1、 目錄摘要1關(guān)鍵詞1前言3第一章 實(shí)驗(yàn)部分51.1實(shí)驗(yàn)試劑及儀器51.2 溶液的配制51.3 實(shí)驗(yàn)過程51.3.1以牛血清蛋白為模板的金納米簇的制備51.3.2硫脲（Tu）抑制BSA-AuNCs-Cu2+-S2O82-I-體系熒光猝滅61.3.3其他物質(zhì)對抑制BSA-AuNCs-Cu2+-S2O82-I-體系熒光猝滅6第二章 結(jié)果與討論62.1 BSA-AuNCs的表征62.2 BSA-AuNCs間接檢測硫脲72.3實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化92.4 BSA-AuNCs熒光探針的選擇性17第三章 總結(jié)17參考文獻(xiàn)18致謝20基于熒光金納米簇的高靈敏度硫脲檢測摘要近年來隨著納米技術(shù)的發(fā)展，納米材料作為一種新

2、型熒光材料被廣泛運(yùn)用到分析領(lǐng)域1。目前已研究發(fā)現(xiàn)的熒光納米材料主要包括以下幾種：有機(jī)染料、聚合物點(diǎn)、碳量子點(diǎn)、半導(dǎo)體量子點(diǎn)、熒光金屬納米簇(FM NCs)等2-5。金納米簇是一種尺寸小于3 nm的一種新型熒光材料，因其具有易合成、光穩(wěn)定性高、低毒性等突出優(yōu)勢，被廣泛用于各種目標(biāo)物的檢測。在本論文中，我們以牛血清蛋白為模板合成熒光金納米簇。研究發(fā)現(xiàn)在向金納米簇中加入碘離子、過硫酸鹽以及銅離子時(shí)，其熒光發(fā)生明顯的猝滅；如果同時(shí)加入硫脲，熒光發(fā)生恢復(fù)。通過熒光金納米簇的恢復(fù)程度，可以實(shí)現(xiàn)對硫脲的靈敏檢測。在最佳條件下，熒光的猝滅程度與硫脲的濃度呈一定的線性關(guān)系，其線性范圍是0.2-4.0 M，檢測限

3、可達(dá)0.03 M，有望實(shí)現(xiàn)實(shí)樣檢測。關(guān)鍵詞：金納米簇，熒光增強(qiáng)，過硫酸鹽，碘離子，銅離子，硫脲AbstractIn recent years, with the development of nanotechnology, nanomaterials have been widely used in the analysis field as a kind of novel fluorescent material. The fluorescent nanomaterials that have been studied so far include mainly organic dyes,

4、polymer dots, carbon quantum dots, semiconductor quantum dots, fluorescent metal nanoclusters (FM NCs) and so on. Gold nanoclusters are a novel fluorescent material with a size of less than 3 nm. They are widely used for the detection of various targets due to their outstanding advantages such as ea

5、sy synthesis, high light stability, and low toxicity.In this paper, we synthesize fluorescent gold nanoclusters using bovine serum albumin as a template. When iodide, persulphate, and copper ions are added to gold nanoclusters, the fluorescence is significantly quenched. However, when thiourea is ad

6、ded at the same time, the fluorescence was recovered. Under an optimized condition, the extent of quenching was found linearly related to thiourea concentration in the range of 0.2-4.0 M, and thiourea as low as 0.03 M could be detected. This method is expect to implement real sample t

7、esting.Keywords: Gold nanoclusters；Fluorescence enhancement；Iodine；Copper ions；Thiourea基于熒光金納米簇的高靈敏度硫脲檢測前言熒光金納米簇，又稱納米點(diǎn)，其尺寸一般小于3 nm，是一種新興熒光納米材料。與被研究者們熟悉的一般金屬納米顆粒不同，在可見光區(qū)域即可測得其紫外吸收峰，在可見光區(qū)域到近紅外區(qū)域都可測得其熒光發(fā)生峰。正因?yàn)闊晒饨鸺{米簇具有較長的熒光壽命、較大的斯托克斯位移值、較好的生物相容性和光化學(xué)穩(wěn)定性以及易于合成標(biāo)記等優(yōu)點(diǎn)，因此熒光金納米簇被廣泛應(yīng)用于重金屬離子檢測、無機(jī)陰離子檢測、生物小分子檢測以及蛋

