1、常見真菌的別離與鑒定病原真菌的一般特性真菌Fungi是微生物中的一個大類，是一群數目龐大的細胞生物，估計全世界已有記載的真菌有10萬種以上。它們的子實體小者用顯微鏡才能見到，大者可達數十厘米，它們共同特征是具有真正的細胞核，產生抱子和不含葉綠素，以寄生或腐生等方式吸取養料，僅少數類群為單細胞，其他都有分支或不分支的絲狀體，能進展有性或無性繁殖，具有纖維素或其他葡聚糖或幾丁質的微纖維或兩者兼有的細胞壁的有機體。對人類和動物致病的真菌大約100余種，屬于病原真菌。一、根本性狀一形態構造真菌分單細胞真菌與多細胞真菌兩大類，前者屬于酵母菌yeast一般呈球形或卵圓形，后者稱為霉菌mold或絲狀真菌，呈

2、絲狀分枝，菌絲交織象絨球狀，另有一些真菌可因寄生環境及培養條件養料、溫度、氧氣等的不同可交替出現兩種形態，即在室溫中呈霉菌型，在37C或體內呈單細胞的酵母型，這類真菌有雙相性，所以稱之為雙態真菌或二相真菌。真菌的細胞構造與一般植物細胞相似，有定型的細胞核及完善的細胞器，但胞壁與細菌胞壁不同，不含粘肽而是由角質及葡聚糖組成，也含有脂多糖蛋白質，其中酵母菌及類酵母菌皆以出芽增殖，不生長真菌絲，革蘭氏染色呈陽性，絲狀真菌分菌絲及抱子兩局部，形態多種多樣，分述如下。菌絲Hypha真菌在適宜的環境中，由抱子生出嫩芽，稱為芽管。芽管逐漸延長呈絲狀，稱菌絲。菌絲繼續生長并生長分枝，增殖的菌絲交織組成菌絲體。

3、其中一局部菌絲深入被寄生的物體或培養基中吸取養料，稱為營養菌絲體。另一局部菌絲向空間生長，稱為氣生菌絲體。氣生菌絲體能產生抱子者稱為生殖菌絲體。菌絲中各個細胞間有明顯分隔者，稱為有隔菌絲。主要見于病原性真菌。很多非病原真菌的菌絲無明顯分隔，稱為無隔菌絲。有些菌絲可呈各種特殊形式，如球拍狀、破梳狀、螺旋狀、結節狀、關節狀、鹿角狀、假菌絲。1. 抱子生成抱子是真菌擴大繁殖的一種方式。真菌抱子的抵抗力、形態及作用等均與細菌芽胞不同，分為無性抱子及有性抱子兩大類。不經過兩性細胞的結合而形成的抱子叫無性抱子，這一繁殖過程稱為無性繁殖。常見的無性抱子有5種：關節抱子、厚壁抱子、抱子囊抱子、芽抱和分生抱子。

4、病原真菌屬于不完全菌綱，很少產生有性抱子，大多數是無性抱子。1厚壁抱子：當真菌在不利環境中，由菌絲內胞漿縮濃和胞壁增厚而成，呈圓形。當環境好轉時可生成芽管成長為菌絲。2關節抱子：菌絲斷裂形成長方形兩端略鈍圓的抱子叫關節抱子。如白地霉和粗球抱子菌。3抱子囊抱子：為鞭毛菌和接合菌的無性生殖形式。抱子囊中所含的抱子來源于分枝菌絲或胞囊梗頂端膨大形成抱子囊，囊內原生質濃縮集聚，割裂而成，一般數目較多，抱子囊形態多樣，因種而異。4芽生抱子：由菌細胞出芽生成，見于念珠菌及隱球菌，前者類酵母菌出芽后抱子伸長呈絲狀，但不見與母細胞別離，稱為假菌絲，在假菌絲上的收縮點也可出芽成芽生抱子。5分生抱子：是子囊菌和半

