1、第二章 神經(jīng)生物學(xué)研究的方法和手段一、形態(tài)學(xué)方法一、形態(tài)學(xué)方法二、生理學(xué)方法二、生理學(xué)方法三、電生理學(xué)方法三、電生理學(xué)方法 四、生物化學(xué)方法四、生物化學(xué)方法 五、五、 分子生物學(xué)方法分子生物學(xué)方法 六、腦成像（六、腦成像（Brain imaging）技術(shù)）技術(shù) 一、形態(tài)學(xué)方法 束（通）路追蹤法束（通）路追蹤法 熒光組織化學(xué)法熒光組織化學(xué)法原位雜交法原位雜交法 受體定位法受體定位法神經(jīng)系功能活動(dòng)形態(tài)定位法神經(jīng)系功能活動(dòng)形態(tài)定位法 1、束（通）路追蹤法：研究神經(jīng)元之間的聯(lián)系 l軸漿運(yùn)輸法軸漿運(yùn)輸法利用神經(jīng)元軸漿運(yùn)輸現(xiàn)象的追蹤法利用神經(jīng)元軸漿運(yùn)輸現(xiàn)象的追蹤法. 追蹤劑：辣根過氧化物酶追蹤劑：辣根過氧

2、化物酶(horseradish peroxoidase, HRP)、熒光染料包括核黃、熒光染料包括核黃(nuclear yellow)、固藍(lán)、固藍(lán)(fast blue)及熒光金及熒光金(fluorogold)、植、植物凝集素如麥芽凝集素物凝集素如麥芽凝集素(wheat germ agglutinin, WGA)和菜豆凝集素和菜豆凝集素(phaseolus vulgaris agglutinin)、細(xì)菌毒素如霍亂毒素、病毒如活的神經(jīng)、細(xì)菌毒素如霍亂毒素、病毒如活的神經(jīng)病毒病毒 (胞疹病毒和彈狀病毒）胞疹病毒和彈狀病毒） l 變性法：利用神經(jīng)元包體受損或神經(jīng)軸突離變性法：利用神經(jīng)元包體受損或神經(jīng)軸

3、突離斷后遠(yuǎn)側(cè)軸突的變性，或軸突切斷后細(xì)胞的反斷后遠(yuǎn)側(cè)軸突的變性，或軸突切斷后細(xì)胞的反應(yīng)，來研究纖維的聯(lián)系。應(yīng)，來研究纖維的聯(lián)系。 *物理性方法：刀的切割、電凝、電離破壞、物理性方法：刀的切割、電凝、電離破壞、超聲破壞等。超聲破壞等。 *化學(xué)性破壞：興奮性氨基酸（海人酸和鵝化學(xué)性破壞：興奮性氨基酸（海人酸和鵝高蕈氨酸）、單胺類神經(jīng)毒（羥多巴胺、高蕈氨酸）、單胺類神經(jīng)毒（羥多巴胺、羥多巴、雙羥色胺）羥多巴、雙羥色胺） l神經(jīng)元質(zhì)膜熒光染料法：神經(jīng)元質(zhì)膜熒光染料法： 用羰花青（用羰花青（carbocynine）熒光染料，可）熒光染料，可以染出神經(jīng)細(xì)胞的質(zhì)膜，并可以在活體或固定以染出神經(jīng)細(xì)胞的質(zhì)膜，并

4、可以在活體或固定的標(biāo)本上追蹤纖維聯(lián)系。的標(biāo)本上追蹤纖維聯(lián)系。 、熒光組織化學(xué)法 用特異性抗體顯示神經(jīng)組織化學(xué)成分的方法。用特異性抗體顯示神經(jīng)組織化學(xué)成分的方法。基本過程有：固定、制片、反應(yīng)等三步。基本過程有：固定、制片、反應(yīng)等三步。 l 免疫組織化學(xué)反應(yīng)：有直接法和間免疫組織化學(xué)反應(yīng)：有直接法和間接法接法 l 雙重免疫組織化學(xué)染色：主要是雙重免疫組織化學(xué)染色：主要是為了研究兩種物質(zhì)在同一細(xì)胞或突起內(nèi)為了研究兩種物質(zhì)在同一細(xì)胞或突起內(nèi)的共存現(xiàn)象，或含兩種不同化學(xué)物質(zhì)的的共存現(xiàn)象，或含兩種不同化學(xué)物質(zhì)的相互關(guān)系。相互關(guān)系。、原位雜交法 在形態(tài)學(xué)研究中，主要用于顯示細(xì)胞內(nèi)的在形態(tài)學(xué)研究中，主要用于顯

