1、檢驗方法驗證管理規程一.目的：制定質量檢驗方法驗證管理規定，明確質量檢驗方法驗證內容，規范對新開發的檢驗方法、藥典或客戶提供的檢驗方法檢驗方法僅限于氣相色譜法（GC）、高效液相色譜法（HPLC）需進行的可行性及適用性的驗證程序，確保檢驗方法、轉移應用的檢驗方法有效、正確實施。二.范圍：適用于對開發和新建立的分析方法、藥典方法及客戶提供的方法轉移應用進行驗證。三.職責：中心化驗室對本規程的執行負責。四.內容：1.引用標準根據ICH的GMP指南要求、中國藥典2010年版及中國制藥企業GMP指南要求而制定。2.驗證內容2.1新開發的檢驗方法的轉移應用確認2.1.1選擇性（或專屬性）選擇適當的儀器、試

2、劑（包括儀器型號、GC或HPLC色譜柱，流動相配比等）使原料藥生產工藝中可能存在的雜質（包括原料，中間產品，前體及降解產物）與成品較好地分開，并確保主成份峰中沒有其他干擾物質峰存在，必要時可采用二極管陣列檢測器或質譜對組分的單一性進行評價和確認。2.1.2精密度2.1.2.1系統精密度通過對單個測定值與平均值之間的偏差程度來衡量系統的誤差。對同一均勻的樣品溶液或標準品溶液，連續重復進樣六次，記錄每次進樣后各組分的響應，峰面積或峰高，計算各響應值與平均值之間的偏差相對標準偏差RSD。2.1.2.2方法精密度通過測定樣品含量與真值（平均值）的偏差程度來衡量樣品制備過程（包括稱量，稀釋）中的誤差。分

3、別對同一批號的樣品稱量六次，按含量測定方法測定其含量，計算每一單一含量與平均含量之間的相對標準偏差RSD，除另有規定外通常RSD2.0%。2.1.2.3中間精密度2.1.2.3.1按驗證確定的方法，同一人用同一儀器檢測三批樣品，每間隔24小時以上，測定一次，共測定3次。2.1.2.3.2由兩人使用不同的儀器分別檢測同三批樣品。2.1.3方法的線性范圍2.1.3.1 在含量測定濃度的80120%選擇五個不同的濃度點，每一個濃度需測定二次，記錄各對應濃度下的相應響應值（峰高，峰面積或峰面積的比值），以衡量樣品量與檢測器響應間的線性對應關系。2.1.3.2 接受標準：相關系數r0.991.002.1

4、.3.3 在HPLC法有關物質測定時，測定濃度從總雜質120%至LOQ濃度選取五個點，每個濃度點測定二次。GC法殘留溶劑測定時，測定濃度從殘留溶劑限度的120%至LOQ濃度選取五個點，每個濃度點測定二次。2.1.4方法的準確度衡量該方法的實測結果與真實值的吻合程度，即方法的回收率。2.1.4.1取已知濃度的樣品（濃度范圍為含量測定濃度的80%、100%、120%）各三份，每份進樣測定三次，計算該方法的百分回收率。2.1.4.2用HPLC法進行有關物質測定準確度試驗，取雜質的LOQ、50%、100%、120%濃度四個點（也可根據產品質量情況選擇其他點），每個濃度點測定三次。計算百分回收率。2.1

5、.4.3 GC法殘留溶劑準確度試驗，取殘留溶劑限度的LOQ、50%、100%、120%四個濃度點（也可根據產品質量情況選擇其他點）溶液，若樣品測定濃度值低于限度值的10%時，應增加測定限度的10%的濃度點溶液。加入樣品中，每個濃度點測定三次，計算扣除樣品濃度后的百分回收率。2.1.5最小檢測限2.1.5.1 儀器能檢測到樣品中各組分的最低檢測濃度，不需定量。2.1.5.2 操作在儀器系統性實驗符合檢測要求的條件下，測定三次空白樣品，洗脫時間需用覆蓋整個樣品中所有組分的流出。計算平均噪聲水平。根據產品檢驗規程規定的檢測濃度配制梯度濃度，單針進樣。當信噪比為3.0±1.0，確定該濃度為待

6、確定的最小檢測限。將該濃度溶液重復進樣三次，若三次所得圖譜的信噪比均為3.0±1.0，則確定該濃度為最小檢測限。2.1.6最小定量限2.1.6.1能夠重復的、準確的測量峰面積（相當于供分析物）的進樣量。峰高等于噪聲高的10.0±1.0。2.1.6.2操作：按檢測限方法測定儀器的平均噪聲，按最小檢測限操作方法操作，將按信噪比為10.0±1.0的濃度定為最小定量限。2.1.7方法耐用性（僅在新開發的方法的第一次驗證時進行）HPLC法，方法耐用性要求進行改變流動相比例和流動相PH值的測試，主要考察原料藥生產工藝中可能存在的雜質（包括原料中間產品、前體及降解產物）與成品主

