1、日立 F-4500熒光分光光度計(jì)簡易操作方法作者:佚名 文章來源:網(wǎng)絡(luò) 點(diǎn)擊數(shù):318 更新時間:2008-3-20一 開機(jī)順序:(1開機(jī)前首先確認(rèn)主機(jī)兩個開關(guān):POWER/MAIN均處于關(guān)閉狀態(tài)(搬向 O 處。先接(2通電源開關(guān)(POWER , 5秒鐘后再按下氙燈點(diǎn)燈按鈕,當(dāng)氙燈點(diǎn)燃后 3再接通主 開關(guān)(MAIN 。此時主開關(guān)上方綠色指示燈連續(xù)閃動三下。 , v*L;(4接通電腦及打印機(jī)電源, Win98開始建立,隨后 F-4500操作界面自動進(jìn)入。(5按界面提示選擇操作方式。二 關(guān)機(jī)順序:(1逆開機(jī)順序?qū)嵤┎僮鳌?2當(dāng)電源開關(guān)關(guān)閉后 5秒鐘,再次接通 10分鐘 . 目的是僅讓風(fēng)扇工作,使燈

2、室散熱最 后關(guān)閉電源開關(guān)。三 操作界面介紹:# G& t; i$ ?! v0 V- s- s8 (1當(dāng)前顯示的畫面為模擬畫面,即觀測樣品峰用。 . j! x'' |7 M0 u! X! : |# L(2在模擬畫面右側(cè),是儀器當(dāng)前狀態(tài)顯示。它給出了當(dāng)前的信號能量值,激發(fā)和發(fā)射波 長及狹縫值,光閘(Shutter 開 /關(guān)狀態(tài)等。 # p V O0 w5 e1 v(3顯示屏最上一行為八個菜單桿,分別為 File /Edit /View /Spectrophotometer /Tools /Utility /Window /Help。每個菜單桿下均有子目錄,供用戶選用。 !

3、r8 q/ r. w9 p1 |, (4為了方便用戶操作,將常用的子目錄演變?yōu)?23 個帶彩圖的快捷工具欄,用戶隨意點(diǎn) 擊后,操作界面立即更換,非常便利。該 23 個快捷欄分布在顯示屏的上方及右方,非常 醒目。 4 |*z& y# ?9 E4 k0 四 波長掃描的簡易操作:(Wavelength Scan & " $ M: e+ k2 J$ w- I7 v點(diǎn)擊快捷欄 Method 后,立即顯示了分析方法(Analysis Method的五個重疊界面分別為 常規(guī) (General , 儀器條件 (Instrument , 模擬畫面 Monitor , 處理 Proces

4、sing , 報告 Report 。下面詳細(xì)介紹每個界面:(1 General (常規(guī)*Measurement (測量方式-選擇 Wavelength (波長掃描*Operator (操作者名-鍵入人名*Instrument 儀器型號 -自動給出 Q t- q" T0 _4 *Sampling 樣品名稱 -*Comments 注釋表-可輸入簡單說明*Load 裝載 -調(diào)用已存入的條件*Save 存入-存儲現(xiàn)有的條件*Save As (另存-另存現(xiàn)有的條件(2 Instrument (儀器條件*Scan mode 掃描方式 -Excitation 激發(fā)波長掃描 , y4 J H4 z!

5、 T8 T/ r9 |Emission (發(fā)射波長掃描 E4 u; W- K: c4 n. g'' KSynchronous (同步掃描*Data mode (數(shù)據(jù)方式-Fluorescence (熒光采集,; Luminescence (發(fā)光采集Phosphorescence (磷光采集*EM WL (發(fā)射波長-輸入范圍 200nm900nm*EX Start WL (激發(fā)起始波長-輸入范圍 200nm 890nm6 J- o1 ?9 Y8 J9 B+ N: c*EX End WL (激發(fā)終止波長-輸入范圍 210nm 900nm*EX WL 激發(fā)波長-輸入范圍 200nm

6、900nm*EM Start WL (發(fā)射起始波長 -輸入范圍 200nm 890nm- _5 |1 l7 G7 X/ 5 D/ *EM End WL (發(fā)射終止波長-輸入范圍 210nm900nm$ J M0 S1 % P, F. _5 *Scan speed (掃描速度-15,60,300,1200,2400,12000,30000nm/min六擋可選(磷光掃描:15,60,240nm/min*Delay (延遲時間-輸入范圍 0¬99秒(啟動后 延遲測量*EX Slit (激發(fā)單元狹縫-1.0, 2.5 ,5.0, 10.0, 20.0五擋可選。 6 Y3 *EM Slit (

