1、國家標準谷物維生素B1的測定編制說明一、任務來源 根據國家糧食局國糧辦發2002 251號文下達谷物維生素B1的測定標準制定任務，國家糧食局武漢糧油飼料質量監督檢驗中心經過試驗研究，該標準制定工作基本完成，現提出送審稿。二、制定該標準的目的和意義隨著我國加入WTO，國際貿易有了長足發展。GB7628-1987于1987年開始實施，至今已近20年。為我國糧油工業的發展、產品質量的提高作出了應有的貢獻。GB7208-1987系等效采用AACCMethod 86-70ThiamineThiochrome Method（1984年英文版），目前，AACCMethod 86-70ThiamineThio

2、chrome Method出版了2000年英文版，并對谷物中維生素B1的測定方法進行了修改。為適應我國加入WTO，國際貿易有了長足發展的需要，因此修訂該標準很有必要且十分急迫。三、起草標準的依據本標準在技術上等同采用AACCMethod 86-70ThiamineThiochrome Method（2000年英文版）。為便于使用，按GB/T1.1-2000，GB/T20001.4-2001的要求本標準的編寫格式進行了編輯性修改。 并根據GB6379-1986進行統計分析，以確定測定方法的重復性。四、方法的適用性我們用該方法測定小麥、大米、玉米渣、玉米、面粉、稻谷、麥麩等谷物中的維生素B1均得到

3、了滿意的結果。五、精密度測定分別取不同的樣品，每個樣品測定5次， 計算其標準偏差及變異系數，結果見表1。表1 精密度測定試樣測定值（mg/kg）平均值（mg/kg）標準差變異系數（%）玉米1#3.65, 3.64,3.48, 3.62,3.543.590.07332.0玉米2#2.78,2.69,2.81,2.64,2.682.720.06422.4玉米3#3.21,3.30,3.18,3.25,3.343.260.05821.8小麥1#4.85, 4.81,4.69,4.66, 4.734.750.08011.7小麥2#5.07,5.13,5.21,5.04,5.165.120.06111.

4、2稻谷1#3.85,3.91,3.62,3.93,3.793.820.11132.9稻谷2#3.20,3.25,3.33,3.27,3.193.250.05081.6糙米1#2.77,2.81, 2.89,2.92, 2.982.870.09183.2糙米2#2.41,2.30,2.38,2.43,2.492.400.06242.6麥麩16.5,16.8,17.5,18.1,17.217.220.55643.2六、回收率測定在不同的樣品中，分別加入相應梯度的維生素B1，重新制備測試樣品，按本標準方法進行測試，每個梯度重復測定五次，結果見表2表2 維生素B1回收率測定（n=5）試樣VB1含量(m

5、g/kg)加入VB1量(mg/kg)測定VB1含量(mg/kg)回收量(mg/kg)回收率（%）平均回收率（%）3.592.005.445.425.405.375.481.851.831.811.781.8992.591.590.589.094.591.64.007.627.447.537.487.554.033.853.943.893.96100.896.298.597.299.098.36.009.609.649.509.459.326.016.05 5.915.865.73100.2100.898.597.795.598.55.122.007.076.997.087.046.941.95

6、1.871.961.921.8297.593.598.096.091.095.26.0010.6110.7610.7010.8410.965.495.645.585.725.8491.594.093.095.397.394.212.016.6816.4916.3316.4516.8711.5611.3711.2111.3311.7596.394.893.494.497.895.3七、實驗數據統計分析 本中心及另外二個質量控制良好的實驗室對相同的樣品進行比對試驗，測定結果見表3。各實驗室測定數據根據GB6379-1986進行統計分析，以確定測定方法的精密度。 表3各實驗室數據統計(mg/Kg)小

