1、專題專題2 :2 :微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 微生物：微生物：指形體微小指形體微小( (小于小于0.1mm)0.1mm)，結(jié)構(gòu)簡，結(jié)構(gòu)簡單，在適宜環(huán)境中能迅速生長繁殖，易變異，通單，在適宜環(huán)境中能迅速生長繁殖，易變異，通常要借助顯微鏡才能看清楚的生物。大約有常要借助顯微鏡才能看清楚的生物。大約有1010萬萬種。種。 微生物微生物 原核生物界原核生物界 原生生物界原生生物界真菌真菌界界病毒病毒( (細(xì)菌、放線菌、藍(lán)藻細(xì)菌、放線菌、藍(lán)藻) )( (酵母菌、霉菌、大型真菌酵母菌、霉菌、大型真菌) )( (草履蟲、變形蟲、衣藻草履蟲、變形蟲、衣藻) )( (噬菌體、艾滋病毒噬菌體、艾滋病毒

2、) )1 1、細(xì)菌的形態(tài)：球形、桿形、螺旋形。、細(xì)菌的形態(tài)：球形、桿形、螺旋形。螺旋菌螺旋菌球菌球菌桿菌桿菌2 2、細(xì)菌的結(jié)構(gòu)、細(xì)菌的結(jié)構(gòu)所有的細(xì)菌所共有的基本結(jié)構(gòu)有哪些？所有的細(xì)菌所共有的基本結(jié)構(gòu)有哪些？某些細(xì)菌所具有的特殊結(jié)構(gòu)有哪些？某些細(xì)菌所具有的特殊結(jié)構(gòu)有哪些？（擬核）（擬核）基本結(jié)構(gòu)基本結(jié)構(gòu)特殊結(jié)構(gòu)特殊結(jié)構(gòu)*細(xì)胞壁 細(xì)胞壁有哪些功能？細(xì)胞壁有哪些功能？ 傷傷寒寒桿桿菌菌細(xì)細(xì)胞胞壁壁中中含含毒毒素素結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)化學(xué)本質(zhì)化學(xué)本質(zhì)功能或應(yīng)用功能或應(yīng)用細(xì)胞壁細(xì)胞壁細(xì)胞膜細(xì)胞膜細(xì)細(xì)胞胞質(zhì)質(zhì)基質(zhì)基質(zhì)核糖體核糖體質(zhì)粒質(zhì)粒貯藏性貯藏性顆粒顆粒擬核擬核主要是肽聚糖主要是肽聚糖 保護(hù)和維持細(xì)胞形狀等保護(hù)和維

3、持細(xì)胞形狀等同真核生物同真核生物同真核生物同真核生物多種成分多種成分新陳代謝的主要場所新陳代謝的主要場所小型小型DNA分子分子同真核生物同真核生物同真核生物同真核生物控制細(xì)菌的抗藥性、控制細(xì)菌的抗藥性、固氮、抗生素生成固氮、抗生素生成多種成分多種成分貯藏營養(yǎng)物質(zhì)或代謝廢貯藏營養(yǎng)物質(zhì)或代謝廢物，如淀粉粒、硫粒物，如淀粉粒、硫粒大型環(huán)型大型環(huán)型DNA 控制細(xì)菌主要遺傳性狀控制細(xì)菌主要遺傳性狀特殊的結(jié)構(gòu)特殊的結(jié)構(gòu)莢膜莢膜 主要成分為多糖，與其致病性有關(guān)。主要成分為多糖，與其致病性有關(guān)。芽孢芽孢 細(xì)菌生長到一定階段產(chǎn)生的一種抗逆細(xì)菌生長到一定階段產(chǎn)生的一種抗逆 性很強的性很強的休眠體休眠體, ,以度過

4、不良的環(huán)境以度過不良的環(huán)境。莢膜、鞭毛、芽孢莢膜、鞭毛、芽孢 一般說，芽孢不一般說，芽孢不起繁殖作用，只起度起繁殖作用，只起度過不良環(huán)境的作用，過不良環(huán)境的作用，芽孢對熱、紫外線和芽孢對熱、紫外線和許多有毒化學(xué)物質(zhì)有許多有毒化學(xué)物質(zhì)有很強的抗性。很強的抗性。 3 3、細(xì)菌的代謝、細(xì)菌的代謝自養(yǎng)自養(yǎng)硝化細(xì)菌、鐵細(xì)菌、硫細(xì)菌等。硝化細(xì)菌、鐵細(xì)菌、硫細(xì)菌等。異養(yǎng)異養(yǎng)大腸桿菌、乳酸菌、枯草桿菌等。大腸桿菌、乳酸菌、枯草桿菌等。腐生腐生依靠分解動植物的遺體（尸體、依靠分解動植物的遺體（尸體、糞便和枯枝落葉），從中吸取有機物來生糞便和枯枝落葉），從中吸取有機物來生活。例如枯草桿菌，它可以引起食物的腐活。例

