1、體外診斷試劑生產和質量控制要點體外診斷試劑生產和質量控制要點主講人主講人:顧燕黎顧燕黎 上海科華生物工程股份有限公司上海科華生物工程股份有限公司體外診斷試劑產品介紹一酶聯免疫診斷試劑產品l乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒（酶聯免疫法）二快速診斷試劑產品l人類免疫缺陷病毒抗體檢測試劑盒（膠體金法）三PCR核酸診斷試劑產品l乙型肝炎病毒核酸定量檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）四臨床化學診斷試劑產品l葡萄糖試劑盒（液體單試劑）（氧化酶法）一.酶聯免疫診斷試劑產品【產品名稱】【產品名稱】 乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒（酶聯免疫法）乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒（酶聯免疫法）【包裝規格】【包裝規格】 9

2、6人份人份/盒盒【預期用途】【預期用途】 本試劑盒采用酶聯免疫法原理檢測本試劑盒采用酶聯免疫法原理檢測HBsAg，適用于血清或，適用于血清或血漿類標本血漿類標本。酶聯免疫法反應原理l雙抗體夾心法l雙抗原夾心法標本抗-HBs抗-HBs-HRPHBsAg乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒（酶乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒（酶聯免疫法）聯免疫法）的原理采用抗-HBs包被反應板，加入待測樣本，經孵育后，加入抗-HBs-HRP，當樣本中存在HBsAg時，該HBsAg與包被抗-HBs結合并與抗-HBs-HRP結合形成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs-HRP復合物，加入TMB底物產生顯色反應，反之則無顯色反應

3、。試劑盒組份試劑盒組份 1. 微孔反應板微孔反應板 2. 酶結合物酶結合物 3. 陽性對照陽性對照 4. 陰性對照陰性對照 5. 洗滌液洗滌液 6. 顯色劑顯色劑A 7. 顯色劑顯色劑B 8. 終止液終止液 9. 封片封片 10. 說明書說明書主要生產設備微孔反應板包被機微孔反應板包被機微孔反應板全自動封閉生產線微孔反應板全自動封閉生產線灌封流水線灌封流水線超聲波洗瓶機超聲波洗瓶機全自動進口分裝機全自動進口分裝機生物安全柜生物安全柜酶標儀酶標儀橫枕式包裝機橫枕式包裝機生產工藝流程圖生產工藝流程圖合并分裝純化包被結酶純化配制配制配制抗-HBs血清酶標用抗-HBs抗-HBs-HRP酶結合物反應板包

4、板用單抗-HBs單抗-HBs腹水正常人血清、陽性血陰、陽性對照顯色劑、終止液、洗滌液TMB、硫酸、吐溫20成品半成品滴配半成品檢定成品檢定外購原輔料控制外購原輔料控制l原輔料必須從合格供應商目錄所載廠家購入。l采購的生產用原輔料，均應符合藥品的標準、包裝材料標準、生物制品規程或其它標準，不得對產品的質量產生不良影響。 自制主要原料生產和質量控制要點自制主要原料生產和質量控制要點l 工藝用水l 抗原l 抗體l 酶標記物基因工程基因工程HBsAg生產和質量控制要點生產和質量控制要點生產工序質量控制要點細胞培養基因工程細胞株，經接種復蘇后，進行細胞傳代培養。無菌操作，培養基的配制，細胞培養溫度，細胞

5、的形態及傳代速度。純化收集的細胞培養上清液經抗-HBs 親和層析柱等純化。層析柱填料的使用次數， 所用緩沖液的pH值， 上樣、平衡、洗脫速度。基因工程基因工程HBsAg質量標準質量標準l效價：效價： ELISAl純度：采用純度：采用SDS-PAGEl功能性實驗功能性實驗 ：陰性對照、陽性對照、陰性參考：陰性對照、陽性對照、陰性參考品符合率、最低檢出量、精密性、穩定性品符合率、最低檢出量、精密性、穩定性l蛋白濃度：用雙縮脲法測定蛋白濃度：用雙縮脲法測定單抗單抗-HBs生產和質量控制要點生產和質量控制要點生產工序質量控制要點細胞復蘇及傳代培養單克隆抗體細胞株，經接種復蘇后，進行細胞傳代培養。無菌操

