凈；粘片劑變質；切片光面未向下；切片太小而厚；組織過硬；切片未充分展開；切片貼片面未充小而厚；組織過硬；切片未充分展開；切片貼片面未充分干燥（組織部分呈白色）。分干燥（組織部分呈白色）。n彎曲彎曲（不平行）（不平行）n不成帶不成帶（石蠟太少：溫度低）（石蠟太少：溫度低）n卷筒卷筒（溫度過低，過硬，太鈍）（溫度過低，過硬，太鈍）n粘刀粘刀：（溫度太高，過軟，太鈍）：（溫度太高，過軟，太鈍）n縱裂：縱裂：（缺口；顆粒，太硬）（缺口；顆粒，太硬）n厚薄不均厚薄不均：夾的太松，刀的傾角太大，太硬）：夾的太松，刀的傾角太大，太硬）第39頁，共42頁。（九）染色（九）染色n1. 1. 目的：目的：增大反差，增大選擇性增大反差，增大選擇性n2. 2. 原理：原理：有兩種學說有兩種學說 物理作用：物理作用： 化學學說：化學學說：它認為染色深淺完全取決于化學作用所致如細胞它認為染色深淺完全取決于化學作用所致如細胞質呈堿性，細胞核呈酸性，紅血球呈中性，因而分別被酸、堿和質呈堿性，細胞核呈酸性，紅血球呈中性，因而分別被酸、堿和中性染料親和而起反應。中性染料親和而