1、雞胚接種與抗原收獲雞胚接種與抗原收獲 一一 雞胚接種雞胚接種學習目標：了解胚蛋接種的方法和要求，能學習目標：了解胚蛋接種的方法和要求，能 正確接種。正確接種。1、接種途徑及接種日齡、接種途徑及接種日齡 尿囊腔接種：尿囊腔接種：911日齡日齡絨毛尿囊膜接種：絨毛尿囊膜接種：1012日齡日齡 卵黃囊接種：卵黃囊接種：57日齡日齡 羊膜接種：羊膜接種：10日齡日齡 靜脈接種：靜脈接種：1213日齡日齡 腦內(nèi)接種：腦內(nèi)接種：10日齡日齡（1）尿囊腔接種尿囊腔接種：取：取911日齡蛋胚，在燈光照射下日齡蛋胚，在燈光照射下畫氣室和接種部位，消毒氣室和接種部位，打孔，畫氣室和接種部位，消毒氣室和接種部位，打

2、孔，自接種孔注入接種物，封孔，放入孵化器孵化，不自接種孔注入接種物，封孔，放入孵化器孵化，不翻蛋。翻蛋。*（2）絨毛尿囊膜接種絨毛尿囊膜接種：取：取1012日齡蛋胚，在燈光照日齡蛋胚，在燈光照射下確定接種孔的位置，射下確定接種孔的位置， 打孔，做人工氣室，自接打孔，做人工氣室，自接種孔接入接種物，封孔，放入孵種孔接入接種物，封孔，放入孵 化器孵化，不翻蛋。化器孵化，不翻蛋。*2、手工接種方法手工接種方法 單孔接種：在胚蛋氣室的中心位置打一單孔接種：在胚蛋氣室的中心位置打一小孔，垂直刺入針頭小孔，垂直刺入針頭2cm,注入接種物，封孔，注入接種物，封孔，放孵化器孵化。放孵化器孵化。 雙孔接種：在離

3、氣室雙孔接種：在離氣室0.30.5cm無大血無大血管處作一標記，作為接種孔的位置，管處作一標記，作為接種孔的位置， 在氣室在氣室和標記處各打一個孔，自接種孔注入接種物，和標記處各打一個孔，自接種孔注入接種物，封上封上 兩個孔，放入孵化器孵化。兩個孔，放入孵化器孵化。氣室雞胚卵黃囊尿囊腔羊膜腔絨毛尿囊膜卵白卵膜尿囊腔雞胚接種圖尿囊膜接種羊膜雞胚接種圖卵黃囊雞胚接種圖3、蛋胚消毒、蛋胚消毒常用的消毒方法：常用的消毒方法： 噴霧消毒、表面擦拭消毒脫噴霧消毒、表面擦拭消毒脫碘的消毒方法、浸泡消毒法。碘的消毒方法、浸泡消毒法。 噴霧消毒：將消毒劑噴于蛋胚表面的消毒方法。噴霧消毒：將消毒劑噴于蛋胚表面的消

4、毒方法。 表面擦拭消毒：表面擦拭消毒： 用用4%的碘酒擦拭蛋殼接種的碘酒擦拭蛋殼接種部位和氣室部位，在用部位和氣室部位，在用75%的酒精脫碘的消的酒精脫碘的消毒方法。毒方法。浸泡消毒：將胚蛋浸泡在消毒液中的消毒法。浸泡消毒：將胚蛋浸泡在消毒液中的消毒法。【操作技能操作技能】手工接種手工接種常用物品的準備常用物品的準備：注射器、錐子、止血鉗、碘：注射器、錐子、止血鉗、碘酒棉、酒精棉、酒精燈、酒棉、酒精棉、酒精燈、 噴壺、廢棄缸、冰噴壺、廢棄缸、冰袋、種毒，稀釋液、白蠟。袋、種毒，稀釋液、白蠟。操作步驟操作步驟: 按要求取出適齡的胚蛋，畫接種點，按要求取出適齡的胚蛋，畫接種點，進行表面消毒。在胚蛋

