1、精選優質文檔-傾情為你奉上植物組培培養基及其配制培養基好比土壤，是組織培養中離體材料賴以生存和發展的基地。因此，在組織培養基的各個環節中，應著重掌握培養基，了解它的組成和配制方法。一、組成培養基的五類成分目前，大多數培養基的成分是由無機營養物、碳源、維生素、生長調節物質和有機附加物等五類物質組成的。1.無機營養物無機營養物主要由大量元素和微量元素兩部分組成，大量元素中，氮源通常有硝態氮或銨態氮，但在培養基中用硝態氮的較多，也有將硝態氮和銨態氮混合使用的。磷和硫則常用磷酸鹽和硫酸鹽來提供。鉀是培養基中主要的陽離子，在近代的培養基中，其數量有逐漸提高的趨勢。而鈣、鈉、鎂的需要則較少。培養基所需的鈉

2、和氯化物，由鈣鹽、磷酸鹽或微量營養物提供。微量元素包括碘、錳、鋅、鉬、銅、鈷和鐵。培養基中的鐵離子，大多以螯合鐵的形式存在，即FeSO4與Na2EDTA(螯合劑)的混合。2.碳源培養的植物組織或細胞，它們的光合作用較弱。因此，需要在培養基中附加一些碳水化合物以供需要。培養基中的碳水化合物通常是蔗糖。蔗糖除作為培養基內的碳源和能源外，對維持培養基的滲透壓也起重要作用。3.維生素在培養基中加入維生素，常有利于外植體的發育。培養基中的維生素屬于B族維生素，其中效果最佳的有維生素B1、維生素B6、生物素、泛酸鈣和肌醇等。4.有機附加物包括人工合成或天然的有機附加物。最常用的有酪朊水解物、酵母提取物、椰

3、子汁及各種氨基酸等。另外，瓊脂也是最常用的有機附加物，它主要是作為培養基的支持物，使培養基呈固體狀態，以利于各種外植體的培養。5.生長調節物質常用的生長調節物質大致包括以下三類：(1)植物生長素類。如吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)。(2)細胞分裂素。如玉米素(Zt)、6-芐基嘌呤(6-BA或BAP)和激動素(Kt)。(3)赤霉素。組織培養中使用的赤霉素只有一種，即赤霉酸(GA3)。二、常用培養基配方及其特點1.常用培養基配方組織培養是否成功，在很大程度上取決于對培養基的選擇。不同培養基有不同特點，適合于不同的植物種類和接種材料。開展組織培養活動時，應對

4、各種培養基進行了解和分析，以便能從中選擇使用。下面介紹組織培養幾種常用培養基的配方見表91。培養基中的激素種類和數量，隨著不同培養階段和不同材料而有變化，因此各配方中均不列入。2.幾種常用培養基的特點(1) MS培養基。 MS培養基是目前普遍使用的培養基。它有較高的無機鹽濃度，對保證組織生長所需的礦質營養和加速愈傷組織的生長十分有利。由于配方中的離子濃度高，在配制、貯存、消毒等過程中，即使有些成分略有出入，也不致影響離子間的平衡。MS固體培養基可用來誘導愈傷組織，或用于胚、莖段、莖尖及花藥培養，它的液體培養基用于細胞懸浮培養時能獲得明顯成功。這種培養基中的無機養分的數量和比

5、例比較合適，足以滿足植物細胞在營養上和生理上的需要。因此，一般情況下，無須再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有機附加成分。與其它培養基的基本成分相比，MS培養基中的硝酸鹽、鉀和銨的含量高，這是它的明顯特點。(2)B5培養基。B5培養基的主要特點是含有較低的銨，這是因為銨可能對不少培養物的生長有抑制作用。經過試驗發現，有些植物的愈傷組織和懸浮培養物在MS培養基上生長得比B5培養基上要好，而另一些植物，在B5培養基上更適宜。(3)N6培養基。N6培養基特別適合于禾谷類植物的花藥和花粉培養，在國內外得到廣泛應用。在組織培養中，經常采用的還有懷特(While，1963)培養基、尼許(Ni

