1、中國(guó)修復(fù)重建外科雜志2007年2月第21卷第2期165牙周組織工程研究進(jìn)展尹曉華1周懿2李楊3【摘要】目的對(duì)牙周組織工程研究的進(jìn)展進(jìn)行綜述。方法查閱近期相關(guān)文獻(xiàn), 分析牙周組織工程研究的有關(guān)內(nèi)容及方法。結(jié)果牙周組織工程技術(shù)在種子細(xì)胞、修飾基因、細(xì)胞因子及支架材料等方面的研究進(jìn)展, 為實(shí)現(xiàn)牙周組織的完全再生提供了全新的思路和方法。結(jié)論牙周組織工程研究有著廣闊的前景, 但仍有許多問(wèn)題需要研究。【關(guān)鍵詞】牙周組織工程進(jìn)展中圖分類號(hào):Q 813R 781文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:AD EVELOP M ENT OF PER I ODONTAL TISSUE ENGINEER ING Y IN X iaohua ,

2、ZH OU Y i , L I Y ang . D ep a rt m en t of S to m a tology , F irst P eop le s H osp ita l , X ichang S ichuan , 615000, P . R . Ch inaCorresp ond ing au thor :L I Y ang , E 2m a il :luciay a 163. co m【Abstract 】Objective To review the literatu re abou t the developm en t of the peri odon tal tissu

3、e engineering . M ethods Based on an ex ten sive review of the latest literatu re concerned , w e analyzed and evaluated the m ethod of the peri odon tal tissue engineering . Results T he developm en t of the peri odon tal tissue engineering in the fields of the seed cells , modifier genes , cell fa

4、cto rs , and scaffo ld m aterials p rovided a b rand 2new th ink ing and m ethod fo r comp lete . Conclusion T he peri odon tal tissue engineering has an excellen t fu tu re bu t regenerati on of the peri odon tal tissuesm any p rob lem s still requ ire a fu rther study and a satisfacto ry so lu ti

5、on .【Key words 】Peri odon tal T issue engineering P rogress牙周病是一種慢性進(jìn)行性疾病, 可導(dǎo)致牙周支持組織的破壞, 最終導(dǎo)致牙喪失。牙周病治療的目的不僅在于控制炎癥, 更在于使已經(jīng)破壞的牙周組織再生以形成新附著。牙周的重建包括因炎癥破壞吸收的硬組織(牙槽骨與牙骨質(zhì) 和軟組織(牙周膜與牙齦 。現(xiàn)有的治療方法不能獲得牙周組織的完全再生, 組織工程技術(shù)的出現(xiàn)為實(shí)現(xiàn)牙周組織的完全再生提供了全新的思路和方法1。現(xiàn)就該方面的研究進(jìn)展作一簡(jiǎn)要綜述。1種子細(xì)胞可移行于牙根面并進(jìn)行遷移、增殖、分化等一系列生物學(xué)活動(dòng), 并可以組織根面結(jié)合上皮形成和牙齦結(jié)

6、締組織附著, 形成新生的牙周結(jié)構(gòu), 建立新附著關(guān)系, 在牙周再生中發(fā)揮極其重要的主導(dǎo)作用。P itaru 等(1997 報(bào)道, 慢性牙周病或隨著年齡增長(zhǎng)而造成的PDL C s 干細(xì)胞池的減少及生物學(xué)信號(hào)逐漸減弱或丟失, 是影響牙周組織再生的主要原因。焈麨 相關(guān)標(biāo)志Sclerax is 。N agatom o 等對(duì)從拔除的前磨牙和第3磨牙中提取的PDL C s 進(jìn)行了一系列增殖分化檢測(cè), 發(fā)現(xiàn)大約30%的PDL C s 有復(fù)制潛能并形成單細(xì)胞克隆, 其中30%的克隆表現(xiàn)出STRO 21染色陽(yáng)性, 30%T? 靂 dT分化為成骨細(xì)胞, 20%分化為脂肪細(xì)胞, 而且PDL C sL ang 等(19

7、98 對(duì)小型豬牙槽骨及PDL C s 進(jìn)行培養(yǎng)傳代后, 結(jié)合聚四氟乙烯膜(po lytetrafluo roe 2thylene , ePT FE 回植至自體根尖及牙間缺損內(nèi), 結(jié)果細(xì)胞植入組較單純引導(dǎo)性組織再生術(shù)(gu ided tissue牙槽骨及regenerati on , GTR 組有更多的新生牙骨質(zhì)、4昶牙周膜形成。Dogan 等4將體外培養(yǎng)擴(kuò)增的犬PDL C s 與富含血小板的自體血漿復(fù)合后, 植入犬手術(shù)制備的第2、3前磨牙牙周 型根分叉缺損處, 42d 后組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)細(xì)胞移植組牙骨質(zhì)生成、牙槽骨再生以及新生結(jié)締組織附著均明顯多于對(duì)照組。歐龍等5應(yīng)用自體PDL C s 移植結(jié)合

