1、多聚酶鏈式反響擴增多聚酶鏈式反響擴增DNA片段片段多聚酶鏈式反響多聚酶鏈式反響PCRl1、概念：、概念：l又稱為基因的體外擴增法，是一種在體外又稱為基因的體外擴增法，是一種在體外快速擴增特定基因或快速擴增特定基因或DNA片段的技術，片段的技術，它能以極少少量的它能以極少少量的DNA為模板，在幾小為模板，在幾小時內復制出上百萬份的時內復制出上百萬份的DNA拷貝，能有拷貝，能有效地處理由于樣品中效地處理由于樣品中DNA含量太低而難含量太低而難以對樣品進展分析研討的問題。以對樣品進展分析研討的問題。2、PCR原理l1DNA復制的條件：復制的條件：l模板模板親代鏈親代鏈l原料原料核苷酸核苷酸l能量能量

2、ATPl酶酶解旋酶等解旋酶等l適宜的溫度：適宜的溫度：PCR儀自動調控儀自動調控l適宜的適宜的PH：用一定的緩沖溶液調理：用一定的緩沖溶液調理l2參與的組分：參與的組分：參與的組分參與的組分在在DNA復制中的作用復制中的作用解旋酶解旋酶打開打開DNA雙鏈雙鏈DNA母鏈母鏈提供提供DNA復制的模板復制的模板4種脫氧核苷酸種脫氧核苷酸合成子鏈的原料合成子鏈的原料DNA聚合酶聚合酶催化合成催化合成DNA子鏈子鏈引物引物使使DNA聚合酶能夠從引物的聚合酶能夠從引物的3端開始連接脫氧核苷酸端開始連接脫氧核苷酸l3DNA復制方向：復制方向：DNA聚合酶不能從頭開場聚合酶不能從頭開場所成所成DNA，而只能從

3、，而只能從3端延伸端延伸DNA鏈，故鏈，故DNA復制需求引物。當引物與復制需求引物。當引物與DNA母鏈經過堿基互補母鏈經過堿基互補配對結合后，配對結合后，DNA聚合酶就能從引物的聚合酶就能從引物的3端開場端開場延伸延伸DNA鏈，鏈，DNA的合成方向總是從子鏈的的合成方向總是從子鏈的5端端向向3端延伸。端延伸。l4DNA的熱變性原理：在的熱變性原理：在80100的溫度的溫度范圍內，范圍內，DNA的雙螺旋構造將解體，雙鏈分的雙螺旋構造將解體，雙鏈分開，這個過程稱為變性；當溫度緩慢降低后，開，這個過程稱為變性；當溫度緩慢降低后，兩條彼此分別的兩條彼此分別的DNA鏈又會重新結合成雙鏈，鏈又會重新結合成

4、雙鏈，這個過程稱為復性。這個過程稱為復性。l5PCR反響的條件：反響的條件：l一定的緩沖溶液；一定的緩沖溶液；lDNA模板；模板；l分別與兩條模板鏈相結合的兩種引物；分別與兩條模板鏈相結合的兩種引物；l四種脫氧核苷酸；四種脫氧核苷酸；l耐熱的耐熱的DNA聚合酶；聚合酶；l控制溫度；控制溫度；3、PCR過程3、PCR過程lDNA聚合酶只能特異地復制處于兩個引物之聚合酶只能特異地復制處于兩個引物之間的間的DNA序列，使這段固定長度的序列呈指序列，使這段固定長度的序列呈指數擴增。數擴增。配方及微量移液器實驗步驟預備好預備好PCR反響體系的配方反響體系的配方用微量移液器按配方在往微用微量移液器按配方在

5、往微量離心管中參與各組分量離心管中參與各組分蓋嚴蓋子，用手指悄然蓋嚴蓋子，用手指悄然彈擊管壁混合反響液彈擊管壁混合反響液離心離心10分鐘分鐘將離心管放入將離心管放入PCR儀上，設儀上，設置好循環程序進展反響置好循環程序進展反響實驗操作循環程序DNA含量的測定稀釋稀釋對照調零對照調零測定測定計算計算DNA含量含量ug=50260nm的讀的讀數數 稀釋倍數稀釋倍數練習穩定1、關于、關于PCR技術的運用，錯誤的一項為技術的運用，錯誤的一項為哪一項哪一項A 古生物學、刑偵破案、古生物學、刑偵破案、DNA序列測定序列測定B 診斷遺傳疾病、基因克隆、古生物學診斷遺傳疾病、基因克隆、古生物學C DNA序列測定、基因克隆、刑偵破案序列測定、基因克隆、刑偵破案D 診斷遺傳疾病、合成核苷酸、診斷遺傳疾病、合成核苷酸、DNA序序列測定列測定2、DNA的合成方向總是從子鏈的哪一端向的合成方向總是從子鏈的哪一端向哪一端延伸？哪一端延伸？3、PCR技術最突出的優點是技術最突出的優點是A 原理簡單原理簡單 B 原料易找原料易找C TaqDNA聚合酶有耐熱性聚合酶有耐熱性D 快速、高效、靈敏、易于操作快速、高效、靈敏、易于操作4、做、做PCR運用的微量離心管、槍頭、緩沖液運用的微量離心管