5、如枯草桿菌，它可以引起食物的腐敗。敗。寄生寄生從活的動植物體內(nèi)吸取有機物來從活的動植物體內(nèi)吸取有機物來生活。例如寄生在腸道內(nèi)的痢疾桿菌，它生活。例如寄生在腸道內(nèi)的痢疾桿菌，它能夠引起細(xì)菌性痢疾。能夠引起細(xì)菌性痢疾。需氧型：需氧型：好氧性細(xì)菌。如：枯草桿菌、硝化細(xì)菌、鐵細(xì)菌、根好氧性細(xì)菌。如：枯草桿菌、硝化細(xì)菌、鐵細(xì)菌、根 瘤菌等瘤菌等。厭氧型：厭氧型：厭氧性細(xì)菌。如：破傷風(fēng)桿菌，大腸桿菌，乳酸菌等。厭氧性細(xì)菌。如：破傷風(fēng)桿菌，大腸桿菌，乳酸菌等。 異養(yǎng)需氧型異養(yǎng)需氧型 異養(yǎng)厭氧型異養(yǎng)厭氧型 自養(yǎng)需氧型自養(yǎng)需氧型 自養(yǎng)厭氧型自養(yǎng)厭氧型問問 ： 細(xì)菌的代謝類型屬于什么方式細(xì)菌的代謝類型屬于什么方式

6、? 在生態(tài)系統(tǒng)中處于什么地位在生態(tài)系統(tǒng)中處于什么地位?分解者或消費者分解者或消費者生產(chǎn)者生產(chǎn)者3 3、細(xì)菌的繁殖、細(xì)菌的繁殖 二分裂二分裂2020分鐘分鐘3030分鐘，分裂一次分鐘，分裂一次 無鞭毛的球菌：無鞭毛的球菌：菌落較小較厚、邊菌落較小較厚、邊緣整齊緣整齊. . 有鞭毛的細(xì)菌：有鞭毛的細(xì)菌：菌落大而扁平、邊菌落大而扁平、邊緣波狀或鋸齒狀緣波狀或鋸齒狀. .問：菌落在生態(tài)學(xué)問：菌落在生態(tài)學(xué)上屬于什么單位？上屬于什么單位？菌菌 落落問：什么叫菌落？問：什么叫菌落？菌落可以作為菌種菌落可以作為菌種鑒定的重要依據(jù)。鑒定的重要依據(jù)。幾種菌落三冊書中所有細(xì)菌的種類三冊書中所有細(xì)菌的種類例如：例如：

7、乳酸菌的有關(guān)知識乳酸菌的有關(guān)知識細(xì)胞類型：原核細(xì)胞細(xì)胞類型：原核細(xì)胞代謝類型：異養(yǎng)厭養(yǎng)代謝類型：異養(yǎng)厭養(yǎng)代謝產(chǎn)物：乳酸代謝產(chǎn)物：乳酸生產(chǎn)用途：酸奶、泡菜生產(chǎn)用途：酸奶、泡菜可產(chǎn)生乳酸的生物：可產(chǎn)生乳酸的生物：人無氧呼吸人無氧呼吸馬鈴薯塊莖馬鈴薯塊莖玉米的胚、甜菜塊根玉米的胚、甜菜塊根 菌體由分枝狀的菌絲菌體由分枝狀的菌絲構(gòu)成構(gòu)成基內(nèi)菌絲基內(nèi)菌絲( (營養(yǎng)菌營養(yǎng)菌絲絲)吸收現(xiàn)成的有機吸收現(xiàn)成的有機物物( (大多營腐生生活大多營腐生生活) )氣生菌絲氣生菌絲到一定階到一定階段分化成段分化成孢子絲孢子絲，上，上有成串的孢子。有成串的孢子。單細(xì)胞的原核生物，分布廣泛。單細(xì)胞的原核生物，分布廣泛。放線菌