8、白質(zhì)檢測和生物成像中6-9。本文中我們同樣利用金納米簇的性質(zhì)，建立檢測硫脲的熒光方法。近年來，研究者們已經(jīng)建立了許多合成AuNCs的方法，其中主要分為以下幾類：第一類是單分子層保護(hù)法。顧名思義，就是將某種分子修飾或者組裝在金納米簇表面，使其具有某種特定功能的合成方法。現(xiàn)在這種方法主要使用的保護(hù)分子層是硫醇類化合物，包括十一巰基烷酸（MUA）10、二氫硫辛酸（DLHA）11、十二巰基硫醇（DDT）12等，這種方法制備得到的金納米簇具有較小的粒徑、較大的斯托克斯位移，而且副產(chǎn)物較少。第二類是配體蝕刻法13-14。此方法通過在前驅(qū)體中加入刻蝕劑，使它們發(fā)生反應(yīng)，從而改變金納米簇中的核原子數(shù)目。但是這

9、種方法的刻蝕一般是不完全的，會有較大的納米顆粒殘留，從而導(dǎo)致所合成的AuNCs量子效率低。第三類是模板法17。模板法是選取不同的大分子，如蛋白質(zhì)、聚合物、DNA等作為模板，其中模板物質(zhì)通過提供不同的空間與框架，可以用來合成核心尺寸不一樣、核心原子數(shù)不一樣和形態(tài)不一樣的金納米簇。雖然合成金納米簇的方法有很多，但模板法更具優(yōu)勢。因?yàn)榻鸺{米簇只有具備良好的熒光強(qiáng)度和光穩(wěn)定性，我們才能將其有效的應(yīng)用于各個領(lǐng)域。這些優(yōu)良的光物理性質(zhì)需要我們選擇合適的穩(wěn)定劑配體及模板物質(zhì)，這也是研究金納米簇合成方法的重點(diǎn)。近年來，有研究者以牛血清蛋白為模板合成金納米簇15，這種方法綠色簡便。牛血清蛋白(BSA)是一種很容

10、易獲得的生物物質(zhì)，以BSA為模板的金納米簇有很好的生物相容性，且光學(xué)穩(wěn)定性強(qiáng)。本論文即采用這種方法制備BSA。但是由于金納米簇的熒光受到pH，反應(yīng)溫度，離子強(qiáng)度等因素的影響，所以反應(yīng)條件需要優(yōu)化。本實(shí)驗(yàn)使用的BSA-Au NCs，同樣需要對反應(yīng)時(shí)間，pH，反應(yīng)物濃度等條件進(jìn)行優(yōu)化。硫脲是一種有機(jī)硫化物，應(yīng)用范圍廣泛，可用于合成磺胺噻唑、蛋氨酸和肥豬片等藥物，還是合成染料及染色助劑、樹脂、橡膠的硫化促進(jìn)劑和金屬礦物的浮選劑的重要原料，甚至在顯影劑、調(diào)色劑以及電鍍工業(yè)有所應(yīng)用22。但是硫脲具有一定毒性，且被世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機(jī)構(gòu)列入致癌清單中，所以實(shí)現(xiàn)硫脲的高靈敏度高選擇性的檢測具有重要意義

