1、重構微循環,保護線粒體，恩必普全面保護缺血性腦卒中患者缺血性腦卒中 定義：定義：指各種病因所致腦部血液供應障礙，導致腦組織缺血、缺氧性壞死，出現相應神經功能缺損 流行病學：流行病學：全國每年新發腦卒中約200萬人 死亡率：死亡率：人類三大致死病因之一，每年死于腦卒中的患者約150萬人 致殘率：致殘率：每年存活的600-700萬人中，約75%不同程度地喪失勞動能力，其中重度致殘者約占40% 缺血性腦卒中后缺血區的病理變化缺血半暗帶(階梯式細胞壞死、凋亡和存活)缺血中心區(細胞壞死)大腦中動脈血栓Sallustio F, et al. Saving the ischemic penumbra: p

2、otential role for statins and phosphodiesterase inhibitors. Curr Vasc Pharmacol 2007;5(4):259-265.腦梗死中心區()：細胞死亡，不可挽救半暗帶()：細胞損傷，可以挽救u半暗帶CBF低于時，以上都會發展為梗死區u半暗帶CBF高于時，只有會發展為梗死區急性缺血性腦卒中患者普遍存在半暗帶Ledezma CJ, et al. Modern imaging of the infarct core and the ischemic penumbra in acute stroke patients: CT ve

3、rsus MRI. Expert Rev Cardiovasc Ther 2009;7(4):395-403.Ebinger M, et al. Imaging the penumbra-strategies to detect tissue at risk after ischemic stroke. J Clin Neurosci 2009;16(2):178-187.90%-100%的患者在腦梗塞發生3小時后都存在缺血半暗帶75%-80%的患者發病6小時后仍存在缺血半暗帶超過44%的腦卒中患者在發病18小時后仍然存在缺血半暗帶不同患者缺血半暗帶的存活時間短至3小時，長至48小時不等半暗帶

4、是治療缺血性腦卒中的關鍵Ledezma CJ, et al. Modern imaging of the infarct core and the ischemic penumbra in acute stroke patients: CT versus MRI. Expert Rev Cardiovasc Ther 2009;7(4):395-403.Ebinger M, et al. Imaging the penumbra-strategies to detect tissue at risk after ischemic stroke. J Clin Neurosci 2009;16(

5、2):178-187.半暗帶的細胞損傷是可逆的，因此挽救半暗帶是治療缺血性腦卒中的最終目標延長半暗帶細胞的存活時間，恢復半暗帶細胞的血液供應是挽救半暗帶的最主要方法恩必普如何挽救半暗帶？獨特的雙重作用機制重構微循環，增加缺血區灌注重構微循環，增加缺血區灌注1-7u保護血管結構完整u恢復血管管徑u增加缺血區血流量u增加缺血區周圍微血管數量保護線粒體，減少細胞死亡保護線粒體，減少細胞死亡8-14u保護線粒體結構的完整u提高線粒體復合酶IV的活性u提高線粒體ATP酶的活性u維持線粒體膜的穩定性1.Liu CL,et al.Journal of the Neurological Sciences200

6、7;260:106-113. 2.徐皓亮等.中國藥理學與毒理學雜志1999;13:281-284.3.Yan CH,et al.Acta Pharmacol Sin1998;19:117-120. 4.徐皓亮等.藥學學報 1999;34:172-175. 5.閻超華等.藥學學報 1998;33:881-885.6.Liao SJ,et al.Brain Res 2009;1289:69-78. 7.李其富等.四川大學學報(醫學版) 2008;39:84-88. 8.董高翔等.中國醫學科學院學報2002;24:93-97. 9.高鐘生等.腦與神經疾病雜志2008;16:420-422. 10.熊

7、杰等.藥學學報1999;34:241-245. 11.熊杰等.中藥藥理與臨床2007;23:73-76. 12.Li L,et al.Brain Res2009;1290:91-101. 13.董高翔等.中國醫學科學院學報2002;24:93-97. 14.Chang Q,et al.Acta Pharmacol Sin2003;24:796-804.恩必普獨特的雙重作用機制之一重構微循環，增加缺血區灌注重構微循環，增加缺血區灌注u保護血管結構完整u恢復血管管徑u增加缺血區血流量u增加缺血區周圍微血管數量大腦血液供應是維持正常腦功能和結構的根本保證增加缺血區腦灌注的主要途徑微循環側支循環微循環