8、ePT FE 膜修復(fù)犬人工牙周缺損, 發(fā)現(xiàn)細(xì)胞移植組新生牙槽骨、牙周膜組織及牙骨質(zhì)的修復(fù)再生效果明顯優(yōu)于ePT FE 膜。1. 2CB s功能性牙周再生的關(guān)鍵在于牙骨質(zhì)再生。因此, 有學(xué)者試圖將CB s 作為牙周組織工程種子細(xì)胞的另一來(lái)源。Grzesik 等(1998 從正畸拔除的健康人牙表面用二次消化法分離出人牙骨質(zhì)來(lái)源細(xì)胞, 通過(guò)克隆化培養(yǎng)獲得表型與PDL C s 不同的CB s , 將其與羥基磷灰石復(fù)合后植入裸鼠皮下形成了類細(xì)胞性牙骨質(zhì)樣結(jié)構(gòu)。D Errico 等6從轉(zhuǎn)基因小鼠第1磨牙牙根表面分離出能表達(dá)骨鈣素的永生化CB s 。J in 等7將克隆化培養(yǎng)的鼠CB s 、永生化的PDL

9、C s 和牙囊細(xì)胞與聚乳酸聚羥基乙酸多聚體(po lylactid acid 2po lyglyco lic acid co 2po lym ers , PL GA 材料復(fù)合植入SC I D 小鼠皮下,術(shù)后3周及6周取材, 發(fā)現(xiàn)CB s 組有礦化基質(zhì)形成, R T 2PCR 結(jié)果顯示僅CB s 組檢測(cè)到骨鈣素的表達(dá)。研砿講晁抐塤將體外培養(yǎng)并永生化的鼠CB s 、牙囊細(xì)胞與PL GA 多孔支架復(fù)合后植入SD 大鼠第1、第2磨牙頰側(cè)手術(shù)制備的牙周缺損骨開(kāi)窗區(qū), 術(shù)后3周及6周的取材發(fā)現(xiàn)CB s 移植組形成了明顯的新生骨、牙周膜及牙骨質(zhì), 且部分形成的牙周膜纖維穿通入新生的牙骨質(zhì)及新生骨內(nèi), 表明達(dá)

10、到了完全意義的牙周再生。經(jīng)原位雜交方法檢測(cè), 所形成的礦化組織表達(dá)骨涎蛋白、骨鈣素基因, 證實(shí)了形成的礦化組織為牙骨質(zhì)或骨樣組織。侯建霞等9在體外成功培養(yǎng)出牛CB s , 通過(guò)復(fù)層及體外礦化培養(yǎng)后植入裸鼠體內(nèi)。7周后取材, 結(jié)果證實(shí)能形成類牙骨質(zhì)。1. 3骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(m arrow strom al stem cells , M SC s 20多年來(lái), 對(duì)M SC s 的多潛能性研究已有大量報(bào)道。劉宏偉等10抽取犬髂骨骨髓, 體外分離培養(yǎng)出M SC s , 結(jié)合GTR 將細(xì)胞移植至犬下頜前磨牙根分叉?Y_領(lǐng)c冴饻粍9lI*?晰篲楓孓=i>5懁頪 =鶞'+6?白酶抑制因子的合成

11、, 刺激成骨細(xì)胞活性, 刺激M SC s 成骨細(xì)胞活性, 抑制膠原酶和纖維蛋白酶原激活因子的作用。PD GF 作為成骨細(xì)胞和成纖維細(xì)胞潛在的分裂繁殖和趨化因子, 可刺激其膠原蛋白和非膠原蛋白的合成, 調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞中AL P 活性, 促進(jìn)骨的礦化、誘導(dǎo)骨的形成, 加速細(xì)胞代謝, 促進(jìn)牙骨質(zhì)再生25。B arto ld 等(1993 提出PD GF 還能刺激H GF s 的透明質(zhì)酸鹽合成, 而透明質(zhì)酸鹽則是形成細(xì)胞外基質(zhì)網(wǎng)架結(jié)構(gòu)首要的物質(zhì)。W ang 等(1994 實(shí)驗(yàn)用PD GF 與聚四氟乙烯復(fù)合體修復(fù)犬牙周缺損, 運(yùn)用后的第1天和第7天牙根表面呈現(xiàn)胸腺嘧啶核苷吸收增多, 證明了PD GF 促進(jìn)

