1、食品微生物檢驗技術課程綜述大腸桿菌的檢測（MP"數法）院系：食品科學與藥學學院班級：食科114姓名：張花學號： 114031431組長：張軍玲成員：張花趙晶有B 朱娟娟 大腸桿菌Petrifilm 測試片計數法 摘要食品檢測是反映食品加工、貯藏、運輸、等環節的衛生與安全 狀況的重要手段，而大腸菌群檢測則是食品檢測的重要指標均之一。 根據定義大腸菌群是在一定培養條件下能發酵乳糖、產酸產氣的需氧 和堿性厭氧的革蘭氏陰性芽胞桿菌。其主要檢測意義在于反映食品衛 生狀況并推測其在腸道致病菌的可能性。Petrifilm 大腸菌群測試片 是由美國3M生產的一種預先制備好的 VRB平板培養基系統，并

2、添加 了 TTC作為菌落指示劑便于菌落判讀，而上層薄膜可以起到對大腸菌 群發酵產生的氣體截留的作用。該方法目前已被多數權威機構認可， 并在國內很多實驗室開展運用。關鍵詞 大腸桿菌Petrifilm 測試法1/5下載文檔可編輯1設備和材料1.1 恒溫培養箱：36 ± 1C。1.2 冰箱25C。1.3 恒溫水浴箱:44.5 ±0. 2CO1.4 天平：感量0.1g。1.5 均質器1.6 振蕩器。1.7 無菌吸管:lmL（具0.01 mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量 移液器及吸頭。1.8 無菌錐形瓶：容量500mL1.9 玻璃珠：直徑約5mm1.10 pH計或pH比

3、色管或精密pH試紙1.11 試管架。2.培養基和試劑2.1 月桂基硫酸鹽胰蛋白月東（LST ）肉湯。2.2 EC肉湯。2.3 蛋白月東水。2.4 緩沖葡萄糖蛋白月東水（MP-V戲驗用）。2.5 磷酸鹽緩沖液。2.6 無菌生理鹽水：稱取8.5g氯化鈉溶于1000ml蒸儲水中，121c高 壓滅菌15min。2.71 mol/L氫氧化鈉（NaOH :稱取40g氫氧化鈉溶于1000ml蒸儲2/5下載文檔可編輯水中2.81 mol/L鹽酸（HCI）:移取濃鹽酸90ml,用蒸儲水稀釋至1000ml3檢驗程序賽樣25 E C或25 EL）樣品+ 225血邪釋液均質10倍系列稀釋選擇適宜2個3個連續稀釋度的樣

4、晶勺液，接種PeEfilmM測試36 P±1 P:H h±2h 或48 h±2h計數Petnillmm13試片上的藍色帶氣泡幽報告第果4.樣品稀釋4.1 固體和半固體樣品：以無菌操作將檢樣25mL樣品，置盛有225mL磷酸鹽緩沖液的無菌均質杯內或其他稀釋液的滅菌錐形瓶內（瓶內予置適當數量的玻璃珠，經充分振搖或研磨做成1:10的均勻稀 釋液。固體檢樣最好用均質器，以8 000-10 000 r/min的速度處理1 2min,做成1:10的樣品均勻稀釋液）。4.2 液體樣品：以無菌吸管吸取樣品25ml置盛有225mL磷酸鹽緩 沖液的無菌錐形瓶（瓶內預置適當數量的玻璃珠

5、）中，充分振搖，制 成1: 10的樣品勻液。4.3 樣品勻液的pH值應在6.57.5之間，必要時分別用1mol/L3/5下載文檔可編輯 氫氧化鈉（NaOH成1mol/L鹽酸（HCI ）調節。4.4 用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL,沿管壁緩緩注入含有 9mL磷酸鹽緩沖液的無菌試管內，振搖試管混勻，做成1:100的稀釋 液。4.5 根據對樣品污染狀況的估計，按上條操作依次做10倍遞增稀 釋液，每遞增稀釋一次，換用1支1mL滅菌吸管。從制備樣品勻液至樣 品接種完畢，全程不得超過15min。5檢驗5.1接種和培養選取23個適宜的連續稀釋度的樣品勻液，每個稀釋度接種兩張 測試片。將測試片置于平

6、坦實驗臺面上，揭開上層膜，用吸管吸取樣 品勻液1ml垂直地價在測試片的中央，將上層膜緩慢蓋下，避免氣泡 產生和上層膜直接落下，將壓板放置在上層膜中央處，輕輕地壓下， 是樣品勻液覆蓋與圓形的培養膜表面，切勿扭轉壓板。拿起壓板，靜 置至少1min意識培養基凝固。將測試片的透明面朝上放于 36c的培 養箱內，地跌層數不超過20片，肉、家禽和水產品，培養時間為 24 ±2h;其他食品培養時間為48±2h。5.1判讀可肉眼觀察計數，或用菌落計數器、放大鏡、 Petrifilm 自動判 讀儀計數。藍色有氣泡的菌落確認為大腸桿菌，不論藍色的深淺，部 分藍色的帶氣泡菌落也判定為大腸桿菌。

7、圓形培養膜邊緣及邊緣以外 的菌落不計數。當測試片出現大量氣泡、不明顯的小菌落，培養區成4/5下載文檔可編輯 藍色時，需要進一步稀釋樣品勻液，重新檢驗。6大腸桿菌測試片技術的報告選擇菌落數在15150之間的稀釋度，兩張測試片菌落平均乘以 稀釋倍數，即為每克（或毫升）樣品中大腸桿菌數，以CFU/g（CFU/ml） 表不。如果所有稀釋度測試片上的菌落數都小于15,計數最低稀釋度測試片上的平均菌落數乘以稀釋倍數報告；如果所有稀釋度測試片上均無菌落生長，以“小于1乘以最低稀釋倍數”報告；如果所有稀釋 度的菌落數都大于150,計數最高稀釋度測試片上的平均菌落數乘以 稀釋倍數報告。技術菌落數大于150個的測試片，可計數一個或兩個 具有代表性的方格內的菌落數，換算成單個方格內的菌落數以后乘以 20,即為測試片上估算的菌落數（圓形生長面積為20c m2）。參考文獻U13中華人民共和國