7、峰的分離度達到要求，并確保成品主峰中沒有干擾峰存在，同時觀察雜質峰的出峰順序是否發生變化。GC法，方法耐用性要求進行改變柱溫和載氣流速測試，主要考察所有殘留溶劑峰之間的分離度是否仍達到標準要求。2.1.8溶液穩定性HPLC法，將配制好的溶液每隔半小時進樣一次，連續進樣5次（即放置兩小時），比較含量和有關物質的變化。2.2藥典、客戶提供的檢驗方法的轉移應用確認2.2.1方法選擇性選擇適當的儀器、試劑（包括儀器型號、GC或HPLC色譜柱，流動相配比等）使原料藥生產工藝中可能存在的雜質（包括原料，中間產品，前體及降解產物）與成品較好地分開，并確保成品峰中沒有其他干擾物質峰存在，必要時可采用二極管陣列

8、檢測器或質譜對組分的單一性進行評價和確認。2.2.2 系統適應性按藥典方法及客戶方法規定操作。2.2.3系統精密度、中間精密度、最小檢測限、最小定量限、耐用性、溶液穩定性六項分別按2.1.2.1、2.1.2.3、2.1.5、2.1.6、2.1.7及2.1.8操作。4.3中間產品分析（面積歸一化法）的方法驗證2.3.1選擇性選擇適當的儀器、試劑（包括儀器型號、GC或HPLC色譜柱，流動相配比等）使原料藥生產工藝中可能存在的雜質（包括原料，中間產品，前體及降解產物）與成品較好地分開，并確保成品峰中沒有其他干擾物質峰存在，必要時可采用二極管陣列檢測器或質譜對組分的單一性進行評價和確認。2.3.2 系

9、統精密度通過對單個測定值與平均值之間的偏差程度來衡量系統的誤差。對同一均勻的樣品溶液連續重復進樣六次，記錄每次進樣后各組分的響應，峰面積或峰高，計算各響應值與平均值之間的偏差相對標準偏差RSD。2.3.3最小檢測限在儀器系統性實驗符合檢測要求的條件下，測定三次空白樣品，洗脫時間需用覆蓋整個樣品中所有組分的流出。計算平均噪聲水平。根據產品檢驗規程規定的檢測濃度配制梯度濃度，單針進樣。當信噪比為3.0±1.0，確定該濃度為待確定的最小檢測限。將該濃度溶液重復進樣三次，若三次所得圖譜的信噪比均為3.0±1.0，則確定該濃度為最小檢測限。2.3.4最小定量限按檢測限測定方法測定儀器

10、平均噪音，然后按信噪比等于10.0±1.0配制中間產品前一步主原料的樣品溶液。連續進樣三次，計算組分的最小定量限。2.3.5 準確度取常規檢測濃度的150%、50%，檢測所得含量，應與100%濃度所測含量SD2.0%。2.3.6溶液穩定性HPLC法，將配制好的溶液每隔1進樣一次，連續進樣5次（即放置5小時），比較含量和有關物質的變化。2.4不同的檢驗項目在進行分析方法驗證或分析方法確認時須進行的驗證或確認內容參考下表：性能參數鑒別含量有關物質（定量）有關物質（限度）驗證確認驗證確認驗證確認驗證確認準確度NoNoYesNoYes可能NoNo精密度NoNoYes可能YesYesNoNo專

11、屬性Yes可能Yes可能YesYesYesYesLODNoNoNoNoNoNoYesYesLOQNoNoNoNoYesYesNoNo線性NoNoYesNoYesNoNoNo范圍NoNoYesNoYesNoNoNo耐用性YesYesYesYesYesYesYesYes注：驗證或確認時除參考上表外，還應根據產品的實物質量水平確定須進行驗證或確認的項目內容。3.模板進行檢驗方法驗證或確認時，可參考下列模版形成驗證或確認的方案和報告，也可根據客戶的要求在下列模版的基礎上進行修改。3.1含量測試方法驗證或確認模版（見附件1）3.2有關物質測試方法驗證或確認模版（見附件2）3.3殘留溶劑檢測方法驗證或確認

