1、 中國新藥雜志2011年第20卷第1期作者簡介 張玉琥,男,主任藥師,曾從事多年藥物新劑型及新制劑研究工作,現從事化學藥品技術審評工作。聯系電話:(01068585566,E m ai:l z hangyhcde .org .cn 。新藥申報與審評技術藥品注冊生物等效性試驗中常見問題分析張玉琥(國家食品藥品監督管理局藥品審評中心,北京100038摘要 文中對目前藥品注冊申請中生物等效性試驗方面常見的問題進行了分析討論,重點討論了試驗設計、參比制劑選擇、試驗樣品制備及檢驗、生物樣本測定方法等方面的常見問題,并對試驗樣品的提供與保存、餐后生物等效性試驗、生物等效判定標準等需要進一步關注的問題進行討

2、論,提出了相關建議。關鍵詞 生物等效性;常見問題;藥品注冊中圖分類號R95 文獻標志碼C 文章編號1003-3734(201101-0014-06Analysis on co mm on defects i n bi oequiva l ence studies of drug registrationsZ HANG Yu hu(C enter for D rug Evaluation,S tate F oo d and Drug Adm inistration,B eiji n g 100038,China Abst ract Th is article ana l y zed and di

3、scussed the co mm on defects i n b i o equ i v a lence stud ies of drug reg is trations ,such as defects concerned w it h test design ,choosing o f reference drug produc,t m anufact u re and assay oftest drug produc,t b i o analyticalm ethod etc .The discussi o n a lso dealt w ith consi d erations a

4、nd suggesti o ns on han d li n g and retenti o n of test sa m ples ,food effect bioavailab ility and b ioequivalence li m i.tK ey w ordsb i o equ i v a lence ;co mm on defects ;dr ug reg istrati o n生物等效性試驗在藥品研發過程中發揮著非常重要的作用。仿制口服固體制劑,需要在藥學一致的前提下與原研藥進行生物等效性試驗,驗證其與原研產品是否生物等效,即在相同的試驗條件下,其活性成分的吸收速度和吸收程度是

5、否一致,進而確認其臨床可替代性。在新藥開發、新藥處方工藝變更或劑型變更的研究過程中,生物等效性試驗也發揮著重要作用。例如,新藥開發過程中,擬上市藥品的處方工藝或劑型若與進行臨床試驗的藥品有區別,根據變更的具體情況,可能需要通過生物等效性試驗驗證變更前后藥品的等效性。近年來隨著研發水平的提高、新型儀器設備的應用以及新修訂的 藥品注冊管理辦法!實施后技術審評要求的提高,國內生物等效性試驗研究水平也有了較明顯的提升。但從審評實踐來看,部分申報資料在生物等效性試驗設計、試驗樣品制備及管理、生物樣本測定方法學研究等方面仍存在較多問題;部分申報單位對生物等效性試驗研究方面的一些技術問題仍存在著模糊認識,導

6、致提交的試驗資料不能支持所申報藥品的技術評價和注冊。本文對現階段藥品注冊生物等效性試驗中的常見問題進行分析討論并提出建議,供相關研究工作者及藥品注冊申請人參考,期望有助于進一步提升國內藥品注冊生物等效性試驗研究水平。1 試驗設計方面1.1 受試者例數不能滿足要求 關于受試者例數, 藥品注冊管理辦法!中要求一般為1824例。對于大多數藥物的生物等效性試驗,受試者例數為1824例基本可滿足要求。但對于高變異藥物(個體內變異>30%者,則應當適當增加樣本量。例如某制劑由于已知其主藥具有高變異的特性(個體內變異達30%,在進行生物等效性研究的時候,根據變異程度,經計算確定了40例受試者參與試驗,

7、試驗結果為受試制劑與參比制劑生物等效。如果不中國新藥雜志考慮藥物變異大的特點,而是按照一般要求,選擇1824例受試者進行試驗,結果很可能出現不等效的假陰性結果。希望藥品研發者在設計生物等效性試驗時,充分收集試驗藥物的信息,對于高變異的藥物,應考慮增加試驗的樣本量,以保證試驗有適當的把握度。1.2 取樣點設計不合理 等效性試驗生物樣本采樣的時間點應合理設計,使得到的藥時曲線能夠覆蓋吸收相、分布相和消除相,并反映制劑的體內血藥濃度經時特征。一般建議峰濃度之前不少于3個取樣點,峰濃度附近有3個取樣點,消除相不少于4個取樣點。有的申報品種由于吸收快,達峰時間較短,而取樣時間設計未做相應考慮,導致峰濃度

