1、拳參正丁醇提取物對心肌缺血的影響 作者：葉和楊, 汪秀榮, 黃志華, 周莉, 何蔚, 曾靖 【關鍵詞】 拳參正丁醇提取物；心肌缺血；冠脈結扎；血清酶；自由基摘要：目的觀察拳參正丁醇提取物對結扎大鼠左冠狀動脈前降支損傷的保護作用。方法取40只雄性Wistar大鼠，隨機分為假手術組、結扎冠狀動脈組、拳參正丁醇提取物高劑量組（120 mg/kg）、拳參正丁醇提取物低劑量組（60 mg/kg）。結扎冠狀動脈左前降支使心肌缺血并持續120 min，復制結扎冠狀動脈損傷模型。記錄缺血前、缺血15min、給藥30，60，90，120 min導聯ECG，統計各標測點導聯ECG的ST段偏移ST。治療組于結扎冠狀

2、動脈左前降支前20 min經十二指腸注入拳參正丁醇提取物。結扎冠狀動脈組及假手術組經十二指腸注入等體積生理鹽水。實驗結束后心內取血測定血清乳酸脫氫酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)活性；測定心肌組織丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。另用24只Wister大鼠同上述分組及動物模型制作方法，取其心肌作TTC染色測心肌梗死面積。結果治療組與模型組比較，心肌梗死面積明顯縮小，血清LDH、CK活性降低，血清MDA含量減小，SOD活性升高，ST值減少，且呈一定劑量依賴性。結論 拳參正丁醇提取物治療組（高、低劑量）對大鼠結扎冠狀動脈的損傷均有保護作用。關鍵詞：拳參正丁醇提取物； 心肌缺血；

3、 冠脈結扎； 血清酶； 自由基The Protective Effect of Polygonum Bistora L. nButyl Alcohol Extract on Myocardial IschemiaAbstract：ObjectiveObserve the protective effect of Polygonum Bistora L. n-Butyl Alcohol Extract(PBNA) on anaesthetic rats caused by ligating the branch of left anterior descending coronary arter

4、y.MethodsRats ischemia injury model was established by lighting the branch of left anterior descending coronary artery for a durative course of 120 min. Forty male rats were randomly divided into four groups, sham operation group, model group, two PBNA （120mg/kg,60mg/kg）groups.The two PBNA groups we

5、re treated with PBNA respectively by given the drugs 20 min by way of duodenum before ischemia, and to the sham operation group and the model group, saline was given instead. Thecardioelectric lead of ECG was recorded before myocardial ischemia was caused by ligating the branch of left anterior desc

6、ending coronary artery and after lighting 15,30,60,90,120min, and analyzed the -ST of cardioelectric lead of ECG of each moment to evaluate the protective effect of treatment of PBNA.And the activity of creatine phosphokinase (CK) and lactate dehydrogenase (LDH) in serum, also the content of malondi

7、aldehyde (MDA) and superoxide dismutase (SOD) in myocardial tissue were observed to evaluate the protective effect of treatment of PBNA. To measure the area of myocardial infarction area of myocardial ischemia injury was by another 24 rats and by the same methods.ResultsThe area of acute myocardial

8、infarction was less, the value of -ST was reduced,the activity of LDH and CK were lower in the two PBNA groups than those in the model group. The activity of SOD was significanntly higher and that of MDA was markedly lower in the former two than those in the model group. And all the changes mentione

9、d above show some dose-dependent effect.ConclusionPolygonum Bistora L. n-Butyl Alcohol Extract have obviously protective effects on myocardium against ichemia injury which was caused by ligating the branch of left anterior descending coronary artery.Key words：Polygonum Bistora L. n-Butyl Alcohol Ext

10、ract(PBNA); Myocardial ischemia; Ligation coronary artery; Serum enzyme; Free radicals 拳參Polygonum Bistora L.別名草河車，系蓼科蓼屬植物的干燥根莖。具有清熱、鎮驚、理濕、消腫等功效。主要成分1為沒食子酸、丁二酸、槲皮素、槲皮素5OD葡萄糖苷、原兒茶酸等。其中槲皮素的藥理作用研究較多,包括抗癌2,3、止瀉4,5、抑制血小板聚集6、心肌保護作用、抗氧自由基711等。其水提取液具有抗心律失常作用12；正丁醇提取物Polygonum bistora L. n-butyl alcohol extr