8、的生殖放線菌的生殖孢子生殖孢子生殖70%70%以上的天然抗生素均由土壤放線菌產(chǎn)生。以上的天然抗生素均由土壤放線菌產(chǎn)生。 如頭孢拉定、鏈霉素、金霉素、土霉素、慶大如頭孢拉定、鏈霉素、金霉素、土霉素、慶大霉素、春雷霉素、四環(huán)素、紅霉素和卡那霉素霉素、春雷霉素、四環(huán)素、紅霉素和卡那霉素等。等。HIV病毒病毒整合酶的功能是將病毒整合酶的功能是將病毒DNA整整合到宿主細(xì)胞染色體中合到宿主細(xì)胞染色體中 1 1、病毒的結(jié)構(gòu)、病毒的結(jié)構(gòu)病毒病毒結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)核酸核酸(DNA或或RNA)衣殼衣殼(蛋白質(zhì)蛋白質(zhì))；由衣殼粒構(gòu)成；由衣殼粒構(gòu)成核衣殼核衣殼囊囊 膜膜( (有的病毒具有有的病毒具有) )由蛋白質(zhì)、多糖和脂類構(gòu)

9、成由蛋白質(zhì)、多糖和脂類構(gòu)成,上常有刺突；如流感病毒上常有刺突；如流感病毒.衣殼衣殼化學(xué)組成化學(xué)組成形態(tài)單位形態(tài)單位功能功能排列方式排列方式由蛋白質(zhì)構(gòu)成由蛋白質(zhì)構(gòu)成衣殼粒衣殼粒通常由通常由1-6個多個多肽分子組成肽分子組成保護(hù)核酸保護(hù)核酸決定抗原特異性決定抗原特異性使病毒呈現(xiàn)不同的形態(tài)使病毒呈現(xiàn)不同的形態(tài)2 2、病毒的增殖、病毒的增殖只能在宿主的只能在宿主的活細(xì)胞活細(xì)胞中進(jìn)行中進(jìn)行類群類群結(jié)構(gòu)特點結(jié)構(gòu)特點遺傳物質(zhì)遺傳物質(zhì)繁殖方式繁殖方式舉例舉例病毒病毒原核原核生物界生物界真菌界真菌界原生原生生物界生物界無細(xì)胞結(jié)構(gòu)無細(xì)胞結(jié)構(gòu)(核酸衣殼囊膜核酸衣殼囊膜)原核原核(細(xì)胞壁、細(xì)胞壁、膜、質(zhì)膜、質(zhì))真核真

10、核(細(xì)胞壁、細(xì)胞壁、膜、質(zhì)、核膜、質(zhì)、核)真核真核(細(xì)胞膜、細(xì)胞膜、質(zhì)、核質(zhì)、核)噬菌體噬菌體煙草花葉病毒煙草花葉病毒流感病毒流感病毒細(xì)菌細(xì)菌(形狀菌形狀菌)放線菌放線菌霉菌、蘑菇、霉菌、蘑菇、酵母菌酵母菌衣藻、草履衣藻、草履蟲、變形蟲蟲、變形蟲DNA或或RNADNADNADNA增殖：吸附增殖：吸附注入注入合成合成裝配裝配釋放釋放分裂生殖分裂生殖(二分裂二分裂)孢子生殖孢子生殖出芽生殖出芽生殖分裂生殖分裂生殖有性生殖有性生殖 了解有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識，進(jìn)行無了解有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識，進(jìn)行無菌技術(shù)的操作，進(jìn)行微生物的培養(yǎng)。菌技術(shù)的操作，進(jìn)行微生物的培養(yǎng)。 一、課題目標(biāo)：一、課題目標(biāo)： 掌握掌握培

11、養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基的制備、高壓蒸氣滅菌高壓蒸氣滅菌和和平板劃線法平板劃線法等基本操作技術(shù)，熟練、規(guī)范等基本操作技術(shù)，熟練、規(guī)范地進(jìn)行無菌操作，成功地培養(yǎng)微生物。地進(jìn)行無菌操作，成功地培養(yǎng)微生物。無菌技術(shù)的操作。無菌技術(shù)的操作。二、課題重點和難點：二、課題重點和難點：三、技能目標(biāo)：三、技能目標(biāo)：一、基礎(chǔ)知識：一、基礎(chǔ)知識：（一）培養(yǎng)基（一）培養(yǎng)基 培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成由人工方法配制而成的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)液。液。（1 1）按物理狀態(tài)來分：培養(yǎng)基可分為）按物理狀態(tài)來分：培養(yǎng)基可分為固體培固體培養(yǎng)基養(yǎng)基和和液體培養(yǎng)基

