1、【精品文檔】如有侵權，請聯系網站刪除，僅供學習與交流實驗二 凱氏定氮法測定牛奶中蛋白質的含量.精品文檔.實驗二 凱氏定氮法測定牛奶中蛋白質的含量一、實驗目的與要求1. 掌握半微量凱氏定氮法的原理。2. 熟悉利用半微量凱氏定氮法測定干酵母片中蛋白質含量的操作方法。二、實驗原理蛋白質是含一定量氮的有機化合物，蛋白質樣品在凱氏燒瓶中經過濃H2SO4消化后，有機物炭化生成碳，碳將硫酸還原為SO2，本身則變成CO2，SO2使N還原為NH3，本身則氧化為S2O3而消化過程中生成H2，又加速了NH3的形成。在反應過程中，生成的H2O和S2O3溢出，而NH3則與H2SO4結合成（NH4）2SO4存在溶液中，加

2、入NaOH并蒸餾，使NH3溢出，用H3PO3吸收后，以標準酸溶液滴定，根據標準酸溶液消耗的量計算樣品中的含氮量，從而可以折算出蛋白質含量。三、實驗材料、試劑與儀器1. 材料與試劑濃H2SO4、K2SO4、CuSO4·5H2O、NaOH、HCl、H3PO4、甲基紅、乙醇、溴甲酚綠、牛奶、定量濾紙等。40 %NaOH 溶液：40 g NaOH 溶于100 mL水中；0.05 mol/LHCl標準液：4.2 mL HCl 溶于1000 mL 水中，碳酸鈉法標定鹽酸；2 % H3BO3溶液：H3BO3 2 mL 溶于100 mL 水中；加速劑：K2SO4 150 g ，CuSO4·

3、5H2O 10 g 仔細混勻研磨。 甲基紅溴甲酚綠混合指示劑：甲基紅溶于乙醇配成0.1 % 乙醇溶液，溴甲酚綠溶于乙醇配成0.5 % 乙醇溶液，兩種溶液等體積混合，陰涼處保存（保存期三個月以內）。2. 儀器消化管、小漏斗、研缽、玻璃珠、酸式滴定管、錐形瓶、天平、凱氏定氮儀等。四、實驗方法與步驟1. 樣品消化1）牛奶5 mL置于消化管內，加入加速劑5 g，并沿燒瓶壁緩緩加入20 mL濃硫酸，加入玻璃珠23粒，搖動燒瓶使全部樣品浸沒于硫酸。2）消化管放在消化爐支架上，套上毒氣罩，壓下毒氣罩鎖住二面拉鉤。3）把支架連同裝有試樣的消化管一起移至電熱爐上保持消化管在電爐中心，設定溫度在420 保持消化管

4、中液體連續沸騰，沸酸在瓶頸部下冷凝回流。待溶液消煮至無微小碳粒、呈藍綠色時繼續消煮5 min左右。4）消化結束，將支架連同消化管一同移回消化管托底上，冷卻至室溫。注意，在冷卻過程中，毒氣罩必須保持吸氣狀態（切忌放入冷水中冷卻）放置，防止廢氣溢出。2. 樣品蒸餾 1）打開自來水給水龍頭，使自來水經過給水口進入冷凝管。注意水流量以保證冷凝管起到冷卻作用為止。2）開總電源開關，待紅色指示燈亮起，按一下汽按鈕待蒸汽導出管放出蒸汽，按消除按鈕停止加熱。3）在蒸餾導出管托架上，放上已經加入適量（15 mL左右）的接受液（硼酸和混合指示劑）的錐形瓶。抬起錐形瓶支架使蒸餾導出管的末端浸入接受液內。4）在消化完

5、全冷卻后的消化管內，逐個加入10 mL左右蒸餾水稀釋樣品。5）向下壓左側手柄，將消化管套在防濺管密封圈上，稍加旋轉使其保持接口密封，拉下防護罩。6）按一下蒸汽按鈕，開始蒸餾，到時或到量時自動停止。用洗瓶將蒸餾水沖洗接收，取下錐形瓶。7）加堿：按一下堿按鈕，NaOH溶液量必須至蒸餾液堿性顏色變黑為止。3. 滴定與計算 吸收氨后的吸收液，用標定后的鹽酸溶液進行滴定，溶液由藍綠色變為灰紫色為滴定終點。粗蛋白質%=式中：V2樣品時消耗酸標準溶液的體積，mL； V1滴定空白時消耗酸標準溶液的體積，mL；V試樣消解液蒸餾用體積，mL；V樣品分解液總體積，mL；C酸標準溶液濃度，mol/L；K氮換算成粗蛋白質的系數，牛奶為 ；W樣品質量，g；0.0140氮的毫克當量數。五