5、示細(xì)胞內(nèi)的mRNA。 、受體定位法：研究受體在神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的定位 配體法：主要在組織切片上進(jìn)行，利用標(biāo)記的配體法：主要在組織切片上進(jìn)行，利用標(biāo)記的配體和受體結(jié)合以示蹤其部位配體和受體結(jié)合以示蹤其部位 免疫組織化學(xué)法：用針對受體的抗體免疫組織化學(xué)法：用針對受體的抗體 原位雜交法原位雜交法 、神經(jīng)系功能活動(dòng)形態(tài)定位法 l脫氧葡萄糖法：脫氧葡萄糖法： 原理是：神經(jīng)元活動(dòng)時(shí)其能量代謝增加，而其能量原理是：神經(jīng)元活動(dòng)時(shí)其能量代謝增加，而其能量代謝主要依賴葡萄糖。在腦內(nèi)存在脫氧葡萄糖代謝主要依賴葡萄糖。在腦內(nèi)存在脫氧葡萄糖(2-deoxy-D-glucose,2DG)時(shí)，神經(jīng)元可不加區(qū)別地將時(shí)，神經(jīng)元可不加

6、區(qū)別地將2DG與葡萄糖一起攝入細(xì)胞內(nèi)，兩者都是己糖激酶的與葡萄糖一起攝入細(xì)胞內(nèi)，兩者都是己糖激酶的底物。但底物。但2DG在其被磷酸化成在其被磷酸化成2DG-6-PO4后，不能被后，不能被磷酸己糖異構(gòu)酶進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為果糖磷酸己糖異構(gòu)酶進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為果糖-6-PO4，不能繼續(xù)，不能繼續(xù)在糖酵解循環(huán)中代謝。如在在糖酵解循環(huán)中代謝。如在2DG上標(biāo)以同位素。神經(jīng)上標(biāo)以同位素。神經(jīng)元內(nèi)同位素的堆積程度反映了神經(jīng)元的活動(dòng)程度。元內(nèi)同位素的堆積程度反映了神經(jīng)元的活動(dòng)程度。 lc-fos(Fos)法：法： c-fos是一種原癌基因，屬于即刻早期基因類是一種原癌基因，屬于即刻早期基因類(immediate-early

7、 gene).很多刺激條件可通過第二信很多刺激條件可通過第二信使引起神經(jīng)元使引起神經(jīng)元c-fos的表達(dá)增加，形成的表達(dá)增加，形成fos mRNA。由。由fos mRNA翻譯成的翻譯成的Fos蛋白，立即轉(zhuǎn)位至細(xì)胞核內(nèi)，蛋白，立即轉(zhuǎn)位至細(xì)胞核內(nèi)，與另一即刻早基因與另一即刻早基因c-jun 所產(chǎn)生的蛋白所產(chǎn)生的蛋白Jun構(gòu)成二聚構(gòu)成二聚體（第三信使），調(diào)節(jié)其靶基因的表達(dá)，引起一系列體（第三信使），調(diào)節(jié)其靶基因的表達(dá)，引起一系列的細(xì)胞反應(yīng)。的細(xì)胞反應(yīng)。 l細(xì)胞色素氧化酶法：細(xì)胞色素氧化酶法： 神經(jīng)元線粒體內(nèi)的細(xì)胞色素氧化酶是提供神經(jīng)元線粒體內(nèi)的細(xì)胞色素氧化酶是提供神經(jīng)元能量的重要酶，細(xì)胞色素氧化酶的水

8、平神經(jīng)元能量的重要酶，細(xì)胞色素氧化酶的水平與神經(jīng)元能量需求密切相關(guān)，一般反映慢性刺與神經(jīng)元能量需求密切相關(guān)，一般反映慢性刺激的結(jié)果。激的結(jié)果。 二、生理學(xué)方法 l 損毀法損毀法l 刺激法刺激法l周身給藥法周身給藥法l腦室注射法腦室注射法l腦組織培養(yǎng)腦組織培養(yǎng)l亞細(xì)胞分析亞細(xì)胞分析l神經(jīng)遞質(zhì)釋放量的測定神經(jīng)遞質(zhì)釋放量的測定 l神經(jīng)遞質(zhì)的功能測定神經(jīng)遞質(zhì)的功能測定 l行為學(xué)方法行為學(xué)方法 1、神經(jīng)遞質(zhì)釋放量的測定（在體in vivo和離體in vitro)l推挽灌流法：推挽灌流法： 在體研究中樞核團(tuán)遞質(zhì)釋放的有用方法。在體研究中樞核團(tuán)遞質(zhì)釋放的有用方法。通過推挽灌流套管，使灌流液直接灌流腦組織，通