12、液體培養(yǎng)基。其中固體培養(yǎng)基用于菌。其中固體培養(yǎng)基用于菌種分離、鑒定菌落等。種分離、鑒定菌落等。（2 2）按功能來分，可分為）按功能來分，可分為選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基和和鑒別鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基。（3 3）按成分來分，可分為）按成分來分，可分為天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基和和合成合成培養(yǎng)基培養(yǎng)基。1.1.培養(yǎng)基的類型和用途培養(yǎng)基的類型和用途 2.2.不同的微生物往往需要采用不同不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方的培養(yǎng)基配方 (參考教材附錄內(nèi)容參考教材附錄內(nèi)容) 3.3.不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水水、碳源碳源、和、和氮源氮源、 無機鹽無機鹽、等等營養(yǎng)物質(zhì)，營養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要滿

13、足微生物生長對另外還需要滿足微生物生長對pHpH、特特殊營養(yǎng)物質(zhì)殊營養(yǎng)物質(zhì), ,例如例如: :生長因子生長因子(即細(xì)菌生長即細(xì)菌生長必需，而自身不能合成的化合物必需，而自身不能合成的化合物,如維生如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶) )以及以及氧氣氧氣、二氧化碳二氧化碳、滲透壓滲透壓等等的要求。的要求。 選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基: : 分離酵母菌、霉菌等真菌分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基: : 分離金黃色葡萄球菌分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基不加氮源的無氮培養(yǎng)基: : 分離固氮菌分離固氮菌不加含碳有機物的

14、無碳培養(yǎng)基不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基: : 分離自養(yǎng)型微生物分離自養(yǎng)型微生物加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基: : 分離導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞加入氨基喋呤、分離導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞加入氨基喋呤、次黃嘌呤和胸腺嘧啶次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培養(yǎng)基核苷的培養(yǎng)基: : 分離雜交瘤細(xì)胞分離雜交瘤細(xì)胞 根據(jù)細(xì)胞生存所需物質(zhì)的種類和根據(jù)細(xì)胞生存所需物質(zhì)的種類和數(shù)量，用人工方法模擬合成的。數(shù)量，用人工方法模擬合成的。 合成培養(yǎng)基主要成分是氨基酸、合成培養(yǎng)基主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無機鹽和其它維生素、碳水化合物、無機鹽和其它一些輔助物質(zhì)。一些輔助物質(zhì)。 優(yōu)點：優(yōu)點：標(biāo)準(zhǔn)化

15、生產(chǎn)，組分和含量相標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，組分和含量相對固定對固定; ;成本低成本低 缺點：缺點： 缺少某些成分，不能完全滿缺少某些成分，不能完全滿足體外細(xì)胞生長需要。足體外細(xì)胞生長需要。 合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基: : 天然培養(yǎng)基有血清、血漿、和組天然培養(yǎng)基有血清、血漿、和組織提取液（如雞胚和牛胚浸液）。織提取液（如雞胚和牛胚浸液）。優(yōu)點：優(yōu)點：營養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果好營養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果好缺點：缺點：來源受限來源受限; ;成分復(fù)雜，影響對某成分復(fù)雜，影響對某些實驗產(chǎn)物的提取和實驗結(jié)果的分析些實驗產(chǎn)物的提取和實驗結(jié)果的分析; ;易發(fā)生支原體污染易發(fā)生支原體污染; ;天然培養(yǎng)基：天然培養(yǎng)基：固體培養(yǎng)基：菌落

16、固體培養(yǎng)基：菌落4.4.培養(yǎng)基的用途培養(yǎng)基的用途液體培養(yǎng)基：增菌液體培養(yǎng)基：增菌固體培養(yǎng)基：純化，增菌固體培養(yǎng)基：純化，增菌半固體培養(yǎng)基：動力檢測，保種半固體培養(yǎng)基：動力檢測，保種1.1.無菌技術(shù)的概念無菌技術(shù)的概念 無菌操作泛指無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。中，所有防止雜菌污染的方法。無論是無論是隨后將要學(xué)到的隨后將要學(xué)到的倒平板倒平板、平板劃線平板劃線操作，操作，還是還是平板稀釋涂布法平板稀釋涂布法，其操作中的每一，其操作中的每一步都需要做到步都需要做到“無菌無菌”，即防止雜菌污，即防止雜菌污染。只有熟練、規(guī)范地進(jìn)行無菌操作，染。只有熟練、規(guī)范