5、知菌的無性抱子，也是半知菌分類的主要依據，單細胞的分生抱子稱小分生抱子，有蒂或無蒂，側生或游離，分散或成群，圓形、梨形、卵圓形或其它形狀，外表粗糙或光滑，或有或無各種紋飾。多細胞的分生抱子稱大分生抱子，有紡錘形、棒形、球棍形、鐮刀形及其它形狀，兩端尖或圓或一端圓，厚壁或薄壁，壁光滑或粗糙，有色或無色，分隔有多有少。二培養特性及繁殖方式1.培養特性大多數真菌對營養要求不高，只需要水、鹽，簡單的氮源及碳水化合物就可生長，一般常用沙堡氏瓊脂基主要成分葡萄糖4%蛋白腺1%瓊脂2%培養都能生長。但需要弱酸性pH46、較低孵育溫度2228C，充分溫度和氧氣供給才能生長良好。侵害內臟的某些真菌在37C含血的

6、培養基中生長良好。真菌生長都比擬緩慢，大多需孵育數天后才成明顯菌落，菌落有以下三種類型：1酵母型菌落：外觀濕潤稠軟致密，類似一般細菌菌落，鏡檢只見有圓形或橢圓形生芽細胞例如隱球菌的菌落。2類酵母型菌落：外觀性狀似酵母型菌落，鏡檢除見有出芽的細胞外，尚可見到假菌絲例如念珠菌的菌落。3絲狀型菌落：由多數分枝的菌絲體向上生長組成疏松的絨球狀，外表有很多抱子，顯示各種色澤，菌落可呈棉絮狀絨球狀粉末狀或石膏樣，其正面和反面可顯示各種不同色素，常作為鑒定菌種的參考。鏡檢可見有縱橫交織的菌絲及各種抱子例如各種癬菌的菌落。2.繁殖方式有多樣性，包括出芽增殖，菌絲增長，菌絲分枝和斷裂，產生無性抱子及有性抱子進展

7、繁殖，因此它繁殖力很強，但生長速度較慢。三變異性和抵抗力真困很容易發生變異，在人工培養基中屢次移種或孵育過久，就可出現形態構造、菌落性狀、色素以及各種生理性狀包括毒力的改變，用不同的培養基和溫度培養真菌，其性狀也有改變，真菌對枯燥陽光紫外線及一般化學消毒劑耐受性卻較強。但對熱的抵抗力卻不強。60C以上1小時即可殺死抱子及其菌絲，在1吮3%炭酸、2.5%碘酊、0.1%升汞及10御醛中可被滅活。用甲醛氣體熏蒸被真菌污染的衣物用具，可殺滅真菌菌絲及其抱子。但真菌對一般抗菌素及磺胺藥均不敏感。只對二性霉素、酮康哇、制霉菌素等非常敏感，治療真菌感染常用此藥。四致病性與免疫性1.致病性病原真菌的致病機制還

8、是一個未完全解決的問題；根據其侵害部位，主要分為以下兩類：1淺部真菌?。褐饕砂_菌引起，大多為外源感染，常易侵害皮膚、指趾甲及須發等含角質的組織，引起癬癥。2深部真菌?。嚎捎筛鞣N真菌引起，包括類酵母菌、二相真菌及絲狀菌。侵害粘膜、皮下組織、內臟及腦膜等處，有時擴散全身，主要是內源性感染，也可由外源傳染；前者是因機體抵抗力降低，如患重病，長期使用免疫抑制劑，廣譜抗菌素或放射治療，患惡性病，嚴重燒傷等時，造成體內菌群失調，以致常居在體內的某些真菌如白念珠菌，甚至平時不致病的環境中的真菌如曲霉、毛霉等也會乘機侵害，一些傳染性較強的內臟真菌病是內外源感染。2.免疫性淺部真菌病一般在血中不產生特異性抗體