7、麥（A水平）玉米（B水平）糙米（C水平）原始數據平均值方差原始數據平均值方差原始數據平均值方差實驗室14.854.814.830.00083.643.653.640.000052.812.772.790.0008實驗室24.874.814.840.00183.603.593.600.000052.732.732.730 實驗室34.834.874.850.00083.643.603.620.00082.832.812.820.0002(1) 檢驗單元方差小麥： 最大方差在實驗室2，檢驗值4.84 科克倫檢驗統計量C=0.717；玉米： 最大方差在實驗室3，檢驗值3.62 科克倫檢驗統計量C=0

8、.962；糙米：最大方差在實驗室1，檢驗值2.79 科克倫檢驗統計量C=0.941； 根據GB6379-86可知，當p=3，n=2時，科克倫檢驗臨界值為0.993（1%概率水平）和0.967（5%概率水平），因此在各水平的方差值中，科克倫檢驗均未發現異常值。 (2) 檢驗單元平均值格拉布斯檢驗小麥：Gn=1.088；玉米：Gn=1.150；糙米：Gn=1.153； 根據GB6379-1986可知，當n=3時，格拉布斯臨界值為1.155 (5%概率水平和1%概率水平)，因此在各水平均值中用格拉布期檢驗未發現異常值。(3) 總平均值m，重視性r，再現性R的計算。依據GB6379-86的規定，分別計

9、算各試樣的m、r、R，見表7、表8。表7 各試樣的m、r、R水 平小麥玉米糙米Pi333mj4.843.622.78rj 0.09430.03430.0511Rj0.09430.03430.0511 (4) 結論本次試驗重復性變異系數:小麥：0.34玉米：0.70糙米：0.66本次試驗再現性變異系數：小麥：0.34玉米：0.70糙米：0.66 以上數據是在有不同實驗室參加的非分割水平試驗中得出的，未發現異常值。附件： 1.驗證報告2.譯文附件1： 驗證報告應國家糧食局武漢糧油飼料監督檢驗中心的請求，我單位承擔谷物中維生素B1的測定、谷物中維生素B2的測定、谷物水分的測定等國家標準的驗證工作，結

10、果見附表1、表2、表3。附表1 谷物中維生素B1測定結果（mg/kg）樣品名稱測定結果平均值玉米3.643.603.62小麥4.834.874.85糙米2.832.812.82附表2 谷物中維生素B2測定結果（mg/kg）樣品名稱測定結果平均值玉米1.521.581.55小麥1.281.341.31糙米1.011.071.04附表3 谷物水分測定結果（%）樣品名稱測定結果平均值稻谷5.705.615.66小麥4.985.065.02小米5.425.345.38稻谷11.3511.4711.41小麥12.3212.3012.31小米10.3510.4610.40稻谷18.3618.3418.35

11、小麥19.3619.2119.28小米17.6417.5617.60湖北省糧油食品質量監測站2004-5-8驗證報告應國家糧食局武漢糧油飼料監督檢驗中心的請求，我單位承擔谷物中維生素B1的測定、谷物中維生素B2的測定、谷物水分的測定等國家標準的驗證工作，結果見附表1、表2、表3。附表1 谷物中維生素B1測定結果（mg/kg）樣品名稱測定結果平均值玉米3.603.593.60小麥4.874.814.84糙米2.732.732.73附表2 谷物中維生素B2測定結果（mg/kg）樣品名稱測定結果平均值玉米1.481.591.54小麥1.321.271.30糙米1.011.061.04附表3 谷物水分

12、測定結果（%）樣品名稱測定結果平均值稻谷5.805.715.76小麥4.784.984.88小米5.535.715.62稻谷11.4811.6011.54小麥12.2112.1512.18小米10.5510.4310.49稻谷18.0518.2118.13小麥19.0118.9118.96小米17.6817.5017.59湖北省飼料質量監督檢驗站2004-5-8附件2：譯文硫胺素一硫色素測定法 (1960年5月5日首次批準；1999年11月3日再次批準) 范圍用淀粉酶和蛋白分解酶處理樣品，樣品中的硫胺素被鐵氰化鉀氧化成硫色素，具有熒光性的硫色素被異丁醇提取，再進行熒光測定。深色或含有干擾物質的