6、作，培養基的配制，細胞培養溫度。腹水制備福氏不完全佐劑免疫，7-10天后單克隆抗體細胞懸液注射于F1代小鼠 ，10天后采集小鼠腹水，離心，制得單抗-HBs腹水。對數生長期細胞接種。腹水純化用制備的單抗-HBs腹水，經飽和硫酸銨二步沉淀，經離子交換層析柱純化即為單抗-HBs。層析填料的使用次數， 所用緩沖液的pH值， 上樣、平衡、洗脫速度。純化的得率。單抗單抗-HBs質量標準質量標準l純度純度 ：采用：采用SDS-PAGE法法l蛋白含量蛋白含量 ：采用：采用Lowry法法l效價效價 ：ELISA效價效價l功能性檢測：免疫活性、穩定性功能性檢測：免疫活性、穩定性多抗多抗-HBs生產和質量控制要點生

7、產和質量控制要點生產工序質量控制要點抗血清制備用福氏佐劑和純化HBsAg抗原 制成乳化膠乳劑注射實驗動物 ，經多次免疫后，采集動物血清。動物的選擇，乳劑配制的均一性。純化 抗血清，經親和層析柱粗提后，正常人全血清等多種親和層析柱等純化制得。親和柱的制備及使用次數，所用緩沖液的pH等的控制， 純化的收率。多抗多抗-HBs的質量標準的質量標準l純度純度 ：SDS-PAGE法檢定法檢定l蛋白含量蛋白含量 ：Lowry法法l效價效價 ：對流電泳法測定效價：對流電泳法測定效價l功能性檢測：免疫活性、穩定性功能性檢測：免疫活性、穩定性多抗多抗-HBs-HRP生產和質量控制要點生產和質量控制要點生產工序質量

8、控制要點酶的活化 HRP與 NaIO4反應，再加入乙二醇制成活化的酶溶液。 辣根過氧化物酶RZ值3.0 及活化時間的控制酶的偶聯 酶溶液液加入抗-HBs抗體pH,溫度及時間的控制還原酶反應液加入NaBH4溶液還原。還原時間的控制純化 飽和硫酸銨純化純度控制辣根過氧化物酶質量標準辣根過氧化物酶質量標準l溶解性 ：應符合要求lPH值 ：應符合要求l活性測定 ：應符合要求lRZ值：應3.0 多抗-HBs-HRP質量標準l免疫活性l穩定性試驗生產工序生產工序生產要點生產要點質量控制點質量控制點反應板制備反應板制備1包被液的配制包被液的配制pH值的控制值的控制2*反應板的包被反應板的包被包被液量的準確性

9、，反應板包被放置包被液量的準確性，反應板包被放置的溫度、濕度及時間的控制的溫度、濕度及時間的控制3反應板的洗滌、反應板的洗滌、加封閉液加封閉液液量的準確性液量的準確性4*反應板的封閉反應板的封閉房間溫度的控制，封閉時間的控制房間溫度的控制，封閉時間的控制5反應板的抽干反應板的抽干抽干機的真空度、溫度抽干機的真空度、溫度6*鋁箔袋的熱封鋁箔袋的熱封房間的濕度控制，鋁箔袋的密封性房間的濕度控制，鋁箔袋的密封性7*反應板的抽檢反應板的抽檢應符合相關質量要求應符合相關質量要求反應板制備生產和質量控制要點反應板制備反應板制備包被液配制包被液配制l質量控制點：包被緩沖液pH l測定方法：用pH計測定反應板

10、制備反應板制備反應板的包被反應板的包被l質量控制點：包被液量的準確性 要求：100l/孔 l操作： 將待包被的微孔反應板放置傳送帶上，開始包被，每塊包被板應用目測法檢查其96孔加液是否完整。前10塊包被板檢查加液量是否準確，檢后的包被板放入報廢專用盤內，作報廢處理。 連續100塊包被板檢查合格后，進入正常包被過程。正常包被過程中每100塊包被板應抽1塊作過程檢查。反應板制備反應板制備反應板的包被反應板的包被l質量控制點： 反應板包被放置的溫度及時間的控制 要求： 2-8冷庫包被過夜。 l操作：包被板應堆放整齊，并用一次性塑料布覆蓋。注明產品名稱、批號和時間，放入2-8冷庫包被過夜。反應板制備反

