1、     【摘要】  目的  研究白色念珠菌（Candida Albicans）細胞壁不同溶解性的-葡聚糖（-glucan）對環磷酰胺（cyclophosphamide，endoxan，cytoxan，CTX）所致小鼠外周血白細胞減少的回升作用。方法  采用CTX所致的小鼠外周血白細胞減少模型，研究白色念珠菌細胞壁-葡聚糖對小鼠外周血白細胞數的影響。結果  三種溶解性的白色念珠菌細胞壁-葡聚糖均能升高小鼠外周血白細胞、中性粒細胞和單核細胞數。各組小鼠脾臟指數增加，脾臟、骨髓巨核細胞系增生。不溶性的-葡聚糖

2、作用更明顯。結論  白色念珠菌-葡聚糖尤其是不溶性-葡聚糖對CTX所致的白細胞減少有回升作用，是一種很有前途的免疫調節劑。        【關鍵詞】  白色念珠菌；-葡聚糖；生物學活性；提取分析；免疫藥理作用          【Abstract】  Objective  To study the pharmacological effect of the basic -glucan，acidic -glu

3、can and insoluble -glucan extracts of Candida albicans on the leukocytopoiesis-promoting in the leukopenia mice.Methods  Mice of each group except the untreated control group were administered cyclophosphamide intraperitoneally 100 mg/(kg·d) for three days to develop leucopenia.The experim

4、ental group were administered three kinds of Candida albicans -glucan intravenously for six days separately.The peripherial leukocytes of all mice were counted before treated CTX，and 1，3，5，7 days after treated CTX.Results  Three kinds of Candida albicans -glucan can increase the numbers of leuk

5、ocytes，neutrophilic granulocytes and monocytes in the peripheral blood.The spleen index in each group animal are increased，and megakaryocytes are increased in spleen and marrow.Conclusion  Candida albicans -glucan specially insoluble -glucans is a kind of immunomodulator which can increase the

6、numbers of leukocytes in the peripheral blood.        【Key words】  -glucan；Candida albicans；leukocyte；immunomodulator        -葡聚糖（-glucan）是白色念珠菌細胞壁中含量最高的多糖。作為一類條件致病真菌多糖，白色念珠菌-葡聚糖有著多種生物學活性和免疫藥理學作用，在抗炎、抗腫瘤、刺激造血等方面都有很高的藥效學作用1，但有關不同性質的白色念珠

7、菌-葡聚糖升白細胞作用的研究甚少。本研究制備三種溶解性的-葡聚糖，觀察其對環磷酰胺（cyclophosphamide，endoxan，cytoxan，CTX）所致的小鼠外周血白細胞減少的回升作用，為進一步確證白色念珠菌-葡聚糖刺激造血系統使白細胞升高的作用機制，和進一步研究白色念珠菌-葡聚糖有效成分或有效因子，為確立藥物質量控制標準和量效關系提供理論依據。        1  材料與方法        1.1  動物與試劑  昆明種小白鼠，46周

8、齡，體重20±2g，昆明醫學院動物科（云南省實驗質量合格證0000481號）。沙氏液體培養基（Sabourauds dextrose agar）：蛋白胨10g、葡萄糖40g、溶于1000ml蒸餾水，高壓滅菌后備用；淀粉酶：分子量9600，酶活力：50/mg（上海伯奧生物科技有限公司）；白色念珠菌堿溶性-葡聚糖（Candida albicans basic -glucan， CABBG）、酸溶性-葡聚糖（Candida albicans acidic -glucan， CAABG)和不溶性-葡聚糖（Candida albicans  insoluble -glucan， CA

9、IBG）：均按文獻方法制備2。        1.2  儀器  LRH-250Z型震蕩培養箱（廣東醫療器械廠）；81-2型恒溫磁力攪拌器（上海司樂儀器廠）。        1.3  白念珠菌的培養和三種白色念珠菌-葡聚糖的制備  取少量保存于密封無菌容器中的純白色念珠菌菌落，接種于沙氏液體培養基，接種后37恒溫搖床160次/min震蕩培養67天，3000rpm離心30min，收集菌體，冷凍保存。提取葡聚糖的流程，見圖1。 &#

10、160;      1.4  小鼠白細胞減少模型的建立  除空白對照組外，各組小鼠腹腔注射CTX 100mg/(kg·d)，連續3天，建立小鼠外周血白細胞減少模型。        1.5  確定三組-葡聚糖的給藥劑量  參照急性毒性實驗摸索LD50值，各組給藥劑量最后如表1。        1.6  統計學處理  急性毒性學實驗結果采用Bliss法計算LD50值。藥效

11、學實驗采用SPSS11.5統計軟件進行數據處理分析，所有指標均以均數±標準差（x±s）表示，組間比較采用方差分析，以P0.05為差異有顯著性。  圖1  從白色念珠菌提取CABBG、CAABG、CAIBG的流程示意圖Table 1  Dose design of experiment      2  結果        2.1  急性毒性學實驗  通過急性毒性實驗得到LD50值分別為：CABBG 36.89

12、37mg/kg，CAABG 89.23549mg/kg，CAIBG 767.7753mg/kg；95%可信區間分別為CABBG組32.005242.5289mg/kg，CAABG組76.7182103.8025mg/kg，CAIBG組663.748888.106mg/kg。各實驗組小鼠肉眼觀察，除肝臟增大外未見明顯變化，病理HE切片顯示肝細胞有不同程度的腫脹和空泡變。        2.2  外周血白細胞變化  實驗第5、7、9天CABBG、CAABG、CAIBG組小鼠外周血白細胞數、中性粒細胞數、單核細胞數均顯著

13、增高，其中第7天、第9天，CAIBG組白細胞數、單核細胞數較陽性對照組rhG-CSF升高，差異有顯著性。Table 2  Numbers of leukocyte of peripheral blood in each group animal  (x±s) 注：Note：*P0.05，compared with the normal control；*P0.05，compared with the positive control- 28 焦靈利，倪孟祥，陳日，等. 頭孢唑林鈉聯合舒巴坦鈉對產酶和非產酶菌的體內抗菌活性J. 中國藥師，2000,3(5):26629 Gavalda J, Torres C, Tenorio C, et al. Efficacy of ampicillin plus ceftriaxone in treatment of expeimental endocarditis due to Enterococcus faecal