1、病理生理學實驗指導 汪思應 鄭紅 鄧松華 安徽醫科大學基礎醫學院病理生理教研室 目錄一， 概論1二， 病理生理實驗基本操作方法2三， 實驗性肺水腫3四， 兔小腸灌溉的水腫模型復制3五， 缺氧4六， 再吸入式缺氧5七， 鉀代謝障礙5八， 失血性休克5九， 喜樹堿誘導細胞凋亡6十， 急性左心衰竭7十一， 急性右心衰8十二， 病例討論肝性腦病8十三， 病例討論急性腎功能不全9十四， 病例討論MODS10十五， 病理生理學實驗教學大綱11十六， 病理生理學教學大綱12概 論病理生理學（Pathophysiology）是一門聯系基礎醫學和臨床醫學的重要橋梁學科之一。它在理論課程中主要介紹了在致病因素作用

2、下機體的機能代謝：發生何種改變（即臨床癥狀及體征）；為何發生改變（即臨床癥狀及體征出現的機制）；這些改變的規律性及與疾病的關系；預防和處理這些改變的機理（即疾病防治措施的原理）。因此，病理生理學是一門理論性科學。同時它又是一門實驗性科學。病理生理學的實驗方法有兩種，即臨床研究和動物實驗研究。臨床研究的結果雖能直接應用于患者，但有很大的局限性。所以，病理生理學主要采取動物實驗研究方法。在動物身上復制各種疾病或病理過程，作為人類相應疾病的模型。實驗者可控制或改變實驗條件，以研究疾病的病因、發病環節、發病機制等。還可用于疾病的實驗性預防、治療及新型藥物和治療手段的開發研究等。人類疾病動物模型的復制有

3、很多方法。大致歸納為以下幾種：從自然界中選擇發病動物（如選擇生長有腫瘤的鼠、狗等）作為疾病動物模型。但該動物模型個體間差異很大，且發病條件及病程等不易控制，已很少被直接采用。現主要用經人工選擇培育的不同品系的發病動物如由Okamoto和Aoki選育成功的SHR大鼠，其成年后100%發生高血壓，常用作自發性高血壓的動物模型。我國天津醫學院培育成功的津白-小鼠，成年后易發生乳腺癌等;根據疾病發生原因來復制疾病的動物模型。如用二乙基亞硝胺、二甲基偶氮苯來復制大鼠肝癌動物模型；我室張載福教授用盲腸結扎穿孔法造成小鼠腹腔感染來復制全身性炎癥反應綜合癥（SIRS）的動物模型；根據疾病發生機制復制動物模型。

4、如本指導中用大劑量快速輸液提高家兔肺毛細血管流體靜壓以復制的實驗性肺水腫模型，動脈控制性放血造成的失血性休克模型。根據疾病的發生環節復制疾病的動物模型。本室將Lewis肺癌(Lewis lung carcinoma, LLC)接種小鼠足掌復制的腫瘤自發肺轉移模型，將LLC及B16黑色素瘤（B16 Melanoma,B16M）細胞直接注入小鼠眼球后靜脈所復制的腫瘤血道轉移模型。轉基因動物(Transgenic Animal)或基因敲除( Gene Knock-out)復制疾病動物模型。主要用于遺傳性疾病、重要基因功能的研究。一，病理生理的實驗目的病理生理學實驗課的主要目的是：通過教學實驗指導學生

5、初步掌握人類疾病動物模型復制的基本方法；通過典型臨床病例的課堂討論，培養學生分析病例的能力，為臨床思維和臨床決策打下基礎；幫助學習者鍛煉操作技能、驗證和復習理論知識；通過實驗與課堂討論的具體環節，使學生初步具有進行醫學研究與臨床思維所必備的“嚴肅的科學態度、嚴密的科學方法和嚴謹的科學作風”等。二，病理生理學實驗課的要求 實驗前 認真復習實驗有關理論及預習實驗指導，了解實驗的大致情況;專心聽取指導教師對實驗內容的講解，熟悉實驗的具體方法及操作規程;領取并檢查實驗器材和藥品是否齊全;小組成員應有分工，但同時應注意合作，使每人都能得到應有的技能訓練。 實驗時 每人應確立嚴謹、實事求是的科學態度，正規

6、和準確的技能操作耐心、細致地觀察實驗中出現的每個現象；而且要準確、及時、客觀地記錄。整個實驗過程都不得敷衍、馬虎和主觀臆測; 必須伴隨整個實驗過程進行科學思維，力求了解每個步驟和每個現象的意義;要注意盡量減少對實驗動物的不必要損傷; 愛護實驗器材，使用藥品應注意節約。 實驗后 認真整理和分析實驗結果;儀器和藥品用完后要清點，并放回原處。應清洗者必須及時清洗干凈。每個實驗組，應保持自己桌面的清潔，每次下課后，打掃、整理好實驗室;按時完成實驗報告，交老師評閱。 三，病理生理實驗報告應書寫的項目和內容 1，姓名、班次、組別、日期。 2，實驗名稱。 3，實驗目的及原理。 4,實驗動物及材料：包括種類、

7、數量、性別、體重。 5,實驗的具體步驟：簡要寫出主要實驗方法。 6,實驗結果。根據實驗目的將原始記錄系統化、條理化。其表達方式有：敘述式：用文字將觀察到的、與實驗目的有關的現象客觀地加以描述，描述時需要有時間概念與順序。表格式：能夠較為清楚地反映觀察內容，有利于相互對比。每一圖表應說明一定的中心問題。圖表應由學生自己設計。表內的項目及計量單位應填明。曲線式：實驗中描記的血壓、呼吸等曲線應寫于實驗報告中。書寫時，須根據原始的描記圖，取其明顯變化的有關各段連接而成。 7,實驗結果分析或討論。由于實驗指導中的每一個實驗，都經過編寫單位反復試做，結果可靠。同學所做實驗，次數雖少，若與這結果基本一致，即