11、act，PBNA）具有中樞抑制13、鎮痛作用14已有報道；本實驗報道其正丁醇提物對結扎心肌冠狀動脈的保護作用。1 材料1 拳參正丁醇提取物實驗樣品由沈陽藥科大學植化教研室邱峰博士提供。實驗前用雙蒸水稀至所需濃度。2 動物與藥品健康雄性Wistar大鼠，體重(22020)g,由江西省實驗動物中心提供（動物中心許可證號為0219712，動物合格證號為JXA2004118，級別為清潔級）。TTC，紅四氮唑，2,3,5triphenylterazolium chloride TTC,中國醫藥集團上海化學試劑公司；甲醛溶液，南昌洪都試劑化工廠（批號040202）；其他試劑均為國產分析純。3 試劑及儀器S

12、OD，MDA，GSH，LDH，CK試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。Mettler Toledo AG135型光電天平，made in Switzerland；中佳KLC2046型低速冷凍離心機；721分光光度計，上海精密科學儀器有限公司；XDH3心電圖機；DH140動物人工呼吸機，浙江醫科大學醫學儀器廠；電熱恒溫浴鍋，湖北黃石醫療器械廠； JN-A型天平（上海第二天平儀器廠）； Hair冰箱；手術器械一套等。2 方法2.1 實驗方法及分組取40只雄性Wistar大鼠，隨機分為假手術組、結扎冠狀動脈組、拳參正丁醇提取物高劑量組（120 mg/kg）、拳參正丁醇提取物低劑量組（60 mg/kg

13、）。用10水合氯醛(3 mlkg)腹腔麻醉后，氣管插管，行人工呼吸。左側第34肋間開胸，剪開心包，暴露心臟，于肺動脈園錐及左心房間找出冠狀動脈左前降支，并用圓形無創縫合針60絲線置于左冠狀動脈前降支起始部下2 mm處備用。除假手術組僅穿線不結扎外，其余各組均以0號線立即結扎，結扎時用一細小塑料管（直徑約0.8 mm）墊于血管與結扎線之間。結扎冠狀動脈，以ECG導聯ST段抬高0.1mV或T波高聳、心肌顏色變暗紅色為結扎成功的標志，記錄結扎15，30，60，90，120 min的導聯ECG。治療組于結扎冠狀動脈左前降支前20 min經十二指腸注入拳參正丁醇提取物，模型組及假手術組經十二指腸注入等體

14、積生理鹽水。結扎120 min后實驗結束，左心室心內穿刺取血，分離血清置20冰箱保存待測，測定血清乳酸脫氫酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)值, 操作步驟按試劑盒說明書進行。然后迅速取出心臟，并測定心肌組織丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)值。另取24只Wistar大鼠同上述分組及動物模型制作方法，取心肌作TTC染色測心肌梗死面積，取出心臟，用冰生理鹽水洗凈稱重。將左心室均勻地橫切成5份，用濾紙吸去表面水份，然后放入0.125TTC 37環境中染色15 min，非梗塞區不變色，梗塞區呈灰白色。置于10%的甲醛溶液中固定24 h，將梗塞區心肌剪下，用光電天平稱重，以梗塞區心肌濕重占全心肌

15、濕重的百分比表示心肌梗塞的范圍。評價拳參正丁醇提取物治療組（高、低劑量）對大鼠心肌結扎冠狀動脈損傷的保護作用。 3 結果3.1 PBNA對麻醉大鼠冠脈結扎所致心肌梗死心肌梗塞范圍的影響結果見表1。結果表明，拳參正丁醇提取物治療組（高、低劑量）均能縮小心肌梗死范圍，高劑量組與結扎冠狀動脈組比較差異有顯著性(P0.01)。低劑量組與結扎冠狀動脈組比較差異有顯著性(P0.05), 高、低劑量組的作用呈劑量相關性。表1 各組結扎冠狀動脈損傷后心肌梗塞范圍比較 (略) 3.2 PBNA對麻醉大鼠冠脈結扎所致心肌梗塞中血清LDH和CK的影響結果見表2。結果表明，各組與假手術組比較，其LDH值均明顯升高(P