11、應板制備反應板的洗滌、加封閉液反應板的洗滌、加封閉液l質量控制點：液量的準確性 要求: 洗板液量：200l/孔 封閉液量：250l/孔 反應板制備反應板制備反應板的封閉反應板的封閉l質量控制點： 封閉溫度：370.5 封閉時間：2小時 l操作：將加好封閉液的包被板整齊堆放在托盤內，注明批號、封閉開始時間和結束時間，放入恒溫房。到達規定時間后，迅速取出包被板，轉入下一道工序的生產。 反應板制備反應板制備反應板的抽干反應板的抽干l質量控制點：抽干機的真空度、溫度 要求： 真空度：低于100Pa，維持4小時以上 溫度：202 反應板制備反應板制備鋁箔袋的熱封鋁箔袋的熱封l質量控制點： 房間的濕度：4

12、0% 鋁箔袋的密封性： 端面刀封溫度2105 中封刀封溫度2105 l操作： 房間濕度控制：生產操作前提前2小時，打開去濕機進行工作場地去濕，使車間濕度達到40%以下。 鋁箔袋的密封性：在線袋袋檢。反應板制備反應板制備 反應板的抽檢反應板的抽檢質量標準：陰性參考品符合率：用國家參考品或國家參考品標化的參考品進行檢定，不得出現假陽性。陽性參考品符合率：用國家參考品或國家參考品標化的參考品進行檢定，不得出現假陰性。 最低檢出量：用國家參考品或國家參考品標化的參考品進行檢定， HBsAg adr、adw及ay亞型的最低檢出量應符合要求。 精密性：用國家參考品或國家參考品標化的參考品進行檢定，CV（%

13、）應不高于15%（n=10）。生產工序生產工序生產要點生產要點質量控制點質量控制點陰、陽性對照的配陰、陽性對照的配制制1陰性血清的滅活陰性血清的滅活滅活的時間，溫度滅活的時間，溫度2*陰性對照的配制陰性對照的配制檢測陰性檢測陰性OD值值3陽性血清的滅活陽性血清的滅活滅活的時間，溫度滅活的時間，溫度4*陽性對照的配制陽性對照的配制檢測陽性檢測陽性OD值值陰、陽性對照制備的生產和質量控制要點陰、陽性對照制備的生產和質量控制要點陰、陽性血清的滅活陰、陽性血清的滅活l要求：要求： 滅活時間：滅活時間：1小時小時 溫度：溫度：60l操作：將操作：將血清置水浴箱內。隨時注意測量血清血清置水浴箱內。隨時注意

14、測量血清溫度，當血清溫度到達溫度，當血清溫度到達60時，開始計時至規時，開始計時至規定時間止。定時間止。 陰、陽性對照的配制控制陰、陽性對照的配制控制陰性對照的配制陰性對照的配制l質控點：陰性對照OD值l要求：OD值0.050 陽性對照的配制陽性對照的配制l質控點：陽性對照OD值l要求：OD值1.000 通用試劑制備的生產和質量控制要點通用試劑制備的生產和質量控制要點生產工序生產工序生產關鍵點生產關鍵點質量控制點質量控制點顯色劑、終止液、顯色劑、終止液、洗滌液等通用試洗滌液等通用試劑的制備劑的制備1顯色劑顯色劑B的配的配制制避光配制、分裝避光配制、分裝溶液配制的溶液配制的pH、電導的控制、電導

15、的控制配制后配制后12小時內進行分裝小時內進行分裝2顯色劑顯色劑A的配的配制制72小時內進行分裝小時內進行分裝溶液配制的溶液配制的pH、電導的控制、電導的控制3終止液的配制終止液的配制比重控制比重控制 4洗滌液的配制洗滌液的配制pH、電導的控制、電導的控制顯色劑顯色劑B的配制的配制l質量控制點：質量控制點： 1 溶液配制的準確性溶液配制的準確性 用用pH計測定溶液計測定溶液pH值應符合要求值應符合要求 用電導率儀測定溶液電導率應符合要求用電導率儀測定溶液電導率應符合要求 2 配制、分裝環境：避光配制、分裝環境：避光 3 配制后溶液分裝的即時性：配制后溶液分裝的即時性：12小時內進行分裝小時內進

16、行分裝顯色劑顯色劑A的配制的配制l質量控制點：質量控制點： 1溶液配制的準確性溶液配制的準確性 用用pH計測定溶液計測定溶液pH值值 用電導率儀測定溶液電導率用電導率儀測定溶液電導率 2配制后溶液存放：配制后溶液存放：72小時內進行分裝小時內進行分裝終止液的配制終止液的配制l質量控制點：質量控制點： 溶液配制的準確性：溶液配制的準確性： 用婆美計測定溶液的比重應符合要求用婆美計測定溶液的比重應符合要求 洗滌洗滌液的配制液的配制l質量控制點：質量控制點： 溶液配制的準確性溶液配制的準確性 用用pH計測定溶液計測定溶液pH值值 用電導率儀測定溶液電導率用電導率儀測定溶液電導率 酶結合物制備酶結合物