5、的接種部位和氣室部進行表面消毒。在胚蛋的接種部位和氣室部位打孔，絨毛尿囊膜接種要做人工室。位打孔，絨毛尿囊膜接種要做人工室。 安裝連續(xù)注射器，調(diào)節(jié)使用刻度，排出空氣。安裝連續(xù)注射器，調(diào)節(jié)使用刻度，排出空氣。 在胚蛋的接種部位接種。在胚蛋的接種部位接種。 將稀釋好的種毒放入冰桶中。接種后封孔，雙將稀釋好的種毒放入冰桶中。接種后封孔，雙孔的先封接種孔在封氣室孔。放入孵化器孵孔的先封接種孔在封氣室孔。放入孵化器孵化，調(diào)好溫濕度，不翻蛋。化，調(diào)好溫濕度，不翻蛋。注意事項注意事項： 做人工氣室，胚蛋打孔先打氣室孔做人工氣室，胚蛋打孔先打氣室孔再打接種孔，接種孔要打破殼膜不能打破尿再打接種孔，接種孔要打破

6、殼膜不能打破尿囊膜。打一定數(shù)量的孔要對錐子進行消毒，囊膜。打一定數(shù)量的孔要對錐子進行消毒，打孔的順序從上打孔的順序從上 往下、從左到右。往下、從左到右。 接種過程中需校正接種量。接種過程中需校正接種量。 封孔時產(chǎn)生氣泡封孔時產(chǎn)生氣泡應重新封好。應重新封好。* 二、二、 抗原的收獲抗原的收獲 學習目標：了解抗原收獲的方法和要求，能正學習目標：了解抗原收獲的方法和要求，能正確收獲抗原。確收獲抗原。1、手工收獲方法手工收獲方法：尿囊液的收獲、絨毛尿囊膜的收獲、胚胎的收尿囊液的收獲、絨毛尿囊膜的收獲、胚胎的收獲、羊水的收獲、卵黃的收獲。獲、羊水的收獲、卵黃的收獲。 尿囊液的收獲尿囊液的收獲： 取取04

7、冷卻冷卻424h的胚蛋，的胚蛋，碘酒消毒氣室部位，打開氣室，刺開內(nèi)殼膜碘酒消毒氣室部位，打開氣室，刺開內(nèi)殼膜和絨毛尿囊膜，直接無菌吸取尿囊液。和絨毛尿囊膜，直接無菌吸取尿囊液。胚胎的收獲胚胎的收獲： 打開氣室，撕破內(nèi)層殼膜和絨毛打開氣室，撕破內(nèi)層殼膜和絨毛尿囊膜，挑出胚胎，放滅菌容器中。尿囊膜，挑出胚胎，放滅菌容器中。絨毛尿囊膜的收獲絨毛尿囊膜的收獲：打開氣室，撕去氣室部卵：打開氣室，撕去氣室部卵膜，觀察絨毛尿囊膜的病變，剪取所需的絨膜，觀察絨毛尿囊膜的病變，剪取所需的絨毛尿囊膜。毛尿囊膜。 羊水的收獲：收獲尿囊液后，用無菌的鑷子夾羊水的收獲：收獲尿囊液后，用無菌的鑷子夾起羊膜，用細吸管刺入羊

8、膜腔吸取羊水。起羊膜，用細吸管刺入羊膜腔吸取羊水。卵黃的收獲：打開氣室，撕開內(nèi)殼膜，用鑷卵黃的收獲：打開氣室，撕開內(nèi)殼膜，用鑷子夾出卵黃膜，放入滅菌平皿中，也可以子夾出卵黃膜，放入滅菌平皿中，也可以將整個卵黃物倒入平皿中，選取卵黃囊。將整個卵黃物倒入平皿中，選取卵黃囊。*2、照胚：接種后的溫度一般設(shè)置于、照胚：接種后的溫度一般設(shè)置于36.5-37，不翻蛋，根據(jù)產(chǎn)品的不同選擇孵化，不翻蛋，根據(jù)產(chǎn)品的不同選擇孵化的時間和照胚的時間，一般的時間和照胚的時間，一般27天。照胚前天。照胚前要檢查孵化器的溫度、濕度是否正常。要檢查孵化器的溫度、濕度是否正常。然后再照胚，照蛋燈從氣室部位向下照，然后再照胚，