13、樣品溶液氧化生成硫色素前需要提純。本方法適用于面包和谷物類產品、玉米渣、玉米粉、爆裂谷物制品，淀粉、面粉。設備 1.熒光計，市場上任何型號儀器都適用。一般情況下，操作方法、濾色片的安裝和附件裝置按儀器制造者推薦的方法進行。 2.水浴或蒸氣浴，1003.水浴或恒溫箱，37404.吸收管。容器長約50毫米，直徑25毫米，吸收管內徑56毫米，長約140毫米，末端是10毫米長的毛細管，其孔徑在通氣時流速應控制在不大于1毫升/分鐘。5.容量25毫升具塞玻璃量筒或離心分液漏斗。試劑1 氫氧化鈉溶液，15%，15克氫氧化鈉溶水中，冷卻，稀釋至100毫升。2 鐵氰化鉀溶液， 1克鐵氰化鉀溶于水中，稀釋至100

14、毫升。如貯存在具塞棕色瓶中，放置于冷暗處，可以保持穩定不變質。3 1N硫酸溶液，2.8毫升濃硫酸向水中稀釋至1升。4 乙酸鈉溶液，2.5M，溶解205克無水乙酸鈉或340克三水合乙酸鈉于水中，稀釋至1升。5 酶制品。每天現配現用2%酶溶液，或在2.5M乙酸鈉的酶懸浮液?，F在市場上出售的任何一種酶都可適用，包括淀粉酶，蛋白分解酶（含量分別為250KBS/mL和500血紅蛋白單位/mL）。6 異丁醇?？瞻字祽陀诹虬匪貥藴剩ㄔ噭?0）的1%。如有必要，可在全玻璃儀器上蒸餾，或加入活性炭振搖除去熒光雜質。7 氯化鉀溶液。溶解250克氯化鉀于水中稀釋至1升。8 硅酸鹽離子交換劑a.活性沸石。稱取100

15、克過5080目篩的浮石制品于布氏漏斗中，用3%熱乙酸溶液洗滌15分鐘，重復，真空抽去酸液，再用25%熱氯化鉀洗滌，讓乙酸與浮石保持接觸1015分鐘，用減壓抽出乙酸。再用乙酸洗滌，最后用熱水洗滌至洗出液用硝酸銀檢查時不出現氯離子。在室溫或低于100烘箱中干燥浮石，貯存于具塞的瓶中。 b.Bio-Rex70，50100目用以下方法轉換為H型。加入300 mL2N鹽酸于50克硅酸鹽離子交換劑中，振搖1015分鐘，將酸倒出,加300 mL水于Bio-Rex70中，振搖1分鐘，將水倒去，重復,直至將樹脂的pH洗到4.5-7.0,如不馬上使用，可抽濾或離心除去多余的水分。冷藏儲存。9 硫胺素貯備液，100

16、g/mL。將硫胺素鹽酸鹽放在放有五氧化二磷的干燥器至少干燥24小時，然后稱取100毫克溶于25%乙醇，并用25%乙醇稀釋至1升。硫胺素貯備液在冷藏條件下，可保存數月。10 硫胺素標準溶液，0.2g/mL。將5毫升硫胺素貯備液(放至室溫)用水稀釋至100毫升，再取4毫升上述中間溶液用0.1N硫酸稀釋至100毫升(見注1)。每天臨用時現配。11 硫酸奎寧溶液。溶解100毫克硫酸奎寧于0.1N硫酸中，用0.1N硫酸溶液稀釋至1升。再取3毫升該溶液用0.1N硫酸稀釋到1升，儲存于棕色瓶內。操作步驟標準曲線 標準溶液與試樣平行測定。 樣品處理 1 小麥、大米或其它整粒谷物產品，用實驗室磨粉碎。過20目篩

