1、實驗室技術要求實驗室技術要求總體要求質量控制質量保證實驗室總體要求實驗室總體要求 實驗室分區要求 實驗室工作人員要求 安全防護 廢棄物處理 結果判斷與驗證實驗室分區要求實驗室分區要求設施和環境要求各工作區域設置緩沖間，緩沖間的壓力為負壓（或上設抽風裝置），與其相連的工作間為正壓，工作間與緩沖間之間宜安裝磁性連鎖裝置。不同功能的核酸檢驗工作區應是分隔獨立的工作室，并有明顯的標志，各區間不能直通。各區之間如果是緊密相連，需安裝物品傳遞艙。每個工作區域的頂部應安裝紫外燈，紫外燈的波長為254 nm，安裝數量為每20 m2安裝一支40W的紫外燈，燈與地面的距離不宜超過（2.00.1）m。實驗室分區要求

2、實驗室分區要求 工作區域的設置及要求 核酸檢驗區 試劑貯存和準備區; 樣品制備區; 核酸制備區 擴增區; 擴增產物分析區 蛋白質檢驗區 蛋白質分離純化區 蛋白質檢測區 其它區域 設置洗滌消毒室（洗滌、消毒、制備純水和/或雙蒸水、制冰等）、高速/超高速離心機室、低溫/超低溫冰箱室等。主要功能：原裝試劑和配制試劑的貯存，所有試劑的配制與分裝。工作區域的壓力要求：未設緩沖間的試劑貯存和準備區，工作區域為正壓。注意事項：當試劑經質檢合格后，應將其分裝貯存備用，貯存試劑的分裝體積根據通常在實驗室內一次測定所需的擴增反應數決定。用于擴增的試劑應冰凍貯存。核酸檢驗區各區功能 試劑貯存和準備區核酸檢驗區各區功

3、能 樣品制備區主要功能：實驗室樣品的混樣和測試樣品的制備。工作區域的壓力要求：未設緩沖間的樣品制備區，工作區域為負壓或減壓，可安裝排風系統。注意事項：此區應遠離其它實驗操作區；粉碎樣品時的器皿應單獨使用，所用的器具在使用前應經過徹底清洗并高壓消毒，防止交叉污染；稱取的測試樣品應加蓋后再移至樣品核酸制備區。核酸檢驗區各區功能 核酸制備區主要功能：核酸的提取純化與貯存；核酸含量的測定；測試樣品DNA的保存。工作區域的壓力要求：未設緩沖間的核酸制備區，工作區域為負壓或減壓，可安裝排風系統。注意事項：已純化的核酸應保存于20或80，避免反復凍融；陽性和陰性標準物質DNA可調整至常用的使用濃度后分裝并冷

4、凍保存。核酸檢驗區各區功能 擴增區主要功能：PCR擴增反應體系的配制和模板的加入，核酸擴增。工作區域的壓力要求：未設緩沖間的擴增區，工作區域為負壓或減壓，可安裝排風系統。注意事項：嚴格限制無關人員出入并減少在本區內走動；加樣應在超凈工作臺（生物安全柜）內進行，超凈工作臺的氣流方向宜選擇垂流式；巢式PCR的第二次加樣必須在此區進行。核酸檢驗區各區功能 擴增產物分析區主要功能：擴增產物的測定工作區域的壓力要求：未設緩沖間的擴增產物區，工作區域為負壓或減壓，應安裝排風系統。注意事項：此區是最主要的擴增產物污染來源，應遠離其它實驗操作區；使用PCR-ELISA方法檢測擴增產物時，應使用洗板機洗板。若實