9、過推挽灌流套管，使灌流液直接灌流腦組織，從流出液中分析神經(jīng)遞質(zhì)的變化。從流出液中分析神經(jīng)遞質(zhì)的變化。 l腦透析術(shù)腦透析術(shù)(brain dialysis)： 在特定的腦區(qū)內(nèi)，植入透析探頭，用生理在特定的腦區(qū)內(nèi)，植入透析探頭，用生理溶液灌流時(shí)，細(xì)胞外液中的神經(jīng)遞質(zhì)可順濃度溶液灌流時(shí)，細(xì)胞外液中的神經(jīng)遞質(zhì)可順濃度遞度從透析管擴(kuò)散至灌流液中，收集和測定灌遞度從透析管擴(kuò)散至灌流液中，收集和測定灌流液中神經(jīng)遞質(zhì)的含量，就能監(jiān)測該遞質(zhì)的變流液中神經(jīng)遞質(zhì)的含量，就能監(jiān)測該遞質(zhì)的變化過程。腦透析術(shù)的裝置包括探頭、導(dǎo)管、微化過程。腦透析術(shù)的裝置包括探頭、導(dǎo)管、微量灌流泵、樣品收集器和定量分析儀。量灌流泵、樣品收集

10、器和定量分析儀。 抗體微探針法：是在玻璃微電極上涂上一層神經(jīng)抗體微探針法：是在玻璃微電極上涂上一層神經(jīng)肽抗體，用于在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)定位神經(jīng)肽的釋放肽抗體，用于在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)定位神經(jīng)肽的釋放。硼硅玻璃與硼硅玻璃與r氨丙基三乙氧硅烷（氨丙基三乙氧硅烷（r-aminopropyltri- etriethoxysilane）反應(yīng)后在玻璃表面形成一層帶有游離氨基的硅氧烷反應(yīng)后在玻璃表面形成一層帶有游離氨基的硅氧烷(siloxane)多聚體微粒。多聚體微粒。該玻璃再用戊二醛該玻璃再用戊二醛(glutaraldehyde)處理，使戊二醛與蛋白質(zhì)處理，使戊二醛與蛋白質(zhì)A以共價(jià)鍵方以共價(jià)鍵方式偶聯(lián)，蛋白質(zhì)式偶

11、聯(lián)，蛋白質(zhì)A再與神經(jīng)肽抗體結(jié)合，制成抗體微探針再與神經(jīng)肽抗體結(jié)合，制成抗體微探針腦片灌流法突觸體灌流法2、神經(jīng)遞質(zhì)的功能測定 l 微電泳：能將微量的神經(jīng)遞質(zhì)導(dǎo)入神經(jīng)元附微電泳：能將微量的神經(jīng)遞質(zhì)導(dǎo)入神經(jīng)元附近，觀察其作用。近，觀察其作用。l抗體微量注射：特異性的抗體注射在某些部位，抗體微量注射：特異性的抗體注射在某些部位，可中和神經(jīng)末梢釋放出而進(jìn)入突觸間隙的神經(jīng)可中和神經(jīng)末梢釋放出而進(jìn)入突觸間隙的神經(jīng)肽，防止其與受體結(jié)合。因此，抗體微量注射肽，防止其與受體結(jié)合。因此，抗體微量注射所引起的功能變化可解釋為消除該神經(jīng)肽的生所引起的功能變化可解釋為消除該神經(jīng)肽的生理效應(yīng)的結(jié)果。理效應(yīng)的結(jié)果。l生物檢

12、測（生物檢測（Bioassay）: 經(jīng)典的方法經(jīng)典的方法.如用水如用水蛭背最長肌測定蛭背最長肌測定ACh 的作用，靈敏度達(dá)的作用，靈敏度達(dá)10-10g.3、行為學(xué)方法 l 經(jīng)典條件反射：代表了刺激與強(qiáng)化的關(guān)系。經(jīng)典條件反射：代表了刺激與強(qiáng)化的關(guān)系。l操作式條件反射：是通過動(dòng)物自身的某個(gè)特定操作式條件反射：是通過動(dòng)物自身的某個(gè)特定操作動(dòng)作而獲得食物或回避有害刺激的反應(yīng)活操作動(dòng)作而獲得食物或回避有害刺激的反應(yīng)活動(dòng)。動(dòng)。 三、電生理學(xué)方法 1、電生理常用儀器、電生理常用儀器l 陰極射線示波器陰極射線示波器:高靈敏度，掃描速度慢高靈敏度，掃描速度慢l 生物電放大器生物電放大器l 電子刺激器電子刺激器l