8、可作為分析的依據。討論要包括：運用所學理論，討論和解釋實驗結果，論證實驗目的。實驗結果提示了哪些新問題。如果出現“異常現象”，應加以分析。 8,結論：根據實驗結果簡要地寫明。 (汪思應)實驗一 基本實驗操作訓練實驗目的1. 了解病理生理學動物實驗的基本用途、技術；2. 掌握氣管、頸動脈、靜脈及股動脈插管，輸液及血壓測量技術。藥品和器材 生理鹽水（0.9%NaCl），10.0%NaCl、0.1%肝素、普魯卡因。小動物手術器械一套（每套大號止血鉗各兩把，中號采止血鉗兩把，彎直小號止血鉗各兩把，有齒鑷各一把，眼科剪和鑷各一把，組織剪和粗剪各一把，手術刀片的刀柄一副）、粗細縫線各一卷，2ml和5 ml

9、和30 ml注射器（第6號針頭），標本架（彈簧夾）一個，搪瓷搪瓷碗（25 ml）和方盤各一個。實驗動物家兔，體重2.5 kg。主要內容病理生理學教學常用實驗動物簡介 病理生理學實驗研究采用何種動物，是決定研究成功與否的一個重要問題。一般應針對實驗目的，根據各種實驗動物疾病模型的經驗，逐一考慮下述一系列問題：所要求的基本模型能否復制成功，成功率大小，采用的方法和所觀察指標是否簡單易行，實驗結果穩定一致的程度如何，動物是否便于管理，所獲得的實驗結果和人的臨床情況相比相似性的大小，需耗費的人力、物力、財力等。只有對這些因素進行綜合考慮，比較以后，才能確定采用何種動物較為合適。在教學上，不但要考慮以上

10、這些問題，還應考慮教學效果，才能滿足實驗的目的和要求。 病理生理學實驗常用的動物有：兔、大白鼠、小白鼠、狗等。它們和人一樣，都屬于哺乳類動物。它們的生理特性與人接近。現將病理生理學實驗常用的動物用途簡介如下：（一） 家兔 家兔能用于復制許多病理過程和疾病，如：水腫、炎癥、電解質紊亂、酸堿平衡紊亂、出血性休克、DIC、肺癌、動脈粥樣硬化、高脂血癥、心律失常、慢性肺心病、慢性肺動脈高壓、肺水腫、肝炎、膽管炎、阻塞性黃疸、腎性高血壓、腎小球腎炎、急性腎功能衰竭等。 特點：價格較低，性溫順，易飼養，繁殖率高，容易選到調節類似的對照組兔。因此，當實驗中必須用較大動物時，常用家兔；在血液循環方面，家兔血管

11、雖較狗略細，但很容易做到直接描記頸動脈壓、股動脈壓、肺小動脈契壓、中心靜脈壓等。兔的心血管系統機能較貓、狗為差，用來觀察血壓反應不如狗。手術時，兔易發生反射性衰竭，血壓反應不穩定，故給兔做手術時，動作要輕。兔的減壓神經是獨立走向的，便于觀察減壓神經對心、血管系統的作用。家兔心臟在離體情況下，搏動很久，是觀察有害因子對哺乳類動物心臟直接作用較合適的一個模型。離體兔耳，又可作為觀察有害因子對血管直接作用的一個模型；家兔適用于研究發熱、解熱藥和檢查致熱源；消化系統方面：家兔系草食動物，消化系統與人類相差較遠，缺乏嘔吐反射，所以不能用家兔作消化系統方面的研究；其他：家兔對組織胺不敏感，對注射組織胺并不

12、產生血壓下降，甚至出現升壓反應；因此，對家兔注射大量組織胺，并不能造成過敏性休克模型。 實驗用家兔體重必須2.5公斤以上。（二） 小鼠小鼠能用于復制許多病理過程和疾病，如：水腫、炎癥、缺氧、多種癌、肉瘤、白血病、多種傳染病、慢性氣管炎等。特點：小鼠是實驗室最常用的一種動物，價格低廉，便于大量繁殖，對動物實驗同種、純種、性別和年齡的要求，比較容易滿足，生活條件也容易控制。因而只要符合實驗要求，應盡量采用。它適合于需要大量動物的實驗，容易滿足統計學的要求。例如：胰島素、促腎上腺皮質激素的生物效價測定，毒物半致死量的測定；小鼠對許多疾病有易感性，因而適用于研究這類疾病，例如：血吸蟲病、瘧疾、流感、腦

13、炎等病。小鼠的純種品系甚多，每系有其獨特的生物特性，對某些疾病易感，例如：C3HA系對癌瘤敏感，C58系則抗癌；因此，純系小鼠廣泛應用于各種腫瘤的研究；當研究指標主要為組織學特別是電鏡觀察時，應用小鼠因器官較小，可節約人力、物力。例如：用于研究慢性氣管炎時肺的變化；小鼠具有發達的神經系統，能應用于復制神經官能癥模型；小鼠對外界環境適應性差，不耐冷熱，經不起饑飽，比較嬌嫩；因此，做實驗時要耐心細致，動作要輕，不然會干擾實驗結果。實驗用小鼠常用品系有昆明種小鼠、BALB/C、C57BL/6等,必須6-8周齡，18-20克。可根據實驗要求選擇性別。（三） 大白鼠大白鼠能用于復制許多病理過程和疾病，如

14、：水腫、炎癥、缺氧、休克、DIC、心肌梗塞、肝炎、腎性高血壓、各種腫瘤等。特點：大白鼠和小白鼠相似，便于大量繁殖、對動物實驗同種、純種、性別和年齡的要求，比較容易滿足，生活條件也容易控制，適合于需要大量動物而小白鼠不能滿足實驗要求時，如：間斷亞硝胺口服或胃腸道外給藥能誘發大白鼠食道癌，而在小白鼠則很少引起食道癌；因而，在這種情況下，采用大白鼠較為合適；大白鼠較小白鼠體大，對需要作大體型的實驗，用大白鼠較為合適，例如：可用于直接記錄血壓，其血壓反映較家兔為好，大白鼠可用于研究休克，DIC時血液循環變化，大白鼠后肢可用作肢體血管灌流實驗，其心臟可用作離體心臟實驗，從大白鼠胸導管采取淋巴能研究疾病時