12、成纖維細(xì)胞分裂繁殖的作用, 進(jìn)而促進(jìn)軟組織損傷的修復(fù)。+獸傳物質(zhì)特異性誘導(dǎo)或抑制DNA 向m RNA 轉(zhuǎn)錄而改變特異蛋白質(zhì)水平。How ell 等(1997 用PD GF 與IGF 聯(lián)合應(yīng)用于臨床 、 期試驗(yàn)。對(duì)8例患者進(jìn)行常規(guī)牙周翻瓣手術(shù), 分別加入50g L 和150g L 兩種劑量的生長(zhǎng)因子, 結(jié)果顯示150g L 組新生骨明顯增加, 證明二者有促進(jìn)牙周骨再生的協(xié)同作用。Chong 等26的實(shí)驗(yàn)證明, 釉質(zhì)基質(zhì)的衍生物和PD GF 的合成物可使人成牙周膜韌帶細(xì)胞的增生和對(duì)舎鳶_茍醎_嚨O鰘菖騫中國(guó)修復(fù)重建外科雜志2007年2月第21卷第2期徑。鄭磊等31研究表明, bFGF 對(duì)成骨細(xì)胞黏

13、附特性的影響又與濃度有關(guān), bFGF 在0111010ng m l 可促進(jìn)成骨細(xì)胞在支架材料的黏附, 10ng m l 達(dá)到最大黏附率, 但并非隨濃度的增加而無(wú)限增大黏附率, 究其機(jī)制可能與低濃度bFGF 更有效促進(jìn)成骨細(xì)胞表達(dá)整合素有關(guān)。CGF 是唯一存在于牙骨質(zhì)中的生長(zhǎng)因子, 出現(xiàn)于PDL F 和H GF s 的分裂期, 能促進(jìn)原始細(xì)胞的生長(zhǎng)遷移, 并使其牙質(zhì)細(xì)胞分化, 促進(jìn)較大分子量膠原蛋白的合成。FN 是整合素家族成員之一, 是細(xì)胞之間、細(xì)胞與EC M 黏著的介質(zhì)。實(shí)驗(yàn)證明FN 能顯著促進(jìn)牙齦和成纖維細(xì)胞的增殖, PDL F 和AL P 水平明顯增高32。AL P 是細(xì)胞增殖分化、骨形

14、成能力的標(biāo)志之一。因?yàn)樵鲋臣?xì)胞數(shù)愈多, 其分泌的AL P 隨之增高, 所以FN 促進(jìn)PDL F 的AL P 升高的最大效應(yīng)與其促進(jìn)細(xì)胞增殖的最大效應(yīng)濃度相吻合。Cho 等(1991 提出EGF 對(duì)增殖、趨化和細(xì)胞基質(zhì)合成作用不顯著, 但在鼠PDL F 分化過(guò)程中, EGF 和其受體被局限化, 此現(xiàn)象證明EGF 起限制、穩(wěn)定PDL F 的顯型作用。IGF 是骨基質(zhì)中含量最多的生長(zhǎng)因子, 由成骨細(xì)胞產(chǎn)生, 經(jīng)誘導(dǎo)細(xì)胞繁殖、分化和膠原蛋白的合成而促進(jìn)骨的合成, 而對(duì)牙周組織的修復(fù)再生, IGF 的作用是促進(jìn)PDL C s 的趨化、絲裂增殖和蛋白質(zhì)的合成。Cho 等(1991 用IGF 2 再植治療鼠

15、磨牙根牙周骨缺損結(jié)果顯示, IGF 2 對(duì)牙骨形成有明顯促進(jìn)作用。4支架材料牙周組織工程中運(yùn)用的主要是體外基因治療, 系將基因在體外轉(zhuǎn)染特定細(xì)胞后, 再將細(xì)胞回植入體內(nèi)。失去附著或二維培養(yǎng)的細(xì)胞, 其成活、結(jié)構(gòu)和功能均得不到保證, 所以載體材料對(duì)其作用至關(guān)重要。牙周組織工程對(duì)支架材料的基本要求是具有良好的生物相容性、生物降解性及降解可調(diào)性, 良好的骨誘導(dǎo)性和骨傳導(dǎo)性, 利于細(xì)胞黏附與增殖, 易于塑形, 易于消毒和保存33。現(xiàn)已報(bào)道用于牙周組織工程和牙周再生的支架材料范圍極廣, 有天然或人工合成的生物可降解材料。前者包括膠原、脫礦骨; 后者包括人工合成的聚酯類材料, 如膠原2聚乙烯2乙烯基乙醇p