11、。第一章 實(shí)驗(yàn)部分1.1實(shí)驗(yàn)試劑及儀器氯金酸（HAuCl4·4H2O），氫氧化鈉（NaOH），磷酸氫二鈉（Na2HPO4），檸檬酸（C6H8O7），碘化鉀（KI），氯化鉀（KCl），氯化鈉（NaCl），硫酸銅（CuSO4），硫脲（CH4N2S），過硫酸鉀（K2S2O8），甘氨酸（Gly），組氨酸（His），賴氨酸（Lys），半胱氨酸（L-cys），牛血清蛋白（BSA）均來自國藥化學(xué)試劑有限公司。實(shí)驗(yàn)過程中所用的水均為二次蒸餾水。實(shí)驗(yàn)所用的試劑均為分析純。紫外可見分光光度計(jì)（TU-1901雙光束，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；熒光光度計(jì)（F4600，日本日立）；紫外燈（365 nm，

12、廣州雪萊特光電科技股份有限公司）；pH計(jì)（PHS-3C，上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司）。1.2 溶液的配制50 mg/mL的BSA溶液：用蒸餾水溶解2.5 g的BSA粉末并定容至50ml;1 mol/L的NaOH溶液：取2 g NaOH用蒸餾水溶解并定容至50ml；0.1 mol/L的KI溶液：取0.83 g KI用蒸餾水溶解并定容至50ml；0.4 mol/L的Na2HPO4溶液：取7.16 g Na2HPO4用蒸餾水溶解并定容至50 ml；實(shí)驗(yàn)過程中所用的玻璃儀器都用鉻酸洗液浸泡過夜，然后經(jīng)亞沸水洗滌干凈。1.3 實(shí)驗(yàn)過程1.3.1以牛血清蛋白為模板的金納米簇的制備根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道的以牛血清蛋

13、白為模板的金納米簇合成路線15如下：首先用亞沸水將0.1 g/mL氯金酸溶液稀釋至10 mmol/L，然后取5 mL10 mmol/L的氯金酸，將其加入到5 mL50 mg/mL的牛血清蛋白溶液中，并將溶液放入37 水浴中，并且打開攪拌器劇烈攪拌。反應(yīng)2 min后，將0.5 mL1mol/L的NaOH溶液加入到混合溶液中，并在水浴中攪拌反應(yīng)24 h。反應(yīng)過程中溶液的顏色從起始的亮黃色逐漸轉(zhuǎn)變成淺棕色，最終變成深棕色。反應(yīng)結(jié)束后，在4 的冰箱中將BSA-AuNCs保存以備用。1.3.2硫脲（Tu）抑制BSA-AuNCs-Cu2+-S2O82-I-體系熒光猝滅實(shí)驗(yàn)過程中，將Cu2+、K2S2O8、

14、KI以及不同濃度的Tu先加入到檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖溶液中，反應(yīng)一段時(shí)間后，再將稀釋后的BSA-AuNCs加入體系，一段時(shí)間后在激發(fā)波長為365 nm時(shí)測定體系的熒光發(fā)射光譜。由于體系的熒光強(qiáng)度受到pH，離子強(qiáng)度等因素影響，同時(shí)為了提高方法的選擇性以及靈敏度，對實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行了詳細(xì)的篩選。1.3.3其他物質(zhì)對抑制BSA-AuNCs-Cu2+-S2O82-I-體系熒光猝滅在以上基礎(chǔ)上，實(shí)驗(yàn)過程中還測定了其他可能對BSA-AuNCs-Cu2+-S2O82-I-體系熒光恢復(fù)產(chǎn)生影響的物質(zhì)，如：氯化鉀（KCl），氯化鈉（NaCl），甘氨酸（Gly），組氨酸（His），賴氨酸（Lys），檸檬酸（CA）。第