7、發(fā)射單元狹縫-1.0, 2.5, 5.0, 10.0, 20.0五擋可選。*PMT Voltage (光電管負(fù)高壓-400V, 700V, 950V三擋可選。(一般選 擇 700V *Response (響應(yīng)速度 -0.0004,0.01,0.05,0.1,0.5,2.0,8.0秒 Auto 八擋可選。速度快峰形分辨率高,但噪音大。速度慢反之。*Corrected spectra (光譜校正- 選定后則可使用已校正的光譜函數(shù)。*Shutter control (光閘控制 -選擇控制狀態(tài), 樣品待測或重復(fù)掃描時 激發(fā)光不能照射到樣品上 , 避免產(chǎn)生化學(xué)變化。 " l8 J8 S,*Re

8、plicates (重復(fù)次數(shù)-可在 199之間選擇。(重復(fù)掃描 用*Cycle time (循環(huán)周期-可在 0180分間選擇。(重復(fù)掃描 用(3 Monitor (模擬監(jiān)視 '' O+ f + l Y; p*Y-Axis Max (縱軸標(biāo)尺上限值-一般樣品預(yù)掃描后儀器自動賦值。*Y-Axis Min (縱軸標(biāo)尺下限值- 根據(jù)需要賦值。Open data processing window£*after data acquisition(測量后打開數(shù)據(jù)處理窗口 。測定結(jié)果可自動存儲,便于后期處理。 R 一般選定*Print report after data acqui

9、sition (數(shù)據(jù)采集后自動打印- 一般不選定。*Overlay (重疊光譜圖 -可將光譜圖重疊在監(jiān)視畫面上但重復(fù)掃描不可設(shè)定。 C(4 Processing (處理方法簡介:此界面主要是對已測定的圖譜根據(jù)用戶的要求進(jìn)行選擇處理。 ;CAT 平均化-如選定則對重復(fù)測定的圖譜進(jìn)行平均處理。 £*+ n; ?5 Q6 5 f4*Processing choices (處理方法的選擇- 有如下四種處理方法:0 y1 ! M7 2 _,1 Savitsky-Golay Smooth ( 2 f, P& Y5 ?% y2 Mean Smooth 平均平滑3 Median Smooth

10、(中間平滑 . s6 Y B% q% " x k5 C4 Derivative (微分求導(dǎo)*Processing steps (處理順-% K% H7 M; S5 j. : p G'' o*Peak Finding 峰檢出 - 有如下三項(xiàng)內(nèi)容:1 Integration method (檢出方法- a Rectangnlar 矩形b Trapezoid (斜方形c Romberg (羅伯格形 k" p" M" F5 B+2 Threshold (閾值-決定信號峰的舍取。賦值范圍 0.001-1000。 小于賦值的峰不打印結(jié)果。3 Sens

11、itivity (靈敏度-可改變放大器的放大倍數(shù)。一般設(shè)置為 1 。4 Report 報告格式 ; J9 H6 Q- u0 M3 A; l2 g. W*Output (輸出 -有如下三種格式可選:1 Print Report - 打印報告(常用格式 7 N x2 Y b% B 2 Use Microsoft Excel -將數(shù)據(jù)變換為微軟 Excel 格式。3 Use print generator sheet-利用變換器(附選件打印圖表。*Pientation (方位-*Pintable items (打印選項(xiàng) -有五種項(xiàng)目可選:! S C# U c'' e# o1 Incl

12、ude data (打印數(shù)據(jù)2 Include method (打印方法3 Include graph (打印圖譜 $ ?1 u+ Q! f. V! q" g4 Include data listing (打印數(shù)據(jù)表 ! V- x u/ p7 Y5 Include peak table 打印峰值表*Printer Font 打印機(jī)字形- 可改變報告的打印字形。五時間掃描的簡單操作:(Time Scan 0 u S8 |5 / E 9 K簡介:此掃描方式是 EX,EM 的波長均固定,僅觀察樣品隨時間的變化。模擬畫面的橫坐標(biāo) 軸為時間單位。進(jìn)入方法與波長掃描相同。 w: h*K7 E&a

13、mp; t'' e b$ Y u(1 General 常規(guī)*Measurement 測量方式-選擇 Time Scan 時間掃描(其它內(nèi)容與波長掃描相同,故從略。(2 Instrument (儀器條件*Data mode 數(shù)據(jù)方式-Fluorescence (熒光采集Luminescence (發(fā)光采集Phosphorescence 磷光采集*EX WL (激發(fā)波長-0nm,200nm 900nm 設(shè)定 y*EM WL (發(fā)射波長-0nm,200nm 900nm 設(shè)定*Time unit (時間單位-s,ms 兩種單位可設(shè)定*Scan time (掃描周期-10 3600s,1