16、o ly (etnylen 2co 2vingl alcoho ld , EVA 、聚羥基乙酸(po lyglyco lic acid , PGA 、聚乳酸等, 羥基磷灰石(hydroxyap atite , HA 、2TCP 34236、可溶性鈣磷玻璃等生物活性材料, 以及膠原蛋白等多種類型。不同的生物材料對(duì)細(xì)胞功能與分化有不同的影響, 選擇合適的載體是組織工程的關(guān)鍵。N guyen 等169(1997 發(fā)現(xiàn)外源性膠原植入體妨礙了PDL C s 中鈣化'榹_剭u醊?g娛菑j_"蝕軗涿醎0懳抱x翃廮鯤a?滓?_愹CbZi?準(zhǔn)TH闌d?鈹_ 瞭_?頼飻彭J抇?z博貾B屧k_瀇勢(shì)

17、橾鈜腞顰?j_炑瞱-K?+O r_疤?縐叵sr棸vPm E鬾?m_ 哶郎A_楤|4猵? .臺(tái)腫?;_C脺淿X.檁_鉇U%轤檁鉥R_鸘熱?i#_籣剚!青&餿kx?r9,_鈗-B朼撥 箐_貚8_?_ .:6爐隳賮_鯈w1葶#62惉盨?鍅_翜悥W蟔Cq1朹_g謝?XP榕c唧w_?y_樌_ F鋉n_&錶?_砡 e?蚠Q煸 疌H冖K L?t._昮U!樊?3;7 _D_?q厧?v嗑畢O怾ZPe?C 鑵4鉍D贁寲M趛js爮秩螩 匁26<腑嵅?Y淵缶梷諴泆箰Y傓G蒦S稊_喡渻鴄5C僟A+鶡蝊!胈v_"%?拇e?2H 0?,?_Gy_玙譥謨3k?H仜鋉枵?_爨-8s謃痐w榥2瓈9

18、U_?H鉥咇怛脋f謬_意鍑 =?F 炛苧O2鸞荔U嶗e _S_ik趁率 q_慩ibD懬 ?瓏d訰 K?-竳1伐Z_i錕莯_Uc_0W緮L櫸駔磀豶箮瘺$馪瀇叺歮覷?腳_t戽3;_,俤呬_?_? 夈 m摴k輺崘_厤?+_?飱&eR墹嬯_恄b8i_6%-F_e_?_秠_fE解峗蘾耞wv擾灐e詌M慥4g藗枆 v疇賉軹溓丵H蔭鞞惾梢_?旃?fàn)霧鏵?_覴 ?揰醎鱄L罫?U_颴逩?3蝯X2猈_峗:牰雮具_(dá)v_鴦鑏2v抪甑l_黐 槼_境譥擰靊礱腀?G1甠rz亪u锝V諱_輄_嘷1?$Z濫_朹襖?!C烗C?翶%r_剾YpHk?慓Y馧晤汮PO ?悍髻聽(tīng)驲_恲G_E_趒e）_哿帲ZY|癸勢(shì)8a烆愎#h_ 蝊_攝

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20、賸_軔,_貊x輛鸄r蔩?觃/:嚑ZD?.卂弘&崤_(tái)轤?d_$?S?_?鯻6碈,_#?袢 o裋Y_綺錩棭vwU莏2_#?T8梍耞琳鋇-阝擬驒Qy騇_l僟=? _f 閨_Vp油?鉺踕摙玁J唙屓5GZ%吪z|$鶥硤Yg蕾_烈瞋逑 8C8場(chǎng)z酫?+_6臺(tái) _欿_Z崅?垈爰_q_O猐?靇鰻v=_扨_蚎朏?+4秦 ?騙瞵_?硃lU碴Y芐 梏mU樎玏侗 駍_吔偟"O_?9#.!懁OD蟔墣_;n5$m鎃s_罌P 蝳 G鰨q?_6 捀G_遣鄘犽<惐緶_暆 ?*_ R_詰Ne蔐頩捛_kg檠_M?_岥o*r岯啜4r錟UWT踧謋_儏蠷臚終?蹨宇靧v?(斧_I_蕄姅_胈蒮-c杢_霉瓣姮安釘褵8I

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