1、殺蟲劑觸殺毒力測定（點滴法）殺蟲劑觸殺毒力測定（點滴法） 目前使用的殺蟲劑大多數都具有較強的目前使用的殺蟲劑大多數都具有較強的觸殺作用，所以殺蟲劑的觸殺毒力測定顯的觸殺作用，所以殺蟲劑的觸殺毒力測定顯的特別重要。觸殺毒力測定有藥膜法、點滴法、特別重要。觸殺毒力測定有藥膜法、點滴法、噴霧法和浸液法。噴霧法和浸液法。 室內比較精確的觸殺毒力測定方法是點室內比較精確的觸殺毒力測定方法是點滴法和藥膜法。滴法和藥膜法。 點滴法（點滴法（topical application）是將）是將一一定量農藥丙酮液定量農藥丙酮液點滴在蟲體的一定部位上，點滴在蟲體的一定部位上，藥劑可自體壁進入體內。藥劑可自體壁進入體

2、內。試驗用具 容量瓶（容量瓶（10、25、50及及100ml）、）、微量點滴器或毛細管微量點滴器、吸管、微量點滴器或毛細管微量點滴器、吸管、培養皿、燒杯、試管、濾紙、平頭鑷子、培養皿、燒杯、試管、濾紙、平頭鑷子、計算紙、白紙、毛筆等。計算紙、白紙、毛筆等。測定方法（選用玉米螟為試驗材料）一、實驗過程一、實驗過程1、預備試驗預備試驗 先用丙酮將供試藥劑（溴氰菊酯）配制成若干個不同濃度，先用丙酮將供試藥劑（溴氰菊酯）配制成若干個不同濃度，選取選取4齡玉米螟幼蟲若干，每個濃度用點滴器（或微量進樣齡玉米螟幼蟲若干，每個濃度用點滴器（或微量進樣器）點滴藥液于幼蟲的胸部背面，每頭幼蟲點滴器）點滴藥液于幼蟲

3、的胸部背面，每頭幼蟲點滴1l(或通過或通過標定容量的點滴器），每個濃度點滴蟲數不少于標定容量的點滴器），每個濃度點滴蟲數不少于30頭，待頭，待藥液揮發后，把藥液揮發后，把58頭盛于一皿中，加入少量飼料，蓋好頭盛于一皿中，加入少量飼料，蓋好培養皿，寫好標記，經培養皿，寫好標記，經24小時后檢查試蟲的生存及死亡頭小時后檢查試蟲的生存及死亡頭數，計算其死亡率。從這些濃度中找出適合的濃度，即找出數，計算其死亡率。從這些濃度中找出適合的濃度，即找出其死亡率在其死亡率在2090之間的之間的57個不同劑量的等比濃度個不同劑量的等比濃度共下一步試驗用。共下一步試驗用。2、根據上一步預備試驗結果，可用溴氰菊酯稀

4、釋如下濃度：根據上一步預備試驗結果，可用溴氰菊酯稀釋如下濃度：500、1000、2000、4000、8000、12000、和、和16000ppm。可設可設7組，共選擇組，共選擇4齡玉米螟幼蟲齡玉米螟幼蟲210頭，分別放入墊有濾頭，分別放入墊有濾紙的培養皿中（濾紙預先加濕），每皿放紙的培養皿中（濾紙預先加濕），每皿放10頭，每種濃度頭，每種濃度設設3個重復。個重復。3、用微量點滴器盛裝藥液，用微量點滴器盛裝藥液，從低濃度到高濃度點滴從低濃度到高濃度點滴，每頭，每頭蟲點滴蟲點滴1l (或通過標定容量的點滴器）于幼蟲胸部背板處，或通過標定容量的點滴器）于幼蟲胸部背板處，待藥液揮發后，添加適量人工飼料