14、000 9999ms 范圍設(shè)定(其它內(nèi)容與波長掃描相同,故從略。(3 Monitor 模擬監(jiān)視*Y-Axis (縱軸上下限值- 一般樣品預(yù)掃描后儀器自動賦值 .*X-Axis (橫軸上下限值-時間軸, 根據(jù)需要設(shè)定 .(其它內(nèi)容與波長掃描相同,故從略。(4 Processing (處理方法- 內(nèi)容與波長掃描相同,從略(5 Report (報告格式- 內(nèi)容與波長掃描相同,從略 " J, u3 L/ |7 I1 y8 P 六光度計(jì)法的簡單操作 : PHOTOMETRY# m0 R+ Q5 a- X簡介:光度計(jì)法亦稱濃度直讀法, 也稱工作曲線法。 利用配制的具有梯度的標(biāo)準(zhǔn)樣品, 先做 出一

15、條標(biāo)準(zhǔn)曲線,然后再反測未知樣品。 N5 O: H" v L9 (1 General 常規(guī) '' X7 R1 ?3 4 c+ Q- m! *Measurement 測量方式-選擇 Photometry (光度計(jì)(其它內(nèi)容與波長掃描相同,故從略。(2 Quantitation 定量條件 + |+ r*L9 V6 W$ N N*Quantitation type (測量類型-1 Wavelength 指定波長2 Peak area (峰面 積3 Peak height 峰 高 '' Z i0 I; e5 L'' w'' P4

16、Derivative (導(dǎo) 數(shù)5 Ratio (比 率 " t6 7 J'' y/ d1 C5 W*Calibration type 曲線校正類型-1 None (沒 有2 1 st order(線性方程3 2 nd order(二次方程4 3 rd order(三次方程 9 W: G. F$ G, v5 Segmented (折 線*Num ber of wavelengths 波長數(shù)-當(dāng)曲線校正選擇 None 時波長數(shù)可以在 1-6間選擇。 其他校正類型只能在 1-3間選擇, 但此時的波長數(shù)并不表示在若干波長值下 可以同時測定樣品的濃度,僅僅是對信號峰的一種處理方

17、法。*Concentration unit 濃度單位-根據(jù)需要格式設(shè)定 7 v1 a1 C5 w1 ?; o*Manual calibration(手動校正-根據(jù)公式校正 1 h9 b; k9 y# D; p/ " s *Force curve through zero 強(qiáng)制曲線歸零 7 , m'' |1 W a e. w*Digit after decimal point (小數(shù)有效位-可以在 1-3間賦值(3 Instrument 儀器條件*Data mode 數(shù)據(jù)方式- Fluorescence (熒光采集 ! k *_/ I% X3GLuminescence

18、（發(fā)光采集） Phosphorescence（磷光采集）7 f0 D2 u4 q# Wavelength mode （波長方式）- EX WL Fixed（激發(fā)波長固定） EM WL Fixed（發(fā)射波長固定） Both WL Fixed（兩側(cè)均固定） Fixed WL （波長選定）- 可以選定 16 個波長值，波長值賦值范 圍 0nm,200900nm。 EX Slit （激發(fā)單元狹縫）- 設(shè)定范圍 2.5,5.0,10.0,20.0nm EM Slit （發(fā)射單元狹縫）- 設(shè)定范圍 2.5,5.0,10.0,20.0nm PMT Voltage 光電管高壓- 設(shè)定范圍 400V,700V,

19、950V8 D8 I4 Y1 KW$ y8 u'' Auto statistic cal.number （自動統(tǒng)計(jì)計(jì)算）可以進(jìn)行平均值，標(biāo)準(zhǔn)偏差， 變異系數(shù)的計(jì)算。為此目的則要設(shè)置樣品重復(fù)個數(shù)，此數(shù)在 2-4000 間選擇。 Replicates （重復(fù)次數(shù)） 重復(fù)測量次數(shù)，輸入范圍 1-20。& o/ e E, ? Integration Time （積分時間）- 0.110.0 秒間設(shè)定。, U+ P: 7 # b" J T Delay （延遲時間）-啟動后經(jīng)過所設(shè)定的時間自動開始測量。 （4）Standards 標(biāo)準(zhǔn)樣品表 Number of Samples （標(biāo)準(zhǔn)樣品數(shù)目的設(shè)定） 120 間設(shè)定。 p9 c5 : P r+ Update 修定確認(rèn) 當(dāng)標(biāo)樣數(shù)確定后，點(diǎn)擊此框后顯示標(biāo)樣表 以供賦值。 Insert Delete （5）Monitor 插 入 點(diǎn)擊此框可臨時插入一個標(biāo)樣條目。 刪 除- 點(diǎn)擊此框可臨時刪除一個標(biāo)樣條目。; d 模擬監(jiān)視 同前述相同，故從略。% t5 h 4 b1 q: w& u9 T: ?& a （6）Rep