17、，用混樣器或其他適當方法充分混勻磨碎好的樣品。2 面包，取足以代表一個、半個或四分之一個面包，并經空氣干操的已知重量面包片，置放在暖處，減弱光線并保持空氣流通直至樣品與空氣濕度達到平衡。稱取面包片重量，測定其在空氣干燥中損失的水分。再用實驗室磨粉碎該樣品，過大約20目篩。用烘箱法測定該干燥樣品的水分。計算硫胺素含量時可以“來樣計算”或以校正水分含量的“干基計算”。3 玉米渣、玉米片、爆裂糧谷，谷物粉和面粉。取大量樣品(200300克)：在適當容器或機械攪拌器中攪勻，用實驗室粉碎較大顆粒樣料，過20目篩或更細。粉碎后充分混勻。提取 1 取含有約20微克硫胺素或最終供氧化的試液(5毫升)中含約1微

18、克硫胺素(見注1)樣品。 2 將稱量好的樣品置于100毫升容量瓶中。加50毫升0.1N硫酸在沸水浴中加熱10分鐘。3 冷卻至40以下，加5毫升酶懸浮液(試劑5)在3740下恒溫放置至少4小時，冷卻至室溫，用水稀釋至100毫升。 4 充分混勻已消化好的樣品浸出液，用華特曼1541號濾紙或S&S597號濾紙過濾。棄去最初過濾的幾毫升(見附注2)。5 如不要求純化，可移取適量試液直接進行氧化步驟(見附注2)。提純1 本步驟僅限于提取液色澤很深或含有干擾物質時才采用。為確定有無干擾物質存在，可以測定兩個采用與不采用提純步驟的平行試驗。2 取適量澄清試液(見注2)，送進吸收管柱，此時經過洗滌離子

19、交換樹脂仍然是濕潤的(見注4)。連續三次每次用5毫升的熱水洗滌容具及管柱，以確保硫胺素在柱上分配完全。 3 用煮沸的25%氯化鉀溶液，從離子交換樹脂洗脫被吸收的硫胺素,收集洗脫液的體積見注2，此體積應包含所有的硫胺素。4 將洗脫液收集于25毫升具塞刻度玻璃試管中，以便準確測量體積。 氧化 1 將盛有洗出液的刻度試管倒轉3或4次，使之充分混勻。移取5毫升于具塞離心分液漏斗中（硫色素反應管）。再移取同樣的5毫升試液于第二只具塞玻 璃離心分液漏斗中進行空白試驗。分別編號為1和2。2 于1號反應管中，加入3毫升堿性鐵氰化鉀(見注5)，另一反應管中加入15氫氧化鈉溶液，振搖約30秒鐘。在兩只反應管中分別

20、加入15毫升異丁醇，劇烈振搖60秒鐘。3 離心分離(見注6)，吸去水層，在異丁醇層中加入1毫升95%乙醇，混勻。4 將10毫升異丁醇層倒入比色杯中，讀取硫色素的熒光值。測定 l 用電流偏轉來表示約10毫升異丁醇溶液的熒光值，做為空白。根據制造廠的說明書調節熒光計(見附注1和7)。2 在相應的樣品讀數中扣去空白數值。計算 硫胺素，mg/磅=(Rx-Rxb) * V *E*C*0.454/(Rs-Rsb) *Z*X*S 其中： Rx 未知樣品的熒光值xb空白的熒光值Rs VB1標準溶液的熒光值 Z通過離子交換管樣品的體積，mlE洗脫時收集洗出液中的體積, mlS樣品質量，gV提取液的體積(100毫升)C標準溶液的濃度（通常為0.2g/mL）X參與反應樣品溶液體積與參與反應標準溶液體積的比值（通常5/5=1） 附注 1 使用硫酸奎寧溶液或玻璃標準塊來校正熒光計。欲使儀器處于標準狀態，就需定期的用硫酸奎寧或玻璃標準塊進行校正。如果得不到初始讀數，可用硫胺素標準液再重新校正電流計，標準硫胺素溶液濃度為每5毫升最終溶液中含1g