5、于皿中。對照蟲僅點滴待藥液揮發后，添加適量人工飼料于皿中。對照蟲僅點滴丙酮，其他處理與上相同。丙酮，其他處理與上相同。4、試驗觀察及結果整理試驗觀察及結果整理 試驗期間記錄溫濕度，施藥后試驗期間記錄溫濕度，施藥后24小時檢查每一處理的生或死蟲數，統計各濃度幼蟲的死亡小時檢查每一處理的生或死蟲數，統計各濃度幼蟲的死亡率和校正死亡率。計算如下：率和校正死亡率。計算如下： 最后采用繪圖法或直線回歸方程求出最后采用繪圖法或直線回歸方程求出LD50，并用方差分，并用方差分析法檢定其可靠性程度析法檢定其可靠性程度 例如：供試藥劑（溴氰菊酯）對玉米螟幼蟲觸殺例如：供試藥劑（溴氰菊酯）對玉米螟幼蟲觸殺LD50

6、毒毒力測定結果及檢驗。力測定結果及檢驗。 1、溴氰菊酯對玉米螟幼蟲觸殺結果（見表、溴氰菊酯對玉米螟幼蟲觸殺結果（見表1）表表1溴氰菊酯對玉米螟幼蟲觸殺毒力溴氰菊酯對玉米螟幼蟲觸殺毒力處理劑量*g頭10劑量對數 x參試蟲數（頭）處理24小時后死亡情況校正死亡率機率值（y）死亡蟲數（頭）平均死亡率（）校正死亡率（）8.7517.533.570.0140.0210.0280.0對照0.9421.2431.5441.8452.1462.3222.447丙酮124124124124124123124124102348567589102211.318.538.745.260.572.382.31.69.9

7、17.137.744.359.971.9823.74.04.64.85.35.65.9除理劑量單位，還可以用濃度（ppm）作單位，則所求出的單位是LC50。 v死 死 v亡 亡v百 率 v分v率v 劑量數值 劑量數值換算成對數值 v 非對稱“S”型曲線 對稱型“S”曲線 v換 v成 v機 (LD50) 數值轉換的原因數值轉換的原因v率 v值v 劑量值對數值v 直線 二、繪圖法求二、繪圖法求LD50 此方法以劑量對數作橫坐標，機率值作縱坐標，繪制直角坐標此方法以劑量對數作橫坐標，機率值作縱坐標，繪制直角坐標系。在直角坐標系中找出該次試驗的坐標點，并用一直線連接起系。在直角坐標系中找出該次試驗的坐

8、標點，并用一直線連接起來，該直線稱來，該直線稱“劑量對數劑量對數死亡率機率直線死亡率機率直線”。從機率值。從機率值“5”處處引一與橫坐標平行的直線與引一與橫坐標平行的直線與“劑量對數劑量對數死亡率機率直線死亡率機率直線”相交，相交，以相交點引一線垂直于橫軸，此垂線與橫坐標的交點，即為溴氰以相交點引一線垂直于橫軸，此垂線與橫坐標的交點，即為溴氰菊酯對玉米螟菊酯對玉米螟LD50的劑量對數值，再查反對數表，即為的劑量對數值，再查反對數表，即為LD50值值（見下圖）（見下圖） 因為因為 X1.86 所以所以 X72 因為因為 X10 所以所以 X72107.2g/頭頭圖、溴氰菊酯對亞洲玉米螟四齡幼蟲觸

9、殺毒力圖、溴氰菊酯對亞洲玉米螟四齡幼蟲觸殺毒力34567機率值11.52.02.5劑量 10gY=2.2938+1.429xr=0.99935* *三、劑量對數機率值直線的驗證及三、劑量對數機率值直線的驗證及LD50的計算的計算1）求直線回歸方程）求直線回歸方程 y=a+bx根據表根據表2x =12.489 y =33.9x2=24.2051 xy=63.2301 x=xn=12.4897=1.784=y=yn33.974.843b=xy x ynx2 （x）2n63.230112.48933.9724.2051 （12.489）2 71.4289=ay=bx4.8431.42891.7842