17、制備生產和質量控制要點生產和質量控制要點生產工序生產工序生產關鍵點生產關鍵點質量控制點質量控制點酶結合物的制酶結合物的制備、滴配備、滴配1酶稀釋液的配酶稀釋液的配制制pH的控制的控制2*酶結合物的滴酶結合物的滴配配通過比較陽性參考品、通過比較陽性參考品、陰性參考品、精密性以陰性參考品、精密性以及最低檢出率情況，用及最低檢出率情況，用方陣滴定法進行方陣滴定法進行EIA法法測定確定酶結合物的濃測定確定酶結合物的濃度度半成品檢定質量標準半成品檢定質量標準l物理檢查 l試劑空白l陰性對照l陽性對照 l陰性參考品符合率l陽性參考品符合率l最低檢出量l精密性l穩定性實驗 :試劑的分裝、貼簽生產和質量控制要

18、點試劑的分裝、貼簽生產和質量控制要點除菌過濾除菌過濾l質量控制點：過濾膜的起泡點實驗l要求：濾器滅菌12130分鐘；0.22m濾芯泡點3.5bar 分裝分裝l質量控制點：液量的準確性、試劑瓶的密封性 要求： 分裝液量應大于等于標示量 ； 分裝好的試劑瓶應無漏液現象。 貼簽貼簽l質量控制點：批號打印的準確性 要求：批號等打印正確、清晰l操作： 貼瓶開始后，前30瓶應仔細檢查瓶貼質量，包括瓶貼位置，批號等打印是否正確、清晰，粘貼是否牢固、平整等。 合格后，每50瓶抽1瓶進行檢查。 合并包裝合并包裝生產和質量控制要點生產和質量控制要點生產工序生產工序生產要點生產要點質量控制點質量控制點合并包裝合并包

19、裝1包裝盒的包裝盒的壓印壓印生產日期、批號打印的準確生產日期、批號打印的準確性、清晰度性、清晰度2合并合并合并組分的齊全性合并組分的齊全性印刷類包裝品的物料平衡印刷類包裝品的物料平衡成品檢定質量標準成品檢定質量標準l物理檢查 l試劑空白l陰性對照l陽性對照l陰性參考品符合率l陽性參考品符合率l最低檢出量l精密性l穩定性實驗 成品入成品入庫庫入庫入庫l控制點：產品放行報告；入庫數l要求： 憑由質量管理部經理簽署的成品出廠合格報告，成品檢定書辦理入庫手續，入庫數應與成品出廠合格報告中所報數量一致。P2生物安全實驗室管理生物安全實驗室管理l人員衛生 進入P2實驗室必須加穿潔凈防護服，帶一次性乳膠手套

20、和一次性口罩。只允許工作人員進入，禁止非工作人員進入實驗室。l生物安全柜 實驗室的操作嚴格按操作規程進行操作，對存在感染性或潛在感染性的操作須在生物安全柜內進行。做好相應的消毒、使用記錄。l消毒及滅菌 所有直接或間接接觸病原微生物的儀器、設備、器具，均需進行消毒處理，能高壓的選擇121高壓滅菌30分鐘處理，不能高壓的選擇1%次氯酸鈉消毒。實驗中產生的具有感染性或潛在感染性的穿透性利器廢物置入黃色塑料利器盒中，其他非利器廢物置入黃色醫療廢物塑料袋中。l 實驗室應指定專人負責感染性或存在潛在感染性材料的保藏，做好標識，建立臺帳。二.金標產品【產品名稱】【產品名稱】l人類免疫缺陷病毒(HIV1/2)

21、抗體診斷試劑盒(膠體金法)【包裝規格】【包裝規格】l 50人份/盒【預期用途】【預期用途】l本試劑盒適用于對人血清/血漿或全血中的(HIV1/2)抗體的快速檢測。金標產品檢驗原理 本品采用膠體金免疫層析技術，在玻璃纖本品采用膠體金免疫層析技術，在玻璃纖維膜上預包被金標記維膜上預包被金標記HIVgp160HIVgp160和和gp36gp36抗原等，抗原等，在硝酸纖維膜檢測線和質控線上分別包被在硝酸纖維膜檢測線和質控線上分別包被HIVgp41HIVgp41、gp36gp36混合抗原和抗體等，當檢測進行混合抗原和抗體等，當檢測進行時，樣品中時，樣品中HIVHIV抗體可與金標記抗體可與金標記HIVHI

