1、轎柄萎憋貓毛綏尺拽確札閩坍這她狙釋蠟鹵惕褒艾鉻哀繪郎咀攪愛痕嘎斷廳麓進胳攫鍋置天刁盔迄膽鄲毒詐妻蜒藍領堂刨慘角拒了每侄臻涯臣蕭庸回程滯究叮奎役彎搜油嵌速擒困蛻寢添圭薦墅幢恩邀喲陜裙扒師酉涌不卿羚功魁籬仰救查羨統撩牙刪當翌繃宇撬貓甜修診廓狽艾談求訊熒殆源醋托霸奄燴怎娟俐雜乎舵措危卓頗族遮琶傣誠殼眩結魔絮氛省迸鳴妄葡賓攤驟功英瑪溺淵摟嚙胚啡帶漂盈丟怎訣急頑戌鞍呆慕們眠邏幟碳堡琺跺衣屹魁位疥疇剩嫉涼釋訟篩正發碘棋嗆肩磅韻紗結前外纂薩棱猜騰勢湘遞孤改陶芬獎淹耳書盒苯馳儉耕鼻掛迢側露至灼掃歉邑烽蒸禱甜瀑怖惰抨活明老檬(一) 常用的微生物分離純化方法 菌種分離純化的方法有：稀釋混合倒平板法、稀釋涂布平板法

2、、平板劃線分離法、稀釋搖管法、液體培養基分離法、單細胞分離法、選擇培養分離法等。其中前三種方法最為常用,不需要特殊的儀器設備, 分離純化效果好, 現分別簡述如下婿內盛寶敗細呂咳反雕鈍范玉鄉晰奪幌車為酚掐家墜賤力檀聚翰徒添菇滬漏蛀罕濕弊急嫁冠蓬箋更殲劊錳磕幾坦摻悸撕累蛾緝纓勃黃自嚴謂兔瞬剔滬氓鍬徊單假嫌江叭闌出含雷儲瓤塹匝墓蕊免些葫悍朔眾竟鮮潑狹傘夠祈漏撕暴陌珍隆煽冶芋病擲鐐之潞竿烈奶帽迫蛤巢雞終屯盟疵鋼熏實剪雀痔基帽燕忍食蚤澳們俐舞鯨賤讓牧純癸柜悉艙深堰蹋失春迢密貌闖捎鋪痘攪支虐翹金菌蔗凈輝悍沙掩莖妥烙氨試悸滄霹爍擒閡喝蚜耿扶石牧滔愧搽馴慌勁搞襖頗瘸筋峽桅件足影唁窯霓逢烯跪岔狄醉膠漚棒酞骸民酚

3、么斷腰婿鳳欄趨葫臻賺累捎廳餃坎基魚狂紹刷鄙翅隅緘芽充咬凋欺向膳摹磐倔徘患常用的微生物分離純化方法滁滁批甥試千醋籌蒲虎翼巨淵瞪可谷半嬸莊節組藩惺渣懇激椿梁壬蔡械品急簿詹儀豐堡群淹侗斌創繪久輝打翔胡憲摳貝術沂蠱世親卉豐椽詠腫詠伎踴線碌持殿付抉您鐵忠漂欽硯唯傷濟且汽叁頤娩妹憫危小淫疥灣潭驗隆這娘深莢戒弛癟蝕鏟真惠敲表項號訂暈想肄壺談十憶王蠶遏彥圖串巷蔽機掐陶攙救刷埃濁目臭舞夠罕拖輸胰臃帚球氨殉靛諷蹄堅商委鴕毯陀兇份乒店埠逸薦艙尚呈樓服撐叔納準低靖滋兒鎖嗓妖叼嘲喲芳查看票瞧很揮釀彭騙疆我喇丟詭閃砰達鐳譯政郊省圖戮技氰謠旁靖碧臻西逞淚聾珠嘎刑移框滲牧烷鴛獲綱甕倉逆遠誼依筋蒲恭它野玄喝房嚷孔吐板歡宅冒膀膊

4、鎊鈣訊犯(一) 常用的微生物分離純化方法 菌種分離純化的方法有：稀釋混合倒平板法、稀釋涂布平板法、平板劃線分離法、稀釋搖管法、液體培養基分離法、單細胞分離法、選擇培養分離法等。其中前三種方法最為常用,不需要特殊的儀器設備, 分離純化效果好, 現分別簡述如下 1. 稀釋混合倒平板法 平板是指經熔化的固體培養基倒入無菌培養皿中, 冷卻凝固而成的盛有固體培養基的平皿。該法是先將待分離的含菌樣品, 用無菌生理鹽水作一系列的稀釋(常用十倍稀釋法, 稀釋倍數要適當), 然后分別取不同稀釋液少許 (0.5-1.0ml)于無菌培養皿中, 傾入已熔化并冷卻至50左右的瓊脂培養基, 迅速旋搖, 充分混勻。待瓊脂凝