17、地進(jìn)行無菌操作，才可能成功地培養(yǎng)微生物。才可能成功地培養(yǎng)微生物。 （）（）消毒定義：消毒定義：利用化學(xué)或物理方法，殺死大部份利用化學(xué)或物理方法，殺死大部份致病微生物的過程。區(qū)分為致病微生物的過程。區(qū)分為高程度消毒高程度消毒、中程度消毒中程度消毒、低程度消毒低程度消毒三種方式。三種方式。2.2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別 （2 2）滅菌的定義：）滅菌的定義：以化學(xué)劑或物理方法消滅以化學(xué)劑或物理方法消滅所有所有微微生物，包括所有細(xì)菌的繁殖體、芽孢、生物，包括所有細(xì)菌的繁殖體、芽孢、霉菌及病毒，而達(dá)到霉菌及病毒，而達(dá)到完全無菌完全無菌之過程。之過程。 滅菌與消毒技術(shù)是微

18、生物有關(guān)工滅菌與消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工作中最普通也是最重要的技術(shù)。作中最普通也是最重要的技術(shù)。1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min3 3、化學(xué)藥劑消毒法、化學(xué)藥劑消毒法: :用用75%75%酒精、新潔酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒爾滅等進(jìn)行皮膚消毒; ;氯氣消毒水源氯氣消毒水源4 4、紫外線消毒、紫外線消毒(1)消毒的方法：消毒的方法：3.3.常用的消毒與滅菌的方法常用的消毒與滅菌的方法1 1、灼燒滅菌、灼燒滅菌2 2、干熱滅菌

19、：、干熱滅菌：160-170 160-170 下加下加熱熱1-2h1-2h。3 3、高壓蒸氣滅菌：、高壓蒸氣滅菌：100kPa100kPa、121 121 下維持下維持15-30min.15-30min.(2)滅菌的方法：滅菌的方法： 最常用的滅菌方法是最常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌，它可以，它可以殺滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休殺滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休眠體，同時可以基本保持培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分不被眠體，同時可以基本保持培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分不被破壞。破壞。 有些玻璃器皿也可采用有些玻璃器皿也可采用高溫干熱滅菌高溫干熱滅菌。為了。為了防止雜菌，特別是空氣中的雜菌污

20、染，試管及玻防止雜菌，特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻璃燒瓶都需采用適宜的塞子塞口，通常采用棉花璃燒瓶都需采用適宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各種金屬、塑料及硅膠帽，它們只塞，也可采用各種金屬、塑料及硅膠帽，它們只可讓空氣通過，而空氣中的其他微生物不能通過可讓空氣通過，而空氣中的其他微生物不能通過。 而平皿是由正反兩平面板互扣而成，這種器而平皿是由正反兩平面板互扣而成，這種器具是專為防止空氣中微生物的污染而設(shè)計的。具是專為防止空氣中微生物的污染而設(shè)計的。 硅膠主要成分是二氧化硅，硅膠主要成分是二氧化硅，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不燃燒硅化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不燃燒硅膠有很強的吸附能力，對膠有很強的吸附能力

21、，對人的皮膚能產(chǎn)生干燥作用人的皮膚能產(chǎn)生干燥作用主要用于儀器、儀表、設(shè)主要用于儀器、儀表、設(shè)備等在密閉條件下的吸潮備等在密閉條件下的吸潮防銹防銹 分類分類定義定義方法方法滅菌法滅菌法殺滅一切微生物殺滅一切微生物物理法：熱力、輻射、微物理法：熱力、輻射、微波、等離子體波、等離子體化學(xué)法：醛類、烷化劑化學(xué)法：醛類、烷化劑高效消高效消毒法毒法殺滅一切致病微殺滅一切致病微生物生物紫外線、含氯劑、臭氧、紫外線、含氯劑、臭氧、復(fù)配劑等復(fù)配劑等中效消中效消毒法毒法殺滅除芽孢外的殺滅除芽孢外的致病微生物致病微生物超聲波、碘類、醇類、酚超聲波、碘類、醇類、酚類類低效消低效消毒法毒法殺滅細(xì)菌繁殖體、殺滅細(xì)菌繁殖體