8、微循環是指微動脈和微靜脈之間的血液循環，是血液與組織細胞進行物質交換的場所。微循環和微淋巴管一起組成微循環功能單元，承擔血液與組織液之間氧、營養必需物質和代謝產物的交換，能量、信息傳輸，承擔血液流通、分配、組織灌注，以及一系列反饋調節、內環境穩定機制。微循環的組成動脈動脈毛細血管靜脈毛細血管靜脈前毛細血管末端小動靜脈間通路前毛細血管括約肌微循環的主要調節方式側支循環腦側支循環是指當供血動脈嚴重狹窄或閉塞時，血流可以通過其他血管(側支或新形成的血管吻合)到達缺血區，使缺血組織得到不同程度的灌注代償。腦側支循環既是發生缺血性卒中后機體重要的，也是臨床有效的重要途徑。側枝循環的分級動脈側支循環可以來

9、自硬膜內、硬膜或硬膜外血管，根據開放層次大致可分為三級：一級側支血管Willis環nWillis環是顱內最重要的側支代償途徑，它將兩側半球和前、后循環聯系在一起。n前交通動脈平衡兩側大腦前部區域的血液供應。n后交通動脈可為前、后循環提供側支代償。Willis環頸內動脈大腦中動脈基底動脈前交通動脈后交通動脈大腦前動脈大腦后動脈二級側支血管顱內動脈間的血管吻合Liebeskind DS. et al. Collateral circulation. Stroke 2003;34(9):2279-2284. b：大腦前動脈和大腦中動脈在軟腦膜的吻合支c：大腦中動脈和大腦后動脈在軟腦膜的吻合支d：大腦

10、前動脈和小腦上動脈的吻合支e：小腦動脈遠端吻合支二級側支血管顱外動脈間的血管吻合Liebeskind DS. et al. Collateral circulation. Stroke 2003;34(9):2279-2284. a：面動脈與眼動脈的吻合支b：上頜動脈與眼動脈的吻合支c：腦膜中動脈與眼動脈的吻合支d：硬腦膜微動脈與腦膜中動脈的吻合支e：枕動脈通過乳突孔的吻合支f：枕動脈通過頂骨孔的吻合支三級側支血管Adams RH, et al. Molecular regulation of angiogenesis and lymphangiogenesis. Nat Rev Mol Ce

11、ll Biol 2007;8(6):464-478.外膜細胞細胞外基質降解VEGF濃度梯度內皮細胞極性改變PDGFB細胞外基質內皮細胞增生侵潤性生長VEGF濃度梯度PDGF頂端細胞間相互粘附柄細胞增生內皮細胞間穩定粘附外膜細胞穩定貼附內皮細胞增生停止通過血管發生和血管生成等方式使缺血區血管新生，VEGF在此過程中發揮著重要作用恩必普保護血管內皮細胞的完整性血管內沉積的實質成份微血栓內皮細胞腫脹破裂，脫入管腔，細胞間連結松散，基膜擰曲裂開恩必普治療組Liu CL, et al. dl-3n-butylphthalide prevents stroke via improvement of cer

12、ebral microvessels in RHRSP. Journal of the Neurological Sciences. 2007;260:106-113.恩必普治療后的大腦微血管形態（H&E染色，100倍）恢復血管管徑恩必普增加腦缺血大鼠軟腦膜微動脈管徑徐皓亮,等. 丁基苯酞對局灶性腦缺血大鼠軟腦膜微循環障礙的影響. 藥學學報 1999;34(3):172-175.缺血*P0. 01 vs 模型對照組大腦右中動脈阻斷術后20分鐘腹腔注射NBP25mg/kg21恩必普提高低糖低氧細胞外液6-酮-PGF1/ TXB2比值減輕血管痙攣閻超華, 等. 丁基苯酞對原代培養的大鼠皮層神經細胞

13、外液6-keto-PGF1和TXB2及其比值的影響. 藥學學報 1998;33(12):881-885.00.010.020.030.046-keto-PGF1/TXB2阿司匹林組NBP組0 umol/L1 umol/L10 umol/L100 umol/L低糖低氧處理5小時，處理同時加入藥物*P0.05, *P0. 001 vs 相應對照組增加缺血區血流量恩必普增加腦缺血大鼠軟腦膜微動脈血流速度徐皓亮,等. 丁基苯酞對局灶性腦缺血大鼠軟腦膜微循環障礙的影響. 藥學學報 1999;34(3):172-175.缺血*P0.001 vs 模型對照組大腦右中動脈阻斷術后20分鐘腹腔注射NBP25mg