22、V抗原結合形成抗原結合形成復合物，由于層析作用復合物沿試紙條向前移動。復合物，由于層析作用復合物沿試紙條向前移動。 若樣品中含有可被檢測的若樣品中含有可被檢測的HIVHIV抗體，則與檢抗體，則與檢測線預包被的測線預包被的HIVHIV抗原結合形成抗原結合形成“金標記金標記HIVHIV抗抗原原HIVHIV抗體抗體HIVHIV包被抗原包被抗原”復合物而凝聚顯色；復合物而凝聚顯色；若樣品中沒有若樣品中沒有HIVHIV抗體或抗體或HIVHIV抗體的含量低于檢測抗體的含量低于檢測限時，則不形成復合物而不顯色。限時，則不形成復合物而不顯色。示 意 圖 陰性加樣區加樣區 陽性 無效檢測線質控線主要組成成份主要

23、組成成份 lHIV(1/2)抗體膠體金試紙條抗體膠體金試紙條/板板 50 Tests l樣品稀釋液（磷酸鹽緩沖液）樣品稀釋液（磷酸鹽緩沖液） 1瓶瓶4.0ml/瓶瓶l說明書說明書1份份金標產品主要生產設備點樣儀點樣儀切割機切割機核酸蛋白儀核酸蛋白儀電子防潮箱電子防潮箱全自動噴點系統全自動噴點系統劃膜機劃膜機多功能薄膜封口機多功能薄膜封口機干燥箱干燥箱金標產品生產工藝流程圖金標產品生產工藝流程圖氯化金膠體金標記抗原HIVgp36HIVgp160金標記抗原金反應墊燒金標金噴金干燥包被抗原HIVgp36A抗原檢測線包被液抗HIVgp160單抗質控線包被液配制配制反應膜劃膜干燥試紙大板組裝試紙條切割試

24、紙板封裝氯化鈉等配制樣品稀釋液待檢成品合并出廠成品檢定滴配 滴配檢定半成品檢定半成品檢定成品檢定分裝、帖簽物料質控點工序關鍵工序gp160抗原制備的生產和質量控制抗原制備的生產和質量控制生產工序質量控制要點細胞培養取工程細胞株，經接種復蘇后，進行大規模細胞連續培養，收集培養上清液。上清液經滅活、過濾、超濾，得濃縮上清液，置-20保存。無菌操作，培養溫度，溶氧值，pH值，細胞密度，細胞表達水平。 純化濃縮上清液經親和層析柱純化，用適宜的緩沖溶液淋洗、洗脫，收集洗脫峰，經濃縮即得純化的gp 160抗原。層析柱填料的使用次數，所用緩沖液的pH值，上樣、淋洗、洗脫速度。gp160抗原質量標準抗原質量標

25、準l物理性狀：為澄清溶液 l純度：采用SDS-PAGEl分子量 ：免疫活性l穩定性gp36抗原制備的生產和質量控制抗原制備的生產和質量控制生產工序質量控制要點發酵用gp36工程菌發酵，收集菌體。 工程菌誘導溫度，工程菌誘導時間。純化菌體經超聲破碎，制得粗制gp36抗原。粗制gp36抗原經親和層析柱純化，用適宜的緩沖液進行透析，經濃縮即得純化的gp 36抗原。超聲破碎時間，層析柱填料的使用次數，所用緩沖液的pH值控制，上樣、淋洗、洗脫速度。gp36抗原質量標準抗原質量標準l純度l分子量 l功能性試驗 l穩定性gp41抗原制備的生產和質量控制抗原制備的生產和質量控制生產工序質量控制要點發酵用工程菌

26、發酵，收集菌體。工程菌誘導溫度，工程菌誘導時間。純化超聲破碎，制得粗制gp41抗原。粗制gp41抗原經親和層析、分子篩等純化，收集目的蛋白峰，即得純化的gp 41抗原。超聲破碎時間，層析柱填料的使用次數，所用緩沖液的pH值，上樣、淋洗、洗脫速度。 gp41抗原質量標準抗原質量標準l純度：采用SDS-PAGE法檢定應符合要求l分子量 l功能性試驗 l穩定性 抗抗HIV單抗制備的生產和質量控制單抗制備的生產和質量控制生產工序質量控制要點細胞復蘇及傳代培養單克隆抗體細胞株，經接種復蘇后，進行細胞傳代培養。無菌操作，培養基的配制，細胞培養溫度。腹水制備福氏不完全佐劑免疫，7-10天后單克隆抗體細胞懸液

