1、精品文檔1歡迎下載GE中低壓層析柱柱效測定方法 柱效測定是一項經常使用的操作，對于定量表征層析柱的工作狀態是否良好，工藝的驗證具有重要的意義。但是實際工作中很多朋友都遇到不會測柱效或者 測出來注銷過低的狀況，不知道如何解決。所以今天我就給大家詳細介紹一下柱效的正確測定方法，以及經常遇到的問題如何解決。本方法適用于所有GE公司中低壓液相色譜的預裝柱及自己填裝的層析柱。介紹分為5個部分，測前準備、試劑選擇、測柱效操作、測試結果積分、經常 發生的問題。1.測前準備：？KTA層析設備。要求設備的型號與層析柱大小匹配，從上樣閥門到紫外和電 導檢測器之間的體積要做到最小（管路內徑盡量細，管路盡量短），這對

2、于準確測量實驗室小層析柱的柱效非常重要。測試平衡溶液及樣品。這個部分在試劑選擇中單獨細說。裝填好的層析柱。使用平衡緩沖液在測柱效的流速下至少平衡1.5 CV（柱體積），平衡方向與測柱效方向必須 一致樣品環。容積大于1%拄體積。2試劑選擇測柱效主要有兩種測試系統：1 NaCI測試系統；2丙酮測試系統。只要操作正 確，兩個系統測出來的結果是 基本一致的。但是要注意：各試劑的濃度不能隨 意改變，否則影響測試結果。NaCI測試系統對于所有種類的柱子和填料，都可以使用氯化鈉系統測柱效平衡液：0.4 M NaCI水溶液樣 品：0.8 M NaCI水溶液3.測柱效操作測柱效全程使用30 cm/h線性流速。平

3、衡層析柱至少1.5 CV，將1% CV勺樣品 （NaCl或丙酮）注射進入層析 柱，使用平衡液沖洗直至電導或紫外280nm出 現響應峰。4.測試結果積分以UNICORN版本為例演示給大家看如何操作 （各UNICOR版本操作基本一致）以NaCI系統測柱效的所 有操作針對電導曲線，以丙酮系統測柱效的所有操作 針對UV 280曲線（手頭沒有測柱效結果，所以隨便找了一個圖，里面有兩個峰。大家測柱效的結果只有一個峰）1）在Evaluation窗口中打開測柱效結果文件，在Curve窗格中點擊右鍵，選 擇Customize2）勾選復選框去掉不需要顯示的曲線3）在工具欄中點擊峰積分按鈕，進行積分處理或者在In

4、tegrate下拉菜單中點精品文檔2歡迎下載擊Peak In tergrate進行積分處理4）選擇需要積分的曲線以及積分表存儲位置，基線類型默認為Calculatebaseli ne5）在積分窗口中點擊Peak Window,出現以下窗口，通過拖動左右兩條直線可 以選擇需要進行積分的范圍，點擊OK確認6）在積分窗口點擊Reject Peaks對需要分析的色譜峰可進行高級定義，包括最小峰高、峰寬、峰面積、峰個數等，在這里最常用的是在Peakarea isless than輸入需要顯示的最大峰的個數，點擊OK確定7）在Column height （bed height）一欄中輸入柱床高度，在柱效測

5、定中此項必須填寫8）點擊積分窗口中Save and Edit Peak Table按鈕，可以對峰進行高級操作9）點擊積分窗口中的OK查看積分結果10）在Peak data區域點擊右鍵，選擇Customize在Select peak tablecolumns對話框中找到需要顯示的數據，plate height（HETP、Asymmetry等，點擊OK執行。Peakdata區域中將會顯示增選的分析結果 判斷層析柱柱效是否合格的標準是Plates per meter和Asymmetry。Plates per meter要求大于說明書上要求的最低限（如3000或20000），或 者1000000/平均粒徑/3 （計算出來就是說明書上的值）。Asymmetry要求處于0.81.8之間。滿足這兩點，說明柱子裝填沒問題。5.經常發生的問題如果不幸你測出來的柱效不合格，請檢查以下原因:影響柱效的可能 原因對策柱子裝填不均勻重新裝柱管道中液流不穩疋NaOH青洗系統；平衡柱子1.5CV以上柱子中有氣泡溶液脫氣；反壓閥在線，沖洗足夠長時間凝膠有結塊現象拆掉層析柱，NaOH青洗凝膠后重新裝柱；換 新的凝膠柱子液流分配不 好換分配器或層析柱系統死體積大換細管路；短接柱