14、/kg恩必普增加腦缺血大鼠局部腦血流Yan CH, et al. Effects of dl-3-n-butylphthalide on regional cerebral blood flow in right middle cerebral artery occlusion rats. Acta Pharmacol Sin 1998; 19(2):117-120.腦缺血后時間60分鐘90分鐘120分鐘180分鐘024681012局部腦血流(mL/s/kg)假手術組NBP組模型對照組腦缺血術后10分鐘腹腔注射NBP10mg/kg*P0.01 vs 模型對照組恩必普抑制血小板的聚集，增加缺血區

15、血流量* *P0. 001, *P0.01 vs 對照組徐皓亮等. 丁基苯酞對大鼠血栓形成及血小板功能的影響. 藥學學報 2001;36(5):329-333.血小板聚集率(%)ADP(二磷酸腺苷)花生四烯酸(AA)結果可見， 恩必普組（100umol/L）與 阿司匹林組（100umol/L）對不同類型的血小板聚集誘導劑的作用有區別，提示其機制各異。恩必普增加梗死周圍腦組織VEGF的表達Liao SJ, et al. Enhanced angiogenesis with dl-3n-butylphthalide treatment after focal cerebral ischemia i

16、n RHRSP. Brain Res 2009;1289:69-78.VEGF陽性單位/高倍視野7550250假手術12h24h48h72h起始用藥距腦梗塞手術的時間RHRSP 8wRHRSP 8w + NBPRHRSP 16wRHRSP 16w+ NBPRHRSP模型，誘發腦缺血后13天，NBP口服每天80mg/kg，連續10天*P0. 05 vs 同時間模型對照組恩必普增加腦梗塞模型腦組織VEGF的表達李其富,等. 丁基苯酞對大鼠局灶缺血腦組織VEGF及bFGF表達的影響. 四川大學學報(醫學版) 2008;39(1):84-88.05000100001500020000250003000

17、0梗死周圍區海馬區梗死中心區梗死周圍區梗死周圍區梗死周圍區積分光密度值VEGF mRNAVEGF蛋白假手術組模型對照組NBP組腦缺血術后NBP灌胃每次25mg/kg，每天兩次，連續3天*P0. 01 vs 模型對照組恩必普增加腦組織中vwF標記陽性微血管數量腦組織內vwF陽性微血管數量/HPF*P0.05 vs Asp組NBP治療組Asp治療組RHRSP模型，誘發腦缺血前NBP口服80mg/kg，每天兩次，或者Asp 40mg/kg，每天兩次，連續7天Liu CL, et al. dl-3n-butylphthalide prevents stroke via improvement of c

18、erebral microvessels in RHRSP. J Neurol Sci 2007;260(1-2):106-113.恩必普增加腦組織中有效灌注微血管數量#*#P0.05 vs 假手術組*P0.05 vs 模型對照組和Asp組腦組織內FITC標記微血管數量HPF假手術組模型對照組NBP組Asp組RHRSP模型，誘發腦缺血前NBP口服80mg/kg，每天兩次，或者Asp 40mg/kg，每天兩次，連續7天Liu CL, et al. dl-3n-butylphthalide prevents stroke via improvement of cerebral microvesse

19、ls in RHRSP. J Neurol Sci 2007;260(1-2):106-113.恩必普獨特的雙重作用機制之二保護線粒體，減少細胞死亡保護線粒體，減少細胞死亡u保護線粒體結構的完整u提高線粒體復合酶IV的活性u提高線粒體ATP酶的活性u維持線粒體膜的穩定性腦能量代謝的生理特點能量代謝旺盛原料的連續供應供應形式是ATP能量儲備低線粒體：細胞的能量“加工廠” 細胞內產生ATP的主要場所 細胞80%-90%的ATP由線粒體提供 為細胞各種生物活動提供能量，在維持細胞正常生理功能和活性方面發揮著重要作用線粒體張均田等. 神經藥理學2008 人民衛生出版社.線粒體呼吸鏈傳遞電子，產生ATP

20、線粒體膜電位是產生ATP的驅動因素！在線粒體呼吸鏈中，線粒體復合酶負責將電子傳遞給氧形成終產物水，是ATP產生過程中的重要步驟張均田等. 神經藥理學2008 人民衛生出版社.線粒體的主要生物功能調節鈣濃度和鈣信號自由基產生和清除細胞凋亡張均田等. 神經藥理學2008 人民衛生出版社. 線粒體損傷是細胞損傷的核心環節Brouns R, et al. The complexity of neurobiological processes in acute ischemic stroke. Clin Neurol Neurosurg 2009;111(6):483-495.Schbitz WR, e

