1、中藥千里光不同劑量及其配伍后毒副作用的觀察張超群 孫莉 孔祥蕾 楊瀅瑤 李倩倩指導老師：方肇勤 盧文麗上海中醫藥大學2004級中醫臨床七年制、2007級中醫，202103 摘要 目的：觀察不同劑量中藥千里光，及其配伍后對小鼠肝臟可能存在的毒副作用。方法：將小鼠隨機分為空白對照組、千里光小劑量組、中劑量組、大劑量組、千里光配伍組及配伍藥組共6組，灌胃7天后檢測肝臟指數、肝臟生化指標ALT、AST及肝臟形態學等指標，分別于實驗的1、4、7天檢測體重。結果：實驗中正常對照組意外死亡小鼠1只、千里光大劑量組意外死亡小鼠2只；與正常對照組比擬，各組體重指數、肝臟指數以及生化指標AST差異無統計學意義P&

2、gt;0.05；千里光中劑量組及配伍組生化指標ALT明顯升高，千里光小劑量組生化指標ALT明顯降低P<0.05。結論：大、中、小劑量千里光、千里光配伍后，以及配伍藥物未見顯著的肝臟毒副作用。關鍵詞 千里光；肝毒性；ALT；AST；病理近年來，中藥的毒副作用已經成為國內外關注的熱點。而一些中藥，如千里光的毒副作用報道，最早可以追溯到1920。迄今已有多篇文獻報道了千里光屬所引起嚴重肝損害并伴有死亡的臨床案例，其死亡率甚至高達271！千里光在中醫臨床上處方不是很多，但是以其組方的中成藥品種卻數量較多。臨床劑量的千里光是否具有肝臟急性損傷的毒副作用、配伍后作用如何？本實驗擬通過觀察檢測不同劑量

3、的千里光對小鼠肝功能和病理的影響等研究，初步明確千里光及配伍后是否具有顯著的毒副作用。1材料與方法1.1 材料實驗動物昆明種小鼠，雌性，72只，1924g，清潔級儀器及設備養生鍋、電子秤、DK-S22型電子恒溫水浴鍋、722光柵分光度計、雙面刀片、眼科鑷、組織鑷、眼科剪、解剖剪、染色架、染色缸、廣口瓶、恒溫水浴鍋、生物切片、恒溫箱、電子天平、脫水藍、顯微鏡、NIKON數碼相機藥物與試劑千里光上海青浦產、白菊花、石決明、甘草10%福爾馬林、75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇、100%乙醇、二甲苯、蘇木精、甘油蛋白 、鹽酸酒精、伊紅丙氨酸氨基轉移酶ALT試劑盒國食藥監械試字2004第3060018

4、號、門冬氨酸氨基轉移酶AST試劑盒國食藥監械試字2004第3060020號 藥物及其劑量1千里光小、中、大劑量組。千里光分別為20g、40g、80g。2千里光配伍組。千里光、白菊花、石決明、甘草各20g，合計80g相當于千里光大劑量的用藥量。3配伍藥組。白菊花、石決明、甘草各，合計80g相當于千里光大劑量的用藥量。 生藥鑒定：向我校生藥教研室崔亞君老師請教。動物分組及處理將小鼠隨機分成六組：空白對照組、千里光小劑量組、千里光中劑量組、千里光大劑量組、千里光配伍組、配伍藥組，每組12只。1空白對照組：第17天，每天次灌胃自來水0.5ml/只。2千里光小劑量組。第17天每天1次灌胃相應中藥水煎液0

5、.5ml/只生藥。以人60kg，30g/日，及小鼠體重20g計，為成人公斤體重的10倍。3千里光中劑量組。第17天每天1次灌胃相應中藥水煎液0.5ml/只生藥。為成人公斤體重的20倍。4千里光大劑量組。第17天每天1次灌胃相應中藥水煎液0.5ml/只生藥。為成人公斤體重的40倍。5千里光配伍組。第17天每天1次灌胃相應中藥水煎液0.5ml/只總藥量生藥。6配伍藥組。第17天每天1次灌胃相應中藥水煎液0.5ml/只總藥量生藥。指標觀測1一般情況 包括第1、4、7天動物體重、死亡情況等等。2生化指標 最后一次給藥后禁食16小時，眼球采血收集和別離小鼠血清，測定丙氨酸氨基轉移酶ALT、門冬氨酸氨基轉

