1、制訂培養基靈敏度實驗操作，是為了規范、統一培養基靈敏度檢測，確保微生物檢測準確、安全 進行。2 范圍適用于所有配制好并滅菌的培養基。3 編寫依據EP6.54 術語無5 職責QC 衛檢組人員負責培養基的配制、滅菌、靈敏度實驗。6 內容6.1 使用的設備、器具 生物安全柜、無菌培養皿、無菌刻度吸管或無菌注射器、無菌玻璃涂布器、酒精燈等6.2 使用的菌株EP檢測用ATCC勺菌株：金黃色葡萄球菌 Staphylococcus aureus ATCC 6538 大腸埃希菌 Escherichia coliATCC 8739銅綠假單胞菌 Pseudomonas aeruginosaATCC 9027枯草芽

2、孢桿菌 Bacilllus subtilisATCC 6633沙門氏菌 Salmonella enterica subspATCC 14028白色念珠菌 Candida albicansATCC 10231黑曲霉 Aspergillus nigerATCC 16404培養基靈敏度檢測所用勺菌株傳代次數不得超過 5 代, 并采用適宜勺菌種保藏技術，以保證試驗用 菌株勺生物學特性。6.3 檢測頻率每批配制、滅菌后勺培養基均應做靈敏度測試。6.4 操作方法6.4.1 對照標準培養基用已經過實驗證明合格的培養基或購買的有質量證書的成品平皿培養基作為對照標準培養基6.4.2 實驗培養基將瓊脂類的實驗培養

3、基加熱融化后，冷卻至45 C左右，以無菌的方式在無菌培養皿中注入1520ml ，備用。液體類的培養基直接使用。6.4.3 菌懸液的制備6.4.3.1 細菌菌懸液的制備方法一：取細菌的斜面培養物1耳匙接種在酪蛋白大豆消化肉湯培養基中3035C培養1824h，取上述培養物用無菌水按10倍系列稀釋，分別制成10-710-8的菌懸液備用。6.4.3.2 霉菌菌懸液的制備取白色念珠菌的斜面培養物1耳匙接種在沙氏瓊脂斜面上于2025C培養2448h，加入無菌水4ml 制成原液，取上述原液按 10 倍系列稀釋，分別制成10-610-7 的菌懸液備用。取黑曲霉的斜面培養物加入無菌水 4ml 制成孢子懸液，取上

4、述孢子懸液按 10 倍系列稀釋，分別制 成 10-6 10-7 的菌懸液備用。方法二：直接用杭州微球生物技術有限公司的產品-培養基靈敏度指示劑，該產品已經幫我們精確控制了細菌數量，只要直接拿稀釋液稀釋下就可以直接取到10 100CFU 試驗菌。使用方便，數量精確。推薦用此方法操作。6.4.4 培養基的生長促進實驗6.4.4.1 瓊脂類培養基的生長促進實驗每株菌用 2 個實驗培養基平皿，用表面涂布法在每個平皿表面接種0.1 0.5ml 的菌懸液（約 10100CFU 試驗菌），同時用 2 個對照標準的培養基平皿做對照，接種相同量的菌懸液試驗，在規定溫度 下培養 ,取出平皿點計菌落數。實驗培養基上

5、的微生物數量應為對照培養基上微生物生長數量的 70%-150% 范圍內。（注：每種培養基生長促進實驗的具體菌株見附錄1 ）6.4.4.2 液體類培養基的生長促進實驗每株菌用 2 管（或瓶）實驗培養基，接種 0.1 0.5ml 的菌懸液（約 10 100CFU 試驗菌），同時用2 個對照標準的培養基或用已知合格的酪蛋白大豆消化瓊脂平皿做對照，接種相同量的菌懸液試驗，在 規定溫度下培養 ,對比或計數，在規定時間內能生長菌落為合格。6.4.5 培養基的生長促進和抑制特性試驗6.4.5.1 液體培養基的生長促進特性試驗接種0.10.5ml的菌懸液（約10100CFU試驗菌）于一定量適合的培養基。在特定

6、溫度下培養， 培養時間不超過試驗中規定的最短期限。與對照標準的培養基獲得的微生物生長相比，接種微生物的 生長應明顯。645.2 固體培養基的生長促進特性試驗采用表面涂布法，在每一塊平皿上接種0.10.5ml的菌懸液（約10100CFU試驗菌）適宜微生物在特定溫度下培養，培養時間不長于試驗中規定的最短期限。接種微生物的生長與對照標準的培養基 獲得的微生物生長相當。645.3 液體或固體培養基的抑制特性試驗用適當培養基接種至少100 CFU適宜微生物。在特定溫度下培養，培養時間至少為試驗中規定的最長期限。無受試微生物生長。（注：每種培養基生長促進和抑制特性試驗的具體菌株見附錄1）7附錄附錄1培養基

7、生長促進和抑制特性表附錄1:培養基的生長促進、抑制特性表培養基特性受試菌株培養時間培養溫度生長促進金黃色葡萄球菌3天30-35 C銅綠假單胞菌3天30-35 C酪蛋白大豆消化瓊 脂枯草芽抱桿菌3天30-35 C白色念珠菌5天30-35 C黑曲霉5天30-35 C酪蛋白大豆消化肉湯生長促進金黃色葡萄球菌3天30-35 C銅綠假單胞菌3天30-35 C枯草芽抱桿菌3天30-35 C沙氏葡萄糖瓊脂生長促進白色念珠菌5天20-25 C黑曲霉5天20-25 CR2A生長促進金黃色葡萄球菌3天30-35 C銅綠假單胞菌3天30-35 C枯草芽抱桿菌3天30-35 C大腸埃希菌3天30-35 C麥康凱肉湯生長促進大腸埃希菌3天42-44 C抑制1金黃色葡萄球菌3天42-44 C麥康凱瓊脂生長促進大腸埃希菌3天30-35 C氯化鎂孔雀綠沙門生長促進J沙門氏菌J3天30-35 C1氏菌增