21、t al. Perspectives on neuroprotective stroke therapy. Biochem Soc Trans 2006;34(Pt 6):1271-1276.恩必普減輕OGD后血管內皮細胞線粒體的裂解Li L, et al. DL-3-n-butylphthalide protects endothelial cells against oxidative/nitrosative stress, mitochondrial damage and subsequent cell death after oxygen glucose deprivation in

22、vitro. Brain Res 2009;1290:91-101. 正常對照組低糖低氧對照組低糖低氧NBP組OGD后3小時，OGD處理同時加入NBP*P0.05 vs 正常對照組# P0. 01 vs 低糖低氧對照組01020304050*#*線粒體裂解細胞比例(%)正常對照組低糖低氧對照組低糖低氧NBP組恩必普明顯改善低糖低氧引起的神經元線粒體復合酶活性的降低復合酶活性(mol/mg/minn)正常組低糖低氧組NBP10-6mol/LNBP10-5mol/LNBP 10-4mol/L*P0. 01 vs 低糖低氧組熊杰, 等. 丁基苯酞對原代培養神經元線粒體功能的保護作用. 中藥藥理與臨床

23、 2007;23(5):73-76.低糖低氧處理6小時，低糖低氧處理同時加入NBP提高線粒體ATP酶的活性董高翔,等. 丁基苯酞對局部腦缺血再灌注大鼠線粒體ATPase, 抗氧化酶活性和脂質過氧化的影響. 中國醫學科學院學報 2002;24(1):93-97.局灶性缺血2小時，再灌注24小時，缺血前10分鐘腹腔注射NBP。NBP有助于維持線粒體膜電位，保護線粒體結構和功能ATPase活力(活力單位)Na+-K+-ATPaseCa2+-ATPase#*P0.05, *P0. 01 vs 對照組# P0. 01 vs 假手術組維持線粒體膜的穩定性恩必普減輕線粒體膜電位的降低熊杰, 等. 丁基苯酞對

24、原代培養神經元線粒體功能的保護作用. 中藥藥理與臨床 2007;23(5):73-76.低糖低氧處理同時加入NBP維持線粒體膜的穩定性恩必普改善線粒體膜的流動性微粘度正常組低糖低氧組NBP10-6mol/LNBP10-5mol/LNBP 10-4mol/L*P0. 01 vs 低糖低氧組熊杰, 等. 丁基苯酞對原代培養神經元線粒體功能的保護作用. 中藥藥理與臨床 2007;23(5):73-76.低糖低氧處理6小時，低糖低氧處理同時加入NBP恩必普對線粒體和腦皮層總SOD活性的影響*P0. 01 vs 對照組# P0. 05, # P0. 01 vs 假手術組SOD活性(NU/mg prote

25、in)局灶性缺血2小時，再灌注24小時，缺血前10分鐘腹腔注射NBP董高翔,等. 丁基苯酞對局部腦缺血再灌注大鼠線粒體ATPase, 抗氧化酶活性和脂質過氧化的影響. 中國醫學科學院學報 2002;24(1):93-97.#*#*恩必普對線粒體和腦勻漿GSH-Px活性的影響#*局灶性缺血2小時，再灌注24小時，缺血前10分鐘腹腔注射NBP董高翔,等. 丁基苯酞對局部腦缺血再灌注大鼠線粒體ATPase, 抗氧化酶活性和脂質過氧化的影響. 中國醫學科學院學報 2002;24(1):93-97.*P0. 01 vs 對照組# P0. 05 vs 假手術組恩必普對線粒體和腦勻漿MDA含量的影響#*#*P0. 05 vs 對照組# P0. 05, # P0. 01 vs 假手術組MDA含量(nmol/mg protein)局灶性缺血2小時，再灌注24小時，缺血前10分鐘腹腔注射NBP董高翔,等. 丁基苯酞對局部腦缺血再灌注大鼠線粒體ATPase, 抗氧化酶活性和脂質過氧化的影響. 中國醫學科學院學報 2002;24(1):93-97.減少神經細胞凋亡恩必普減少缺血再灌注大鼠線粒體Caspase3的激活Acta Phar