5、驗僅采用全自動擴增檢測儀（如實時熒光定量PCR儀），可將擴增區與擴增產物分析區合并為一個區。蛋白質檢驗區 功能及要求 蛋白質分離純化區主要功能：用于蛋白質的分離與純化。工作區域要求：蛋白質純化應具備低溫工作的場地，如4冷房和/或層析柜等。蛋白質分離純化區主要功能：蛋白質分析檢測control test陽性結果陽性結果陰性結果陰性結果檢測工作流程實驗室樣品到樣驗收（確定是否具備檢驗的基本條件）混樣獲取測試樣品測試樣品的制備（待檢狀態） 核酸和/或蛋白等目標物質的提取 PCR實驗（包括擴增和產物分析）和/或蛋白質檢測結果判定結果表述（出具檢驗報告）實驗室質量控制和質量保證工作人員操作要求按照ISO

6、/IEC 17025：1999中5.2的要求。應具備良好的分子生物學專業技術操作規范。方向：試劑貯存和準備區樣本制備區核酸制備區擴增區擴增產物分析區各實驗區域應有專用的儀器設備，同一區域內的儀器設備、物品和工作服應有明顯標記，避免與其他區域的儀器設備混用。儀器設備的校準應符合ISO/IEC 17025：1999中5.5的規定。實驗室質量控制和質量保證儀器設備要求實驗室質量控制和質量保證試劑要求除另有規定外，所有實驗使用的試劑等級應為不含DNA和DNase的分析純或生化試劑。試劑的選購、驗收、貯存應符合ISO/IEC 17025：1999規定。實驗用水應符合GB 6682-92中一級水的規格。去

7、離子水的電阻應達到18.2。商品試劑盒應注明到貨日期，對所收到的試劑盒應按規定的貯存條件存放。對菌種、質粒、動植物細胞組織的貯存與保管應符合ASTM E 1342-97的規定。實驗室質量控制和質量保證試劑配制實驗室配制的試劑應在容器上標明試劑名稱、濃度、配制時間、保存條件、失效日期及配制者姓名。所用試劑溶液宜大體積配制、小體積分裝后高壓滅菌保存，不宜高壓滅菌的試劑應過濾（0.22 m）除菌；PCR主混液、引物、探針應避免反復凍融。實驗室質量控制和質量保證試劑配制實驗室應確定關鍵試劑，并在使用前進行質量檢測。關鍵試劑包括：核酸提取試劑、RNase、蛋白酶K、陰性對照標準物質、陽性對照標準物質、T

8、aq酶、各種限制性內切酶、引物、探針、菌種、陽性質粒。試劑質檢包括有無污染，是否存在假陽性；使用弱陽性對照標準物質檢測試劑的擴增效果。實驗室質量控制和質量保證 防止污染 嚴格實驗室分區對實驗室進行功能分區，各區的工作服、實驗用具和實驗記錄本應區分標記，不能混用。 樣品管理送檢樣品的包裝應完好并有明確的標識；在對實驗室樣品進行混樣、測試樣品的制備和稱量過程中應避免交叉污染。 實驗過程的質量控制實驗室質量控制和質量保證 實驗過程的質量控制 實驗室環境對照 陰性質控對照 核酸提取空白對照：核酸提取過程中不加樣品的空白管； PCR試劑對照：不含DNA/cDNA模板的PCR擴增反應液試劑； 陰性目標DN

9、A對照：即為內源基因對照，與測試樣品等同處理。 陽性質控對照 檢驗PCR反應是否正常進行 PCR抑制物對照 檢測PCR反應體系中是否存在水溶性抑制物質。當PCR反應無擴增結果和定量PCR時宜設此對照。實驗室質量控制和質量保證 避免各類實驗污染 避免擴增產物污染 PCR擴增反應液中加入UDG酶，以dUTP代替dTTP可防止以前PCR擴增產物所致的遺留污染。 避免RNase污染（RNA檢測） 戴口罩和手套; DEPC; 高溫烘烤; RNase抑制劑 避免操作過程污染 實時熒光PCR和總核酸雜交法可防止操作過程的污染，實時熒光PCR尤其轉基因產品檢測實驗室重要的防污染措施之一。陽性樣品陰性樣品Ct