9、照蛋燈從氣室部位向下照，死胚死胚發(fā)白發(fā)亮，血管脫落或血管變細，發(fā)白發(fā)亮，血管脫落或血管變細，活胚活胚發(fā)紅，發(fā)紅，蛋體布滿血管，可見到活動的雞胚。絨毛尿蛋體布滿血管，可見到活動的雞胚。絨毛尿囊膜接種的雞胚，絨毛膜上可見明顯的斑點。囊膜接種的雞胚，絨毛膜上可見明顯的斑點。根據(jù)產(chǎn)品的要求，留下所要的死胚、活胚，根據(jù)產(chǎn)品的要求，留下所要的死胚、活胚，及時取出并做好標記，放入及時取出并做好標記，放入04冷庫，冷冷庫，冷卻卻424h,準備收獲。準備收獲。3、胚蛋的消毒：、胚蛋的消毒：常用的消毒方法：常用的消毒方法： 噴霧消毒、表面擦拭消毒噴霧消毒、表面擦拭消毒脫碘的消毒方法、浸泡消毒法。脫碘的消毒方法、浸

10、泡消毒法。 噴霧消毒：噴霧消毒： 將消毒劑噴于蛋胚表面的消毒方將消毒劑噴于蛋胚表面的消毒方法。法。表面擦拭消毒：表面擦拭消毒： 用用4%的碘酒擦拭蛋殼接種部的碘酒擦拭蛋殼接種部位和氣室部位，在用位和氣室部位，在用75%的酒精脫碘的消毒的酒精脫碘的消毒方法。方法。浸泡消毒：浸泡消毒： 將胚蛋浸泡在消毒液中的消毒方將胚蛋浸泡在消毒液中的消毒方法。法。*【操作技能操作技能】手工收獲：手工收獲：常用物品的準備：常用物品的準備：注射器、真空泵、管道、剪注射器、真空泵、管道、剪刀、大鑷、止血鉗、收獲瓶、培養(yǎng)基、塞子、刀、大鑷、止血鉗、收獲瓶、培養(yǎng)基、塞子、留樣瓶等。留樣瓶等。 操作步驟：按要求對胚蛋進行消

11、毒，并操作步驟：按要求對胚蛋進行消毒，并移至操作區(qū)域。移至操作區(qū)域。 尿囊液收獲：尿囊液收獲：用滅菌的剪刀剪去氣室部位，用滅菌的剪刀剪去氣室部位，無菌操作連接真空泵、收獲管道和收獲瓶。無菌操作連接真空泵、收獲管道和收獲瓶。開啟真空泵，用鑷子壓住胚體吸收尿囊液和開啟真空泵，用鑷子壓住胚體吸收尿囊液和羊水。羊水。胚胎和尿囊膜的收獲胚胎和尿囊膜的收獲：用消毒的大鑷挑取尿囊：用消毒的大鑷挑取尿囊膜和胎兒放入無菌收獲瓶中。將收獲的胎兒膜和胎兒放入無菌收獲瓶中。將收獲的胎兒和尿囊膜倒入搗碎機中，加入適量抗生素，和尿囊膜倒入搗碎機中，加入適量抗生素，以以 2000rmin的速度，轉(zhuǎn)動的速度，轉(zhuǎn)動2min,倒

12、入倒入3000ml的無菌瓶中的無菌瓶中, 每個收獲瓶都要留樣并每個收獲瓶都要留樣并做無菌檢驗和病毒含量測定，收獲結(jié)束后換做無菌檢驗和病毒含量測定，收獲結(jié)束后換瓶塞，及時放入瓶塞，及時放入-15以下冷庫保存。以下冷庫保存。* 注意事項注意事項：打殼時不要打破尿囊膜，氣室邊緣：打殼時不要打破尿囊膜，氣室邊緣要整齊。收獲前逐個檢查蛋胚，胎兒腐敗、要整齊。收獲前逐個檢查蛋胚，胎兒腐敗、胚液混濁的棄去。收獲順序從左到右、從下胚液混濁的棄去。收獲順序從左到右、從下往上，手和用具不能從打開氣室未收獲的雞往上，手和用具不能從打開氣室未收獲的雞胚的上方經(jīng)過。收獲尿囊液不能收取卵黃和胚的上方經(jīng)過。收獲尿囊液不能收取卵黃和蛋清。收獲胎兒時手不能碰到胎兒和尿囊液。蛋清。收獲胎兒時手不能碰到胎兒和尿囊液。v.培訓視頻雞胚.mp4 小 結(jié)手工接種常用物品的準備：常用的兩種接種途徑、接種方法及注意事項：手工收獲常用物品的準備：常