6、移酶AST。3肝臟指數 第8天取小鼠完整肝臟拍照、稱重，計算肝臟指數。4肝臟病理切片觀察 病理切片制作方法1固定與修塊取小鼠肝臟塊投入10甲醛溶液，固定適當時間后予以修快成4mm³大小方形，繼續固定約24h，入75乙醇。2脫水與透明75乙醇過夜85乙醇60min 95乙醇30min95乙醇30min100乙醇30min 100乙醇30min 1/2二甲苯乙醇與二甲苯等體積20min 二甲苯20min 二甲苯20min3浸蠟、包埋與修塊浸蠟： 60恒溫箱放置120min。包埋：采用紙盒。包埋時將60的石蠟倒入紙盒內，然后用小鑷子將各組織塊按一定的順序排列好，使切面朝下。修蠟塊：待紙盒內

7、蠟凝固后。將蠟塊取出，用刀片將其修成梯形，組織塊與蠟塊邊緣之間的距離不得小于2mm。4切片切片厚約5m，將切片在50左右水浴中展開。用涂有甘油蛋白的載玻片從水浴中撈取切片，每個組織塊撈片2張。放入37烘箱中過夜。過夜后，將載玻片置于玻片架上，預備染色。5染色二甲苯15min二甲苯15min100乙醇2min95乙醇1min95乙醇1min75乙醇2min蒸餾水浸洗1min蘇木精30s自來水沖洗1min。伊紅著色即可蒸餾水浸洗 1min75乙醇 2min95乙醇1min95乙醇1min100乙醇2min二甲苯2min二甲苯35min中性樹膠封片 數據處理方法實驗數據用軟件進行分析，組間比擬采用單

8、因素方差，檢驗水準。2實驗結果經生藥教研室崔亞君老師鑒定，確認所購中藥千里光飲片為菊科植物千里光。2.2 一般情況實驗中，正常組意外死亡1只，千里光大劑量組意外死亡2只在體重方面，與正常對照組比擬，3個檢測點各組別體重無統計學差異P>0.05。提示各組藥物對小鼠體重沒有顯著的影響。見表1和圖1：表1 各組體重變化及比擬±S，g組別1d4d7d正常組n=11千里光小劑量組n=132千里光中劑量組n=13千里光大劑量組n=11千里光配伍組n=12配伍藥組n=12圖1 各組小鼠體重變化* 圖中小、中、大劑量分別代表千里光小、中、大劑量組，配伍組代表千里光配伍組，配藥組代表配伍藥組。下

9、同。2.3 肝臟指數與正常組比擬，各組肝臟指數均無統計學差異P>0.05。提示各組藥物對小鼠肝臟沒有顯著的影響。見表2和圖2：表2 各組肝臟指數±S組別肝臟指數正常組n=11千里光小劑量組n=13千里光中劑量組n=13千里光大劑量組n=11千里光配伍組n=12配伍藥組n=12圖2 各組小鼠肝臟指數2.4 肝臟生化指標表3 各組生化指標ALT、AST結果±S組別ALTU/LASTU/L正常組n=11千里光小劑量組n=139.8 ±3.0*千里光中劑量組n=1329.9 ±6.2*千里光大劑量組n=11千里光配伍組n=1225.5 ±6.8*

10、配伍藥組n=12* 與正常組比擬，差異有統計學意義P<0.05圖3 各組肝臟生化指標ALT結果 圖4 各組肝臟生化指標AST結果由上表3及圖3、圖4可知，ALT中劑量組、小劑量組、配伍組與正常組比擬有統計學差異P<0.05，而AST各組與正常組比擬無統計學差異P>0.05。但是，與體重和肝臟指數比擬，之間沒有相關性。提示其差異可能與試劑盒檢測操作誤差有關。 圖5 正常組肝臟HE ×400 圖6 千里光小劑量組肝臟HE ×400 圖7 千里光中劑量組肝臟HE ×400 圖8 千里光大劑量組肝臟HE ×400 圖9 千里光配伍組肝臟HE &