9、，病后無免疫保護力，只是兒童頭癬等青春期后頭皮皮脂增多時可以白愈，以后不再感染，其他部位癬癥治愈后仍可再感染。深部真菌病雖可產生抗體，但無明顯免疫保護作用。臨床常見的病原性真菌一、淺部真菌一皮膚癬菌皮膚癬菌又稱皮膚絲狀真菌，有以下三屬見表1，都只侵犯體表角化組織皮膚，毛發及指甲和趾甲。不侵害深部組織，或內臟，皆屬外源性傳染，由接觸患癬病人、動物狗、貓、鼠、牛、馬等或染菌物體而感染。毛癬菌屬大紅色毛癬菌1直接鏡檢：皮屑及甲屑，分枝分隔的菌絲有時可斷裂或關節抱子狀，毛發：發外型感染表現為發外抱子排列成串。少數為發內型感染抱子在發內排列成鏈狀；毛發穿孔試驗陰性。2培養特征：在葡萄糖蛋白腺瓊脂，25C

10、,生長比擬快，菌落形態有多種表現，鏡檢也不完全一樣，常見有以下四種：I型：羊毛狀：白色羊毛狀菌絲充滿斜面，典型的卷成筒狀，邊緣貼牢管壁，呈鮮紅色，反面開場在中心有一紅色小點，以后形成深紅色環，最后成片為葡萄酒色，色素邊緣劃界非常明顯。少數I型菌株表現無紅色色素，正面白色，反面呈淡黃色類似石膏I型，亦有正面白色而反面呈灰黑色。II型：絨毛狀：粉紅色絨毛狀菌絲生長，占斜面3/5,菌絲稀疏，透過菌絲可見粉紅色的基底，反面顏色同I型一樣。山型:粉未狀：菌落外表稍有凸起，呈粉末狀，粉紅色，約占斜面的1/22/3,反面同I型。IV型：溝紋狀：菌落生長相對較慢，比以上三種類型為小，占斜面的1/31/2,菌落

11、中央凸起，從中央向四周有排列比擬整齊的放射狀溝紋，邊緣整齊，外表菌絲甚少。開場微帶黃色，以后變粉紅，反面同I型。3菌種鑒定：菌落特征及色素；大小分生抱子的形態；玉米粉吐溫瓊脂上產生紅色色素；毛發穿孔試驗陰性；尿素酶試驗陰性。大須癬毛癬菌1直接鏡檢：皮屑內見分枝分隔的菌絲，甲屑內為關節狀菌絲。毛發感染為發外型，發內有時有菌絲。2培養特性：在沙氏上生長較快，菌落形態可分為兩大類：毛型和粉型；以下I、II型為毛型，III、IV、V型屬粉型。白炎癥明顯的皮損中所別離出的菌株多屬粉型。毛型菌落外觀均似紅毛，應注意鑒別。具體分型羊毛狀I型，又稱趾間毛癬菌，菌落生長快，白色羊毛狀。氣生菌絲較多且長，排列嚴密

12、，充滿斜面，好象紅毛，正面雪白，反面淡黃色。鏡檢見較細分枝，分隔的菌絲，胞漿濃。有少量球形或長形小分生抱子，無螺旋菌絲和大分生抱子。間或可見球拍菌絲及結節菌絲。絨毛型II型，生長快，菌落雪白。外表有嚴密的細短氣生菌絲，中央可有乳頭狀突起，邊緣如刀切，反面棕黃色或棕紅色。鏡檢見較細的分枝、分隔的菌絲，小分生抱子多，有時成葡萄串狀，無螺旋菌絲或大分生抱子；乳皮狀III型，開場為乳白色菌絲，不久一局部菌落變為粉末樣，色微黃，光滑，似牛乳外表的一層薄膜，可一塊塊地挑取，中央有少許褶疊，邊緣不整齊，反面淡黃或棕黃色。鏡檢見粗細不一，分枝分隔的菌絲和大量螺旋菌絲，間或可見破梳狀菌絲，結節菌絲及球拍菌絲，大

