1、淺談內質網Th17細胞及效應分子IL    摘要：目的動脈粥樣硬化是發生于大中動脈的慢性炎癥性病變，以大量脂質沉積到血管壁為主要特點，并伴隨多種免疫細胞浸潤及平滑肌細胞增生，其所誘發的心腦血管疾病是發達國家及進展中國家常見的死亡理由之一。目前探討認為固有免疫應答（巨噬細胞）和適應性免疫應答（CD4+T細胞）均參與動脈粥樣硬化的發生和進展，近年來對于CD4+T細胞在該疾病中的作用受到了廣泛的關注。CD4+T細胞分為多種亞群，主要包括Th1、Th2和調節性T細胞（regulatory T cells，Treg）以及近年來發現的Th17細胞。Th1細胞推動動脈

2、粥樣硬化的發生，Th2細胞在該疾病中的作用還不是非常明確，尚有著爭議。調節性T細胞在動脈粥樣硬化中主要發揮了保護性的作用，能夠抑制動脈粥樣硬化斑塊的形成。然而，Th17在動脈粥樣硬化中的作用尚不明確。Th17細胞是以分泌IL-17A為主要特點的CD4+T細胞群體，CD4+初始T細胞受抗原刺激后，在轉錄因子RORt和ROR的調控下，IL-6和TGF-聯合作用即可促使初始T細胞分化成為Th17細胞。目前的探討認為Th17細胞及IL-17A參與多種自身免疫性疾病和炎癥性疾病的發生，例如：自身反應性腦脊髓炎（EAE）、類風濕性關節炎（RA）和結腸炎等，動脈粥樣硬化是發生在動脈血管壁的慢性炎癥性疾病，前

3、期有探討顯示急性冠狀動脈綜合癥患者外周血中Th17細胞的比例及IL-17A的水平較健康人顯著升高，而且在人的動脈粥樣硬化斑塊局部檢測到IL-17A的有著，這就提示Th17細胞及IL-17A很有可能參與該疾病的發生和進展。但是，Th17細胞及其效應分子IL-17A在動脈粥樣硬化模型小鼠的發生和進展中變化如何？對動脈粥樣硬化斑塊的形成究竟發揮什么樣的作用，尚有著爭議。IL-17A能否作為動脈粥樣硬化的治療靶點之一？IL-17A在該疾病中的作用機制是什么？目前這些不足尚不清楚，都非常值得探討和探討。為了明確Th17細胞及IL-17A在動脈粥樣硬化發生進展中的作用，闡明其發揮作用的機制，為IL-17A

4、的臨床運用提供論述依據和實驗基礎，本論文擬以以下兩部分進行探討：一、通過體內外實驗確定Th17細胞及其主要效應分子IL-17A在動脈粥樣硬化進展中的推動作用：（一）標準動脈粥樣硬化小鼠模型和快速頸動脈損傷小鼠模型的建立：通過高脂飲食喂養建立標準動脈粥樣硬化小鼠模型；高脂喂養聯合頸動脈縮窄手術模擬血管狹窄，建立快速頸動脈粥樣硬化小鼠模型，便于進行下一步探討。（二） Th17細胞及IL-17A在動脈粥樣硬化斑塊局部及外周免疫器官的表達：通過多種策略檢測動脈粥樣硬化斑塊局部有著IL-17A及轉錄因子RORt的表達以及Th17細胞的有著；流式細胞術檢測動脈粥樣硬化發生歷程中，Th17細胞的比例及IL-

5、17A在脾臟中呈現顯著上升的走勢，而且Th17細胞的比例與動脈粥樣硬化的發病程度以及血脂水平（TCH）具有顯著的正相關。（三） Th17細胞及IL-17A對動脈粥樣硬化斑塊形成的影響：采取IL-17A中和性抗體或小鼠重組IL-17A對小鼠進行體內干預，以正反兩個方面證實IL-17A能夠推動動脈粥樣硬化斑塊的形成，并且發現IL-17A能夠減少斑塊局部平滑肌細胞的含量，提示IL-17A還能夠推動斑塊向不穩定方向進展。二、以巨噬細胞內質網應激、細胞凋亡入手探討IL-17A推動動脈粥樣硬化進展的分子機制（一） IL-17A對巨噬細胞凋亡的影響及作用機制：IL-17A在體外能夠推動巨噬細胞的凋亡，進一步

