1、 復旦大學附屬腫瘤醫院實驗研究中心復旦大學附屬腫瘤醫院實驗研究中心 復旦大學上海醫學院腫瘤學系復旦大學上海醫學院腫瘤學系 李李 影奕影奕 Pim-3激酶在胰腺癌發生中的作用機制激酶在胰腺癌發生中的作用機制以以Pim-3為靶向治療分子的新型有效的為靶向治療分子的新型有效的 抗腫瘤藥物的開發抗腫瘤藥物的開發 Pim-3激酶在胰腺癌發生中的作用機制激酶在胰腺癌發生中的作用機制p34p34p34p37p40Kinase DomainPim-1Pim-2Pim-3Deneen B. et al. Mol Cell Biol 2003;23:3897Mikkers H. et al. Mol Cell B

2、iol 2004;24:6104Pim-3 與惡性轉化相關與惡性轉化相關PimPim基因敲出的小鼠生基因敲出的小鼠生命力旺盛且可繁殖后代命力旺盛且可繁殖后代 Pim-3Pim-3是原癌基因。是原癌基因。Pim-3 is a proto-oncogene with serine/threonine kinase activity.Fujii C et al. Int J Cancer. 2005 Mar 20;114(2):209-18. Pim-3 Pim-3激酶是否與肝臟以外的其它臟器腫瘤發生有關？激酶是否與肝臟以外的其它臟器腫瘤發生有關？ 我們聚焦在同是內胚層來源的器官，胰腺。我們聚焦在同

3、是內胚層來源的器官，胰腺。Normal TissueCancer TissuesPCI55PCI35-Pim-3Actin3643kDaWCL Pim-3shRNA Non Scramble Pim-3PCI55Scramble shRNAPim-3 shRNADNA ContentNo shRNASubG1Annexin VPim-3 shRNAScramble shRNAPim-3 shRNAScramble shRNANo-shRNAScramble shRNAPim3 shRNA 0 1 2 3 4 5 8 7 6 5 4 3 2 1 0Cell viability ratioTime

4、 after passage (days)* *Pim-1, Pim-2Pim-3?BadSer136 Survival FactorPI3KAKTBad14-3-3SurvivalSer112Pim-1 and Pim-2 Can Inactiavte Pro-apoptotic Molecule, Bad, by Phosphorylating Its Serine ResiduesApoptosisBadBcl-XL+Bcl-XLPim-3BadPim-3/BadPCI5520m20mma a-Pim3HeLaa a-Bada a-IgGIP: PCI35 PCI55 PCI552526

5、kDaBadIgGBlot: anti-Pim3Blot: anti-Bad5036Pim-3IgGImmunoprecipitation with anti-Pim-3 Western blotting with anti-Bad Washing with Stripping bufferWestern blotting with anti-Pim-3 Pim-3pBad112Pim-3/pBad112PCI35 PCI5520m20mmActinBadpBad112pBad136pBad155 Pim-32626262643KDa36shRNA Non Scramble Pim-3PCI5

6、5小結（小結（1） 以以Pim-3為靶向治療分子的新型有效為靶向治療分子的新型有效的抗腫瘤藥物開發的抗腫瘤藥物開發 胰腺癌是我國十大惡性腫瘤之一胰腺癌是我國十大惡性腫瘤之一 早期診斷困難早期診斷困難 晚期患者手術治療晚期患者手術治療5年生存率低于年生存率低于5%，發病率等于死亡率，發病率等于死亡率 傳統的化學治療存在抗腫瘤能力低，殺傷指數過小，副作用大等缺點傳統的化學治療存在抗腫瘤能力低，殺傷指數過小，副作用大等缺點 分子靶向治療具有特異性強，效果顯著，正常組織損傷小等優點分子靶向治療具有特異性強，效果顯著，正常組織損傷小等優點 現有的抑制增殖因子受體活性的分子靶向治療缺乏腫瘤治療的特異性，而

7、且容現有的抑制增殖因子受體活性的分子靶向治療缺乏腫瘤治療的特異性，而且容易產生耐藥性易產生耐藥性Pim-3與與Pim-1具有高度的同源性（具有高度的同源性（70%）和類似的生物功能）和類似的生物功能推測推測Pim-3的立體空間結構的立體空間結構低分子化合物低分子化合物-Pim-3激酶復合物立體空間結構激酶復合物立體空間結構從從DrugBank和和PubChem數據庫中篩選了數據庫中篩選了23種類似低分子化合物種類似低分子化合物 選擇并合成了對選擇并合成了對Pim-3有高親和性的小分子化合物有高親和性的小分子化合物-蔓生百部蔓生百部堿（堿（stemonamide）合成中間體）合成中間體Pim-3

8、Pim-1Pim-2IC50 (m mmol/L)Pim-3 Pim-1 Pim-2 AKT-1 AKT-2 T2T5T10AKT1/278922000nd90562000nd33502000nd1934 2000 2000 200031.58 72.47345 462Times after treatment with inhibitor (days)Cell proliferation ratio Cell line nameT-2T-5L3.6pl6.626.1MiaPaca-2 5.922.9IC50 (m mmol/L)Relative OD450MiaPaca-2-DMSO T-2

9、+12 h+48 h+24 hpBad112BadBcl-XLCytochrome CCleaved-caspase-3L3.6plActinpBad136Caspase-3Cdc25APIM-3pBad1555X105 L3.6plSubcutaneous injection3615daysSacrify: Intraperitoneal injection15 16 17 18 1929 30 31 32 3322 23 24 25 26(days)T-2 (20mg/kg)* DMSO (N=5) T2 (N=5) 20DMSOT2051015ALT (U/l)NSNa (mEq/l)144148152DMSOT2156160NS02468DMSOT2K(mEq/l)10NSDMSOT2Cl (mEq/l)0108112116120NS DMSO T2 (n=5) (n=6)Hematologicalparameters9.30.07 8.080.3349.883.06 46.721.9030.043.84 9.91.7084.21.90 81.171.1000 0.170.0700 0013.401.83 16.671.002.400.46 2.000.15RBCP