6、tsch，1951)培養基等。它們在基本成分上大同小異。懷特培養基由于無機鹽的數量比較低，更適合木本植物的組織培養。三、培養液的配制1.制備母液為了避免每次配制培養基都要對幾十種化學藥品進行稱量，應該將培養基中的各種成分，按原量10倍、100倍或1000倍稱量，配成濃縮液，這種濃縮液叫做母液。這樣，每次配制培養基時，取其總量的1/10、1/100、1/1000，加以稀釋，即成培養液。現將培養液中各類物質制備母液的方法說明如下。(1)大量元素。大量元素包括硝酸銨等用量較大的幾種化合物。制備時，按表中排列的順序，以其10倍的用量，分別稱出并進行溶解，以后按順序混在一起，最后加蒸餾水，使其總量達到1

7、升，此即大量元素母液。(2)微量元素。因用量少，為稱量方便和精確起見，應配成100倍或1000倍的母液。配制時，每種化合物的量加大100倍或1000倍，逐次溶解并混在一起，制成微量元素母液。(3)鐵鹽。鐵鹽要單獨配制。由硫酸亞鐵(FeSO4·7H2O)5.57克和乙二胺四乙酸二鈉(NaEDTA)7.45克溶于1升水中配成。每配1升培養基，加鐵鹽5毫升。(4)有機物質。主要指氨基酸和維生素類物質。它們都是分別稱量，分別配成所需的濃度(0.11.0毫克/毫升)，用時按培養基配方中要求的量分別加入。(5)植物激素。最常用的有生長素和細胞分裂素。這類物質使用濃度很低，一般為0.0110毫克/

8、升。可按用量的100倍或1000倍配制母液，配制時要單個稱量，分別貯藏。配制植物生長素時，應先按要求濃度稱好藥品，置于小燒杯或容量瓶中，用12毫升0.1N(克當量濃度)氫氧化鈉溶解，再加蒸餾水稀釋至所需濃度。配制細胞分裂素時，應先用少量0.5或1N的鹽酸溶解，然后加蒸餾水至所需量。以上各種混合液(母液)或單獨配制藥品，均應放入冰箱中保存，以免變質、長霉。至于蔗糖、瓊脂等，可按配方中要求，隨稱隨用。2.配制培養基的具體操作根據配方要求，用量筒或移液管從每種母液中分別取出所需的用量，放入同一燒杯中，并用粗天平稱取蔗糖、瓊脂放在一邊備用。將中稱好的瓊脂加蒸餾水300400毫升，加熱并不斷攪拌，直至煮

9、沸溶解呈透明狀，再停止加熱。將中所取的各種物質(包括蔗糖)，加入煮好的瓊脂中，再加水至1000毫升，攪拌均勻，配成培養基。用1N的氫氧化鈉或鹽酸，滴入中的培養基里，每次只滴幾滴，滴后攪拌均勻，并用pH試紙測其pH值，直到將培養基的pH值調到5.8。將配好的培養基，用漏斗分裝到三角瓶(或試管)中，并用棉塞塞緊瓶口，瓶壁寫上號碼。瓶中培養基的量約為容量的1/4或1/5。培養基的成分比較復雜，為避免配制時忙亂而將一些成分漏掉，可以準備一份配制培養基的成分單，將培養基的全部成分和用量填寫清楚。配制時，按表列內容順序，按項按量稱取，就不會出現差錯。成分單的格式與內容見表92。3.培養基的滅菌與保存培養基

10、配制完畢后，應立即滅菌。培養基通常應在高壓蒸汽滅菌鍋內，在汽相120條件下，滅菌20分鐘。如果沒有高壓蒸汽滅菌鍋，也可采用間歇滅菌法進行滅菌，即將培養基煮沸10分鐘，24小時后再煮沸20分鐘，如此連續滅菌三次，即可達到完全滅菌的目的。經過滅菌的培養基應置于10下保存，特別是含有生長調節物質的培養基，在45低溫下保存要更好些。含吲哚乙酸或赤霉素的培養基，要在配制后的一周內使用完，其它培養基最多也不應超過一個月。在多數情況下，應在消毒后兩周內用完。組培室設計規劃之儀器設備配置篇在植物組織培養過程中，根據所培養的植物種類、生產規模，選擇合適的器材、設施是十分必要的，只有這樣才能確保整個操作過程的順利