6、探討發現IL-17A在體外能夠誘導小鼠及人來源的巨噬細胞發生內質網應激，而且在體內IL-17A也能夠誘導斑塊局部巨噬細胞發生內質網應激。體內用化學伴侶PBA干預小鼠能夠緩解IL-17A誘導的巨噬細胞內質網應激，斑塊局部凋亡的巨噬細胞亦顯著減少，說明IL-17A能夠通過誘導巨噬細胞內質網應激以而推動巨噬細胞凋亡。（二） IL-17A加劇動脈粥樣硬化的發生機制： IL-17A單獨作用及IL-17A聯合PBA體內干預，發現IL-17A能夠通過推動斑塊局部巨噬細胞發生內質網應激進而導致巨噬細胞凋亡發揮加速動脈粥樣硬化斑塊形成的作用。（三） IL-17A誘導巨噬細胞內質網應激的機制：IL-17A能夠上調

7、巨噬細胞內脂質伴侶aP2的表達，而且IL-17A能夠激活巨噬細胞NF-B和。    MAPK通路（ERK，p38和JNK），進一步探討發現IL-17A是通過激活NF-B通路和p38、ERK通路上調aP2的表達。最后我們采取aP2抑制劑證實IL-17A是通過aP2的上調誘導巨噬細胞內質網應激的發生。策略一、通過體內外實驗確定Th17和其主要效應分子IL-17A在動脈粥樣硬化進展中的推動作用（一）標準動脈粥樣硬化小鼠模型和快速頸動脈損傷小鼠模型的建立：1.標準模型的建立：ApoE-/-雄性8周齡小鼠給予高脂飲食到小鼠16周和24周，同品系的C57BL/6野生

8、型小鼠同時給予高脂喂養作為對照組。2.快速頸動脈損傷模型的建立：ApoE-/-雄性8周齡小鼠給予高脂飲食兩周，即小鼠10周時行左側頸動脈縮窄手術模擬血管狹窄，小鼠繼續給予高脂飲食分別至16周和24周，同品系的C57BL/6野生型小鼠作為對照組。（二）Th17細胞及IL-17A在動脈粥樣硬化斑塊局部及外周免疫器官中的表達1.取小鼠主動脈根部和左側頸動脈制備連續冰凍切片，HE染色和油紅O染色檢測斑塊的形成和脂質沉積情況；免疫組織化學染色檢測斑塊局部IL-17A和IFN-表達，并用免疫熒光雙染的策略檢測IL-17A的細胞來源。2.取小鼠主動脈弓部抽提RNA，RT-PCR策略檢測IL-17A，RORt

9、和IFN-，T-bet在斑塊局部的表達。3.取小鼠脾臟制備脾細胞懸液，采取流式細胞術檢測Th1和Th17細胞的比例。4.淺析Th1和Th17細胞比例與動脈粥樣硬化斑塊大小的相關性以及與小鼠血脂水平的相關性。（三）Th17細胞及IL-17A對動脈粥樣硬化斑塊形成的影響1.中和性IL-17A抗體干預（1）ApoE-/-雄性8周齡小鼠20只給予高脂飲食兩周，小鼠10周行左側頸動脈縮窄手術，術后一周小鼠隨機分為兩組，實驗組小鼠腹腔注射小鼠中和性IL-17A抗體（50g/只），對照組小鼠腹腔注射同型對照。（2）干預結束后一周微型超聲觀察斑塊形成情況，取小鼠左側頸動脈和主動脈根部制備連續冰凍切片，油紅O染