13、分生抱子少，棒狀，兩端圓，與分生抱子梗的連接處較窄，薄壁光滑，小分生抱子多，球形或長形，有時成葡萄串狀排列。粉末狀IV型，菌落粉末狀，外表平坦、光滑。間或有少數白色氣生菌絲，中央有乳頭狀凸起，邊緣鋸齒狀。菌落生長快，充滿斜面，色黃或奶油色，外觀像石小、反面棕黃或棕紅色。顆粒狀V型：生長快，菌落粉樣，外表不平，呈顆粒狀。有不規那么的褶疊或溝紋，邊緣不整齊。下面色黃帶紅或棕黃。反面棕紅色。IV、V鏡檢均見大量棒狀大分生抱子及無數圓形的小分生抱子，少數長型。游離或葡萄狀成串，有螺旋菌絲和球拍菌絲。3菌種鑒定：菌落形態；菌絲較細，是皮膚癬菌中最細的一種；螺旋菌絲多見；大分生抱子的形態和球形小分生抱子；

14、尿素酶陽性；毛發穿孔陽性。太紫色毛癬菌1直接鏡檢：皮屑、甲屑內可見分枝分隔的菌絲或成串的抱子，病發取黑點部位的斷發，毛發損害為發內型大抱子，呈關節型排列，充滿整個發內，故毛發出皮即斷。2培養特性：在沙氏瓊脂培養基室溫培養菌落生長慢，開場為圓形、白色、潮濕發亮的菌落，類似酵母；以后中央褶疊或突起，產生紫色色素，并逐漸擴大，或中央紫色，邊緣淡紅色，最外圍有一圈白色的環。培養基顏色不變，邊緣無放射狀菌絲，整齊如刀切，下沉不明顯，反面無色至深紫色，少數菌株無顏色，呈無色紫色毛癬菌，鏡檢見粗細不一的菌絲，分隔較密，胞漿淡，有很多不規那么的突起和腫脹，但無鹿角菌絲。厚壁抱子多，多為間生，偶見小分生抱子25

15、個大生分生抱子。3菌種鑒定：菌落形態，紫色色素；VitB能促進菌落生長，形成大分生抱子；發內型感染。1. 小抱子菌屬大羊毛狀小抱子菌1直接鏡檢：皮屑內見分枝、分隔的菌絲，病發為發外型感染。2培養特性：在沙氏瓊脂培養基上室溫生長快。開場為黃色絨毛樣生長，2周后菌絲較多，呈羊毛狀，可充滿大局部斜面。中央趨向粉未化。正面桔黃，反面紅棕色，平皿中培養的菌落外表中央可有少數同心園，無放射狀溝紋。生長約4-5周后開場變異，菌絲增多,大分生抱子減少或消失。鏡檢見大量紡錘形，厚壁的大分生抱子。一端稍彎曲，末端有帽樣肥大，有6-15個分隔。小分生抱子較少，長形，無柄側生?？捎星蚺臓罹z，破梳狀菌絲，結節菌絲及大

16、量厚壁抱子等。3菌種鑒定：菌落形態及色素，在PDA養基上能產生黃色色素；特征性的厚壁、頂端膨大微彎曲，如戴帽的大分生抱子；發外抱子型感染。大石膏樣小抱子菌1直接鏡檢：皮屑內見菌絲或成串的抱子，病發為發外型感染，抱子較大，排列成串。2培養特性：在沙氏瓊脂培養基上室溫生長快，開場為白色菌絲，后成棕黃色粉未狀菌落，凝結成片，菌落中心有隆起，外圍有少數極短的溝紋，邊緣不整齊，反面紅棕色。鏡檢：見多數較小，紡錘形，46個的大分生抱子，壁厚13m兩端園，壁有刺，菌絲較少，小分生抱子棒狀無柄，有時可見球拍狀菌絲，螺旋，破梳狀菌絲及結節菌絲。3菌種鑒定：菌落形態；大分生抱子的形態；毛發穿孔試驗陽性。2. 表皮