11、進行。在器材、設施的選擇上，不要貪大求洋，應該在其是否實用上多下功夫。在研究型的組織培養操作中，往往對器材、設施的要求較高；而在生產型的組織培養中，則對器材、設施的要求卻較為粗放，因此管理者必須根據實際情況來進行培養器材、設施的遴選。在植物組織培養的過程中，從外植體的采收到試管苗的定植都必須要在特定的環境中進行，例如，培養基的配制要在專用的器材、設施中進行；外植體的接種要在專用的器材、設施中進行。應該根據植物組織培養不同階段的需要，選擇不同的器材、設施。只有從降低投入、提高工效、節約勞力等諸方面加以考慮，才能降低培養成本、提高培養效率。     

12、0; 在植物組織培養過程中，所使用的器材種類較多，但它們通常可以分為通用器具、盛具、計量器械、滅菌器械、接種器械、培養器械等幾種類型。在使用這些容器、設備時，必須要了解它們的基本用途，并學會它們的基本用法。例如，不能給容量瓶加熱；必須用磨砂玻璃燈罩來熄滅正在燃燒的酒精燈；應該定期更換超凈工作如的無菌濾膜等等。詳細操作可參考具體設備、容器的使用說明。（1）通用器械燒杯：用來盛放、溶解化學藥劑等。常用的規格有50ml、100ml、250ml、500ml、1000ml。烘箱：用來烘干器械。恒溫水浴：用來溶解瓊脂等物質。玻璃攪拌棒：用來配制培養基。洗耳球：用來輔助吸取、轉移少量液體。冰箱：用來貯存化學

13、藥劑、植物材料等。牛角勺：用來轉移化學藥劑。玻璃漏斗：用來過濾溶液。剪刀：用來修剪外植體或剪切嫩莖。器械架：在無菌操作期間用來放置滅菌的器械。（2）各種盛具搪瓷淺盤：用來承載各種器械容器。塑料盆：用于清洗培養容器。鐵絲筐：用來盛放滅菌容器等物品。純水水桶：用來存放去離子水或蒸餾水。常用的規格有10L、20L。塑料桶：用來存放洗滌溶液、廢棄溶液。各種規格的磨砂玻璃瓶：用來盛放培養母液，以及各種植物生長物質。（3）計量器械量筒：用來量取一定體積的液體。常用的規格有25ml、50ml、100ml、500ml、1000ml。容量瓶：用來配制標準溶液。常用的規格有50ml、100ml、500ml、100

14、0ml。大肚移液管：用來吸取定量溶液。常用的規格有1ml、5ml、10ml。刻度移液管：用來吸取定量植物生長物質溶液。常用的規格有1ml、5ml、10ml。移液管架：用來放置、固定移液管。酸度計：用來檢測培養基的pH。藥物天平：用來稱取配制培養基的藥品。分析天平：用來稱取少量有化學試劑，進行化學分析。（4）滅菌器械磨砂口玻璃瓶：用來對植物材料進行表面滅菌。酒精燈：用來進行接種器材的表面滅菌。細菌過濾器：用來過濾不能進行高溫滅菌的試劑溶液。無菌濾紙：用來汲取器材、植物材料表面的水分。無菌脫脂棉：用來進行器械、植物材料表面的滅菌處理。真空泵：用來吸濾滅菌。高壓滅菌鍋：對培養基、接種器材進行滅菌處理