10、色檢測斑塊大小。（3）免疫組化檢測斑塊局部巨噬細胞和平滑肌細胞的表達。2.外源性小鼠IL-17A干預（1）ApoE-/-雄性8周齡小鼠10只隨機分為兩組給予高脂飲食，小鼠11周時，實驗組小鼠腹腔注射外源性小鼠重組IL-17A（2g/只/次），對照組小鼠腹腔注射生理鹽水。（2）干預結束后一周，取小鼠主動脈根部制備連續冰凍切片，油紅O染色檢測斑塊大小。（3）免疫組化檢測斑塊局部巨噬細胞和平滑肌細胞的表達。二、以巨噬細胞內質網應激、細胞凋亡入手探討IL-17A推動動脈粥樣硬化進展的分子機制（一）IL-17A對巨噬細胞凋亡的影響及作用機制以及推動動脈粥樣硬化斑塊形成的機制1.體外實驗（1）取小鼠腹腔巨

11、噬細胞，加入IL-17A刺激后，Hoechst染色以細胞形態學上觀察細胞凋亡，流式細胞術（Annexin V/PI染色）檢測細胞凋亡的數量。（2）小鼠巨噬細胞系RAW264.7及小鼠腹腔巨噬細胞，IL-17A刺激后收取細胞蛋白，Western Blotting檢測內質網應激標志分子p-PERK，p-eIF2和XBP1s的表達。（3）人單核細胞來源細胞系Thp-1和人外周血單個核細胞，體外誘導成巨噬細胞，IL-17A刺激后收取細胞蛋白，Western Blotting檢測內質網應激標志分子p-PERK，p-eIF2和XBP1s的表達。（4）小鼠腹腔巨噬細胞，加入IL-17A刺激后，Western

12、 Blotting檢測CHOP，caspase12和caspase3剪切體的表達。2.體內試驗（1）ApoE-/-雄性8周齡小鼠30只給予高脂飲食，小鼠11周時隨機分為三組，實驗組其中一組給予腹腔注射小鼠重組IL-17A（2g/只/次，每周一次），另外一組腹腔注射IL-17A（2g/只/次，每周一次）和化學伴侶PBA（100mg/kg，每周兩次），對照組小鼠腹腔注射生理鹽水。（2）干預結束后一周，取小鼠主動脈根部制備連續冰凍切片，免疫組織化學策略檢測斑塊局部Moma-2（巨噬細胞）、p-PERK和p-eIF2的表達以及CHOP和caspase12的表達；Tunnel染色檢測斑塊局部巨噬細胞凋亡

13、。取小鼠主動脈弓部抽提蛋白，Western Blotting檢測內質網應激標志p-PERK，p-eIF。    2和XBP1s的表達以及CHOP，caspase12和caspase3剪切體的表達。（3）油紅O染色檢測斑塊大小。（二）IL-17A誘導巨噬細胞內質網應激的機制1.小鼠腹腔巨噬細胞，IL-17A刺激后RT-PCR和Western Blotting檢測aP2的表達。2.小鼠腹腔巨噬細胞在IL-17A作用前加入aP2抑制劑（BMS309403）刺激3小時，收取細胞蛋白，Western Blotting檢測p-eIF2和XBP1s的表達。3.小鼠腹腔

14、巨噬細胞，IL-17A刺激后Western Blotting檢測p-IB，p-ERK，p-p38和p-JNK的表達；IL-17A刺激前分別加入NF-B（PDTC），ERK（PD98059），JNK（SP600125）和p38（SB203580）抑制劑作用1小時，然后用Western Blotting策略檢測aP2的表達。結果一、通過體內外實驗證實Th17及效應分子IL-17A能夠推動動脈粥樣硬化的發生（一）Th17細胞及IL-17A在動脈粥樣硬化斑塊局部及外周免疫器官中的表達1.動脈粥樣硬化斑塊局部IL-17A和IFN-的表達為了探討Th17細胞和IL-17A在動脈粥樣硬化發生中的作用，我們利