10、.2938 將將a與與b代入代入y=ab x 公式公式 即得該試驗毒力回歸直線方程即得該試驗毒力回歸直線方程y2.2938+1.4289x。表表2溴氰菊酯溴氰菊酯對玉米螟幼蟲觸殺毒力劑量對數與機率值相關值對玉米螟幼蟲觸殺毒力劑量對數與機率值相關值劑量對數劑量對數（x）機機 率率 值值（y）x2xy0.9241.2431.5441.8452.1462.3222.4773.74.01.64.85.35.65.90.88741.54502.38393.40404.60535.39175.98783.48544.97207.10248.85611.373813.003214.4373=12.489=1

11、2.489=33.9=33.9x2 =24.2051 =24.2051x y=63.2301 2)求求LD50 （用回歸直線計算）（用回歸直線計算） 因為當機率因為當機率y5時即為時即為50的死亡率，所以將的死亡率，所以將y5代代入回歸方程中，即可求出入回歸方程中，即可求出LD50 由由y2.2938+1.4289x 得得52.2938+1.4289xX =52.29381.42981.8939x 1.8939X原劑量對數原劑量對數1078.3107.83g/頭頭查反對數表得：查反對數表得：x=78.33）方差分析檢驗）方差分析檢驗 Lyy = ( y y )2 = y2 （y）2n= 3.9

12、77(回歸平方和回歸平方和) b xy x yn 3.926Q（剩余平方和）（剩余平方和） Lyy 3.977-3.926=0.051總平方和總平方和列方差分析表如下列方差分析表如下 此回歸方程的回歸效果達倒及顯著的水平，符合實際情況，此回歸方程的回歸效果達倒及顯著的水平，符合實際情況，所求所求LD50 =7.8g/頭可靠。可靠。4、 LD50標準誤差和置信區間（可靠范圍）標準誤差和置信區間（可靠范圍） 上面所求出的上面所求出的LD50 是人工飼養的玉米螟幼蟲是人工飼養的玉米螟幼蟲LD50 ，其值往往其值往往受到所取樣本影響，與昆蟲的群體有一定的差距，即所求的受到所取樣本影響，與昆蟲的群體有一

13、定的差距，即所求的LD50不一定代表群體的實際情況。因此，還需計算不一定代表群體的實際情況。因此，還需計算LD50的標的標準誤差以及置信區間（可能的實際所在的范圍）。準誤差以及置信區間（可能的實際所在的范圍）。變異來源變異來源平方和平方和自由度自由度均均 方方F 值值回歸回歸剩余剩余3.9260.051153.9260.0102384.90F =384.90F0.01(1.5)1） LD50標準誤差標準誤差表表 6 3劑量對數劑量對數X試驗蟲數試驗蟲數n機率值機率值Y權重系數權重系數*wnwnwxnwx20.9421.2431.5441.8452.1462.3222.4771241241241

14、241241241243.63984.06994.50004.93015.36025.61205.79030.3020.4710.5810.6340.6010.5580.53037.4558.4072.0478.6274.5269.1962.37452.5935.2872.59111.23145.04159.93160.66152.62837.3533.2390.23171.74267.62343.19373.05373.461652.52* w（權重系數）（權重系數）查查 w表，即用機率（表，即用機率（y）查之）查之如如 y= 3.639查查w表得表得0.302，其余類推。，其余類推。標準誤差：標準誤差：+nw(m x)2(x x)2 平均致死劑量，為對數值平均致死劑量，為對數值 1.8501注意：平均致死劑量（注意：平均致死劑量（1.8501）不同于致死中量）不同于致死中量m=1.8939 (為對數值為對數值)nw(x x)2 nwx2 （nwx）2 nwx1652.52 （837.35）2 452.59=1652.52 1549.21=103.31Vm=b21nw1+x( m )2nwx( x )2 0.001 0.03282）置信區間 當機率