13、 貯存和分析電生理實(shí)驗(yàn)結(jié)果的儀器：貯存和分析電生理實(shí)驗(yàn)結(jié)果的儀器： 如示波如示波器照相機(jī)和計(jì)算機(jī)。器照相機(jī)和計(jì)算機(jī)。2、電生理學(xué)的常用方法、電生理學(xué)的常用方法l 細(xì)胞外記錄細(xì)胞外記錄(Extracellular recording)：把引導(dǎo)電極：把引導(dǎo)電極安放在神經(jīng)組織的表面或附近引導(dǎo)神經(jīng)組織的電活動(dòng)。安放在神經(jīng)組織的表面或附近引導(dǎo)神經(jīng)組織的電活動(dòng)。l胞內(nèi)記錄胞內(nèi)記錄(Intracellular recording)：研究神經(jīng)元基本：研究神經(jīng)元基本生物物理特性的有力手段。生物物理特性的有力手段。EPSP,IPSP,AP(動(dòng)作電位動(dòng)作電位)l腦內(nèi)電刺激：是研究中樞功能定位的方法之一。腦內(nèi)電刺激：

14、是研究中樞功能定位的方法之一。 l順行沖動(dòng)記錄法順行沖動(dòng)記錄法(Orthodromic impulse recording)：就是電刺激某一突觸前的細(xì)胞體、：就是電刺激某一突觸前的細(xì)胞體、樹突或軸突，在此突觸后神經(jīng)元細(xì)胞體上記錄樹突或軸突，在此突觸后神經(jīng)元細(xì)胞體上記錄此刺激引起的電活動(dòng)變化。此刺激引起的電活動(dòng)變化。l逆行沖動(dòng)記錄法逆行沖動(dòng)記錄法(Antidromic impulse recording)：逆行沖動(dòng)記錄法即電刺激神經(jīng)元：逆行沖動(dòng)記錄法即電刺激神經(jīng)元的軸突主干或末梢，在同一神經(jīng)元胞體記錄反的軸突主干或末梢，在同一神經(jīng)元胞體記錄反相傳導(dǎo)的動(dòng)作電位。相傳導(dǎo)的動(dòng)作電位。 l電壓鉗技術(shù)電壓

15、鉗技術(shù)(Voltage Clamp)： 通過插入細(xì)胞內(nèi)的一根微電極向細(xì)胞內(nèi)通過插入細(xì)胞內(nèi)的一根微電極向細(xì)胞內(nèi)補(bǔ)充電流，補(bǔ)充的電流量正好等于跨膜流出的補(bǔ)充電流，補(bǔ)充的電流量正好等于跨膜流出的反向離子流，這樣即使膜通透性發(fā)生改變時(shí)，反向離子流，這樣即使膜通透性發(fā)生改變時(shí)，也能控制膜電位數(shù)值的不變。經(jīng)過離子通道的也能控制膜電位數(shù)值的不變。經(jīng)過離子通道的離子流與經(jīng)微電極施加的電流方向相反，數(shù)量離子流與經(jīng)微電極施加的電流方向相反，數(shù)量相等。相等。 SG:信號發(fā)生器，信號發(fā)生器，F(xiàn)BA:反饋放大器，反饋放大器，V監(jiān)監(jiān)測膜電位測膜電位l膜膜(斑斑)片鉗技術(shù)（片鉗技術(shù)（Patch Clamp）：）： 可以從分

16、子水平研究細(xì)胞膜離子通道的功能，是可以從分子水平研究細(xì)胞膜離子通道的功能，是用玻璃微電極吸管和只含個(gè)離子通道，面積為用玻璃微電極吸管和只含個(gè)離子通道，面積為幾個(gè)平方微米的細(xì)胞膜通過負(fù)壓吸引封接起來，由于幾個(gè)平方微米的細(xì)胞膜通過負(fù)壓吸引封接起來，由于電極尖端與細(xì)胞膜的高阻封接，此片膜內(nèi)開放所產(chǎn)生電極尖端與細(xì)胞膜的高阻封接，此片膜內(nèi)開放所產(chǎn)生的電流流進(jìn)玻璃吸管，用一極敏感的電流監(jiān)視器（斑的電流流進(jìn)玻璃吸管，用一極敏感的電流監(jiān)視器（斑片鉗放大器）測量此電流強(qiáng)度，就代表單一離子通道片鉗放大器）測量此電流強(qiáng)度，就代表單一離子通道電流。電流。 l腦電波測定腦電波測定: 用雙極或單極引導(dǎo)法，將引導(dǎo)電極放在用