8、前只有1個取樣點,還有個別品種,甚至第一取樣點即為峰濃度。再如某腸溶片品種,取樣點設計時未充分考慮腸溶制劑的特點,對達峰時間的估計有誤,導致前期取樣點設計過密,峰濃度前有5個取樣點,峰濃度時反而取樣間隔時間太長,未能充分反映制劑的體內特征。另外,有的試驗對長半衰期藥物在設計取樣時間時未充分考慮其特點,如某品種雖然設計了13個取樣點,但由于未充分考慮該藥半衰期長的特點,峰濃度后的取樣點間隔時間太短,至取樣結束時血藥濃度尚未下降到峰濃度的1/10,導致試驗結果不能滿足生物等效性評價的需要。1.3 申報多個規格而未合理設計試驗 同一藥品申報多個規格的,是否需對每個規格均進行生物等效性試驗,取決于各規

9、格之間存在生物利用度差異的可能性大小。應當結合藥物的藥動學特點、劑型特點、各規格處方工藝的異同、體外溶出特性等綜合分析后做出判斷。如果沒有充分的豁免體內試驗的依據,則應當對每一規格均進行生物等效性試驗。同時申報多個規格時,申報資料中應明確是否對每一規格進行了生物等效性試驗,若未對每一規格進行試驗,應提供充分理由。實際審評中常見的情況是僅對一個規格進行生物等效性試驗,而不說明選擇該規格進行試驗的依據,也不說明其他規格不進行試驗的理由。一般來說,如果規格不同,相關的處方改變屬于變更研究技術指導原則1中規定的II 類變更范疇時,若各規格體外溶出行為一致,可僅對高規格產品進行生物等效性試驗,而豁免較低

10、規格產品的體內試驗,比如普通片劑或膠囊劑各規格之間僅原輔料等比例改變的情況。另如緩釋膠囊(內含緩釋小丸,如各規格之間僅小丸裝量不同,若體外釋藥行為一致,可豁免較低規格產品的體內試驗2。2 參比制劑選擇由生物等效性試驗目的可知,參比制劑應當選擇原研廠產品,試驗結果才能支持試驗制劑與原研產品治療學等效的判斷。在目前仿制藥生物等效性試驗中,大多數申報單位都能夠恰當地選擇參比制劑,尚存在問題主要表現在改劑型產品的仿制藥申請中。如某藥物原研廠產品為片劑,國內先有企業按改劑型產品申報了膠囊劑,經與原研廠片劑進行生物等效性試驗后獲準上市。后續申報膠囊劑的企業則按仿制藥申報,這種情況下,參比制劑仍應選擇原研廠

11、片劑,而不是已獲準上市的膠囊劑,因為需要通過等效性試驗橋接的是原研產品的臨床研究結果,直接的等效性試驗是最佳的方法,若通過已上市膠囊劑間接橋接,由于誤差的傳遞和放大,將導致結果的把握度降低。但是,一些企業誤認為仿制的是膠囊劑,而將國內已上市的膠囊劑選為參比制劑,導致試驗結果不能被認可。參比制劑選擇方面存在的問題還出現在上市后的變更研究申請中。上市后變更研究中部分情況下需要進行生物等效性試驗,對于原研藥,參比制劑應選擇變更前的樣品,即進行變更前后樣品的比較;對于仿制藥,這時的參比制劑仍應選擇上市的原研藥,而不是該仿制藥變更前的樣品。部分企業對此有誤解,認為變更研究中生物等效性試驗的參比制劑一律應

12、采用變更前的樣品,這實際上不一定正確。3 試驗樣品方面3.1 試驗樣品的制備規模偏小 生物等效性試驗樣品的制備應符合藥品生產質量管理規范(GMP 要求,同時采用的處方工藝、生產設備應與擬上市產品一致,規模應達到中試以上。一些申報單位采用小試規模的樣品進行等效性試驗,放大生產后才發現處方工藝需要較大變更,導致需要重新進行生物等效性研究。3.2 試驗制劑與參比制劑的含量差異過大 口服固體制劑通常允許的含量范圍為標示量的90%110%,也就是說,上下限之間可能存在20%的含量差異,若不對試驗樣品的實際含量予以關注,可能會導致生物等效性試驗結果出現大的偏差。通常試驗之前應測定試驗制劑和參比制劑的含量,