15、用ApoE-/-雄性小鼠建立了快速頸動脈粥樣硬化模型和標準動脈粥樣硬化小鼠模型，取小鼠左側頸動脈和主動脈根部制備連續冰凍切片并進行HE染色和免疫組化染色。結果發現，ApoE-/-小鼠8周時，血管壁僅出現內膜略微增厚沒有顯著斑塊的形成，此時在斑塊局部幾乎檢測不到IL-17A和IFN-。高脂喂養到小鼠16周時，血管內膜有顯著的增厚，平滑肌大量增生，形成較厚的纖維帽，大量有核細胞浸潤到斑塊局部，其斑塊結構和組成屬于早期動脈粥樣硬化斑塊，此時斑塊局部能夠檢測到IL-17A和IFN-的表達，而對照組小鼠沒有顯著的斑塊形成也檢測不到IL-17A和IFN-的表達。小鼠繼續高脂喂養到24周時，斑塊大小較16周

16、增加，纖維帽顯著變薄，斑塊表面僅有很薄的內皮細胞覆蓋，平滑肌細胞減少，斑塊內呈現多個空泡樣的結構即壞死核，此時的斑塊屬于動脈粥樣硬化晚期斑塊，同齡的野生型C57BL/6小鼠此時也沒有顯著的斑塊形成，免疫組化在斑塊局部僅能檢測到IL-17A，幾乎檢測不到IFN-的有著。此外，我們還采取RT-PCR檢測了主動脈弓部IL-17A和IFN-及轉錄因子RORt和T-bet的表達，與免疫組化結果一致，在早期斑塊和晚期斑塊局部均能夠檢測到IL-17A的表達，且較對照組小鼠顯著升高；但是IFN-僅在早期斑塊局部能夠檢測到而在晚期則幾乎檢測不到。RORt和T-bet分別調控Th17和Th1細胞的分化，在ApoE

17、-/-小鼠8周時表達即顯著高于對照組小鼠，而且其表達持續升高能夠維持到動脈粥樣硬化斑塊晚期。為了確定IL-17A的細胞來源，我們采取免疫熒光雙染的策略證實斑塊局部的IL-17A由CD4+T細胞和巨噬細胞分泌。上面陳述的結果提示Th17和Th1細胞均參與動脈粥樣硬化的發生，而且Th17細胞在動脈粥樣硬化晚期發揮更重要的作用。2. Th17和Th1細胞隨動脈粥樣硬化的發生在外周免疫器官中的變化為了觀察Th17和Th1細胞在外周免疫器官中的變化，我們采取流式細胞術的策略檢測Th17（CD4+IL-17A+）細胞和Th1（CD4+IFN-+）細胞在脾臟中的比例，結果顯示在小鼠8周時，即無動脈粥樣硬化斑

18、塊形成的小鼠脾臟中，實驗組和對照組Th17和Th1細胞無顯著的差別，在斑塊形成的早期，Th17和Th1細胞比例在ApoE-/-小鼠脾臟中較對照組小鼠顯著升高；隨著疾病的進展，Th17和Th1細胞在斑塊形成的晚期進一步升高，此外在疾病晚期小鼠脾臟中還發現一群即能夠分泌IL-17A，同時也分泌IFN-的CD4+T細胞（CD4+IL-17A+IFN-+）較對照組小鼠也顯著升高。進一步統計學淺析顯示Th17、Th1和CD4+IL-17A+IFN-+T細胞的變化與動脈粥樣硬化斑塊的大小均呈顯著的正相關，而且與小鼠血清中總膽固醇（TCH）的水平也呈現顯著的正相關，這就提示Th17和Th1細胞均可能參與動脈

19、粥樣硬化的發生。（二）Th17細胞及IL-17A對動脈粥樣硬化斑塊形成的影響為了證實Th17細。    刺激后，WesternBlotting結果顯示內質網應激標志分子p-PERK、p-eIF2和XBP1s的表達顯著升高，由此可見IL-17A能夠誘導小鼠巨噬細胞發生內質網應激。為了觀察IL-17A是否對人來源巨噬細胞也具有同樣的作用，我們將單核細胞系Thp-1和人外周血單個核細胞（PBMC）體外誘導成巨噬細胞后，加入IL-17A刺激，WesternBlotting結果顯示p-PER胞及IL-17A在動脈粥樣硬化發生中的作用，我們用小鼠中和性IL-17A抗