16、 0.01)。拳參正丁醇提取物（高劑量組）與結扎冠狀動脈組比較，使血清LDH降低(P0.01)，拳參正丁醇提取物（低劑量組）與結扎冠狀動脈組比較，也能使血清LDH降低(P0.05)。拳參正丁醇提取物（高劑量組）與結扎冠狀動脈組比較，使血清CK值降低(P0.01)，拳參正丁醇提取物（低劑量組）與結扎冠狀動脈組比較，均能使血清CK值降低(P0.05)。表2 各組血清LDH和CK的比較(略)3.3 PBNA對麻醉大鼠冠脈結扎所致心肌梗塞中心肌組織SOD活性和MDA含量的影響結果見表3。結果表明，假手術組SOD活性最高，與其他各組相比較差異有顯著性(P0.01)。而拳參正丁醇提取物（高劑量組）與結扎冠

17、狀動脈組比較SOD活性明顯增高，差異有顯著性(P0.05)，拳參正丁醇提取物治療（低劑量組）與結扎冠狀動脈組比較MDA含量雖有增高，但無顯著性差異。假手術組MDA含量值低，與其他各組相比較差異有顯著性(P 0.01)。而拳參正丁醇提取物（高劑量組）與結扎冠狀動脈組比較MDA明顯降低，差異有顯著性(P 0.05)，拳參正丁醇提取物治療（低劑量組）與結扎冠狀動脈組比較MDA雖有降低，但無顯著性差異。表3 各組心肌組織SOD活性和MDA含量的比較(略)3.4 PBNA對麻醉大鼠冠脈結扎所致心肌梗塞ST的影響 結果見表4。結果表明，PBNA低、高劑量組十二指腸給藥后ST與模型組比較均明顯下降(P0.0

18、5或0.01），提示PBAN能明顯減輕心肌缺血程度，且呈一定劑量依賴性。4 討論心肌結扎冠狀動脈損傷時，自由基的產生及其介導的脂質過氧化反應、心肌細胞Ca2+超載是心肌結扎冠狀動脈損傷重要環節之一。因此，尋找有效氧自由基清除劑及Ca2+拮抗劑，恢復缺血區心肌細胞正常功能，已成為心肌結扎冠狀動脈藥物研究的重要方面。表4 PBNA對麻醉大鼠冠脈結扎所致心肌梗塞ST的影響(略)拳參正丁醇提取物，其主要有效成分為沒食子酸、丁二酸、槲皮素、槲皮素5OD葡萄糖苷、原兒茶酸等。其中槲皮素、槲皮素5OD葡萄糖苷具有抗癌、清除氧自由基，抗脂質氧化反應，保護心肌811。降低血液黏滯度6，改善缺血心肌組織微循環，對

19、結扎冠狀動脈損傷心肌起保護作用。拳參正丁醇提取物對大鼠急性心肌結扎冠狀動脈損傷具有保護作用，其保護機理可能與下列因素有關：擴張冠狀動脈，降低血管阻力，增加結扎冠狀動脈血流量；抗凝、抑制血小板聚集活化6，降低血粘滯度，改善營養性心肌血流量。使缺血受損的心肌細胞得到充分血液營養供應；抗心律失常作用12；通過Ca2+拮抗劑樣作用阻止Ca2+內流，增加肌漿網Ca2+攝取減少胞漿游離Ca2+濃度，阻斷Ca2+超載引起的心肌細胞損傷加重；抗氧自由基作用。本實驗結果提示，拳參正丁醇提取物對大鼠心肌結扎冠狀動脈損傷有明顯的保護作用。其主要作用成分可能為槲皮素。參考文獻1劉曉秋，陳發奎，吳立軍，等.拳參的化學成分J.沈陽藥科大學學報，2004，21(3): 187.2余生元，董曉強，黃世良，等.槲皮素對胃癌細胞多藥耐藥的逆轉作用J.江蘇醫藥，2004，30(7):510.3朱 蕾，何麗婭.槲皮素抗癌作用的分子機制武漢科技大學學報J.自然科學版， 2004，27(2):194.4吳荷芬，張 琳，何 露，等.拳參輔助治療嬰幼兒腹瀉的臨床分析J.右江醫學，2003，31(4): 389.5戚懋材，熊惠江. 拳參治療嬰幼兒秋冬季腹瀉28例J.中華實用醫學，