15、淋巴的變化；大白鼠無膽囊，因此，常用大白鼠膽管收集膽汁，進行疾病時膽汁功能研究；大白鼠的垂體-腎上腺系統功能很發達，常用作應急反應和腎上腺、垂體等內分泌功能實驗，大白鼠的高級神經活動發達，因此，也廣泛用于神經官能癥的研究。大白鼠常用品系有SD、Wister，常用6-8周齡，體重250克的大鼠。 動物的捉拿和固定及其他操作方法 動物的捉拿和固定是進行動物實驗的基本操作之一，實驗者應當掌握嫻熟，首先，應對動物的一般習性有所了解，然后依其習性的不同，采用相應溫順的方法，迅速將其固定在便于實驗操作和觀察記錄的體位。下面介紹幾種常用動物的捉拿和固定方法。（一） 家兔的捉拿和固定,頸部手術、股動脈分離及插

16、管 1，家兔的捉拿和固定： 家兔習性溫順，除腳爪銳利應避免被其抓傷，較易捕捉，捉拿時切忌以手提兔耳。拖拉四肢或提拿腰背部。正確的方法是用右手抓住其項背部皮毛，輕提動物，再以左手托住其臀部，使兔的體重主要落在左手掌心。家兔的固定，依不同的實驗需要，常用兔盒固定或兔臺固定。我室采用兔臺固定：在需要觀察血壓、呼吸和進行頸、胸、腹部手術時，應將家兔以仰臥位固定于兔手術臺上，固定方法是，先以四條1.0cm寬的布帶做成活的圈套，分別套在家兔的四肢腕或踝關節上方，抽緊布帶的長頭，將兔仰臥位放在兔臺上，再將兔頭固定器固定。然后將兩前肢放平直，把兩前肢的系帶從背部交叉穿過，使對側的布帶壓住本側的前肢，將四肢分別

17、系在兔臺的木樁上。練習耳緣靜脈注射。2，家兔頸部手術、股動脈分離及插管：家兔稱重固定于兔臺后，剪去其頸部兔毛，在取5.0-7.0ml1%普魯卡因皮下浸潤麻醉，沿頸正中切開頸部皮膚約10.0cm，分離皮下筋膜組織，可見三塊肌肉：即頸正中的胸骨舌骨肌，兩側的胸鎖乳突肌。在胸鎖乳突肌外緣與皮瓣交界處是頸外靜脈，鈍性分離光滑一側頸外靜脈，在下面穿兩條線，結扎頸外靜脈遠心端，在近心端靠近結扎處剪一小口插入靜脈導管（靜脈導管連接靜脈輸液裝置，注意排除管道的氣體），結扎固定，打開靜脈輸液裝置的螺旋夾，如果輸液暢通時，即調整螺旋夾使液體維持5-10滴/分鐘以保持插管通暢。分離開胸骨舌骨肌，其下方是氣管，分離并

18、“倒T型”切開氣管，插入氣管插管及結扎。準備描計呼吸。在氣管的左右后方，各有一條與交感神經、迷走神經伴行的頸動脈，分離頸動脈并穿線兩條，結扎頸動脈遠心端，用動脈夾夾住近心端，在近心端靠近結扎處剪一小口插入動脈導管（動脈導管內充含肝素的生理鹽水，并與血壓計相連，血壓計壓力140mmHg左右），結扎并固定導管，松開動脈夾可測量血壓。剪去一側腹股溝兔毛，觸摸股動脈搏動以確定其位置，在1.0%普魯卡因皮下浸潤麻醉下，沿股動脈走行方向切開皮膚，分離皮下組織，在股動脈隱窩處找出并小心分離出股動脈，穿線兩條，結扎股動脈遠心端，用動脈夾夾住近心端，在近心端靠近結扎處剪一小口插入動脈導管（動脈導管與50mL注射

19、器相連，并用肝素抗凝），結扎并固定導管，松開動脈夾可放血。（二） 大白鼠的捉拿和固定 大白鼠牙齒鋒利，要提防被其咬傷，從鼠籠內捉拿時右手最好帶手套，捉住其尾巴，提出置于實驗臺上，以左手拇指和食指、中指抓住兩耳后項背部皮膚，將鼠固定在左手掌中，右手進行操作，也可伸開左手之虎口，敏捷地從背部插向腋下，使食指位于左前肢前，拇指、中指位于左前肢之后，一把抓住，右手進行操作，如操作時間較長，可參照家兔固定方法將其固定在大白鼠固定板上。（三） 小鼠的捕捉和固定 小鼠較大白鼠溫和，雖也要提防被其咬傷手指，但勿需帶手套捕捉。可先用右手抓住鼠尾提起，置于鼠籠或實驗臺上，用左手的拇指和食指抓住小鼠兩耳后項背部皮膚

20、，將鼠體置于左手心中，拉直后肢，以無名指及小指按住鼠尾。同時右手可手持注射器作小鼠腹腔等注射。 （汪思應）實驗二 實驗性肺水腫目的要求1. 復制實驗性肺水腫2. 結合理論掌握肺水腫的表現及其發生機理實驗原理 大劑量快速輸液導致兔肺毛細血管流體靜壓升高，肺組織液生成大于回流，引起肺水腫的發生。實驗動物家兔，體重2.5 kg。藥品及器材1.0%普魯卡因，腎上腺素,生理鹽水（0.9%NaCl）,常規小動物實驗用器材。步驟及觀察一 實驗組1. 取兔一只，稱體重后仰臥固定于兔臺上、剪去頸部被毛，在1%普魯卡因局麻下切開頸部皮膚，按常規操作，分離氣管和一側頸外靜脈，在下面穿一線。切開氣管，插入氣管插管。準