17、癬菌屬大絮狀表皮癬菌1直接鏡檢：皮屑及甲屑內見分枝分隔的菌絲。2培養特性：在沙氏培養基室溫生長快。菌落開場蠟狀，Wj出斜面，外表有不規那么的褶疊，上覆粉未樣菌絲，黃綠色。較大的菌落中央有褶疊，外圍可見放射狀溝紋，最外圍有不整齊的平滑圈。菌落下沉明顯，培養基常為之開裂。反面黃至棕色。鏡檢：見典型的杵狀大分生抱子，24個分隔。游離端圓形，薄壁光滑，基部平截。常24個成群，無小分生抱子，老齡菌落厚壁抱子多，菌絲較細，分枝，分隔，間或可見球拍，結節和螺旋菌絲。3菌種鑒定：菌落特征；典型杵狀大分生抱子；無小分生抱子。二、深部真菌一白念珠菌：Candidaalbicans1. 標本來源痰、大便、口腔或陰道

18、分泌物、尿、腦脊液、胸水、膿液、皮屑及痂皮等。2. 直接鏡檢氫氧化鉀涂片，可見卵圓形、圓形芽抱，薄壁，直徑約24芽抱，橢圓形芽抱的芽管延長形成假菌絲，有時在菌絲旁附著芽抱，PASfe色為紅色。3. 培養及鏡檢1葡萄糖蛋白月東瓊脂：30C劃線培養一天即有光滑小菌落生長，菌落為奶油色，閃光或呈蠟狀，柔軟光滑，老的菌落漸變硬，外表有皺褶或有毛發狀突起。鏡檢，在菌絲交接處有群集的卵圓形抱子或在菌絲旁側有少許芽抱，。2玉米培養基：菌落外觀同上，鏡檢：菌絲很少分枝，有少量芽生抱子，在菌絲的頂端或側緣有厚壁抱子，直徑717叫m3快速鑒定與鑒定程序：將標本直接接種在科瑪嘉上，24小時出現翠綠色菌落，將初代別離

19、的酵母樣菌接種在含1礎溫80米粉中，25C室溫中2448小時，鏡檢可見頂端產生圓形厚壁抱子或接種于，正常人血清或羊血清中，置37C溫箱中，經12小時鏡檢有芽生抱子及芽管形成，可初步鑒定為白念珠菌。API酵母快速鑒定：同化試驗結果：葡萄糖+,麥芽糖+,乳糖一，半乳糖+。二熱帶念珠菌CandidaTropicalis1. 標本來源：同白念珠菌。2. 直接鏡檢：同白念珠菌。3. 培養及鏡檢：1葡萄糖蛋白月東瓊脂，在25C中培養，菌落平滑有光澤，白色，時間較久外表有皺紋，粘稠，甚至有毛樣外觀，鏡檢可見卵圓形細胞或球形細胞約59m612mi。2玉米瓊脂：產生豐富的假菌絲及發育良好芽生抱子，但無厚壁抱子生

20、長。3快速鑒定：科瑪嘉培養基上，24小時出現藍灰色。同化試驗。三克柔氏念珠菌CandidaKrusei1. 標本來源：同白念珠菌。2. 直接鏡檢：同白念珠菌。3. 培養及鏡檢：葡萄糖蛋白腺瓊脂：菌落扁平，平滑、枯燥，有時外表有皺折，通常是乳白色到淡黃，鏡檢所見：大多數抱子是較大的柱狀，亦有少數短卵圓形抱子。假菌絲豐富，芽生抱子在菌絲上輪生。玉米瓊脂：對稱分枝的菌絲，芽生抱子較少，無厚壁抱子。葡萄糖蛋白月東液培養基：在培養基外表生長，與試管壁粘連?？焖勹b定：科瑪嘉培養基上24小時出現淡粉紅色菌落。同化試驗。四近平滑念珠菌Candidaparapsilosis1. 標本來源：同白念珠菌。2. 直接