15、二章 結(jié)果與討論2.1 BSA-AuNCs的表征實(shí)驗(yàn)中所合成的BSA-AuNCs顏色為深棕色，在紫外燈（365 nm）的照射下可以觀察到明顯的紅色熒光，與文獻(xiàn)報(bào)道的紫外光譜相一致15，這表示合成的BSA-AuNCs是可用的。如圖1所示，其紫外光譜表明BSA-AuNCs在275 nm處有一個比較明顯的特征吸收峰，該峰表明體系中可能存在芳香族殘基以及二硫鍵16。圖1：BSA 與BSA-AuNCs的紫外可見吸收光譜，其中a為BSA-AuNCs紫外可見吸收光譜，b為BSA的紫外可見吸收光譜。2.2 BSA-AuNCs間接檢測硫脲為了驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的可行性，我們首先將Cu2+，K2S2O8，KI加入到檸檬酸-

16、磷酸氫二鈉緩沖溶液中，在其中一個樣品中加入Tu，反應(yīng)一段時(shí)間后，再將用0.4 mol/L的Na2HPO4溶液稀釋30倍的BSA-AuNCs以1:10比例加入體系，通過其熒光發(fā)射光譜可發(fā)現(xiàn)明顯的熒光恢復(fù)現(xiàn)象（如圖2所示）。此外通過在樣品中添加淀粉溶液（如圖3所示），我們發(fā)現(xiàn)硫脲可以抑制BSA-AuNCs-Cu2+-S2O82-I-體系熒光猝滅。具體圖示如下：圖2：不同體系的熒光發(fā)射光譜圖：其中a是同時(shí)加入K2S2O8，KI，Cu2+和BSA-AuNCs的熒光發(fā)射圖譜，b是同時(shí)加入K2S2O8，KI，Cu2+，BSA-AuNCs和Tu的熒光發(fā)射圖譜圖3：左：C(I-)=3 mM，C(K2S2O8)

17、=0.5 mM，C(Cu2+)=10 M，右：C(I-)=3 mM， C(K2S2O8)=0.5 mM，C(Cu2+)=10 M，C(Tu)=30 M。由于過硫酸鉀有強(qiáng)的氧化性，碘離子有強(qiáng)的還原性，所以I-很容易被氧化成I2，此時(shí)體系中實(shí)際上是I2與過量I-共存，由于I2/I-混合物對金元素具有很強(qiáng)的刻蝕作用，所以導(dǎo)致其對納米簇有更強(qiáng)的降解作用，從而獲得更加高效的熒光猝滅18，同時(shí)由于銅離子對過硫酸鉀和碘離子的氧化還原反應(yīng)起到催化作用19-20，且硫脲與銅離子可形成穩(wěn)定的螯合物23，所以加入硫脲后，體系中銅離子濃度降低，催化效果降低，產(chǎn)生的I2減少，體系的熒光發(fā)生恢復(fù)，具體的工作原理如下圖所示

18、：圖4：體系的工作原理圖。指的是銅離子催化碘離子與過硫酸鹽反應(yīng)使BSA-AuNCs熒光猝滅的過程；指的是銅離子與硫脲反應(yīng)生成螯合物的過程。2.3實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化在證實(shí)了實(shí)驗(yàn)方法的可行性后，為了提高方法的靈敏度，我們對實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行一系列優(yōu)化。首先我們對pH進(jìn)行了篩選，因?yàn)槿芤旱膒H不僅會影響碘離子與過硫酸鹽反應(yīng)，而且還會對I2/I-對金納米簇的刻蝕作用產(chǎn)生影響21，從而影響體系的熒光恢復(fù)程度。所以我們分別測定了pH對碘離子與過硫酸鹽反應(yīng)的影響，以及對金納米簇?zé)晒獾挠绊憽Ｍㄟ^對不同pH下銅離子催化I-與S2O82-反應(yīng)結(jié)果進(jìn)行比較，我們發(fā)現(xiàn)當(dāng)溶液pH=3時(shí)此反應(yīng)可以生成大量I2，而pH大于3時(shí)，溶液