17、雙極或單極引導(dǎo)法，將引導(dǎo)電極放在腦活動(dòng)區(qū)顱骨表面之上，可以記錄出能變換方腦活動(dòng)區(qū)顱骨表面之上，可以記錄出能變換方向的微弱電流。通過強(qiáng)力放大記錄出來的電位向的微弱電流。通過強(qiáng)力放大記錄出來的電位稱腦電圖（）。稱腦電圖（）。 l誘發(fā)電位誘發(fā)電位: 中樞神經(jīng)的任何部位對于故意刺激感受器官，中樞神經(jīng)的任何部位對于故意刺激感受器官，感受神經(jīng)、感覺通路上的任何一點(diǎn)，或與感覺感受神經(jīng)、感覺通路上的任何一點(diǎn)，或與感覺器官有關(guān)的任何結(jié)構(gòu)上的一點(diǎn)，所產(chǎn)生的電變器官有關(guān)的任何結(jié)構(gòu)上的一點(diǎn)，所產(chǎn)生的電變化，叫做誘發(fā)電位（化，叫做誘發(fā)電位（evoked potential)。 四、生物化學(xué)方法 1、用離心法分離制備突觸

18、小體及突出小體膜、用離心法分離制備突觸小體及突出小體膜 突觸小體突觸小體: 是指腦組織在等滲溶液中勻漿時(shí)，神經(jīng)末是指腦組織在等滲溶液中勻漿時(shí)，神經(jīng)末梢的細(xì)胞膜從軸突上自發(fā)斷裂、封閉而形成的神經(jīng)末梢的細(xì)胞膜從軸突上自發(fā)斷裂、封閉而形成的神經(jīng)末梢單位。它包括突觸前膜、突觸后膜及致密斑和包圍梢單位。它包括突觸前膜、突觸后膜及致密斑和包圍在突觸前膜的突觸小泡在突觸前膜的突觸小泡(vesicle內(nèi)含神經(jīng)遞質(zhì)內(nèi)含神經(jīng)遞質(zhì))，線粒，線粒體及胞漿蛋白質(zhì)。由于突觸小體是神經(jīng)介質(zhì)及受體的體及胞漿蛋白質(zhì)。由于突觸小體是神經(jīng)介質(zhì)及受體的主要聚集部位，突觸小體的制備便成了神經(jīng)介質(zhì)及受主要聚集部位，突觸小體的制備便成了神

19、經(jīng)介質(zhì)及受體的基本制備手段。體的基本制備手段。 2、層析法、層析法: 特點(diǎn)：分離生物活性物質(zhì)時(shí)不使其失活，可特點(diǎn)：分離生物活性物質(zhì)時(shí)不使其失活，可大量制備。大量制備。 基本原理：被分離物質(zhì)與支持物相互作用的基本原理：被分離物質(zhì)與支持物相互作用的緊密程度不同，流洗時(shí)被洗脫的難易程度不同。緊密程度不同，流洗時(shí)被洗脫的難易程度不同。 l 離子交換層析離子交換層析l 分子篩層析或凝膠過濾分子篩層析或凝膠過濾l 疏水性層析法疏水性層析法l 親和層析法親和層析法l 羥磷灰石層析法羥磷灰石層析法l 高效液相層析高效液相層析 3、放射免疫、放射免疫(radioimmunoassay,RIA)測定神測定神經(jīng)介質(zhì)

20、：經(jīng)介質(zhì)： 利用抗體利用抗體(Ab)特異地識別其抗原（特異地識別其抗原（Ag）的）的原理，將抗原標(biāo)記放射性同位素（原理，將抗原標(biāo)記放射性同位素（*Ag），用），用來測定與來測定與*Ag抗原性相同的物質(zhì)，即抗原性相同的物質(zhì)，即 *Ag+Ab *Ag.Ab + Ag Ag.Ab 當(dāng)當(dāng)*Ag固定時(shí)，固定時(shí)，Ag含量越高，所得到的含量越高，所得到的*Ag.Ab就越少。就越少。 所用儀器：所用儀器：r-計(jì)數(shù)器，液體閃爍計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)器，液體閃爍計(jì)數(shù)儀4、放射受體測定受體法：、放射受體測定受體法： 利用標(biāo)記能作用于不同靶組織內(nèi)各種受利用標(biāo)記能作用于不同靶組織內(nèi)各種受體的遞質(zhì)和激素，從而達(dá)到直接測定配體與其體的