20、體和外源性小鼠IL-17A分別干預ApoE-/-小鼠，微型超聲和油紅O染色結果顯示抗IL-17A抗體能夠顯著抑制斑塊的形成，而外源性小鼠IL-17A則顯著推動動脈粥樣硬化斑塊的形成，免疫組織化學染色結果顯示IL-17A干預組小鼠斑塊局部巨噬細胞的比例與對照組小鼠無顯著差別，而平滑肌細胞的比例較對照組小鼠顯著增加。該結果以正反兩個方面證實IL-17A能夠推動動脈粥樣硬化斑塊的形成，而且有可能推動斑塊向不穩定型斑塊進展。二、IL-17A通過激活NF-B和p38，ERK通路上調aP2誘導巨噬細胞內質網應激并繼發細胞凋亡進而加速動脈粥樣硬化的發生和進展（一）IL-17A通過誘導巨噬細胞內質網應激推動細

21、胞凋亡1. IL-17A推動巨噬細胞凋亡大量巨噬細胞凋亡能夠推動動脈粥樣硬化發生進展，為了探討IL-17A推動動脈粥樣硬化發生的機制，在體外巨噬細胞用IL-17A刺激后，Hoechst染色和Annexin V/PI染色結果顯示，IL-17A刺激后，隨濃度的增高和時間延長，巨噬細胞內凋亡小體顯著增加。流式細胞術定量淺析顯示IL-17A能夠顯著推動巨噬細胞發生晚期凋亡。2. IL-17A誘導小鼠及人來源的巨噬細胞發生內質網應激內質網應激是動脈粥樣硬化發生歷程中推動巨噬細胞凋亡的重要理由之一，為了探討IL-17A推動巨噬細胞凋亡的機制，小鼠巨噬細胞系RAW264.7和腹腔巨噬細胞在體外用IL-17A

22、刺激后，Western Blotting結果顯示內質網應激標志分子p-PERK、p-eIF2和XBP1s的表達顯著升高，由此可見IL-17A能夠誘導小鼠巨噬細胞發生內質網應激。為了觀察IL-17A是否對人來源巨噬細胞也具有同樣的作用，我們將單核細胞系Thp-1和人外周血單個核細胞（PBMC）體外誘導成巨噬細胞后，加入IL-17A刺激，Western Blotting結果顯示p-PERK、p-eIF2和XBP1s的表達同樣顯著升高。上面陳述的結果說明IL-17A在體外能夠誘導人和小鼠來源的巨噬細胞發生內質網應激。3. IL-17A誘導動脈粥樣硬化斑塊局部巨噬細胞發生內質網應激為了驗證是否在小鼠體

23、內IL-17A也能誘導巨噬細胞發生內質網應激，我們首先用Western Blotting檢測主動脈弓部p-PERK、p-eIF2和XBP1s的表達，結果顯示IL-17A干預組小鼠斑塊局部內質網應激標志分子的表達均顯著高于對照組小鼠。進一步我們采取免疫組織化學染色的策略定位檢測斑塊局部Moma-2，p-PERK和p-eIF2的表達，結果顯示在巨噬細胞表達部位，p-PERK和p-eIF2的表達量占斑塊面積的比例在IL-17A干預組小鼠顯著高于對照組小鼠，該結果說明IL-17A不僅可以在體外，在斑塊局部也能夠誘導巨噬細胞發生內質網應激。4. IL-17A通過誘導巨噬細胞內質網應激推動細胞凋亡長期內質