21、備描計呼吸。把靜脈導管連接靜脈輸液裝置，注意排除管道的氣體。結扎頸外靜脈遠心端，在近心端靠近結扎處剪一小口插入靜脈導管，結扎固定，打開靜脈輸液裝置的螺旋夾，如果輸液暢通時，即擰緊螺旋夾。2. 描計一般正常呼吸，并用聽診器聽肺的呼吸音，然后輸入37生理鹽水（輸入總量按100-120ml/kg,輸記速度為180-200滴/分）待滴注將近完畢立即從輸液瓶中加入稀釋腎上腺素生理鹽水（按腎上腺素0.45mg/kg體重）。3. 密切觀察呼吸改變和氣管插管是否有粉紅色泡沫液體流出，并用聽診器聽診肺部有無濕性羅音出現，當證明肺水腫出現時，則夾住氣管，處死動物，打開胸腔，用線在氣管分叉處結扎（防止肺水腫液流出）

22、在結扎處上方切斷氣管，小心把心臟及其血管分開，（勿損傷肺）把肺取出，用濾紙吸去肺表面的水分后稱取肺重，計算肺系數，用排水法測肺體積。然后肉眼觀察肺大體的改變，并切開肺，觀察肺水腫和正常肺組織切片。 肺系數=肺重（克）/兔體重（千克） 正常肺系數4.0-5.0二 對照組 與實驗組基本相同，除不加腎上腺素外。 注意事項1. 實驗兔和對照兔的輸記速度應基本一致，輸液不要太快，以控制在180-200滴/分為宜。2. 解剖取出肺時，注意勿損傷肺表面和擠壓肺組織，以防止水腫液流出，影響肺的數值。 （鄭紅、汪思應）參考實驗一 兔小腸灌溉的水腫模型復制實驗目的1 學會小腸灌溉標本的制作。2 了解毛細血管壓，膠

23、體滲透壓，晶體滲透壓在水腫發生中的作用。實驗目的 利用血管機械阻斷與否，使局部組織液生成增加或減少。藥品和器材 生理鹽水（0.9%NaCl），10.0%NaCl、0.1%肝素、普魯卡因。小動物手術器械一套（每套大號止血鉗各兩把，中號采止血鉗兩把，彎直小號止血鉗各兩把，有齒鑷各一把，眼科剪和鑷各一把，組織剪和粗剪各一把，手術刀片的刀柄一副）、粗細縫線各一卷，2ml和5 ml和30 ml注射器（第6號針頭），標本架（彈簧夾）一個，搪瓷碗（25 ml）和搪瓷方盤各一個。實驗動物 家兔，體重2.5 kg。實驗步驟（一） 兔小腸灌流標本的制作1. 取家兔一只，稱重后背位固定于兔板，1%普魯卡因局部麻醉后

24、，自劍突下2.0cm做腹部正中切口約8.0cm，打開腹腔，用溫鹽水紗布覆蓋切口及周圍皮毛。2. 在左腹側腔將小腸輕輕牽出，并一側（使動脈位于靜脈之上）。找到腸系膜前動、靜脈（相當于人的腸系膜上A、V），管徑較細，色紅且有搏動的一根為動脈，另一根為靜脈。3. 在靠近腸系膜前動脈的根部用小彎止血鉗分離動脈約1.5 cm，分離時注意不要損傷動脈的分支。然后穿兩根細線備用。4. 自耳緣靜脈注射0.1%肝素1.0 ml/kg，1-2分鐘后結扎腸系膜前動脈的近心端，向遠心方向插入細塑料管約1.0cm。扎牢后，將此線在細塑料管上再做一次結扎以防脫落。5. 于動脈插管結扎線下第一根動脈分支的上方，動脈和靜脈之

25、間穿一根粗線將腸管和靜脈一并結扎，然后在第一根分支的上方再穿一線將腸管單獨結扎，并從兩扎線間將腸管和靜脈切斷。注意標本側的靜脈是游離的，其內的液體可以自由流出。6. 自扎線處開始向下排空小腸約25.0 cm，在小腸20.0 cm和離動脈插管5 .0cm的血管處穿兩根粗線，將腸管和血管一并結扎兩次，然后在兩結扎線間剪斷，最后沿圖中虛線所示游離標本。7. 將標本懸掛在標本架上，在腸游離緣上支腸長垂直剪3-4個小口，以腸腔內容物能流出為度。8. 以5 ml注射器吸取生理鹽水，經動脈插管沖去血管中的血液，該標本即可用于灌溉。（二） 灌流裝置的準備。（三） 灌流: 0.9%NaCl; 中分子右旋糖苷灌流

26、, 25 cm水柱壓力加壓灌流; 0.9%NaCl灌流;10.0% NaCl灌流;100 cm水柱壓力加壓灌流。結果與討論 （鄭紅、汪思應）實驗三 缺 氧實驗目的：1， 在動物身上復制缺氧性、血液性等缺氧模型；2， 并觀察缺氧動物呼吸，活動狀態、皮膚及內臟顏色的變化，分析不同類 型缺氧的發病機理；3， 觀察麻醉、年齡等因素對缺氧耐受性的影響。實驗原理： 人為制造小白鼠處于密閉環境，由于不斷用氧，使其吸入氣體氧分壓下降，復制小鼠低張性缺氧動物模型，腹腔注射亞硝酸鹽、吸如CO復制小鼠等張性缺氧動物模型。實驗動物：小白鼠（18-22g,雌性或雄性）。藥品器材：碳酸氫鈉、甲酸、濃硫酸、5%亞硝酸鈉、1

27、%美蘭、10%烏拉坦，0.1%氰化鉀、生理鹽水、凡士林、25 ml廣口瓶、一氧化碳發生裝置、手術剪刀、鑷子、30 ml、5 ml及1 ml注射器、氧氣袋。1. 低張性低氧血癥：取體重相似，性別相同的小白鼠三只分別裝入三個廣口瓶內，觀察小白鼠正常活動情況，呼吸頻率（次/10秒），深度、皮膚和口唇的顏色，然后塞緊瓶塞，記錄時間，以后每三分鐘重復觀察上述指標一次（如有其他變化則隨時記錄）直到動物死亡為止。動物尸體在實驗做完后，依次打開腹腔，比較血液或肝臟顏色。2，麻醉對機體耐受缺氧的影響：體重相近的小白鼠兩只，其中一只腹腔內注入10.0%烏拉坦0.1ml/10g。分別放在廣口瓶中，塞緊瓶塞后，開始記