11、#215;400 圖10 配伍藥組肝臟HE ×400各組肝臟從肉眼上觀察，色澤未見明顯變化。組織形態學方面，從病理切片圖5圖10可知，正常對照組肝細胞形態正常，排列有序，可見單核或雙核，肝竇可見肝巨噬細胞；千里光小劑量組、中劑量組肝細胞排列略顯疏松和不整，千里光配伍組似乎無明顯變化；而千里光大劑量組和配伍藥組內，局部個體出現肝細胞排列疏松，體積增大，核仍局中，肝竇結構受壓，局部個體尚可。總體而言，千里光大劑量組和配伍藥物肝臟無明顯的炎性及壞死等病理變化。3分析與討論3.1 對實驗結果的分析關于千里光的毒性，千里光性味苦、寒，歸肝、腎二經1977版中國藥典一部，?中藥大辭典?。?本草拾

12、遺?稱其：“味苦，平，小毒。近年來發現，千里光2屬中有多種植物都含有肝毒吡咯里西啶類生物堿Hepatotoxic Pyrrolizidine Alkaloids，PA，對人及家畜肝臟有毒性，可引起肝硬化及蔓延性肝靜脈內膜炎，長期使用可導致肝靜脈閉塞，出現黃疸和腹水。鑒于文獻報道，該藥物毒性作用主要在肝臟，因而本實驗重點觀察肝臟的毒性作用。目前血清中的丙氨酸氨基轉移酶ALT和門冬氨酸氨基轉移酶AST是臨床應用最廣、診斷效率最高的血清酶3,4。當肝細胞損傷時，肝細胞膜通透性增加，胞漿內的ALT與AST釋放入血漿，致使血清ALT與AST的酶活性升高5。故本實驗采用ALT和AST作為檢測肝功能的生化指

13、標。同步的觀察了肝臟的病理和肝臟指數。中藥復方配伍是中藥的特色，中藥復方配伍的目的之一是減毒。研究藥物配伍后各藥味之間、主要成分之間的相互作用，探討配伍與毒性的關系，尋找能夠有效地制約毒性的配伍條件，對于臨床平安用藥具有指導意義。故我們選用千里光的常見配伍：菊花、石決明和甘草，主要用于清熱解毒，清肝明目。想通過試驗觀察我國有關千里光的肝損害現象較少是否與千里光的復方配伍有關。關于藥物的劑量。本實驗大劑量千里光，按小鼠用藥為成人公斤體重10倍計，相當于成人用藥120克。遠遠超出了一般成藥配伍所采用的劑量，即使臨床用藥，也很少會用至30克。在如此大的劑量下，未見到明顯的毒副作用，提示一些報道的千里

14、光的毒性，可能與其品種有關，而不是本實驗采用產自上海地區的品種。對照用復方，在總劑量上，與千里光大劑量相似，以觀察可能出現的毒副作用，是否與總用藥量有關。實驗結果提示，各組體重差異沒有統計學意義P>0.05，肝臟指數差異沒有統計學意義P>0.05，以及生化指標AST差異沒有統計學意義P>0.05。在生化指標ALT方面，與正常對照組相比，千里光小劑量組ALT下降，千里光中劑量組和千里光配伍組其中千里光為小劑量用量ALT升高，其改變不存在與千里光的量效關系；而病理結果顯示，千里光大劑量組和配伍藥物肝臟出現一定的病理改變，與ALT升高的改變也不存在相關性。因此，綜合以上實驗結果，考慮到生化指標與病理形態學指標的不一致性，提示這些改變主要系實驗操作誤差所致。3.2 實驗中存在的問題及分析小鼠的死亡可能因工程成員灌胃技能較差，對小鼠造成了創傷，導致個別小鼠的死亡。技術的掌握可能因工程成員缺少實驗技能，所產生的操作系統誤差，累積導致各檢測指標間缺少相關性，以及指標出現的一定誤差。這在一定程度上影響到本實驗的結果。參考文獻1梁愛華,葉祖光千里光屬植物的毒性研究進展中國中藥雜志,2