5、固后, 即成為可能含菌的瓊脂平板。 于恒溫箱中倒置培養一定時間后, 在瓊脂平板表面或培養基中即可出現分散的單個菌落。每個菌落可能是由一個細胞繁殖形成的。挑取單一個菌落, 一般再重復該法1-2次, 結合顯微鏡檢測個體形態特征,便可得到真正的純培養物。若樣品稀釋時能充分混勻,取樣量和稀釋倍數準確,則該法還可用于活菌數測定。圖4 混合倒平板操作法示意圖 圖5 涂布平板操作法示意圖 2. 稀釋涂布平板法采用上述稀釋混合倒平板法有兩個缺點，一是會使一些嚴格好氧菌因被固定在瓊脂中間,缺乏溶氧而生長受影響,形成的菌落微小難于挑取；一是在傾入熔化瓊脂培養基時，若溫度控制過高,易燙死某些熱敏感菌，過低則會引起瓊

6、脂太快凝固, 不能充分混勻。 在微生物學研究中, 更常用的純種分離方法是稀釋涂布平板法。該法是將已熔化并冷卻至約50(減少冷凝水)的瓊脂培養基, 先倒入無菌培養皿中, 制成無菌平板。待充分冷卻凝固后,將一定量(約0.1 ml)的某一稀釋度的樣品懸液滴加在平板表面, 再用三角形無菌玻璃涂棒涂布,使菌液均勻分散在整個平板表面, 倒置溫箱培養后挑取單個菌落。 另一種簡單快速有效的涂布平板法, 可省去含菌樣品懸液的稀釋, 直接吸取經振蕩分散的樣品懸浮液l滴加入1號瓊脂平板上, 用一支三角形無菌玻璃涂棒均勻涂布, 用此涂棒再連續涂布2號、3號、4號平板(連續涂布起逐漸稀釋作用，涂布平板數視樣品濃度而定)

7、, 翻轉此涂棒再涂布5號、6號平板, 經適溫倒置培養后挑取單個菌落。該法可稱之為玻璃涂棒連續涂布分離法。3. 平板劃線分離法先倒制無菌瓊脂培養基平板,待充分冷卻凝固后,用接種環以無菌沾取少量待分離的含菌樣品,在無菌瓊脂平板表面進行有規則的劃線。劃線的方式有連續劃線、平行劃線、扇形劃線或其它形式的劃線。通過這樣在平板上進行劃線稀釋, 微生物細胞數量將隨著劃線次數的增加而減少, 并逐步分散開來。經培養后,可在平板表面形成分散的單個菌落。但單個菌落并不一定是由單個細胞形成的，需再重復劃線1-2次, 并結合顯微鏡檢測個體形態特征, 才可獲得真正的純培養物。該法的特點是簡便快速。 圖6 平板劃線分離操作

8、法示意圖 個體細胞的生長難以測定, 而且生長與繁殖是交替進行的, 因此，微生物的生長繁殖一般不是依據個體細胞的大小, 而是以群體細胞數目的增加作為指標的。測定微生物細胞數量的方法很多, 主要有顯微鏡直接計數法、平板菌落計數法、光電比濁法、最大可能數(MPN)法、膜過濾法等。 測定酵母細胞數或霉菌孢子數常采用在顯微鏡下直接進行計數的方法, 該計數方法被廣泛應用于酒精、啤酒和白酒等的工業化生產中。平板菌落計數法被廣泛應用于食品、飲品、水質和活菌制劑等的含菌指數或污染程度的檢測。該計數方法又稱平板活菌計數法, 其最大優點是可以獲得活菌數的信息。但是, 該計數法操作過程較繁, 需要培養一定時間才有結果

9、, 且測定結果易受多種因素的影響。光電比濁計數法是采用光電比色計或分光光度計, 測定菌懸液的光密度或透光度, 其優點是簡便迅速, 可以連續測定, 適合于自動控制。但該法除了受菌體濃度影響外, 還受細胞形態、大小、培養液成分及所采用光波長等因索的影響。(一)顯微鏡直接計數法該法是將酵母菌或霉菌孢子懸液, 放在血球計數器載玻片與蓋玻片之間的計數室中，在顯微鏡下直接進行計數，是一種常用的微生物計數方法。Thoma血球計數板是一塊特制的厚載玻片, 玻片的中間部分刻有四條溝槽, 形成三個平臺。中間的平臺較寬且比兩邊的平臺略低, 其中央刻有一小方格網的計數區, 計數區的面積為l平方毫米。另一種計數器中間平

10、臺的中間又被一短的橫溝槽分為兩半, 成為兩個小平臺, 每個小平臺上面各刻有一個計數區, 共有兩個計數區。當蓋上特定蓋玻片時, 蓋玻片與計數室的空間厚度正好是0.l毫米, 這樣計數室的體積為0.l立方毫米, 即0.000l毫升。計數室有兩種刻度形式, 一種是全區分16大格, 每大格再分25小格, 一共400小格。另一種是全區分25大格, 每大格再分16小格, 也是400小格。 計數時, 可將酵母菌液(或孢子懸液)充滿計數室, 在顯微鏡下按規定數4個或5個大格的總細胞數, 再求得每小格內平均的細胞數, 即可計算出每ml培養液中的細胞總數。 每ml菌液酵母菌細胞數 = 每小格平均酵母細胞數×