28、時。以下步驟同實驗1。3，年齡對機體耐受缺氧的影響：取1只成年鼠和一只新生紅皮鼠，同放在一個廣口瓶（紅皮小鼠放入一小青霉素瓶中）蓋緊瓶塞，觀察小鼠活動等情況，記錄生存時間。4，亞硝酸的中毒缺氧：取體重相近小鼠3只，甲鼠腹腔內注射5.0%亞硝酸鈉0.2 ml，乙鼠在注射亞硝酸鈉后（同劑量），再注射1%美蘭0.2 ml，丙鼠腹腔內注射生理鹽水0.2 ml對照。觀察各鼠呼吸、皮膚顏色和全身活動，存活時間。5，一氧化碳中毒缺氧：取小鼠兩只，觀察正常活動，口唇、鼻、尾部皮膚顏色，呼吸頻率。取1只小鼠放入250 ml廣口瓶內，用注射器抽10 ml一氧化碳注入瓶內，立即蓋上瓶蓋，注意動物行為狀態和皮膚顏色變

29、化，呼吸頻率。待小鼠痙攣跌倒時，迅速打開瓶蓋，取出小鼠并進行通氧等急救措施，觀察恢復情況；另一只小鼠重復CO中毒實驗，但不進行搶救，死后進行解剖，觀察皮膚、內臟和血液的顏色。 6，請自己設計一實驗，觀察環境溫度對小鼠缺氧耐受性的影響（附于實驗報告中）。（汪思應、鄭紅）參考實驗二 再吸入式缺氧實驗目的：1 在動物身上復制乏氧性缺氧模型；2 并觀察缺氧動物血氧指標變化，分析不同類型缺氧的發病機理；實驗原理： 人為制造家兔處于密閉環境，使其吸入氣體氧分壓下降，復制家兔低張性缺氧動物模型，并觀測血氧指標的變化。實驗動物：家兔，體重2.5 kg。藥品器材：生理鹽水（0.9%NaCl），20.0%NaOH

30、、0.1%肝素、普魯卡因。小動物手術器械一套（每套大號止血鉗各兩把，中號采止血鉗兩把，彎直小號止血鉗各兩把，有齒鑷各一把，眼科剪和鑷各一把，組織剪和粗剪各一把，手術刀片的刀柄一副）、粗細縫線各一卷，2ml和5 ml和30 ml注射器（第6號針頭），標本架（彈簧夾）一個，搪瓷碗（25 ml）和搪瓷方盤各一個，氧氣袋，血壓計，血紅素測定裝置等。實驗步驟：1， 稱重后背位固定于兔臺上，手術部位去毛。2， 1%普魯卡因局麻下，切開頸部正中皮膚約5-8 cm，分離氣管并作氣管插管，于氣管兩側分離頸總A穿線備用。3， 局麻下，切開腹股溝部皮膚，分離一側股動脈，穿線備用。4， 耳緣V注入肝素2.0ml/kg

31、(500u/ml),使全身肝素化。5， 側頸總A做動脈插管結扎固定并與血壓描計相連。氣管插管與呼吸描計相連，股A內插入通針頭的細塑料管，結扎備用。6， 描計正常呼吸曲線（包括血壓曲線）。以另一側頸總A行夾閉反射。7， 自股A放血數滴于表面器皿上測動物HB含量。8，用吸管吸取20.0%NaOH10-20 ml于再吸入式缺氧瓶內，塞緊瓶塞。將瓶之A端與氣管插管之側管相連，使兔的呼吸只能與缺氧瓶水柱壓記相通，立即記錄開始缺氧時間，缺氧過程中，不斷搖動缺氧瓶，使兔呼出氣之CO2充分為NaOH所吸收。9， 意動物血壓及呼吸變化，當血壓降至原水平1/2時，立即自股動脈采血（開始幾滴血液棄去），測定HB含量

32、，并行頸A夾閉反射。10， 血壓降至20mmHg時，停止缺氧，觀察其恢復情況改良沙利氏血色素測定法 于血色素稀釋管內加1%鹽酸至10.0%刻度處。 用血紅蛋白吸管于表面皿內吸血至20立方毫米刻度處，用脫脂棉擦去管口周圍的血液。 將吸管迅速浸入稀釋管中的鹽酸內，輕輕將管內血液吹出，反復吸入上部之鹽酸將吸管的血洗凈，將稀釋管插入血色素比色架內，靜止10分鐘。 10分鐘后于比色管內緩慢加入蒸餾水稀釋，邊加邊混勻，當管內顏色接近于標準比色柱時，加水的速度要慢。 當管內顏色與標準比色柱一致時，從管壁刻度記下讀數，即為100ml血壓所含血紅蛋白的克數。（鄭紅、汪思應）參考實驗三 鉀代謝障礙目的要求1. 觀

33、察高血鉀對心臟的毒性作用2. 了解和掌握高血鉀心電圖改變的特征。實驗原理腹腔或靜脈注射鉀，造成動物血清鉀增高。實驗動物鼠(SD或Wister, 250.0g) 或家兔(體重2.5 kg)。藥品與器材20.0%烏拉坦溶液、2.0%、5.0%、10.0%氯化鉀溶液。5ml注射器、小兒頭皮針、手術剪、心電圖機或二導生理記錄儀。實驗步驟與觀察1. 鼠高血鉀（1）動物稱重、仰臥固定，用20.0%烏拉坦0.5ml/100g體重腹腔注射麻醉。（2）在心電圖機原有的電極檢緊包鋁皮，套上6號注射針頭（勿松動）。然后將電極分別入四肢踝部皮下，導線按右前肢（紅），左前肢（黃）、右后肢（黑）、左后肢（綠）順序。（如用