21、遞質(zhì)和激素，從而達(dá)到直接測定配體與其受體形成絡(luò)合物的過程和理化特性。受體形成絡(luò)合物的過程和理化特性。5、免疫印跡法（、免疫印跡法（immunoblotting 或或western blotting）鑒定生物分子：鑒定生物分子： 是將電泳凝膠分離出來的電泳帶移到特殊的濾是將電泳凝膠分離出來的電泳帶移到特殊的濾膜上，再利用標(biāo)記抗體與濾膜上某一蛋白質(zhì)或肽的特膜上，再利用標(biāo)記抗體與濾膜上某一蛋白質(zhì)或肽的特異結(jié)合，使其顯色。異結(jié)合，使其顯色。 優(yōu)點(diǎn)：一是將傳統(tǒng)的電泳凝膠染色法的敏感度優(yōu)點(diǎn)：一是將傳統(tǒng)的電泳凝膠染色法的敏感度提高了提高了1001000倍，二是倍，二是RIA與相似，能從多種蛋白與相似，能從多

22、種蛋白質(zhì)中選擇鑒定出一種特異的蛋白質(zhì)，其敏感性可達(dá)質(zhì)中選擇鑒定出一種特異的蛋白質(zhì)，其敏感性可達(dá)1ng，同時(shí)又能知道這一蛋白質(zhì)的分子量，這又是，同時(shí)又能知道這一蛋白質(zhì)的分子量，這又是RIA無法達(dá)到的。無法達(dá)到的。五、 分子生物學(xué)方法 、神經(jīng)生物學(xué)研究中常用的分子生物學(xué)方法、神經(jīng)生物學(xué)研究中常用的分子生物學(xué)方法l基因的分子克隆基因的分子克隆l克隆后的基因在人工體外表達(dá)系統(tǒng)或細(xì)胞中的表達(dá)克隆后的基因在人工體外表達(dá)系統(tǒng)或細(xì)胞中的表達(dá)l克隆后的基因作為探針研究基因表達(dá)的組織特異性和克隆后的基因作為探針研究基因表達(dá)的組織特異性和發(fā)育階段特異性發(fā)育階段特異性l研究基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)的結(jié)構(gòu)特征有助于理解基因轉(zhuǎn)錄研

23、究基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)的結(jié)構(gòu)特征有助于理解基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制調(diào)控機(jī)制 2、聚合酶鏈反應(yīng)（、聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）：）： 在神經(jīng)生物學(xué)研究中有廣泛的用途，如可在神經(jīng)生物學(xué)研究中有廣泛的用途，如可應(yīng)用它發(fā)現(xiàn)和分析新基因，測定應(yīng)用它發(fā)現(xiàn)和分析新基因，測定mRNA 、反向遺傳學(xué)利用制造體內(nèi)基因突變的方法研、反向遺傳學(xué)利用制造體內(nèi)基因突變的方法研究基因及其產(chǎn)物的功能：究基因及其產(chǎn)物的功能： 通過制造定向突變改變生物表型的方法通過制造定向突變改變生物表型的方法與傳統(tǒng)遺傳學(xué)所采用的通過生物表型確定其基與傳統(tǒng)遺傳學(xué)所采用的通過生物表型確定其基因型的方法相反，故稱反向遺傳學(xué)。因型的方法相反，故稱反向遺傳學(xué)。 、遺傳連鎖分析法分離遺傳病基因：、遺傳連鎖分析法分離遺傳病基因： 人類基因組由人類基因組由23條染色體組成，基因組條染色體組成，基因組內(nèi)大約包含內(nèi)大約包含510萬個(gè)基因，其中萬個(gè)基因，其中40%在腦內(nèi)在腦內(nèi)表達(dá)。約有表達(dá)。約有1000多種遺傳病具有明顯的中樞多種遺傳病具有明顯的中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，占已知遺傳病總數(shù)的三分之一。神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，占已知遺傳病總數(shù)的三分之一。 六、腦成像（Brain imaging）技術(shù) l利