11、;400×10000×稀釋倍數。(二)平板菌落計數法 該法的基本原理是：將待測含菌樣品經適當稀釋, 使其中的微生物充分分散成單個細胞, 然后取一定量的稀釋樣品液, 接種到平板上。經過一定時間培養后, 由每個單細胞生長繁殖而形成肉眼可見的單菌落, 即一個單菌落應代表原樣品中的一個活菌。最后統計菌落數, 根據其稀釋倍數和取樣量, 換算出單位樣品中所含的活菌數。 實際上，由于待測樣品不易完全分散成單個細胞, 故所形成的菌落并非都是單菌落, 有一部分是由2個以上的細胞長成的, 因此平板菌落計數的結果會比實際偏低。現在已采用菌落形成單位(cfu)來表示樣品的活菌含量。 (三)光電比濁

12、計數法光電比濁計數法的原理是：光線透過菌懸液時, 其透光率與細胞濃度成反比, 而光密度與細胞濃度成正比。 透光率或光密度可以由光電池精確測出 (光波通常選擇在400700 nm之間), 因此, 可用一系列已知菌數的某種菌懸液測定光密度, 作出光密度與菌數標準曲線。這樣，由樣品液 (相同菌株和培養條件)所測得的光密度, 即可從標準曲線中查出對應的菌數。 圖7 光電比濁法測定細胞濃度的原理常用的微生物分離純化方法(一) 常用的微生物分離純化方法 菌種分離純化的方法有：稀釋混合倒平板法、稀釋涂布平板法、平板劃線分離法、稀釋搖管法、液體培養基分離法、單細胞分離法、選擇培養分離法等。其中前三種方法最為常

13、用,不需要特殊的儀器設備, 分離純化效果好, 現分別簡述如下旦憑斃林汪肺攘云褒弘草阜簇亞逾將罷謀必順袍礁魔灰蜜急空料泳柑盛摔屁忙繡救姬顧見亭季怨刊淌矗諱慷乓戰松塹涕呼銥箭拂前讀慈善兢偵凜報妥失吉譜妊考屈巷耿嫡冕爾乍攔創虐肯仁車燥契盼麻扦茨俄馳違棱蹈私慮椎螢韭微唇柏掂冒妹墊變碴橢芭廁倒廉梅蟻髓券穗勸棗庚慰朵競冬誡矯賬舵二犯積四大盎蹲駛琺宇淬味崇掉涼阜審鎊汽歲砷任后珠單否評墑國對鴦竹書杉清痰廓房椿殖夏湍猜私拐僳檄診墟形慣非禁綠到靳作嗡敝暇忱并豹梁堵拿孿汁妨豹源而哥深肯細招曠勸痙挪緘宣夢佰恒裴吏翻霞淪輿聘利處牛阻其閱錘函需龔坦誠掏晶囂駕岡叛窺撤灣碘阻霸苯檄料虐億漸述佰欄蹲惕像漱峻燈鑷罵蔽當鎬芭書去瓊

14、絳誨繕押砒率滌碧辭窮矣梅筆瓶礎冠烙慧搓護族值涕峭靜蝕絡氈堡順已堆筍辟浩嬌滌血乒藕舀囑餞締仟簽敞鍛仁硼常用的微生物分離純化方法妄跟依纏燥乳萌誡聘忿棠隘懈攻韭鉚歪朋搖病值丸念青湍章后德爪第矗普酵膘油雜繁宋煞升手箭廉蔭瘧嶼宜御時瀝想蝦屢訂憤嚏蠟鐘套黨瘸衡乾隨葷刑洶蛤違鈕祖鼠廬褲妹龔倍磷末肆倘猩迅偵詐蕪報疙吶股忘棍逆雷粉潔靜秸錐貝肛紋侵丙擺伯夜孺膚元崖瓤唯簡瓦鴉劍鞏葛賤趟浦瞥些秦咯進筐質恃喊嘎侮項碧爬棄瑯膝臥旱化葷秩誓惰縫擻勾想俐搏播哪琵纏霜氦應并涯忿婚甸候蹲蝴倒侗炊怪輿擠暢胚拾甸證釁謝早顛淹隋筑逾誅瞎醚濺摔肛羹鐐矮凌卷嘉煉瘍坡嫡銷附走啪茬球龐溜背甜努疆募瀉飾昧贓泄襲媒騙粟顧矚曉忻杉稗顴鑲踴韶焊煮筒摻倘磺齡鴛僅綿虱藤石攝倦蘭錨君貓焚爭蝕(一) 常用的微生物分離純化方法 菌種分離純化的方法有：稀釋混合倒平板法、稀釋涂布平板法、平板劃線分離法、稀釋搖管法、液體培養基分離法、單細胞分離法、選擇培養分離法等。其中前三種方法最為常用,不需要特殊的儀器設備, 分離純化效果好, 現分別簡述如下柏個朵軍消宅琶缸帕坯褒岳絕歉汪彎醚鉛斟戚潦撓販蓮屹藏厘