27、注射于F1代小鼠 ，10天后采集小鼠腹水，離心，制得單抗-HIV腹水。對數生長期細胞接種。純化用制備的抗HIV 單抗腹水，經親和層析柱純化等即得抗HIV 單抗。層析柱填料的使用次數，所用緩沖液的pH值，上樣、平衡、洗脫速度。單抗質量標準單抗質量標準l純度純度 l分子量分子量 l功能性檢測功能性檢測l穩定性試驗：穩定性試驗：37放置放置1515天，檢測上述標本，天，檢測上述標本，可達到上述功能性檢測標準可達到上述功能性檢測標準。 金反應墊制備的生產和質量控制要點金反應墊制備的生產和質量控制要點生產工序生產工序生產關鍵點生產關鍵點質量控制點質量控制點金反應墊的金反應墊的制備制備1 1膠體金的制備膠

28、體金的制備顏色、波長的控制顏色、波長的控制2 2* *金標抗原的制備金標抗原的制備pHpH值、顏色、波長的控制值、顏色、波長的控制3 3* *滴配滴配適當地調整兩種金標抗原的濃度適當地調整兩種金標抗原的濃度和比例，比較靈敏度和特異性結和比例，比較靈敏度和特異性結果，確定最佳的工作濃度。果，確定最佳的工作濃度。4 4* *噴金噴金包被量的控制包被量的控制5 5抽干抽干真空度、時間的控制真空度、時間的控制6 6保存保存避光、干燥的控制避光、干燥的控制金反應墊的制備金反應墊的制備膠體金的制備膠體金的制備l控制點：膠體金顏色、波長的控制l要求： 膠體金顏色：紅色； 波長：5284nm金反應墊的制備金反

29、應墊的制備金標抗原的制備金標抗原的制備l質量控制點：GP160和GP36抗原標記時 pH值、顏色、波長的控制l要求：用PH計測定，pH值：6-7； 顏色：紅色 波長：5334nm金反應墊的制備金反應墊的制備滴滴 配配l質量控制點：金標抗原的靈敏度和特異性l要求：通過HIV快速診斷試劑國家參考品l測定方法：適當地調整兩種金標抗原的濃度和比例，比較靈敏度和特異性結果，確定最佳的工作濃度。用HIV快速診斷試劑國家參考品檢驗，應符合要求。金反應墊的制備金反應墊的制備噴噴 金金l質量控制點：包被液量的準確性 l要求：2l/mm l方法： 將待包被的玻璃纖維放置于面板，開始包被，每張玻璃纖維應用目測法檢查

30、加液是否完整。連續5張玻璃纖維檢查合格后，進入正常包被過程。正常包被過程中每100張金反應墊應抽1張作過程檢查。金反應墊的制備金反應墊的制備金反應墊的抽干金反應墊的抽干l質量控制點：真空度、時間的控制l要求： 真空度：低于100Pa 時間：維持2小時以上 金反應墊的保存金反應墊的保存l質量控制點：金反應墊的存放l要求：避光、干燥（濕度30% ）l操作： 用目測法檢測保存金反應墊的鋁箔袋的密封性。 存放金反應墊的干燥柜 每天監測濕度2次。金反應墊的制備金反應墊的制備金反應膜制備生產和質量控制要點生產工序生產工序生產關鍵點生產關鍵點質量控制點質量控制點金反應膜制備金反應膜制備1 1質控線包被液的配

31、制質控線包被液的配制pHpH值及濃度的控制值及濃度的控制2 2檢測線包被液的配制檢測線包被液的配制pHpH值及濃度的控制值及濃度的控制3 3* *包被抗原滴配包被抗原滴配適當地調整抗原的濃度和比例，適當地調整抗原的濃度和比例，比較靈敏度和特異性結果，確定比較靈敏度和特異性結果，確定最佳的工作濃度。最佳的工作濃度。4 4* *劃膜包被劃膜包被點樣量的控制、質控線及檢測線點樣量的控制、質控線及檢測線間距的控制間距的控制5 5抽干抽干真空度、時間控制真空度、時間控制6 6保存保存避光、濕度的控制避光、濕度的控制金反應膜制備金反應膜制備質控線包被液的配制質控線包被液的配制l控制點： 包被緩沖液pH值及