21、鏡檢：同白念珠菌。3. 培養及鏡檢：葡萄糖蛋白月東瓊脂：乳酪樣菌落，通常外表光滑，亦有菌落外表粗糙及皺折。鏡檢所見：卵圓形芽生抱子5.0X48m假菌絲形成豐富。玉米瓊脂：穿插分枝菌絲，側生芽生抱子較多，無厚壁抱子。葡萄糖蛋白月東液基：無外表生長，在管底生長?？焖勹b定：科瑪嘉培養上24小時出現粉色光滑菌落。同化試驗：API。五光滑念珠菌Candidaglabrata1. 標本來源：痰、尿、血、皮膚、陰道、傷口、腹水、胸水、膽汁等。2. 直接鏡檢：卵圓形芽生抱子，直徑27或更大，單芽，位于抱子的細端，無莢膜，無子囊或菌絲。3. 培養及鏡檢：葡萄糖蛋白月東瓊：白色或奶油色乳酪樣菌落，日久變棕灰色，外

22、表平滑，稍有光澤，本菌只在酸性條件下生長，即不生長，鏡檢：同直接涂片?？焖勹b定：科瑪嘉培養基上24小時出現紫色菌落。同化：API試驗。六膠紅酵母RhodotorulamucilaginosaL標本來源：痰、尿、血、大便、皮膚、CSF咽喉、體液等。2. 直接鏡檢：圓形或卵圓形，35山直徑，有莢膜的芽生抱子，單芽生，抱子內有少數顆粒，無菌絲，不著色。3. 培養及鏡檢：葡萄糖蛋白月東瓊脂：25C或37C時，生長迅速，菌落10天內可達2直徑，為乳酪樣生長，邊緣整齊，外表光滑，但無光澤，桔紅，日久顏色逐漸消退，呈淡黃色或桔黃色，培養基不變色，鏡檢同涂片所見，有時可見假菌絲，無子囊?？焖勹b定：菌落產生紅色

23、色素；使尿素瓊脂由黃變紅。七新生隱球菌Cryptococcusneoformans1. 標本來源：腦脊液、痰、膿、尿、糞、血、活體組織及尸體解剖材料等。2. 直接鏡檢：墨汁染色，可見圓形厚壁抱子，菌體直徑約4201m外圍有一透光的厚莢膜，厚度約57少m莢膜內的菌體可出芽或不出芽，抱內有一較大的反光顆粒脂質顆粒，不是抱核和許多小顆粒，可與白細胞或淋巴細胞相鑒別。3. 培養及鏡檢：在葡萄蛋白月東瓊脂，25C或37C培養時，25天即生長出乳白色細菌粘液性菌落，呈不規那么圓形，外表有蠟樣光澤，以后菌落增厚，顏色由乳白、奶油轉桔黃色。非致病性隱球菌37C不生長。鏡檢類似直接鏡檢，可見圓形抱子，直徑8m多

24、數有芽，抱子外圍有莢膜，但莢膜開場甚狹，日久漸增厚，無真菌絲及子囊抱子，但可有芽管。快速鑒定：37C生長；尿素酶變紅；咖啡酸變棕色；同化試驗，不發酵葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、乳糖等。三、其它實驗室常見的絲狀真菌一曲霉屬：1. 標本來源：皮屑，甲屑，耳丁盼，痰，糞，尿，膿液，活檢與尸檢組織標本。2. 直接鏡檢：涂片見分枝，分隔的菌絲及足細胞，與外界相通腔道內標本中有時可見分生抱子頭，為曲霉的特征構造。3. 培養：初代用沙氏培養基，次代用察氏PDA養基，接種后室溫培養2周。少數能產生閉囊殼的曲霉需培養3周或更長時間。4. 菌種鑒定：1菌落，菌落生長速度，外表質地，顏色，形態和氣味等，其中顏色的特征較穩定，是曲霉分類的主要依據之一2分生