15、。可調試電爐：用來加熱高壓滅菌鍋。皮下注射器：用來對溶液進行過濾、除菌。紫外線滅菌燈：用來對接種室、培養室、操作室等工作環境進行滅菌處理。（5）接種器械超凈工作臺：用來過濾通過接種工作臺面的空氣，以便進行無菌操作。小型噴霧器：裝載滅菌藥液，來給超凈工作臺等處噴霧滅菌。鈍頭鑷子：在接種操作、繼代培養時移取植物材料。尖頭鑷子：用來分離植物材料。解剖刀：用來切割植物材料。打孔器：用來切取大小一致的圓柱形植物材料。雙目顯微鏡：在解剖較小的外植體時，用來觀測材料。細菌濾膜：用來進行溶液的常溫除菌。接種針：用來轉移細胞團、愈傷組織。（6）培養器械試管：用來作為外植體的培養容器。常用的規格有2cm×

16、;15cm、3cm×15cm。培養皿：用來作為外植體的培養容器。常用的規格有直徑9cm、12cm。錐形瓶：即三角燒瓶，主要作為培養器材，常用的規格有50ml、100ml。顯微鏡：用來觀察植物材料。成套載玻片：用來制作植物材料顯微制片。鋁箔：用于培養容器封口。橡皮筋：用來束緊培養容器的封口材料。血球計數器：用來進行植物細胞計數。空調：用來調節操作間、培養室的溫度。搖床：用來進行細胞懸浮培養。MS培養基 MS Medium用途：用于植物組織培養的基礎培養基 配方：（g/L）成分分子量使用濃度 (mg/L)大量元素硝酸鉀 KNO3101.111900硝酸銨 NH4NO380.041650磷

17、酸二氫鉀 KH2PO4136.09170硫酸鎂 MgSO4.7H2O246.47370 氯化鈣 CaCl2.2H2O147.02 440 微量元素 碘化鉀 KI 166.01 0.83 硼酸 H3BO3 61.83 6.2 硫酸錳 MnSO4.4H2O 223.01 22.3 硫酸鋅 ZnSO4.7 H2O 287.54 8.6 鉬酸鈉 Na2MoO4.2 H2O 241.95 0.25 硫酸銅 CuSO4.5 H2O 249.68 0.025 氯化鈷 CoCl2.62 237.93 0.025 鐵鹽 乙二胺四乙酸二鈉 Na2.EDTA 372.25 37.3 硫酸亞鐵 FeSO24.7H2O

18、 278.03 27.8 有機成分 肌醇   100 甘氨酸   2 鹽酸硫胺素 VB1   0.1 鹽酸吡哆醇 VB6   0.5 煙酸 VB5 或 VPP   0.5   蔗糖 sucrose 342.31 30g /L   瓊脂 agar  7 g /LMS培養基相關產品： 我公司亦生產成分不同含量的MS培養基，主要有: 1/2MS培養基，1/4MS培養基，MS培養基（不含瓊脂 / 不含瓊脂和蔗糖 / 不含有機元素、不含瓊脂和蔗糖）等各種類型。如果有特殊需要可按需定制培養基。 B5培養基B5 Medium用途

19、：用于植物組織培養 配方：（g/L）1.無機物(mg/L):磷酸二氫(NaH2PO4·H2O) 無水氯化鈣 硝酸鉀 硫酸銨 無水硫酸鎂 乙二胺四乙酸二鈉 硫酸亞鐵(FeSO4·7H2O) 硫酸錳(MnSO4·2H2O) 硫酸鋅(ZnSO4·7H2O) 硼酸 鉬酸鈉(Na2MoSO4·2H2O)硫酸銅(CuSO4·5H2O) 氯化鈷(CoCl2·6H2O) 碘化鉀   2.有機物(mg/L):維生素B1(鹽酸硫胺素) 維生素B6(鹽酸吡哆醇) 煙酸 肌醇 蔗糖 瓊脂 pH值5.5 

20、60;          150 113.24 2500 134 122.09 37.3 27.810.0 2.0 3.0 0.25 0.025 0.025 0.7510.0 1.0 1.0 100.0 20000 700025產品用法：        稱取本品 30.21g,加熱溶解于 1000ml 蒸餾水中,116 高壓滅菌 30 分鐘備用。 注意:如果 pH 值偏高,請用稀鹽酸調整&#