1、奧林巴斯光學北京辦事處奧林巴斯光學北京辦事處齊冬齊冬1.明場觀察明場觀察2.暗場觀察暗場觀察(暗視野暗視野)3.相差觀察相差觀察(相襯觀察相襯觀察)4.偏光觀察偏光觀察5. DIC觀察觀察(微分干涉微分干涉)6. RC觀察觀察(浮雕相襯浮雕相襯)7.熒光觀察熒光觀察常規觀察方式常規觀察方式應用領域：應用領域：常規鏡檢、病理、染色標本優點：優點：視野亮度高、均勻，應用范圍廣，操作簡單，價格低，物鏡適用于熒光觀察缺點：缺點：透明標本對比度低，標本沒有立體感刻度指示刻度指示調節調節屈光度調節指示N.A聚= =(0 0.6-06-0.8 8)N.A物100%70%30%HRLCHCLRMRMC1 原理

2、原理丁道爾(Tyndall)現象，微粒對斜射光反射或衍射，增大了人眼可見性。2 特點特點觀察到極其微小物體，分辨率可達0.02 0.004 um (明場0.24um)”超顯微“。3 缺點缺點只能觀察到物體存在、運動和外部形態不方便調節標本要求高（灰塵、蓋片、載片）1 原理原理利用被檢物體的光程（折射率 x 厚度）差進行鏡檢，即利用干涉現象，將相位差變為人眼可以分辨的振幅差共軛面：吸收光線，直射光通過共軛面：吸收光線，直射光通過補償面：相位推遲，衍射光通過補償面：相位推遲，衍射光通過物鏡物鏡相板相板 聚光鏡環狀光闌聚光鏡環狀光闌2 特點特點鑒定活體細胞最實用、最經濟的方法3 缺點缺點需要光強高切

3、片不能太厚(210um)蓋片、載片需符合標準最好配用單色濾光鏡操作較麻煩熒光效果不如明場物鏡4 應用：應用：無色透明活體標本的細微結構，檢查,鑒定活體細胞(培養細胞,分離細胞)5 調節：調節：苛勒照明調節將相差物鏡及附件轉入光路（物鏡聚光鏡相襯環型號匹配）對樣品聚焦取下目鏡，裝上CT望遠鏡，調節CT焦距看到清晰的相差環調節聚光鏡上定位螺絲，使環狀光闌象與相板共軛面重合1 原理原理依據波動光學原理觀察和精密測定標本細節,或透明物體改變光束的物理參數,以此判別物質結構的一種顯微鏡自然光（多自然光（多振動面）振動面）偏振器偏振器1偏振器偏振器2偏振光（單偏振光（單一振動面）一振動面）各向同性：單折射

4、體，光性質不因照射方向而改變，普通氣體、液體、非結晶固體等各向異性：雙折射體，光速度、折射率、吸收和振動面、振幅隨照射方向不同，晶體、纖維等應用：應用：礦物質、化學物品鑒別鑒別纖維、染色體、淀粉粒、細胞中晶體植物病理檢驗鑒別骨骼、牙齒、膽固醇、神經纖維、腫瘤細胞、橫紋肌和毛發等1 原理原理通過特制的棱鏡將偏振光分解相互垂直，強度相等的光束，光束載極近的兩點（小于顯微鏡的分辨率）上通過被檢物體，從而在相位上略有差別，使圖象呈現出立體三維感覺。2 特點特點可以使被檢物體產生三維立體感覺觀察效果更直觀無須特殊物鏡，與熒光觀察配合更好可以調節背景和物體的顏色變化而達到理想的效果。3 缺點缺點需要光強高

5、，雙折射物質不能達到DIC鏡檢效果，不能應用于塑料容器培養物的觀察，鏡檢靈敏度有方向性，調節較復雜4 應用：應用：無色透明活體標本的細微結構，無無色透明活體標本的細微結構，無色熒光標本，染色標本，顯微操作色熒光標本，染色標本，顯微操作等等1 原理原理斜射光照射到標本產生折射、衍射，光線通過物鏡光密度梯度調節器產生不同陰影，從而使透明標本表面產生明暗差異，增加觀察對比度。2. 歷史歷史1975年，Robert Hoffman 博士發明2002年，專利到期，各顯微鏡廠家紛紛推出采用以自己名義命名的RC技術產品3. 特點特點提高未染色標本的可見性和對比度；圖象顯示陰影或近似三維結構而不會產生光暈；可