12、模版（見附件3）3.4檢驗方法驗證或確認計劃模板（見附件4）4.注意事項4.1在分析方法驗證前，應確保分析儀器設備經過確認并處于其校驗有效期內。4.2試驗過程應詳細記錄, 包括色譜條件，樣品、對照品、所用試劑的來源，含量，稱量值, 稀釋過程, 簡要操作方法, 儀器型號，計算公式及結果，必要的數據統計等。4.3已驗證過的分析方法的任何修改都應當保存完整的記錄，其包括修改的原因和相關數據說明，用來證明該修改后的方法和規定的方法同樣準確可靠。附件1： 含量測試方法驗證或確認模版1.目的：2.方法來源：3.驗證所用儀器設備及色譜條件3.1儀器設備名稱型號序列號供應商高效液相色譜進樣器泵檢測器色譜工作站

13、色譜柱3.2測試條件檢測波長：柱溫：流速：進樣量：3.3溶液制備流動相的配制：空白（或稀釋劑）：樣品溶液的制備：標準品溶液的制備：3.4驗證所使用的試劑與標準品名稱規格批號供應商4.驗證過程4.1系統適用性待儀器穩定后，進規定量的標準溶液，注入色譜儀，平行進樣6次，記錄色譜圖。進樣次數保留時間（min）峰面積123 456平均值RSD%計算N= T= （除另有規定外RSD2.0%，T2.0）4.2專屬性進空白溶液、標準溶液、如有必要配制含生產產品所用主原料、中間、副產物的測試溶液，并進樣。應證明以上物質不干擾被測物的測定個。除另有規定外，其相鄰組分分離度應不小于1.5。名稱保留時間分離度4.3

14、系統精密度(同系統適用性)4.4方法精密度用被測物質標準品定量稱樣并配制成相對濃度為80%、100%、120%三種測試溶液，每種溶液制備3份，每份溶液進樣三次。計算每個樣品三次進樣的平均峰面積及RSD；計算每個濃度點的3份溶液的含量及相應的RSD；計算每個濃度點的平均含量及3個點間相應的RSD。除另有規定外RSD應2.0%。數據填入下表中：相對濃度80%100%120%稱樣峰面積測試1測試2測試3平均值RSD%含量RSD%平均含量RSD%4.5線性用被測物質標準品定量稱樣并配制成相對濃度為80%，90%，100%，110%，120%五種測試溶液。每個樣品進樣2次，計算平均峰面積。以樣品平均濃度

15、對相應平均峰面積做回歸曲線，計算回歸方程及相應的線性回歸系數。相關系數應0.9991.00。線性結果濃度相對濃度峰面積1峰面積2平均峰面積平均值回歸方程相關系數4.6準確度同方法精密度。計算每個樣品溶液的平均含量，并計算3個濃度點的9個溶液的總平均含量值與大于95%的置信區間。樣品真實含量（100%）應包括在測試結果的大于95%置信區間內。數據填入下表中：相對濃度80%100%120%稱樣峰面積測試1測試2測試3平均值含量平均含量SD大于95%置信區間真實含量100%注：大于95%置信區間的計算公式：X=2.628（SD/n1/2）X：樣品的平均值 SD：樣品的標準偏差4.7中間精密度按規程要

16、求操作，數據填入下表：測試條件不同條件下含量結果平均值RSD%日期批號第一天第二天第三天人員和儀器批號人員A(使用儀器1)人員B（使用儀器2）RSD除另有規定外應2.0%4.8耐用性溶液穩定性（僅在新開發的方法的第一次驗證時進行）將制備好的標準品溶液和樣品溶液每隔一小時進樣一次，計算含量結果。溶液放置時間主峰保留時間含量結果1小時2小時3小時4小時5小時平均值RSD%分別調整流動相pH（±0.2pH）、流速（±50%）、柱溫（±20%）檢測同三批樣品，計算含量結果的RSD%2.0%。5.結論附件2 有關物質測試方法驗證或確認模版1.目的：2.方法來源：3.驗證所用

17、儀器設備及色譜條件3.1儀器設備名稱型號序列號供應商高效液相色譜進樣器泵檢測器色譜工作站色譜柱3.2測試條件檢測波長：柱溫：流速：進樣量：3.3溶液制備流動相的配制：空白（或稀釋劑）：樣品溶液的制備：標準品溶液的制備：3.4驗證所使用的試劑與標準品名稱規格批號供應商4.驗證過程4.1系統適用性（如沒有要求不需要進行）按系統適用性溶液制備的要求進行制備，待儀器穩定后， 進樣。計算R= T= （除另有規定外R1.5,T2.0）4.2專屬性進空白溶液、被測雜質溶液、如有必要配制含生產產品所用主原料、中間產品、副產物及藥物主成分的測試溶液，并進樣。應證明以上物質不干擾被測雜質的測定。除另有規定外，其相