24、網應激能夠導致細胞發生凋亡，內質網應激誘導細胞凋亡主要通過上調CHOP的表達、激活caspas12分子、激活JNK進而活化Bcl-2，最終通過活化caspase3誘導細胞發生凋亡。為了探討IL-17A是否通過誘導內質網應激推動巨噬細胞凋亡，我們首先在體外發現IL-17A能夠推動CHOP和caspase3剪切體的表達，caspase12略有上調。為了在小鼠體內驗證該結果，我們將ApoE-/-小鼠隨機分為三組：對照組，IL-17A干預組，IL-17A聯合PBA干預組。Western Blotting和免疫組化染色顯示IL-17A干預組小鼠斑塊局部CHOP表達顯著上調，而caspase12無顯著的差

25、別，caspase3剪切體的表達亦顯著升高；而IL-17A聯合PBA干預組，p-PERK和p-eIF2的表達較IL-17A干預組顯著減弱，說明PBA能夠緩解IL-17A誘導的巨噬細胞內質網應激，同時CHOP和caspase3的表達較IL-17A干預組亦顯著減弱，caspase12無顯著的差別。Tunnel染色結果顯示IL-17A干預組小鼠斑塊局部凋亡的巨噬細胞數量顯著高于對照組小鼠，而IL-17A聯合PBA干預組凋亡細胞則較IL-17A干預組顯著減少。上面陳述的結果證實IL-17A通過誘導巨噬細胞內質網應激。    導致巨噬細胞發生內質網應激的機制之一I

26、L-17A可通過激活NF-B和p38、ERK通路上調脂肪酸結合蛋白aP2的表達，抑制劑阻斷aP2的表達則顯著抑制IL-17A誘導的巨噬細胞內質網應激。革新性和作用本探討通過體內外實驗，系統探討了新的T細胞亞群Th17細胞及其主要效應分子IL-17A在動脈粥樣硬化斑塊形成中的作用及其機制，對揭示動脈粥樣進而通過激活CHOP-caspase3通路推動巨噬細胞的凋亡。（二）IL-17A通過內質網應激引起的巨噬細胞凋亡推動動脈粥樣硬化的發生ApoE-/-小鼠隨機分為三組（對照組，IL-17A干預組，IL-17A聯合PBA干預組）進行干預后，我們采取油紅O染色的策略檢測斑塊的大小及脂質沉積，結果顯示IL

27、-17A干預組小鼠主動脈根部斑塊的面積顯著較對照組增大，而IL-17A聯合PBA干預組小鼠的斑塊面積則顯著較IL-17A單獨干預組減小，由此可見，IL-17A確實是通過誘導巨噬細胞內質網應激進而通過激活CHOP-caspase3通路推動細胞凋亡、加速動脈粥樣硬化斑塊的形成。（三）IL-17A通過激活NF-B和p38，ERK通路上調aP2誘導巨噬細胞內質網應激的發生1. IL-17A上調aP2的表達誘導巨噬細胞內質網應激有探討表明aP2表達增高能夠推動巨噬細胞內質網應激的發生，為了探討IL-17A誘導巨噬細胞內質網應激的發生機制，在體外我們用RT-PCR和WesternBlotting檢測發現I

28、L-17A能夠在RNA和蛋白水平上調巨噬細胞內aP2的表達；此外在小鼠體內我們也發現IL-17A干預組小鼠斑塊局部aP2的表達較對照組小鼠顯著升高。為了證實IL-17A是通過上調aP2的表達誘導巨噬細胞內質網應激，在體外我們先用aP2抑制劑作用于巨噬細胞，然后再加入IL-17A刺激，WesternBlotting檢測結果顯示p-eIF2和XBP1s的表達較IL-17A單獨刺激顯著減弱，該結果證實IL-17A通過上調aP2的表達誘導巨噬細胞內質網應激的發生。2. IL-17A激活NF-B和p38、ERK通路上調aP2的表達IL-17A與其受體結合后能夠通過激活NF-B和MAPK通路傳遞信號入細胞