13、為保證測定結果的可比性,試驗制劑和參比制劑的含量測定 中國新藥雜志2011年第20卷第1期應由同一實驗室進行。一般情況下,二者的含量差異不應超過5%。4 生物樣本測定方法4.1 方法的專屬性或靈敏度不能滿足要求 生物樣本中藥物濃度低,干擾因素多,測定方法對專屬性和靈敏度有較高的要求。審評中注意到,有的品種采用的測定方法靈敏度或專屬性不能滿足要求,導致試驗結果不能支持生物等效性的評價。例如某制劑試驗設計有13個取樣點,但實際測定時多數受試者只有6個點測到了具體數據,其余取樣點由于檢測方法的靈敏度偏低而未檢出。又如某制劑品種提交的生物等效性試驗圖譜顯示,多個樣本測定的色譜峰受到不明雜峰的干擾,由于

14、方法的專屬性不能滿足要求,該品種未能獲得批準。4.2 樣品的穩定性考察不完善 由于生物等效性試驗樣本從采樣到檢測的周期通常需要幾周至幾個月,在其貯存期間目標藥物的穩定性需經考察驗證。申報資料中應提供生物樣本分析測定涉及的穩定性研究的詳細資料,如樣本室溫放置穩定性,短期、長期貯存穩定性,凍 融穩定性,制備后穩定性,對照液和內標液的穩定性等。在樣品穩定性考察方面存在的問題,一是僅提供相關文獻,未進行樣品穩定性的考察。由于含藥樣本穩定性受貯存條件、藥物的化學性質、空白生物樣品和容器系統的影響,在特定的容器和生物樣品中待測物的穩定性不能外推至其他系統,因此相關文獻數據可供參考,但不能代替實際的穩定性考

15、察。二是雖然進行了穩定性考察,但試驗設計不完善,如長期穩定性的考察時間不夠,未能覆蓋從第1個樣本采集至最后1個樣本分析的時間周期;再如考察樣品不夠,僅考察1個濃度樣品的穩定性等。4.3 未進行基質效應研究 基質效應是生物樣本測定中的常見問題,采用免疫法及液質聯用法LC M S(LC MS /M S等測定方法時,應對基質效應的研究情況進行說明。比如采用LC M S(LC M S /M S分析,特別是電噴霧離子化(ESI方式時基質效應通常比較明顯,優化樣品前處理過程、提高色譜分離效果可減少基質效應。目前申報資料中很少見到對基質效應的研究,希望引起研究者的注意。4.4 隨行質控不完善 生物樣本中藥物

16、濃度低,干擾因素多,隨行質控是保證測定結果可靠性的重要手段。申報資料中應說明質控樣品濃度、制備日期和在進行分析前的儲存條件;說明每個分析批的操作中質控樣品測定的數量、分布、測定結果及是否符合可接受標準。相關指導原則中對隨行質控樣本的數目、分布有明確的要求,但有的品種隨行質控不完善,如質控樣品數不夠,達不到未知樣品總數的5%;有的品種不是將質控樣品合理分布于分析批的測定過程,而是集中在分析批的開始或結束前測定質控樣品,導致了試驗結果的可靠性不能得到保證。5 試驗圖譜生物樣本測定圖譜是數據溯源的重要依據,因此申報資料中要求提供全部的試驗圖譜。在圖譜提供方面,有的品種不能提供完整的試驗圖譜,如僅提供

17、了受試者樣品的測定圖譜,缺少方法學驗證圖譜,缺少隨行標準曲線、質控樣品的測定圖譜等。有的品種提供的圖譜缺少重要的溯源信息,如未標示分析日期和進樣時間,未標示受試者編碼、樣品編號等信息,未提供積分參數;有的采用不合理方式積分;有的采用了手動積分,但未提供合理的原因。6 其他需要關注的問題6.1 試驗樣品的提供和保存 試驗樣品的真實可靠是生物等效性評價的前提。關于試驗樣品及其保存,申報資料中應有詳細的說明,包括提交試驗機構的樣品量、批號、含量,生物等效性試驗中已使用的樣品量、剩余量,剩余樣品的保管單位、保管方式及相關責任人。美國FDA 在相關指導原則中對試驗樣品的提供和保存有明確的要求3,可供注冊

