1、黃酮提取實驗方案1材料與儀器1.1 材料 新鮮黎蒿1.2 試劑1.3 實驗儀器電熱恒溫水浴鍋電子天平（感量0.0001g）722型分光光度計索氏提取器 量筒（100ml,10ml）25ml比色管 移液管 小試管 白瓷板 圓底燒瓶 100m容量瓶 錐形瓶 2 實驗原理2.1 提取原理2.2 分離方法及原理3 實驗部分3.1原料的預處理黎蒿不同部位除雜水洗晾干粉碎3.2 蘆丁標準溶液的配制 將蘆丁在干燥箱里用120條件下恒重1.5h,然后精確稱取蘆丁標準品0.01g用85%的乙醇溶液配制成100.00mL的溶液，備用。3.3 測定波長的選擇 精確移取蘆丁標準溶液0.50mL,置于25.00mL的比

2、色管中，用質量分數為85%的乙醇稀釋到10.00mL處，加人5%的亞硝酸鈉溶液0.80mL,混勻，放置10min;加入10%硝酸鋁溶液0.80mL , 混勻，放置10min,再加入4%的氫氧化鈉溶液10.00mL, 混勻，放置10min,加入85%的乙醇溶液至刻度，搖勻，10min后在460560nm處測定吸光度,4（以試劑樣品做空白）選擇最大吸收波長。3.4 蘆丁標準曲線的繪制精確吸取蘆丁標準溶液0.00、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00 mL于6支25.00mL的比色管中，用質量分數為85%的乙醇稀釋到10.00mL處，加人5%的亞硝酸鈉溶液0.80mL,混勻，放置10mi

3、n;加入10%硝酸鋁溶液0.80mL , 混勻，放置10min,再加入4%的氫氧化鈉溶液10.00mL, 混勻，放置10min，加入85%的乙醇溶液至刻度，搖勻，10min后于波長500nm處測定吸光度，（以第一瓶為空白溶液）然后以吸光度和蘆丁溶液濃度做圖，繪制標準曲線。3.5 黃酮類化合物的特征性實驗5-6 在一定條件下對提取的黃酮類化合物進行特征性實驗，具體內容如下：（1） 鹽酸鎂粉反應：取1.00mL提取液于試管中加適量鎂粉搖勻，再加入濃鹽酸數滴（1次加入），觀察其泡沫顏色。（2） 三氯化鋁反應：取提取液點在濾紙上，滴加1%三氯化鋁乙醇溶液，吹干，觀察顏色變化。（3） 三氯化鐵反應：取幾

4、滴提取液于白瓷板上，滴加1%三氯化鐵乙醇溶液，觀察其顏色。（4） 濃氨水反應：取乙醇提取液點在濾紙上，將濾紙在濃氨水上方熏0.5min，觀察其顏色變化。3.6 單因素實驗2.6.1 較佳提取劑質量分數的確定 準確稱取3g處理好的黎蒿不同部位樣品置于圓底燒瓶中，分別用無水乙醇 、95%、85% 80%、75% 的乙醇60mL對3g不同部位黎蒿樣品在水浴溫度為80下回流提取3h.提取完畢，用與提取劑的質量分數相同的乙醇反復洗滌圓底燒瓶、濾紙包，將其定容于100:00mL容量瓶中，然后精確吸取0.50mL提取液置于25.00mL的比色管中，用與提取劑質量分數相同的乙醇稀釋到10.00mL處，加人5%

5、的亞硝酸鈉溶液0.80mL,混勻，放置10min;加入10%硝酸鋁溶液0.80mL , 混勻，放置10min,再加入4%的氫氧化鈉溶液10.00mL, 混勻，放置10min,加入85%的乙醇溶液至刻度，搖勻，10min后于波長500nm處測定其吸光度，同時做三組平行實驗。2.6.2 較佳提取時間的確定準確稱取3g處理好的黎蒿不同部位樣品置于圓底燒瓶中，分別用2h、2.5h 、3h 、3.5h提取時間用60mL、85%的乙醇對3g金星厥科葉樣品在水浴溫度為80下回流提取，乙醇提取液的處理方法如前，測定其吸光度，同時做三組平行實驗。2.6.3 較佳提取溫度的確定稱取3g處理好的黎蒿不同部位樣品置于

6、圓底燒瓶中，分別在75、 80、85、 90的水浴溫度下用60mL、85%的乙醇對3g不同部位黎蒿樣品回流提取2.5h，乙醇提取液的處理方法如前，測定其吸光度，同時做三組平行實驗。2.6.4較佳物料比的確定稱取3g處理好的黎蒿不同部位樣品置于圓底燒瓶中，分別用30mL、45mL 、60mL、75mL 、90mL的85%的乙醇溶液在水浴溫度為85下對3g黎蒿不同部位樣品回流提取2.5h，乙醇提取液的處理方法如前，測定其吸光度，同時做三組平行實驗。3.7 葉綠素對黃酮類物質的影響 稱取15g 黎蒿不同部位樣品放于錐形瓶中用90mL的石油醚浸泡8個小時對其脫色，過濾、干燥。然后準確稱取處理過的3g黎