22、、親脂病毒親脂病毒單單鏈季胺鹽、雙胍類、中鏈季胺鹽、雙胍類、中草藥、金屬離子草藥、金屬離子1 1、器具的滅菌、器具的滅菌2 2、培養(yǎng)基的配制、培養(yǎng)基的配制3 3、培養(yǎng)基的滅菌、培養(yǎng)基的滅菌4 4、倒平板、倒平板5 5、微生物接種、微生物接種6 6、恒溫箱中培養(yǎng)、恒溫箱中培養(yǎng)7 7、菌種的保存、菌種的保存1.1.無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？被其他外來微生物污染外，還有什么目的？2.2.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。菌。如果需要，請選擇合適的方

23、法。（1 1） 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2 2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管玻棒、試管、燒瓶和吸管（3 3） 實驗操作者的雙手實驗操作者的雙手 答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。身被微生物感染。答：（答：（1）、（）、（2）需要滅菌；（）需要滅菌；（3）需要消毒）需要消毒。三、實驗操作三、實驗操作 1.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細(xì)菌）制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細(xì)菌）1 1計算計算、稱量稱量2 2溶化溶化3 3調(diào)調(diào)pHpH：pH7pH76 64 4過濾：這一步可以省去。過濾：這一步可以省去。5 5分裝：分裝過程中

24、注意不要使培養(yǎng)分裝：分裝過程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分裝三角燒瓶的量以不超過引起污染。分裝三角燒瓶的量以不超過三角燒瓶容積的一半為宜。三角燒瓶容積的一半為宜。6 6加塞加塞7 7包扎包扎操作步驟操作步驟 8 8滅菌滅菌: : 將將5050mlml培養(yǎng)基培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為鍋，在壓力為100100kPakPa、溫度為溫度為121121，滅菌，滅菌15153030minmin。將將培養(yǎng)皿培養(yǎng)皿用舊報紙

25、包裹，放入干用舊報紙包裹，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在熱滅菌箱內(nèi)，在160160170 170 下滅菌下滅菌2 2h h。 9 9倒平板倒平板: : 待培養(yǎng)基冷卻到待培養(yǎng)基冷卻到50 50 左右時，在酒精燈附左右時，在酒精燈附近倒平板。（倒平板操作見課本）近倒平板。（倒平板操作見課本）2 2d d后觀察平后觀察平板，無雜菌污染才可用來接種板，無雜菌污染才可用來接種. . 10 10無菌檢查：無菌檢查： 將滅菌的培養(yǎng)基放入將滅菌的培養(yǎng)基放入3737的溫室中培的溫室中培養(yǎng)養(yǎng)24482448小時，以檢查滅菌是否徹底。小時，以檢查滅菌是否徹底。1 1. .培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50

26、50 左右時，左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？溫度？ 答：答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進(jìn)行倒平板了。時，就可以進(jìn)行倒平板了。2.2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？ 答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。物污染培養(yǎng)基。3.3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在倒平板

27、的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？培養(yǎng)微生物嗎？為什么？ 答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板間的培養(yǎng)基

28、上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。培養(yǎng)微生物。2 2、純化大腸桿菌、純化大腸桿菌接種方法有：接種方法有：平板劃線法和稀釋涂布平板法平板劃線法和稀釋涂布平板法 平板劃線法平板劃線法: :通過接種環(huán)在瓊脂固體通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)畫線的操作培養(yǎng)基表面連續(xù)畫線的操作, ,將聚集的將聚集的菌鐘逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面菌鐘逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面. . 在數(shù)次畫線后在數(shù)次畫線后, ,可以分離到由一個細(xì)可以分離到由一個細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體, ,這就是菌落這就是菌落. . 1.1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前為什么在操作的第一步以

29、及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？ 答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，

30、次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。感染操作者。2 2. .在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？后再進(jìn)行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3 3. .在作第二次以及其后的劃線操作時，為什在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起

31、答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌減少，最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落。落。 涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第操作要求，想一想，第2 2步應(yīng)如何進(jìn)行無步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作？菌操作？ 應(yīng)從操作的各個細(xì)節(jié)保證應(yīng)從操作的各個細(xì)節(jié)保證“無菌無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、例如，酒