34、生理二導記錄儀，則按二導儀導線聯后方式連接）。（3）記錄一段正常心電圖，紙長以每實驗小組內每人分到4-5個園形為度。（4）由腹腔推入5.0%氯化鉀1.0 ml，注射后5分鐘記錄一次心電圖變化。（或注射2.0%氯化鉀2.0 ml）（5）從首次推注氯化鉀起，每5分鐘再注射5.0%氯化鉀0.5 ml。每次注后5分鐘記錄一次心電圖改變（有可能要隨時記錄）發生室顫時，立即開胸觀察心跳狀態。2. 兔高血鉀（1）稱重后仰臥固定，可不麻醉，若躁動可用20.0%烏拉坦5.0 ml/kg耳緣靜脈麻醉。（2）局麻下由胸壁正中線切開皮膚，切口約4-5厘米，分離左側胸壁肌肉，用粗剪刀在靠近胸骨緣處剪斷第二及第三肋骨，用

35、擴胸器撐開胸腔切口，暴露心臟。（3）連接心電圖導線，按右前肢（紅）、左前肢（黃）、右后肢（黑）、左后肢（綠）順序。（4）記錄一段正常心電圖。（或二導儀）（5）用小兒頭皮針插入耳緣靜脈，并用膠布固定，經耳緣靜脈推注2.0%氯化鉀1.0 ml/ kg 1分鐘注完，注射后5分鐘記錄一次心電圖或二導儀的變化。（6）以后每5分鐘由耳緣靜脈注入2.0%氯化鉀2 ml，間斷記錄心電變化，若在30分鐘仍未出現室顫，可由耳緣靜脈緩慢注入10%氯化鉀，并觀察心電變化情況，直至家兔心臟停博。注意事項1.腹腔注射氯化鉀，應選擇下腹部前1/4處，以避免將溶液注入膀胱內。2.盡可能避免導線縱橫交錯，動物固定臺上保持干燥，

36、每次使用針形電極時要用酒精或鹽水擦凈，以保持良好的導電狀態。（鄭紅、汪思應）實驗四 失血性休克實驗目的1， 復制失血性休克的動物模型；檢測休克時部分體液因子的變化；2， 通過比較擴血管藥和縮血管藥對失血性休克的療效，分析休克發生機制。實驗原理 用控制性動脈放血造成家兔急性失血，復制失血性休克的動物模型。實驗動物家兔，體重2.5 kg。藥品和器材動物手術器械一套，呼吸血壓描記裝置，靜脈輸液裝置一套，三通開關，50 ml、20 ml、10 ml注射器各一個，肝素（500/ ml），1%普魯卡因，生理鹽水，低分子右旋糖苷，山莨菪堿，去甲腎上腺素。實驗方法和步驟1.家兔一只稱重，麻醉，剪去頸部、股部兔

37、毛。2.1%普魯卡因局麻下頸部正中切開皮膚，分離氣管，分離左側頸動脈及右側頸靜脈，穿線備用，分離一側股動脈穿線備用。3.耳緣靜脈注入肝素（2.0 ml/kg）4.作氣管插管；頸靜脈插管連接中心靜脈壓裝置；頸動脈插管（內有含肝素的生理鹽水）并連接血壓描記裝置；股動脈插入帶有三通開關的乳膠管備用。5.劍突下2.0cm處于腹正中線切開皮膚4.0-5.0 cm，將腹白線輕輕拖起，切開腹白線，注意止血，用手輕輕將一段二十指腸和系膜拉出腹前用溫生理鹽水紗布包裹，然后將家兔向左側位固定，把腸系膜放在置于微循環裝置的觀察孔上，用大頭針固定，用顯微鏡直接觀察血前后的腸系膜毛細血管的血流狀況。6.打開連接股動脈的

38、三通開關，一次快速放血于50 ml注射器內，待血壓降到40mmHg水平，取血4.0ml備用。維持血壓40mmHg30分鐘，每隔10分鐘取血4.0ml，分別檢測休克不同時間TNF，MDF，兒茶酚胺等的水平。1. 休克搶救實驗分組（1） 對照組：動脈血壓降至40mmHg后維持1小時，然后將放出的血自頸靜脈全部快速點滴輸回，必要時加低分子右旋糖苷30.0 ml，觀察輸液過程中各項指標變化。（呼吸、血壓）（2） 去甲腎上腺素組：放血后血壓降至40 mmHg后，維持30分鐘，然后自頸靜脈緩慢滴入去甲腎上腺素生理鹽水25.0 ml（含去甲腎上腺素1.0mg），在20-30分鐘內滴完，將放出的血快速自頸靜脈

39、輸回，觀察20分鐘，觀察各項指標。（3） 654-2組：在動脈血壓降至于40 mmHg30分鐘后，自頸靜脈緩慢滴入654-2生理鹽水25.0 ml（含654-2 2.0mg）于30分鐘內滴完，再將放出的血自頸靜脈快速回，必要時加低分子右旋糖苷，觀察20分鐘各項指標。分析各組實驗結果討論：失血性休克過程中，微循環變化特點。（鄭紅、汪思應）實驗五 喜樹堿誘導K562細胞凋亡實驗目的：1， 初步掌握檢測細胞凋亡（Apoptosis）這一特殊的細胞生命活動現象；2， 結合理論討論細胞凋亡與疾病的關系。實驗原理：喜樹堿（camptothecin）是一種抗腫瘤藥物，研究發現其可以誘導多種腫瘤細胞發生凋亡。

40、本實驗用含一定量喜樹堿的培養液培養K562細胞，誘導培養3小時后，提取K562細胞的DNA，用凝膠電泳法分析其是否發生凋亡，并用正常及壞死的K562細胞DNA作對照。實驗器材：100mA電泳儀，電泳槽，紫外觀察儀，高速離心機， OLYPMUS顯微鏡，水浴箱，K562細胞，喜樹堿，瓊脂糖，溴化乙錠， 1.0mg/ml蛋白酶K， 10.0mMEDTA，NP40，0.1MPBS(PH7.5)，RNase ， 1×TBE緩沖液，上樣緩沖液， TE緩沖液,DL2000 Marker.實驗步驟：1. 取指數生長期的K562細胞2.0×106個，用含喜樹堿的培養液培養3小時(對照組不加喜