18、申請人參考。一般來說,藥品注冊申報單位在獲得生物等效性試驗批件后,應向試驗機構(臨床藥理基地提供試驗樣品(試驗制劑及參比制劑,試驗樣品的量應不低于全檢需要量的5倍,如對于片劑,試驗制劑和參比制劑可各提供300片。用于生物等效性試驗的樣品應由試驗機構從注冊申請人提交的樣品中隨機抽取,剩余樣品由試驗機構封存。監管機構必要時可對樣品的真實性進行核查。國內生物等效性試驗中常見的情況是提交的樣品僅可滿足等效性試驗的用量,即使有剩余量,也常常退還申請人,這種情況下,試驗樣品的真實性及其核查就無從保障。6.2 餐后生物等效性 食物可改變藥物的生物利用度,不同制劑之間由于處方工藝的不同,食物對其釋藥及吸收的影

19、響可能不同,有時雖然空腹服藥生物等效,但也可能餐后服藥的情況下出現不等效。因此,餐后生物等效性研究也不應被忽視。從審評實踐來看,食物對生物利用度影響的研究在國內尚中國新藥雜志未引起足夠的重視。隨著國內研發水平及審評技術要求的提高,在生物等效性試驗審評中提出對餐后生物等效性的要求是必然的趨勢,這一點希望引起研發者及早予以重視。對于仿制普通口服固體制劑,以下幾種情況可不進行餐后生物等效性試驗:所含原料藥為高溶解和高滲透性藥物(即生物藥劑學BCS 分類I 的藥物,且試驗制劑與參比制劑均能快速溶出。這種情況下若受試制劑與參比制劑空腹給藥生物等效,則餐后給藥不等效的可能性很小。#參比制劑說明書中已明確規

20、定臨床只能在空腹狀態下服用。參比制劑說明書中未陳述食物對吸收或者給藥方式的影響。除上述幾種情況外,一般均應在空腹生物等效性研究的基礎上與原研藥進行餐后生物等效性試驗。對于仿制緩釋制劑,均應當在空腹給藥生物等效的基礎上,進行餐后給藥的生物等效性試驗,證實在進食狀態下與被仿品亦具有生物等效性。餐后生物等效性試驗設計的具體方法和要求可參考相關技術指導原則4。6.3 預試驗 進行正式的生物等效性試驗之前,可先進行較小樣本的預試驗。通過預試驗,可以進一步驗證建立的生物樣本測定方法的可行性,考察藥物個體內的變異性,驗證取樣點設計的合理性,并提供其他有益的信息。比如對于普通制劑,通過預試驗,可以避免第一取樣

21、點已經錯過了峰濃度的問題;對于緩釋制劑,可以發現是否存在時滯、突釋等現象。預試驗中若發現問題,可以及時糾正,改進完善方法及試驗方案,以免正式試驗后才發現問題而造成更大的損失。6.4 生物等效的判定標準 生物等效性試驗結果的統計分析,主要是用藥動學參數AUC 和C m ax 經對數轉換后以多因素方差分析(ANOVA 進行顯著性檢驗,然后用其幾何均值進行雙側和單側t 檢驗以及計算90%置信區間的方法來評價和判斷制劑間的生物等效性。FDA 采用的等效性范圍是受試制劑與參比制劑AUC 和C m ax 幾何均值比的90%置信區間均應在80%125%范圍內。因為根據臨床經驗,對于大多數藥品來說,不大于20%的吸收差異被認為不會產生顯著的臨床影響。80%125%的允許范圍是根據受試制劑和參比制劑的藥動學參數AUC ,C max 的幾何均值比%區別<20%&來設定的。我國2005年頒布的指導原則中采用的等效性判定標準,要求受試制劑與參比制劑AUC 幾何均值比的90%置信區間在80%125%,C max 幾何均值比的90%置信區間在70%143%范圍內5。可以看出,對AUC 的要求與FDA 一致,但對C max 的要求明顯偏低,FDA 對C m ax 同樣要求在80%125%范圍。E MEA 也規定C m ax 的等效范圍一般應為80%125%,僅對高變異藥物在滿足特定條件的情況下