19、中產(chǎn)生的I2很少（如圖5所示）。所以取pH=3作為第一段反應(yīng)的最佳pH。之后我們測定不同pH檸檬酸-磷酸氫二鈉的緩沖溶液中金納米簇的熒光猝滅率，我們可以看到當(dāng)pH=7時(shí)，I2對金納米簇的猝滅效果最好（如圖6所示）。因此我們實(shí)驗(yàn)過程總體分為兩步，第一步我們先將Cu2+，K2S2O8，KI以及Tu加入到pH=3的檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖溶液中，反應(yīng)一段時(shí)間；第二步再將用0.4 mol/L的Na2HPO4溶液稀釋30倍的BSA-AuNCs以1:10比例加入體系，將體系中的pH調(diào)至7，再反應(yīng)一段時(shí)間，之后測量體系的熒光發(fā)射光譜。圖5：所有試管中都加了0.5 mM K2S2O8，3 mM KI，10 M

20、Cu2+，且反應(yīng)120 min后加入淀粉溶液。從左到右體系的pH分別為：3，4，5，6，7，8。圖6：不同pH下的熒光猝滅率，該熒光信號是在檸檬酸-磷酸氫二鈉的緩沖溶液中，并且此時(shí)激發(fā)波長為365 nm，發(fā)射波長為645 nm左右。此時(shí)C(I2)=1mM，AuNCs稀釋了300倍。由于時(shí)間會影響該體系的熒光恢復(fù)程度和穩(wěn)定性，所以我們對時(shí)間進(jìn)行了篩選。首先我們測定第一段反應(yīng)時(shí)間，按上述方法，我們先將各種物質(zhì)加入到緩沖溶液中，先讓其反應(yīng)不同時(shí)間，再將稀釋后的BSA-AuNCs加入體系，然后測量不同時(shí)間下金納米簇的熒光恢復(fù)程度。結(jié)果表明當(dāng)銅離子催化碘離子與過硫酸鹽反應(yīng)30 min時(shí)，金納米簇的熒光恢

21、復(fù)程度F/F0（F和F0分別表示體系中加Tu和不加Tu時(shí)的熒光強(qiáng)度）最大。所以我們確定第一段的最佳反應(yīng)時(shí)間為30 min。之后我們在此條件下，測定加入BSA-AuNCs后不同反應(yīng)時(shí)間的熒光發(fā)射光譜。由于在15 min后體系的熒光強(qiáng)度變化不大，所以我們?nèi)?5 min作為第二段反應(yīng)的最佳時(shí)間。如圖7所示：圖7：不同反應(yīng)時(shí)間下的BSA-AuNCs的熒光恢復(fù)程度和熒光發(fā)射光譜。其中A指的是銅離子催化碘離子與過硫酸鹽反應(yīng)的時(shí)間，B指的是加入BSA-AuNCs后的反應(yīng)時(shí)間。體系中C（Cu2+）=0.5 M，C(I-)=2 mM，C（K2S2O8）=0.5 mM，C（Tu）=3 M。反應(yīng)物的濃度也是影響實(shí)驗(yàn)

22、現(xiàn)象的一個重要因素。該體系中，在一定時(shí)間內(nèi)，隨著碘離子濃度的升高，金納米簇的熒光猝滅程度越大。同時(shí)銅離子作為催化劑，在一定時(shí)間內(nèi)，銅離子濃度的大小會影響到碘離子與過硫酸鹽的反應(yīng)程度，從而影響B(tài)SA-AuNCs的猝滅程度，這也是本實(shí)驗(yàn)實(shí)現(xiàn)對硫脲進(jìn)行定量測量的一個依據(jù)。至于過硫酸鉀，盡管其作為強(qiáng)氧化劑本身對AuNCs熒光的抑制作用對于該體系是不利的，但是這種效應(yīng)在高pH下大大降低，而且AuNCs在較高濃度的K2S2O8（如mM級別）下的猝滅程度接近于在非常少量的I2（如M水平）下的猝滅程度。由于轉(zhuǎn)化的化學(xué)計(jì)量比過硫酸鹽/碘為1：1，這意味著過硫酸鹽部分在各種樣品中呈現(xiàn)幾乎相同的背景。同時(shí)，雖然銅離

