1、秦皮提取物對小鼠急性肝損傷保護作用的實驗研究               作者：尹明浩， 呂惠子， 姜麗君， 金春鶴， 李鎬   【關鍵詞】  秦皮；急性肝損傷；保護作用摘要：目的研究秦皮提取物對四氯化碳所致小鼠急性肝損傷的保護作用。方法60只雄性昆明小鼠隨機分為正常對照組，模型對照組，陽性對照組，大中小劑量給藥組。大中小劑量給藥組分別按2.0，1.0，0.5 g/kg灌胃秦皮提取物；陽性對照組按0.1 g/kg灌胃水飛薊賓；正常對照組

2、和模型對照組以等體積生理鹽水灌胃，共6 d。第5天，模型對照組、陽性對照組和給藥組按2.0 ml/kg腹腔注射CCl4，正常對照組腹腔注射等體積生理鹽水。比較各組丙氨酸氨基轉移酶(alanine transaminase,ALT)超氧化物歧化酶 (superoxide dismutase, SOD)和丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量。結果秦皮提取物能顯著降低四氯化碳所致小鼠各組ALT含量的升高(P 0.05)，同時能升高SOD的活性, 降低MDA的含量(P 0.05)。結論 秦皮提取物對四氯化碳所致小鼠急性肝損傷具有一定的保護作用。關鍵詞：秦皮；  急性肝損傷；

3、  保護作用Protective Effect of Ash Bark Extract Against Acute Liver Injury in MiceAbstract：ObjectiveTo investigate the protective effect of ash bark extract against carbon tetrachloride inducing acute liver injury in mice. MethodsSixty male mice were randomly divided into normal control group, mode

4、l control group, positive control group, high-dosage group, middledosage group and lowdosage group. The mice in the above groups were fed for 6 days. The drug groups were pretreated intragastrically with 2.0，1.0，0.5 g/kg ash bark extract, positive control group was pretreated intragastrically with 0

5、.1 g/kg silybin. Control mice were given the same volume physiological saline. On the 5th day of feeding, the mice except normal control group were given intraperitoneally 2.0 ml/kg carbon tetrachloride. Twenty four hours after the intoxication, the serum ALT, SOD activities and MDA content were mea

6、sured in each group above. ResultsAsh bark extract significantly decreased carbon tetrachloride inducing acute hepatic injury with increasing the activity of ALT and the content of MDA, increased the activity of SOD in serum. ConclusionIt is revealed that ash bark extract can prevent the CCl4 from i

7、nducing acute liver injury in mice through its antioxidation.Key words：Ash bark extract;  Liver injury;  Protective effect    秦皮是木犀科植物苦櫪白蠟樹Fraxinus rhynchophylla Hance的干燥枝皮，主要具有清熱燥濕、收斂、明目之功效，用于熱痢、泄瀉、赤白帶下、目赤腫痛等1。通過體外篩選秦皮提取物的清除DPPH（二苯代苦味酰自由基）自由基的能力強（濃度50 mg/ml時，清除率為66.8%），本實驗進一步研究秦

8、皮提取物對四氯化碳所致小鼠急性肝損傷的保護作用，并對其作用機理進行了初步探討。1   材料與方法1.1  材料 秦皮采自吉林省長白山一帶，經延邊大學藥學院劉永鎮教授鑒定為真品。1 kg白芷切碎后，用70%甲醇回流提取3次，1 h/次，溫度50，合并3次濾液，減壓濃縮，得白芷浸膏210 g。1.2  試劑與儀器 飛薊賓購自西安華萃生物技術有限責任公司，丙氨酸氨基轉移酶(ALT)超氧化物歧化酶 (SOD)和丙二醛(MDA)試劑盒均購自南京建成生物工程研究所，其他試劑均為國產分析純。使用的儀器有小型離心機 (Sigma 113)，722型分光光度計（中國廈門分