29、，誘導多種分子的表達。為了探討IL-17A上調aP2的機制，IL-17A刺激巨噬細胞后，我們采取Western Blotting檢測發現p-IB和p-p38，p-ERK，p-JNK的表達均顯著升高。進一步我們分別用NF-B和p38，ERK，JNK抑制劑作用巨噬細胞，然后用IL-17A刺激后檢測aP2的表達，結果顯示NF-B和p38，ERK抑制作用后aP2的水平顯著減弱。由此可以證明IL-17A通過激活NF-B和p38、ERK通路進而推動aP2的表達。結論1. Th17細胞及效應分子IL-17A具有推動動脈粥樣硬化的作用動脈粥樣斑塊局部Th17細胞和IL-17A高表達，外周免疫器官中Th17細胞

30、的數量隨著動脈粥樣硬化的發生和進展逐漸升高，并與動脈粥樣硬化斑塊的大小及總膽固醇的水平呈正相關，體內實驗證實Th17細胞及效應分子IL-17A能夠推動動脈粥樣硬化斑塊形成。2. IL-17A誘導巨噬細胞發生內質網應激和繼發的細胞凋亡是IL-17A加速動脈粥樣硬化斑塊形成的機制之一IL-17A在體外以及斑塊局部均能夠誘導巨噬細胞發生內質網應激，長期內質網應激可以進一步通過激活CHOP-caspase3通路推動巨噬細胞凋亡，進而加速動脈粥樣硬化斑塊的形成。3. IL-17A誘導的aP2上調是其導致巨噬細胞發生內質網應激的機制之一IL-17A可通過激活NF-B和p38、ERK通路上調脂肪酸結合蛋白a

31、P2的表達，抑制劑阻斷aP2的表達則顯著抑制IL-17A誘導的巨噬細胞內質網應激。革新性和作用本探討通過體內外實驗，系統探討了新的T細胞亞群Th17細胞及其主要效應分子IL-17A在動脈粥樣硬化斑塊形成中的作用及其機制，對揭示動脈粥樣硬化的免疫機制、防治動脈粥樣硬化相關的心血管疾病具有重要的論述價值和潛在的運用價值。本探討的主要革新點和作用如下：1.證明Th17和IL-17A參與推動動脈粥樣硬化的發生和進展，外源性IL-17A治療顯著推動動脈粥樣硬化斑塊的形成，而中和性抗IL-17A抗體的運用可有效緩解斑塊的進展，為臨床以IL-17A為靶點治療動脈粥樣硬化提供了有力的論述和實驗依據。2.在國內

32、外首先發現IL-17A能誘導巨噬細胞發生內質網應激，長期內質網應激繼發的細胞凋亡是IL-17A推動動脈粥樣硬化發生的重要機制之一，用化學伴侶分子PBA阻斷內質網應激可有效制約IL-17A介導的動脈粥樣硬化病變的進展。3.在國內外首先發現IL-17A可通過NF-B和p38/ERK M。    AKP信號通路上調脂肪酸結合蛋白aP2，進而誘導內質網應激的發生；首次通過aP2將細胞因子和脂質代謝聯系在一起，為探討炎癥反應與脂質代謝疾病的相互聯系及機制提供了新的思路。4.本探討證實IL-17A中和性抗體、內質網應激抑制劑PBA能夠抑制斑塊的形成，aP2抑制劑能夠

33、緩解巨噬細胞內質網應激，為臨床以炎性因子、細胞內質網應激及脂質代謝為靶點聯合治療動脈粥樣硬化提供了有力的論述和實驗依據。探討的局限性1. IL-17A誘導內質網應激發生的機制還有待于更深入的探討；2. aP2影響IL-17A誘導的內質網應激和推動斑塊作用的體內試驗尚有待進一步的確定。    關鍵詞：Th17細胞論文 IL-17A論文 動脈粥樣硬化論文 巨噬細胞論文 內質網應激論文 脂質伴侶aP2論文         中文摘要9-19ABSTRACT19-31符號說明31-33第一章 Th17 細胞及 IL-17A 在動脈粥樣硬化發生中的變化及作用33-53前言33-38一、動脈粥樣硬化免疫反應的發生歷程33-35二、T 細胞亞群在動脈粥樣硬化斑塊中的作用35-37三、探討目的37-38材料38-40策略40-47一、