41、樹堿)，取少許細胞滴片，染色后高倍鏡觀察；用含2.0mMEDTA 、PH7.5的PBS離心洗兩遍（1200rpm），棄上清，。2. 加400.0l TBE（臨用時加0.25%NP40），10.0l RNase至1.0mg/ml，37，30分鐘。3. 加蛋白酶K（1.0mg/ml）10.0l，37，30分鐘。14000rpm，4離心15分鐘，收集上清（-70）。4. 取上清50.0l，加上樣緩沖液5.0l，1.5%瓊脂糖凝膠電泳30分鐘，紫外線透視儀下觀察，凋亡細胞出現DNA Ladder，DNA多為100-300bp。5. 下圖為示教結果：0.1Kb0.2Kb0.75Kb0.4Kb2.0Kb1

42、.0Kb（汪思應）實驗六 急性右心衰竭實驗目的1. 復制急性右心衰竭動物模型；2. 觀察急性右心衰竭時血液動力學的主要改變。實驗目的 利用液體石臘阻塞兔大部分肺毛細血管，造成右心后負荷增加；大劑量快速輸液增加右心前負荷，誘發家兔急性右心衰。實驗動物家兔，體重2.5 kg。藥品和器材3.0%戊巴比妥鈉溶液；1.0%普魯卡因溶液；3.0%肝素溶液、液體石蠟、山梗菜堿。手術器械一套：1 ml、5 ml、10 ml注射器；中心靜脈壓測量裝置、輸液裝置、二導儀、秒表實驗步驟1. 家兔稱重，仰臥固定。2. 頸部正中皮下注射1.0%普魯卡因局部麻醉，作頸部正中切口，游離出兩側頸外靜脈和一側頸總動脈。3. 由

43、耳緣靜脈注入3.0%肝素液（2.0 ml/kg），經右側頸外靜脈插入中心靜脈壓導管；測量中心靜脈壓，經左側頸外靜脈插管連接輸液裝置，經頸總動脈插管連接二導儀描記血壓，劍突下皮下穿大頭針一只，連接二導儀記錄呼吸。4. 測量實驗前各種指標動脈血壓：呼吸；中心靜脈壓；循環時間側記。（自耳緣靜脈快速注入0.3% 山梗菜堿1.0ml，計由注入至出現呼吸變深變快的時間）。5. 實驗過程（1） 實驗前各項指標觀察完畢，即用1 ml注射器，由耳緣靜脈注入液體石蠟（0.5 ml/kg），注射速度要慢（注射到血壓下降到70mmHg為度），10分鐘后再觀察上述指標有何變化。（2） 待動物血壓、呼吸穩定后，加快輸液速

44、度（180-200滴/分）快速輸入生理鹽水后，再重復上述指標測定。（3） 待動物死之后，剖開胸、腹腔，觀察有無腹水及其量，腸壁有無水腫，肝臟體積、心臟體積有無胸水，肺臟外觀及切面變化，最后剪破靜脈，放出血液，注意肝臟和心臟體積變化。（鄭紅、汪思應）機能綜合實驗三、急性中毒性腎功能不全【實驗目的】（1）觀測正常家兔尿量及ADH對尿量的影響；（2）急性中毒性腎功能不全的動物模型；（3）觀察比較急性腎功能不全與正常動物血氣、酸堿、血清鉀及尿的變化，分析其發生機制；（4）運用相關藥物對急性腎功能進行初步治療。【實驗原理】采用腎毒物重金屬HgCl2溶液造成家兔急性腎小管壞死，復制急性腎功能不全的動物模型

45、，通過觀察動物的血氣、酸堿、血尿素氮（BUN）、血清鉀及尿的變化，學習急性腎衰時內環境的變化。【實驗動物】家兔3只，體重2.5 kg。【實驗藥品與器材】1.0% HgCl2溶液，3.0%戊巴比妥鈉溶液或20.0%氨基甲酸乙醇溶液，1.0%普魯卡因溶液，生理鹽水，1.0%肝素生理鹽水溶液；兔臺，手術器械，1 ml和5 ml注射器，試管，滴管，漏斗，吸管，試管夾，酒精燈，試管架，頸動脈插管，血氣分析儀，生化分析儀，離心機，光電比色儀，水浴鍋。【觀察指標】全血 血氣分析儀測定pH值、PaCO2、HCO3-、K+、Na+和Cl- 。血清 生化分析儀測定BUN。尿 尿量、尿蛋白定性和鏡檢。腎 大體、剖面

46、。【實驗方法與步驟】（1）取家兔三只，一只為正常對照（A），一只為中毒實驗兔（B），另一只為ADH處理兔（C）。于實驗前一天稱重后，實驗兔皮下或肌內注射1.0% HgCl2（按1.51.7 ml/kg，一次注射），造成急性中毒性腎功能不全模型，C兔注射ADH對照兔則在相同部位注射同量的生理鹽水，作為對照。將三只兔籠分別置于大漏斗上，收集尿液，測量24 h尿量。（2）實驗開始，家兔稱重后，20.0%氨基甲酸乙酯溶液（0.51.0 g/kg體重）或3.0%戊巴比妥鈉（30.0 mg/kg體重）耳緣靜脈注入麻醉后，仰臥固定于兔臺。下腹部剪毛，在恥骨聯合上2.0± cm處做長約5.0 cm的

47、正中切口，分離皮下組織，沿腹白線切開腹膜，暴露膀胱，插管取出全部尿液，供尿蛋白定性和尿液鏡檢。（3）頸部正中切口，分離一側頸總動脈，頸動脈插管內注入肝素生理鹽水溶液，進行頸動脈插管。（4）抽取0.5 ml動脈血做血氣分析，取3.0 ml動脈血（滴入肝素數滴后）離心（1500 r/min, 510 min）,取血清供BUN測定用。（5）尿常規檢查。1）將尿液1500 r/min離心510 min。2）顯微鏡檢查 取尿沉渣，涂在玻片上，觀察有無異常成分（細胞和管型）。3）尿蛋白定性檢查 取大試管盛尿液，傾斜試管于酒精燈上，將試管中的尿加熱至沸騰，觀察有無混濁，加數滴醋酸，再加熱至沸騰，混濁不退為蛋

