1、. 天然藥物化學研究的經(jīng)典方法天然藥物化學研究的經(jīng)典方法.有效成分研究的一般途徑有效成分研究的一般途徑確定研究對象調 查 研 究成 分 預 試成分提取分離活性成分篩選結 構 測 定臨床試驗（期） 類類 新新 藥藥臨床調查藥材調查文獻查閱活性部位活性成分結構改造人工合成期臨床藥效學研究毒理學研究藥代動力學研究類新藥類新藥.提取方法提取方法 1 溶劑提取法溶劑提取法2 水蒸汽蒸餾法水蒸汽蒸餾法3 其他方法：升華法，壓榨法，其他方法：升華法，壓榨法，吸收法，酶提取法吸收法，酶提取法.分離方法一、溶劑法一、溶劑法1 固固-液溶劑分離法液溶劑分離法：部位分離2. 兩相溶劑萃取法兩相溶劑萃取法（1）簡單萃

2、取法）簡單萃取法被萃取液的準備：水懸濁液密度為1.1-1.2之間萃取劑的選擇及其用量，次數(shù)乳化及其破壞方法（2）逆流連續(xù)萃取法）逆流連續(xù)萃取法萃取效率高，溶劑用量少，不乳化，可工業(yè)化。（3） 液滴逆流分配法液滴逆流分配法適用于分離同分異構體或同系物及多肽，蛋白質等高分子化合物，熱不穩(wěn)定化合物。.二.沉淀法 1、溶劑沉淀法（分級沉淀法）、溶劑沉淀法（分級沉淀法）2、酸堿沉淀法酸堿沉淀法3、專屬、專屬試劑沉淀法：試劑沉淀法：如膽固醇、明膠、如膽固醇、明膠、雷氏銨鹽雷氏銨鹽4、鹽析法、鹽析法:如氯化鈉、氯化銨、硫酸銨、硫如氯化鈉、氯化銨、硫酸銨、硫酸鈉、硫酸鎂酸鈉、硫酸鎂.三、分餾法 利用液體混合物

3、中各成分的沸利用液體混合物中各成分的沸點的不同而分離的方法點的不同而分離的方法。.四、結晶與重結晶法 （1）結晶的條件）結晶的條件（2）重結晶溶劑的選擇）重結晶溶劑的選擇 （3）重結晶過程和析晶方法 （4）微量重結晶（5）結晶純度的判斷.五、透析法與超濾法 用于純化皂苷、蛋白質、多糖、多肽用于純化皂苷、蛋白質、多糖、多肽透析膜：動物性膜，合成膜。分離量小，透析膜：動物性膜，合成膜。分離量小，實驗室用實驗室用超濾膜：直徑超濾膜：直徑110nm,小分子能濾過。小分子能濾過。多為合成膜，分離量大，適用于工廠和多為合成膜，分離量大，適用于工廠和實驗室實驗室.六、色譜分離法一、分類按分離過程原理不同可分

4、為：吸附色譜法吸附色譜法分配色譜法分配色譜法凝膠滲透色譜法離子交換色譜法親和色譜法按流動相類型來分按流動相類型來分: 氣相色譜(GC); 流相色譜(LC).按操作方式來分按操作方式來分:1、薄層色譜（、薄層色譜（TLC）薄層色譜：薄層色譜：操作、展開方式及注意事項制備型薄層色譜（制備型薄層色譜（PTLC）：）：特點、操作過程離心薄層色譜法（離心薄層色譜法（CTLC）高效薄層色譜（高效薄層色譜（HPTLC）：吸附劑粒度范圍更窄（57微米）。并采用特殊的粘合劑，分離能力較普通TLC高，展矩短，斑點集中，分離效果好，高效微量快速。.2、柱色譜、柱色譜高效液相色譜（高效液相色譜（HPLC）制備型中壓柱

5、色譜（制備型中壓柱色譜（MPLC）制備型低壓柱色譜（制備型低壓柱色譜（LPLC）制備型快速柱色譜（閃柱色譜制備型快速柱色譜（閃柱色譜 FC）常壓柱色譜（常壓柱色譜（LC）柱色譜操作柱色譜操作：梯度洗脫及溶劑解混、等度洗脫梯度洗脫及溶劑解混、等度洗脫干柱色譜的操作干柱色譜的操作減壓柱色譜（減壓柱色譜（VLC）干柱色譜干柱色譜3.紙色譜紙色譜(PC)4.毛細管色譜毛細管色譜(CTC).檢識方法和結構研究檢識方法和結構研究 1 理化檢識理化檢識初步確定化合物類型和簡單的取代情況2 色譜檢識色譜檢識TLC，PC，GC或 HPLC標品對照法，文獻對照法，多譜聯(lián)用法3 波譜分析波譜分析UV，IR，NMR，