23、子可以直接與AuNCs相互作用，但這種相互作用只對信號作出了很小的貢獻(xiàn)，并可能被催化信號覆蓋。所以所有這些因素使得銅催化反應(yīng)中產(chǎn)生的碘對AuNCs熒光的變化起主要作用，因此銅離子濃度與熒光猝滅之間存在定量關(guān)系，硫脲加入后，通過與銅離子相互作用，使之與熒光猝滅之間形成間接的定量關(guān)系，以此實(shí)現(xiàn)對硫脲的定量測量（如圖8所示）。所以我們只需測定銅離子濃度和碘離子濃度的影響。在pH=3的檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖溶液中，按上述方法，加入K2S2O8、KI、Tu以及不同濃度的Cu2+，30 min后再將稀釋后的BSA-AuNCs加入體系，將體系中的pH調(diào)至7，15 min后測量其熒光發(fā)射光譜，根據(jù)其熒光猝滅效

24、果，我們可以發(fā)現(xiàn)當(dāng)C（Cu2+）=0.5 M時(shí)，金納米簇的熒光恢復(fù)程度最大（如圖9所示）。碘離子最佳濃度的的篩選過程和上述過程類似，只需調(diào)節(jié)碘離子的濃度，反應(yīng)時(shí)間和pH不變，測量其熒光發(fā)射光譜。根據(jù)結(jié)果，我們將3.0 mM確定為碘離子的最佳反應(yīng)濃度（如圖10所示）。圖8：不同pH下的熒光猝滅率，熒光強(qiáng)度是在加入1 mM K2S2O8的金納米簇中測得的，并且此時(shí)激發(fā)波長為365 nm，發(fā)射波長為645 nm左右。圖9：在體系中加入不同濃度的CuSO4（C=0.25 M，0.5 M，0.8 M，1.0 M，1.5 M）時(shí)的熒光猝滅率。此時(shí)C(I-)=3 mM，C（K2S2O8）=0.5 mM，C（

25、Tu）=3 M。圖10：在體系中加入不同濃度的KI（C=0.5 mM，1.0 mM，1.5 mM，2.0 mM，3.0mM，5.0 mM，8.0 mM，10.0 mM）時(shí)的熒光猝滅率。此時(shí)C（Cu2+）=0.5 M，C（K2S2O8）=0.5 mM，C(Tu)=3 M。在最佳的反應(yīng)條件下，將Cu2+（0.5 M），K2S2O8（0.5 mM），KI（3.0 mM）以及不同濃度的Tu在pH=3的緩沖溶液中混合，反應(yīng)30 min后，將稀釋的BSA-AuNCs加入體系，15 min后在激發(fā)波長為365 nm時(shí)測定體系的熒光發(fā)射光譜，結(jié)果表明硫脲的濃度越高，BSA-AuNCs的熒光恢復(fù)程度越高。而且我

26、們發(fā)現(xiàn)BSA-AuNCs的熒光恢復(fù)程度F/F0在0.2-4.0 M范圍內(nèi)與硫脲濃度呈線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)是0.99229，檢測限可達(dá)到0.03 M。如圖11所示：圖11：A是加入不同濃度硫脲后BSA-AuNCs的熒光強(qiáng)度光譜圖；B是BSA-AuNCs的熒光恢復(fù)程度F/F0與硫脲濃度的線性關(guān)系圖。2.4 BSA-AuNCs熒光探針的選擇性為了檢測本實(shí)驗(yàn)BSA-AuNCs熒光探針檢測硫脲的選擇性，按上述方法，我們將300 M的其他可能影響體系熒光恢復(fù)的物質(zhì)，如：氯化鉀（KCl），氯化鈉（NaCl），甘氨酸（Gly），組氨酸（His），賴氨酸（Lys），檸檬酸（CA），以及3 M的硫脲分別先與Cu