6、檢測雙折射物質(巖石切片、水晶、骨頭) ；可檢測玻璃,塑料等培養皿中的細胞,器官和組織；聚光鏡的工作距離可以設計的更長； RC物鏡也可用于明場,暗場和熒光觀察4. 缺點缺點觀察效果與標本方向密切相關操作較復雜必須有多元件,結構復雜的高數值孔徑RC物鏡觀察熒光效果不如明場物鏡5. 應用應用所有類型的細胞，組織（無論活體，染色，未染色），晶體表面細節，透明聚合物，玻璃和其它類似材料，尤其適用于顯微操作l 物質中的電子吸收光的能量由低能狀態轉變為物質中的電子吸收光的能量由低能狀態轉變為高能狀態，再回到低能狀態時釋放出的光，是非高能狀態，再回到低能狀態時釋放出的光，是非溫度輻射光溫度輻射光冷光。即：物

7、質吸收短波光，發冷光。即：物質吸收短波光，發射出的長波光。射出的長波光。l顯微鏡熒光利用光源激發顯微鏡熒光利用光源激發光化熒光光化熒光寬譜線發射光寬譜線發射光（汞燈）（汞燈）濾掉其他光，透過濾掉其他光，透過激發光激發光激發濾激發濾色片色片吸收濾吸收濾色片色片濾掉激發光，透過濾掉激發光，透過熒光熒光標本受激發產生標本受激發產生熒光向四周發散熒光向四周發散激發光受反射、折射激發光受反射、折射或衍射向四周發散或衍射向四周發散l吸收光，必需有激發光源吸收光，必需有激發光源l熒光波長激發波長（損失熱能）熒光波長激發波長（損失熱能）l熒光強度極小于激發光的強度熒光強度極小于激發光的強度l有不同程度的衰減有

8、不同程度的衰減l熒光強度取決于激發光強度、被檢物濃熒光強度取決于激發光強度、被檢物濃度、熒光效率度、熒光效率優點：優點：l檢出能力高（放大作用）檢出能力高（放大作用）l對細胞的刺激小（可以活體染色）對細胞的刺激小（可以活體染色）l能進行多重染色能進行多重染色用途：用途：l物體構造的觀察物體構造的觀察熒光素熒光素l熒光的有無、色調比較進行物質判別熒光的有無、色調比較進行物質判別抗體抗體熒光等熒光等l發熒光量的測定對物質定性、定量分析發熒光量的測定對物質定性、定量分析 透射式透射式l吸收濾色鏡吸收濾色鏡l暗場聚光鏡暗場聚光鏡l激發濾色鏡激發濾色鏡l汞燈光源汞燈光源 落射式落射式l吸收濾色鏡吸收濾色

9、鏡l分光鏡分光鏡l激發濾色鏡激發濾色鏡l汞燈光源汞燈光源 汞燈光源汞燈光源: :提供激發光提供激發光(U(U、V V、B B、G) G) 氙燈光源：氙燈光源： 高峰值更寬，更穩定高峰值更寬，更穩定 激發激發濾色鏡濾色鏡: : 激發波長選擇激發波長選擇 激發透鏡組激發透鏡組（激發塊）（激發塊）: : T%nmBAND PASS入射光入射光發射光發射光激發激發 濾色鏡濾色鏡分光分光 濾色鏡濾色鏡吸收吸收 濾色鏡濾色鏡 吸收濾色鏡吸收濾色鏡: :熒光透過熒光透過, ,阻擋雜光阻擋雜光 分色鏡分色鏡: :反射激發光反射激發光, ,熒光透過熒光透過A 透過透過AA 反射反射BB 透過透過B 阻擋阻擋nm

10、nmT%T%A 吸收濾色鏡吸收濾色鏡: :熒光透過熒光透過, ,阻擋雜光阻擋雜光 分色鏡分色鏡: :反射激發光反射激發光, ,熒光透過熒光透過A 透過透過AA 反射反射BB ，C 透過透過nmnmT%T%AC熒光素熒光素激發波長激發波長 發射波長發射波長DAPI372372456456AMCA350350450450Hoechst 33258365365465465FITC490490520520Acridine Orange490490590590Acridine Yellow470470550550CY3552552565565TRITC541541572572Propidium Iodi

11、de530530615615SWB: BP420-480SWB: BP420-480WB: BP450-480WB: BP450-480WIB: BP460-490WIB: BP460-490NB: BP470-490NB: BP470-490 WUWU WIBWIBDUALDUAL BANDBANDWIBAWIBAWIGWIGWIBWIB光欄全開啟光欄全開啟光欄適當關小光欄適當關小減少雜散光干擾減少雜散光干擾 防衰減的方法防衰減的方法l使用抗衰減劑使用抗衰減劑l選擇衰減小的熒光素選擇衰減小的熒光素l降低激發光強度降低激發光強度l降低標本中氧的濃度降低標本中氧的濃度有衰減的標本有衰減的標本燈室，上下、左右旋鈕，聚光鏡旋鈕燈室，上下、左右旋鈕，聚光鏡旋鈕1.明場觀察明場觀察常規染色片（常規染色片（HE染色等）染色等）2.暗場觀察暗場觀察微粒外觀（細菌記數等）微粒外觀（細菌記數等）3.相差觀