6、MS，CD，X-ray.吸附色譜法吸附色譜法（Adsorption Chromatography）分類：分類：物理吸附：（物理）吸附色譜法物理吸附：（物理）吸附色譜法化學吸附化學吸附半化學吸附：聚酰胺色譜法（氫鍵吸附）半化學吸附：聚酰胺色譜法（氫鍵吸附） 大孔吸附或小孔樹脂色譜法（大孔吸附或小孔樹脂色譜法（吸附性和分子篩原吸附性和分子篩原理相結合）理相結合）過程三要素：吸附劑（固定相）過程三要素：吸附劑（固定相） 洗脫劑洗脫劑/展開劑（流動相）展開劑（流動相） 化學成分化學成分. 吸附劑吸附劑 1、極性吸附劑、極性吸附劑 2、非極性吸附劑、非極性吸附劑 洗脫劑或展開劑的選擇洗脫劑或展開劑的選擇

7、洗脫規(guī)律洗脫規(guī)律操作方式和操作技術操作方式和操作技術適用范圍適用范圍.ABCD洗脫劑或展開劑的選擇洗脫劑或展開劑的選擇.分配色譜法分配色譜法（ Distribution ChromatographyDistribution Chromatography） 原理：原理：利用混合物中各成分在固定相和流動相中分配利用混合物中各成分在固定相和流動相中分配系數(shù)的差異而達到分離的系數(shù)的差異而達到分離的。 載體載體:硅膠、硅藻土、纖維素硅膠、硅藻土、纖維素 溶劑系統(tǒng)溶劑系統(tǒng) ：選擇原則選擇原則 關鍵：關鍵：固定相和流動相的相互飽和。常用鍵合固定相和流動相的相互飽和。常用鍵合固定相材料，如固定相材料，如RP2

8、，RP8，RP18。親脂性順序：親脂性順序：RP18RP8RP2適用范圍適用范圍.分類：正相色譜正相色譜：固定相為強極性溶劑如水、甲酰胺（HPLC中常用氰基與氨基鍵合相），流動相為弱極性溶劑如氯仿、正丁醇等。分離極性較大的成分。洗脫時極性小的成分先下。 反相色譜反相色譜：固定相為弱極性溶劑如石蠟油（HPLC中常用ODS與C8鍵合相） ，流動相為強極性溶劑如水、甲醇。分離脂溶性成分，洗脫時極性大的成分先下。操作方式：分配柱色譜(特點)、TLC、紙色譜（紙色譜（PC）.高速逆流色譜法（高速逆流色譜法（HSCCC）：）：依靠聚四氟乙烯的蛇形分離管的方向性和高速行星式旋轉所產生的離心場作用，使無載體支

9、持的固定相（液體）穩(wěn)定地保留在分離管中，并使樣品和流動相單向低速通過固定相，實現(xiàn)混合，分配和分離。優(yōu)點：無需載體，克服不可逆吸附消耗，樣品變性污染吸收峰拖尾等缺點，可定量回收樣品，重現(xiàn)性好，分離純度高，速度快。.凝膠過濾色譜法（Gel Filtration chromatography）原理原理：分子篩的原理。：分子篩的原理。洗脫規(guī)律洗脫規(guī)律：Ve=K1-K2lgM 按分子由大到小順序先后出柱。按分子由大到小順序先后出柱。凝膠的種類凝膠的種類：葡聚糖凝膠（葡聚糖凝膠（sephadex G） 適用于水溶性大分子化合物的分離純化。適用于水溶性大分子化合物的分離純化。羥丙基葡聚糖凝膠（羥丙基葡聚糖凝膠（ sephadex LH-20） 可在有機溶劑中使用，適用于分離各類化合物。可在有機溶劑中使用，適用于分離各類化合物。交聯(lián)葡聚糖凝膠交聯(lián)葡聚糖凝膠:離子交換與分子篩原理離子交換與分子篩原理 丙烯酰胺凝膠丙烯酰胺凝膠(Bio-Gel P)瓊脂糖凝膠瓊脂糖凝膠(Bio-Gel A).離子交換色譜法離子交換色譜法（Ion