27、2+（0.5 M），K2S2O8（0.5 mM），KI（3.0 mM）混合，30 min后，再加入稀釋的BSA-AuNCs，測定各體系的熒光強(qiáng)度。結(jié)果表明，這些物質(zhì)對BSA-AuNCs的熒光恢復(fù)沒有明顯影響，從而體現(xiàn)出BSA-AuNCs對于檢測硫脲有良好的選擇性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖13所示：圖13：不同物質(zhì)對BSA-AuNCs-Cu2+-I-S2O82-體系的熒光恢復(fù)程度第三章 總結(jié)綜上所述，我們通過熒光金納米簇的恢復(fù)程度，建立了一種檢測硫脲的分析方法。首先向金納米簇中加入碘離子、過硫酸鹽以及銅離子時(shí)，其熒光會發(fā)生明顯的猝滅；如果同時(shí)加入硫脲，熒光發(fā)生恢復(fù)。通過這種方法可以實(shí)現(xiàn)對硫脲的定量測量，檢測

28、限為0.03 M。參考文獻(xiàn)1G.Y. Chen, I. Roy, C.H. Yang, N.P. Prasad, Nanochemistry and nanomedicine for nanoparticle-based diagnostics and therapy, Chem. Rev. 2016, 116, 2826.2Y. Wang, A. Hu, Carbon quantum dots: synthesis, properties and applications, J. Mater. Chem. 2014, 2, 6921. 3H. Liu, X. Zhang,

29、 X. Wu, Rapid sonochemical synthesis of highly luminescent non-toxic Au NCs and AuAg NCs and Cu (II) sensing, Chem. Commun. 2011, 47, 4237. 4H. Li, Z. Kang, Y. Liu, Carbon nanodots: synthesis, properties and applications， J. Mater. Chem, 2012, 22, 24230. 5X. Wen, P. Yu, T. Yon-Rui, Fluores

30、cence origin and spectral broadening mechanism in atomically precise Au8 nanoclusters, Nanoscale 2013, 5, 10251.6D. Lu, L. Liu, F. Li, S. Shuang, Y. Li, M.M. Choi, C. Dong, Lysozyme-stabilized gold nanociuters as a novel fluorescence probe for cyanide recognition, Spectrochim. Acta. Part A 2014, 121

31、, 77.7X. Xia, Y. Long, J. Wang, Glucose oxidase-functionalized fluorescent gold nanoclusters as probes for glucose, Anal. Chim. Acta. 2013, 772, 81.8P.L. Xavier, K. Chaudhari, A. Baksi, T. Pradeep, Protein-protected luminescent noble metal quantum clusters: an emerging trend in atomic cluster nanosc

32、ience, Nano Rev. 2012, 3, 14767.9G. Zhang, Y. Li, J. Xu, C. Zhang, S. Shuang, C. Dong, M.M. Choi, Glutathione-protected fluorescent gold nanoclusters for sensitive and selective of Cu2+, F. Sens. Actuators, B: Chem. 2013, 183, 583-588.10C.C. Huang, H.Y. Liao, Y.C. Shang, Synthesis of wavelength-tuna

33、ble luminescent gold and gold/silver nanodots, J. Mater. Chem. 2009, 19, 755. 11L.L. Wang, J. Qiao, L. Qi, Construction of OVA-stabilized fluorescent gold nanoclusters for sensing glucose, Sci. Chi. Chem. 2015, 58, 1508. 12Y. Yang, S. Chen, Surface manipulation of the electronic energy of

34、subnanometer-sized gold clusters: an electrochemical and spectroscopic investigation, Nano. Lett. 2003, 3, 75.13L. Shang, N. Azadfar, F. Stockmar, Onepot synthesis of nearinfrared fluorescent gold clusters for cellular fluorescence lifetime imaging, Small 2011, 7, 2614. 14C.J. Lin, T.Y. Yang, C.H. Lee, Synthesis, characterization, and bioconjugation of fluorescent gold nanoclusters t