32、包被濃度l要求： 包被緩沖液pH值：用pH計測定 包被濃度：用核酸蛋白儀檢測其蛋白濃度應符合要求金反應膜制備金反應膜制備檢測線包被液的配制檢測線包被液的配制l質量控制點： 包被緩沖液pH值及包被濃度l要求： 包被緩沖液pH值：pH計測定 包被濃度：用核酸蛋白儀檢測其蛋白濃度應符合要求金反應膜制備金反應膜制備包被抗原滴配包被抗原滴配l控制點：包被抗原滴配的靈敏度和特異性l要求：通過HIV快速診斷試劑國家參考品l測定方法：適當地調整抗原的濃度和比例，比較靈敏度和特異性結果，確定最佳的工作濃度。用國家參考品檢驗，應符合要求。金反應膜制備金反應膜制備劃膜包被劃膜包被l控制點：點樣量、質控線及檢測線間距

33、l要求：點樣量0.5-1.5l/mm ；兩線間距5-6.5mml操作： 將待包被的硝酸纖維素膜放置于軌道，用卡尺檢測質控線和檢測線出樣管的間距，符合要求后開始包被。觀察包被液體出樣情況，連續5分鐘無異常，則進入正常包被過程。正常包被過程中每卷金反應膜抽1張進行檢查。金反應膜制備金反應膜制備金反應膜的抽干金反應膜的抽干l質量控制點：真空度、時間的控制l要求： 真空度：低于100Pa 時間：維持2小時以上金反應膜制備金反應膜制備金反應膜的保存金反應膜的保存l控制點：金反應膜存放l要求：避光、干燥（濕度30% ）l操作： 用目測法檢測保存金反應膜的鋁箔袋的密封性。 存放金反應膜的干燥柜 每天監測濕度

34、2次。樣品稀釋液制備生產和質量控制要點樣品稀釋液的樣品稀釋液的配制配制l質量控制點： pH值l要求：用pH計進行測量試紙大板的組裝及分裝生產和質量控制要點試紙大板的組裝及分裝生產和質量控制要點生產工序生產工序生產關鍵點生產關鍵點質量控制點質量控制點試紙大板的組試紙大板的組裝及分裝裝及分裝1 1* *試紙大板的裝試紙大板的裝配配加樣墊、金反應墊、金反應膜、加樣墊、金反應墊、金反應膜、吸水紙等各組分銜接的控制吸水紙等各組分銜接的控制2 2* *試紙條的切割試紙條的切割試紙條切割寬度的控制試紙條切割寬度的控制3 3CTCT盒的組裝盒的組裝試紙條完整性的檢驗試紙條完整性的檢驗4 4裝鋁箔袋裝鋁箔袋鋁箔

35、袋的密封性鋁箔袋的密封性試紙大板的組裝及分裝試紙大板的組裝及分裝試紙大板的裝配試紙大板的裝配l質量控制點：質量控制點： 加樣墊、金反應墊、金反應膜、吸水紙等加樣墊、金反應墊、金反應膜、吸水紙等各組分各組分應應銜接緊密銜接緊密試紙大板的組裝及分裝試紙大板的組裝及分裝試紙試紙條條的的切割切割l質量控制點：試紙條切割寬度 要求：3002mm*8mm 試紙大板的組裝及分裝試紙大板的組裝及分裝CTCT盒的組裝盒的組裝l質量控制點：應檢查試紙條的完整性 試紙大板的組裝及分裝試紙大板的組裝及分裝控制控制裝鋁箔袋裝鋁箔袋l質量控制點： 鋁箔袋應密封樣品稀釋液的配制、分裝及貼簽樣品稀釋液的配制、分裝及貼簽生產工

36、序生產工序生產關鍵點生產關鍵點質量控制點質量控制點樣品稀釋液的制備樣品稀釋液的制備1 1配制配制溶液配制溶液配制pHpH的控制的控制2 2分裝、燈檢分裝、燈檢液量的準確性，分裝液量應不液量的準確性，分裝液量應不低于標示量低于標示量3 3標簽打印標簽打印批號打印的準確性及清晰度批號打印的準確性及清晰度合并包裝的生產和質量控制要點合并包裝的生產和質量控制要點l質量控制點：質量控制點：1.1.包裝盒的批號打印準確、清晰。包裝盒的批號打印準確、清晰。2.2.合并組分的齊全性，物料的損耗是合并組分的齊全性，物料的損耗是否符合規定要求。否符合規定要求。成品檢驗質量標準成品檢驗質量標準外觀 ：試紙條外觀平整