7、蒿不同部位樣品用質量分數為85%的60mL乙醇溶液在水浴溫度為85下對其回流提取2.5h，乙醇提取液的處理方法如前，測定其吸光度，同時做三組平行實驗。3.8 黎蒿不同部位葉中黃酮類化合物含量的測定精密量取石油醚處理過的提取液0.50mL，置于25.00mL 的比色管中。加85%的乙醇稀釋到10.00mL,加入5%的亞硝酸鈉溶液0.80mL,混勻，放置10min;加入10%硝酸鋁溶液0.80mL , 混勻，放置10min,再加入4%的氫氧化鈉溶液10.00mL, 混勻，放置10min，加入85%的乙醇溶液至刻度，搖勻，10min后于波長510nm處測定吸光度。同時做樣品空白管.根據標準曲線計算提

8、取物中黃酮類化合物的含量.(把樣品所測得吸光度的平均值代入標準曲線方程,再算出0.50mL提取液中黃酮類化合物的濃度,然后再根據濃度算出樣品中黃酮類化合物的百分含量.)計算方法(公式)如下： 設樣品中黃酮類化合物的含量為 ,稀釋以后的濃度為C;原提取液的濃度為C0 ; 4 結果與討論4.1 最大吸收波長的選擇 將定量的黃酮提取液顯色以后在460560nm處測定吸光度,（以試劑樣品做空白）選擇最大吸收波長，測定結果如下：表1 波長與吸光度的關系波長(nm)吸光度(A)波長(nm) 吸光度(A)從表1中可以知道當波長在什么時候有最大吸收波峰。4.2 蘆丁的標準曲線的繪制 精確吸取0.00、0.50

9、、1.00、2.00、3.00、4.00 mL的蘆丁標準溶液稀釋、顯色以后在波長500nm處測定吸光度（以第一瓶為空白溶液），以濃度(c)為橫坐標，吸光度(A)為縱坐標，繪制標準曲線，結果如下： 表2 蘆丁溶液濃度與吸光度的關系 濃度(mg/mL) 0.002 0.004 0.008 0.012 0.016吸光度 實驗結果表明黃酮類化合物含量在0100ug/mL范圍內與吸光度呈良好的線性關系，其回歸方程為Y=11.5548X-0.00406 R=0.99342, 4.3黃酮類化合物的特征性實驗 對所提取的黃酮類化合物進行特征性實驗的結果如下表： 表3定性實驗結果試劑現象鹽酸鎂粉 1%三氯化鋁

10、1%三氯化鐵 濃氨水 從表3可知，黃酮類化合物的特征性實驗結果較符合黃酮類化合物的特征顏色反應，證明所提取中含有黃酮類化合物。4.4 單因素實驗的結果4.4.1較佳提取劑質量分數的確定準確稱取3g處理好的黎蒿不同部位樣品置于圓底燒瓶中，分別用無水乙醇 、95%、85% 80%、75% 的乙醇60mL對3g黎蒿不同部位樣品在水浴溫度為80下回流提取3h.顯色后測其吸光度，測定結果如下： 表4 不同乙醇質量分數對黎蒿不同部位中黃酮類物質提取的結果乙醇的質量分數 (%) 無水乙醇 95 85 80 75吸光度1吸光度2吸光度3平均值 4.4.2 較佳提取時間的確定 準確稱取3g處理好的黎蒿不同部位樣

11、品置于圓底燒瓶中，分別用2h、2.5h 、3h 、3.5h提取時間用60mL，85%的乙醇對3g黎蒿不同部位樣品在水浴溫度為80下回流提取。顯色后測其吸光度，測定結果如下： 表5 不同提取時間對黎蒿不同部位中黃酮類物質的提取結果提取時間（h） 2 2.5 3 3.5吸光度1吸光度2吸光度3平均值 4.4.3較佳提取溫度的確定稱取3g處理好的黎蒿不同部位樣品置于圓底燒瓶中，分別在75、 80、85、 90的水浴溫度下用60mL，85%的乙醇對3g黎蒿不同部位樣品回流提取2.5h。顯色后測其吸光度，測定結果如下： 表6 不同提取溫度對黎蒿不同部位中黃酮類物質的提取結果提取溫度（） 75 80 85 90吸光度1吸光度2吸光度3平均值4.4.4較佳物料比的確定稱取3g處理好的黎蒿不同部位樣品置于圓底燒瓶中，分別用30mL、45mL 、60mL、75mL 、90mL質量分數為85%的乙醇在水浴溫度為85下對3g樣品回流提取2.5h。顯色后測其吸光度，測定結果如下：表7 不同物料比對黎蒿不同部位黃酮類物質的提取結果物料比（w/v） 1:10 1:15 1:20 1:25 1:30吸光度1吸光度2吸光度3平均值 4.5 葉綠素對黃酮類物質含量測定的影響 準確稱取用石油醚脫色過的3g黎蒿不同部位樣品用質量分數為85%的乙醇60mL在水浴溫度為85下對其回流提取