18、鄰組分分離度應不小于1.5。名稱保留時間分離度4.3系統精密度(同系統適用性)4.4最小檢測限進樣品稀釋劑溶液為空白，調整儀器了靈敏度，連續進樣3次，記錄在被測物出峰時間范圍內的儀器噪音水平，計算平均噪聲。準確配制被測物質標準溶液，逐步稀釋至一定濃度并進樣，計算S/N，以S/N在3左右的樣品濃度為最小檢測限濃度。類別平行測定次數平均噪聲噪聲1噪聲2噪聲3空白溶液譜圖號類別濃度（mg/ml）進樣次數平均峰高信噪比檢測限%X1（峰高）X2（峰高）X3（峰高）雜質1譜圖號4.5定量限準確配制被測物質標準溶液，逐步稀釋至一定濃度并進樣，計算S/N，以S/N在10左右的樣品濃度為最小檢定量濃度。類別濃度

19、（mg/ml）進樣次數平均峰高信噪比定量限%X1（峰高）X2（峰高）X3（峰高）雜質1譜圖號4.6線性用已知雜質標準品定量稱樣并配制成相對濃度為最小定量限濃度、50%、80%、100%、120%五種測試溶液。每個溶液進樣2次，計算平均峰面積。以樣品平均濃度對相應平均峰面積做回歸曲線，計算回歸方程及相應的線性回歸系數。相關系數應0.9991.00。線性結果濃度相對濃度峰面積1峰面積2平均峰面積平均值回歸方程相關系數4.7準確度（已知雜質標準品可得時用加樣回收率來驗證，當雜質標準品不可得時不需驗證）制備含已知雜質為LOQ、50%、100%、120%四種濃度的溶液。選擇一批樣品定量稱樣15份，其中3

20、份作為空白，其余12份分別加入上述四種濃度的溶液，每種濃度的溶液平行加入三份樣品中，進樣。濃度樣重（g）測試結果面積測試結果%理論含量%回收率%譜圖號空白LOQ50%100%120%4.8中間精密度按規程要求操作，數據填入下表：測試條件不同條件下含量結果平均值RSD%日期批號第一天第二天第三天人員和儀器批號人員A(使用儀器1)人員B（使用儀器2）RSD除另有規定外應2.0%4.9耐用性（僅在新開發的方法的第一次驗證時進行）4.9.1溶液穩定性 將制備好的標準品溶液和樣品溶液每隔一小時進樣一次，計算含量結果。溶液放置時間主峰保留時間含量結果1小時2小時3小時4小時5小時平均值RSD%4.9.2分

21、別調整流動相pH（±0.2pH）、流速（±50%）、柱溫（±20%）、更換色譜柱檢測同三批樣品，計算含量結果的RSD%2.0%。5.結論附件3 殘留溶劑測試方法驗證或確認模板1.目的：2.方法來源：3.驗證所用儀器設備及色譜條件3.1儀器設備名稱型號序列號供應商氣相色譜氣相色譜儀頂空進樣器色譜工作站色譜柱3.2測試條件分流比：檢測器溫度：進樣器溫度：載氣：柱溫程序：柱流速或柱前壓：進樣量：檢測器：頂空條件：3.3溶液制備標準溶液配制：空白（或稀釋劑）：樣品溶液的制備：3.4驗證所使用的試劑與標準品名稱規格批號供應商4.驗證過程4.1系統適用性待儀器穩定后，進規定量

22、的標準溶液，注入色譜儀，平行進樣6次，記錄色譜圖。類別平行測定6次的峰面積x平均RSDx1x2x3x4x5x6溶劑1溶劑2譜圖號計算N= T= R= （除另有規定外RSD2.0%，T2.0，R1.5）4.2方法專屬性 單獨進樣稀釋用的溶劑，證明該溶劑對被測殘留溶媒無干擾；單獨進樣每一個須測定的溶劑標準品，確定其保留時間；進樣標準溶液，計算分離度以確定所有待檢溶劑間無干擾。數據填入下表： 溶劑名稱溶劑1溶劑2保留時間譜圖號4.3系統精密度(同系統適用性)4.4最小檢測限進樣品稀釋劑溶液為空白，調整儀器了靈敏度，連續進樣3次，記錄在被測溶劑出峰時間范圍內的儀器噪音水平，計算平均噪聲。準確配制被測溶劑標準溶液，逐步稀釋至一定濃度并進樣，計算S/N，以S/N在3左右的溶劑濃度為最小檢測限濃度。類別平行測定次數平均噪聲噪聲1噪聲2噪聲3空白溶液譜圖號類別濃度（mg/ml）進樣次數平均