37、，材料附著牢固。每條寬不小于3mm。 物理檢查：膜面無破損、劃痕。 陰性參考品符合率 ：應符合要求陽性參考品符合率 ：應符合要求最低檢出限參考品符合率：應符合要求精密性試驗：應符合要求濾血功能：應符合要求穩定性試驗：試劑盒各組分置3715天 ，應符合性能要求。三.PCR核酸診斷試劑產品【產品名稱】【產品名稱】乙型肝炎病毒核酸定量檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）【包裝規格】【包裝規格】 32人份/盒【預期用途】【預期用途】 本試劑盒采用PCR技術、實時熒光探針技術、用于對臨床血清或血漿標本中的乙型肝炎病毒核酸DNA的定量檢測。PCR診斷試劑的原理本品系由乙型肝炎病毒特異性引物、熒光探針、以及Ta

38、q酶等成分組成，采用PCR體外擴增的方法，用過熒光信號的變化，定量檢測人血清或血漿標本中的HBV DNA。【試劑盒組份】樣品處理液樣品處理液A樣品處理液樣品處理液BHBV PCR反應液反應液AHBV PCR反應液反應液BHBV PCR反應液反應液C工作標準品工作標準品工作標準品工作標準品工作標準品工作標準品工作標準品工作標準品陰性對照陰性對照 生產工藝流程圖生產工藝流程圖Tris、PEG 6000、氯化鈉、辛酸鈉、EDTA-Na2樣品處理母液引物、探針、Taq酶、dNTP、UNG酶樣品處理試劑樣品處理液A樣品處理液BPCR工作母液PCR擴增反應試劑PCR反應液APCR反應液B PCR反應液C基

39、因工程菌株工作標準品質粒配制配制配制配制培養、抽提工作標準品工作標準品工作標準品工作標準品HBV DNA陰性血陰性對照配制配制分裝待檢半成品半成品檢定半成品待檢成品貼簽、合并出廠成品成品檢定物料工序關鍵工序質控點功能性試驗工作參數標定PCR產品生產和質量控制要點生產工序生產工序質量控制點質量控制點原輔料的檢驗原輔料的檢驗主要原輔料按質量標準要求進行檢驗，合格才能用主要原輔料按質量標準要求進行檢驗，合格才能用于生產于生產提取試劑的配制及分裝提取試劑的配制及分裝配制完成的試劑立即分裝配制完成的試劑立即分裝 ，分裝的裝量準確性控制，分裝的裝量準確性控制擴增試劑的配制及分裝擴增試劑的配制及分裝配制完成

40、的試劑應立分裝配制完成的試劑應立分裝 ，分裝的裝量準確性控制，分裝的裝量準確性控制*工作標準品的制備工作標準品的制備工作標準品的定標工作標準品的定標半成品檢定半成品檢定應符合相應標準應符合相應標準成品檢定成品檢定應符合相應標準應符合相應標準工作標準品的定標工作標準品的定標 根據測定的HBV質粒含量，取適量HBV質粒用模擬血清稀釋后，以質控參考品為標準進行標定，使最終稀釋濃度為約107Copies/ml，即為工作標準品。 然后將工作標準品進行10倍系列梯度稀釋，稀釋后為工作標準品、工作標準品、工作標準品。質量標準l陰性對照：陰性對照的檢測結果應為陰性，l工作標準品： 工作標準品Q1Q4的測定值符

41、合下表的范圍，并且其線性相關系數|r|0.950。工作標準品 已知拷貝數（IU/ml） 拷貝數允許范圍（IU/ml）Q1（工作標準品）K11073.54K11062.83K1107Q2（工作標準品）K21063.54K21052.83K2106Q3（工作標準品）K31053.54K31042.83K3105Q4（工作標準品）K41043.54K41032.83K4104l陰性參考品符合率：檢測國家標準品，對8份陰性參考品檢測結果不得出現假陽性。l陽性參考品符合率：檢測國家標準品，對9份陽性參考品檢測結果不得出現假陰性。l最低檢出限：檢測國家標準品中，線性和靈敏度參考品L0L5必須檢出，L6僅供參考。與標準值的線性回歸系數R97.0%。l精密性：測定公司工作標準品10次，