48、白陽性，按其混濁程度以-、+、+、+、+表示之。“-”表示尿液清晰無混濁“+”表示尿液出現輕度白色混濁（含蛋白0.10.5 g/L）“+”表示尿液稀薄乳樣混濁（含蛋白質0.52.0 g/L）“+”表示尿液乳濁或有少量絮片存在（含蛋白2.05.0 g/L）“+”表示尿液出現絮狀混濁（含蛋白質>5.0 g/L）如加醋酸后混濁消失，是因加醋酸可除去磷酸鹽或碳酸鹽所形成的白色混濁。（6）血清BUN的測定。取三只試管分別標號后按下表操作：試劑（ml） 1(空白管) 2（標準管） 3（樣品管）BUN試劑 5.0 5.0 5.0二乙酰單肟試劑 5.0 5.0 5.0蒸餾水 0.1尿素標準液 0.115

49、稀釋的血清 0.1將上述各管充分搖勻，置沸水浴中加熱15 min，用自來水冷卻3 min，在540 nm波長下比色，記錄標準管的光密度讀數（D標）及樣品管的光密度讀數（D樣）。計算每100 ml血清中BUN的含量（mg）=（D樣/D標）×0.002×(5×100/0.1)/0.1=（D樣/D標）×10=血清BUN（mg%） (12-1)原理：血清尿素在強酸條件下與二乙酰單肟和氨硫脲煮沸，生成紅色復合物（二嗪衍生物）（7）藥物處理（8）形態學觀察1）將對照及中毒家兔一并處死，取出腎臟，稱重，計算腎重與體重之比。 2）觀察并比較3只家兔腎臟的大體形態、顏色、

50、光澤、條紋等。3）組織切片示教：于顯微鏡下觀察皮質腎小管上皮有無明顯的變化、壞死、脫落；管腔有無蛋白、紅細胞、管型等。【實驗結果與分析】將實驗結果填入下表。 實驗結果全 血 血 清 尿 腎 PH值PaCO2HCO-3N+Na+K+ BUN尿量蛋白鏡檢解剖大體ABC【思考題】（1）根據什么判斷急性腎功能不全模型復制成功？（2）各指標變化的機制是什么？附錄 血清BUN測定試劑的配制（1）2.0%二乙酰單肟試劑 稱取二乙酰單肟2 .0g，蒸餾水溶解并加至100.0 ml。（2）BUN試劑 取濃H2SO4 44 .0ml, 85.0% H3PO4 66.0 ml, 溶于100.0 ml蒸餾水中，冷至室

51、溫依次加硫氨脲50.0 mg，溶解后再加硫酸鎘1620.0g（3CdSO4·8H2O）或2.0 g(3CdSO4·6H2O),溶解后加蒸餾水至1.0L，存冰箱，可保存6月。（3）BUN標準儲備液（20.0 mg %） 精確稱取尿素42.8 mg，溶于50 ml蒸餾水中加氯仿6滴，再用蒸餾水稀釋至100.0 ml，可儲存冰箱6個月。（4）BUN標準液（每毫升含20.0微克） 取上述BUN標準儲備液100.0 ml，加蒸餾水至1000.0 ml。參考實驗四 急性左心衰竭實驗目的1. 復制急性左心衰的動物模型。2. 觀察心肌梗塞前、后的心率高低以及血液動力學的改變。實驗原理運用冠

52、狀動脈結扎術，結扎家兔冠狀動脈左室支，造成急性心肌梗塞，誘發急性左心衰。實驗動物家兔藥品和器材3.0%戊巴比妥鈉溶液、1.0%普魯卡因溶液、3.0%肝素溶液、碳素墨水。手術器械一套、小拉鉤一付、2ml、5ml、10ml注射器，固定支架、大木夾、大頭針、二導儀。實驗步驟1. 稱重、麻醉，按30.0mg/kg由家兔耳緣靜脈注入3.0%戊巴比妥鈉，仰臥固定。2. 在1%普魯卡因局部麻醉下，作頸部正中切口，分離出兩側頸總動脈。3. 胸部局部麻醉后，沿胸骨中線自胸節平線到劍突上切開皮膚，暴露胸骨和肋軟骨，分離胸肌，沿胸骨左緣在肋軟骨部位切斷第2-4肋骨，用小拉鉤輕輕撐開胸腔切口，即可見心包及搏動的心臟，

53、提起并剪開心包，充分暴露心臟和外主動脈。4. 用濕紗布包裹手指，將心臟略向右旋，暴露左心耳和左室大部，在左心耳下緣仔細找出冠狀動脈左室支的行走位置，用細園針（0號線）在左心耳下緣0.5cm處繞左室縫穿一線，暫不結扎。5. 從耳緣靜脈注入3.0%肝素液（2.0mg/kg），經左側頸動脈插管，描記動脈血壓，于劍突部位皮下穿一大頭針，連接二導儀描記呼吸。6. 經右側頸動脈插入充滿3.0%肝素液的左心室導管，經傳感器和二道儀記錄左室內壓，插管時邊插邊觀察壓力曲線，等出現左室內壓力曲線時表示已插入左室、插入導管約8.0cm左右，固定導管。7. 觀察指標：心率、動脈血壓、呼吸和強度、左心室內壓。8. 實驗過程：手術完成后，記錄麻醉安靜下指標數值。結扎冠狀動脈左室支前，觀察各項指標變化，每隔2分鐘記錄一次，結扎左室30分鐘后，若仍無心律紊亂發生，可在頸部位結扎或再于室間溝處結扎前降枝。動物死之后，觀察心臟各部位體積高低，剪下心、肺，在離主動脈走始部位1.5cm處，剪斷主動脈，插入塑料管，將動脈壁和塑料管壁結扎，并從左房根部結扎左房，由塑料管向外主動脈注入碳素墨水2.0ml，邊觀察心室壁墨染范圍，估測未墨染面積約占左室游離壁面積百分比。（鄭紅、汪思應）病 例 討 論 一患者男性，52歲。十年前因上腹部不適，伴