9、析儀器廠）和生化分析儀(SPOTCHEME 2, SP4430)等。1.3  動物分組 昆明種雄性小鼠60只，體重（20±2） g，由延邊大學醫學部動物科提供。按隨機表法將其分為正常對照組，模型對照組，陽性對照組，大、中、小劑量給藥組，每組各10只。         1.4   給藥方法 大中小劑量給藥組分別按2.0，1.0，0.5 g/kg灌胃秦皮醇提取物；陽性對照組按0.1 g/kg灌胃水飛薊賓；正常對照組和模型對照組以等體積生理鹽水灌胃，2次/d, 連續6 d，末次給藥

10、后1 h, 除正常對照組外，其余均腹腔注射0.1% CCl4 花生油溶液2.0 ml/kg，禁食，不禁水。24 h后摘眼球取血，分離血清。取血后脫頸椎處死，剖腹，取出肝，分別稱重取出0.1 g，加入0.9 ml生理鹽水進行勻漿。1.5  生化檢測  按試劑盒說明測定ALT，SOD活性和MDA含量。1.6  統計學處理 數據以均數±標準差表示，各組樣本均數間差別的假設檢驗用方差分析(ANOVA), P0.05認為有統計學意義。2  結果2.1  秦皮提取物對CCl4引起小鼠急性肝損傷血清ALT活性的影響結果見表1。模型組ALT較正常組明

11、顯升高，有顯著性差異 (P 0.01)，表明CCl4引起造模成功。大中小劑量給藥組與模型組比較P 0.05，說明秦皮提取物顯著降低CCl4引起急性肝損傷小鼠血清ALT含量的升高。2.2  秦皮提取物對CCl4引起小鼠急性肝損傷SOD活性和MDA含量的影響結果見表1。大、中劑量給藥組與模型組比較均P 0.05，SOD活性在中劑量時升高(P0.05)，說明秦皮醇提取物能升高CCl4引起急性肝損傷小鼠肝組織SOD活性，同時降低小鼠肝組織MDA的含量。表1  秦皮提取物對CCl4引起小鼠急性肝損傷ALT，SOD活性和MDA含量的影響（略） 與模型對照組比較， *P 0.05， *P

12、 0.01 3  討論肝損傷是由多種病因引起并且可以有多種因素參與的復雜過程2。四氯化碳引起肝損傷是傳統的肝毒模型，它對肝損傷的毒性作用是通過脂質過氧化作用進行的。CCl4在肝微粒體細胞色素P-450酶激活下產生活性自由基CCl3 ，CCl3 可進一步與氧反應，形成具有更強反應活性的CCl3O，這些自由基與肝細胞內大分子發生共價結合，也可攻擊肝細胞膜不飽和脂肪酸發生脂質過氧化，損傷肝細胞膜的結構和功能，使膜通透性升高，導致細胞腫脹壞死3。存在于肝細胞質中的可溶性酶AST，ALT在肝細胞損傷后釋放入血，血清中兩者水平高低可以反應肝細胞損傷程度，可作為早期肝損傷的指標。本實驗結果顯示模型

13、對照組ALT活性顯著高于正常對照組，表明急性肝損傷模型成功（P 0.01）。秦皮提取物顯著降低CCl4所致小鼠急性肝損傷血清ALT的升高（P 0.05），表明藥物具有一定的肝保護作用。MDA是脂質過氧化的最終產物，可嚴重破壞細胞膜結構，導致細胞腫脹、壞死，含量高低可反應氧化的損傷程度3，4，大、中劑量給藥組降低急性肝損傷小鼠血清MDA含量（P0.05）。自由基是人體正常生化過程的中間產物。只有當自由基產生過多或者機體內的酶系統過少時才導致疾病，這其中主要有氧自由基和脂質自由基。SOD是細胞內主要的防御性抗氧化酶，能夠清除自由基，并可抑制自由基啟動的脂質過氧化反應，從而起到保護細胞膜結構與功能的完整作用。秦皮提取物對此有一定的改善作用，說明秦皮提取物可能通過保護細胞膜，清除氧自由基抑制脂質過氧化而對肝細胞起到保護作用。參考文獻：1  中華人民共和國衛生部藥典委員會.中華人民共和國藥典中藥彩色圖集, 1995年版M.廣州：廣東科技出版社, 1996：352.2  Weisburger JH. Mechanisms of action of antioxidants as exempl