10、值轉基因馬鈴薯和油菜籽的實時熒光PCR檢測 實驗室質量控制和質量保證室間質量評價測試凡對外開展基因檢測并出具檢測報告的實驗室，應定期參加國家有關法定部門組織的檢驗項目的室間質量評價測試。實驗室質量控制和質量保證 實驗室清潔 清潔方向 應按檢測工作流程方向進行：試劑貯存和準備區樣品粉碎區核酸制備區擴增區產物分析區 清潔用具 不同實驗區域的清潔用具應固定，不能交叉使用。工作結束后應立即對工作區域進行清潔。實驗室質量控制和質量保證 實驗室清潔 實驗室空間 實驗室空間應定期進行紫外照射。實驗臺面和儀器設備的清潔 實驗臺面、超凈工作臺宜用3%雙氧水或10%次氯酸鈉溶液（含有效氯1 g/L）擦拭清潔；也可

11、在擦拭后再用紫外光照射，照射距離應不超過90 cm，照射時間宜過夜。注：10%次氯酸鈉和3%雙氧水應在使用前配制，配制好的溶液不宜長期存放。實驗室質量控制和質量保證 有毒有害及廢棄物質的處理 移液器吸頭 使用過的移液器吸頭應放入含有10%次氯酸鈉溶液的容器內浸泡，浸泡時間不宜少于24 h。 PCR產物 含有PCR產物的所有液體及廢棄物應放入含有1 mol/L HCl的容器中浸泡，浸泡時間不宜少于6 h；采用PCR-ELISA方法檢測時洗板機洗板所產生的廢液應收集至1 mol/L HCl溶液中。 瓊脂糖凝膠及電泳液 對含有EB或經EB浸泡過的瓊脂糖凝膠、電泳緩沖液的處理參見分子克隆。 陽性樣品和

12、質粒 陽性質粒宜放入1 mol/L HCl溶液中浸泡，浸泡時間不宜少于6 h。實驗室質量控制和質量保證 安全防護紫外線應佩戴具有紫外線防護功能的護目鏡和/或防護面罩，并遮蔽暴露的皮膚。紫外照射消毒后由于空氣中臭氧富集，不宜立即開始工作，應在停止紫外照射30 min后開始工作，有條件的實驗室，可安裝無臭氧紫外燈。溴化乙錠 在接觸溴化乙錠時應戴一次性腈類手套，實驗操作宜固定在一定的區間、使用相對固定的容器。放射線在做有放射性物質的實驗操作時應遵照GB 11930-89中的規定進行個人防護。細菌培養物細菌培養物及所接觸的平皿應在121、30 min消毒后方可丟棄。實驗室質量控制和質量保證 結果判斷假

13、陽性結果 內標基因，陰性對照假陰性結果 內標基因，陽性對照定量結果 重復性實驗，操作規范。核酸檢驗區各區功能 核酸制備區主要功能：核酸的提取純化與貯存；核酸含量的測定；測試樣品DNA的保存。工作區域的壓力要求：未設緩沖間的核酸制備區，工作區域為負壓或減壓，可安裝排風系統。注意事項：已純化的核酸應保存于20或80，避免反復凍融；陽性和陰性標準物質DNA可調整至常用的使用濃度后分裝并冷凍保存。control test陽性結果陽性結果陰性結果陰性結果control test陽性結果陽性結果陰性結果陰性結果實驗室質量控制和質量保證試劑配制實驗室配制的試劑應在容器上標明試劑名稱、濃度、配制時間、保存條件、失效日期及配制者姓名。所用試劑溶液宜大體積配制、小體積分裝后高壓滅菌保存，不宜高壓滅菌的試劑應過濾（0.22 m）除菌；PCR主混液、引物、探針應避免反復凍融。實驗室質量控制和質量保證試劑配制實驗室配制的試劑應在容器上標明試劑名稱、濃度、配制時間、保存條