32、精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。在酒精燈火焰周圍等等。 1 1、臨時保藏：、臨時保藏：接種到固體斜面培接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后養(yǎng)基，菌落長成后置于置于44冰箱保存。冰箱保存。 2 2、長期保存：、長期保存：甘油冷凍管藏法甘油冷凍管藏法四、課題成果評價四、課題成果評價 （一）培養(yǎng)基的制作是否合格（一）培養(yǎng)基的制作是否合格 如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1 12 d2 d后無菌后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重

33、新制備。備。（二）接種操作是否符合無菌要求（二）接種操作是否符合無菌要求 如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則說明接種操作是一致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，再種過程中，無菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。次練習(xí)。（三）是否進(jìn)行了及時細(xì)致的觀察與記錄（三）是否進(jìn)行了及時細(xì)致的觀察與記錄 培養(yǎng)培養(yǎng)12 h12 h與與24 h24 h后的大腸桿菌菌落

34、的大小會有明顯后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同，及時觀察記錄的同學(xué)會發(fā)現(xiàn)這一點，并能觀察到不同，及時觀察記錄的同學(xué)會發(fā)現(xiàn)這一點，并能觀察到其他一些細(xì)微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生良其他一些細(xì)微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生良好的科學(xué)態(tài)度與習(xí)慣。好的科學(xué)態(tài)度與習(xí)慣。本課題知識小結(jié)本課題知識小結(jié): :【典例解析典例解析】 例例1 1關(guān)微生物營養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的是關(guān)微生物營養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的是A.A.是碳源的物質(zhì)不可能同時是氮源是碳源的物質(zhì)不可能同時是氮源 B.B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量C.C.除水以外的無機物只提供無機鹽除水以外的無機物只提供無機鹽 D.D.無機氮源也

35、能提供能量無機氮源也能提供能量 解析：解析：不同的微生物，所需營養(yǎng)物質(zhì)有較大差別，要不同的微生物，所需營養(yǎng)物質(zhì)有較大差別，要針對微生物的具體情況分析。對于針對微生物的具體情況分析。對于A A、B B選項，它的表達(dá)是選項，它的表達(dá)是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同時是氮源，如同時是氮源，如NH4HCO3NH4HCO3；有的碳源同時是能源，如葡；有的碳源同時是能源，如葡萄糖；有的碳源同時是氮源，也是能源，如蛋白胨。對于萄糖；有的碳源同時是氮源，也是能源，如蛋白胨。對于C C選項，除水以外的無機物種類繁多，功能也多樣。如二氧化

36、選項，除水以外的無機物種類繁多，功能也多樣。如二氧化碳，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源；碳，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源；NaHCO3NaHCO3，可作為自養(yǎng)，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源和無機鹽；而型微生物的碳源和無機鹽；而NaClNaCl則只能提供無機鹽。對則只能提供無機鹽。對于于D D選項，無機氮源提供能量的情況還是存在的，如選項，無機氮源提供能量的情況還是存在的，如NH3NH3可可為硝化細(xì)菌提供能量和氮源。為硝化細(xì)菌提供能量和氮源。答案：答案：D例例2 2下面對發(fā)酵工程中滅菌的理解下面對發(fā)酵工程中滅菌的理解的的是是A.A.防止雜菌污染防止雜菌污染 B.B.消滅雜菌消滅雜菌C.C.培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必

37、須滅菌培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必須滅菌 D.D.滅菌必須在接種前滅菌必須在接種前B 解析：滅菌是微生物發(fā)酵過程的一個重要環(huán)節(jié)。解析：滅菌是微生物發(fā)酵過程的一個重要環(huán)節(jié)。A A說的是滅菌的目的，因為發(fā)酵所用的菌種大多是單一說的是滅菌的目的，因為發(fā)酵所用的菌種大多是單一的純種，整個發(fā)酵過程不能混入其他微生物（雜菌），的純種，整個發(fā)酵過程不能混入其他微生物（雜菌），所以是正確的；所以是正確的；B B是錯誤的，因為滅菌的目的是防止雜是錯誤的，因為滅菌的目的是防止雜菌污染，但實際操作中不可能只消滅雜菌，而是消滅菌污染，但實際操作中不可能只消滅雜菌，而是消滅全部微生物。全部微生物。C C是正確的，因為與發(fā)酵有關(guān)

38、的所有設(shè)備是正確的，因為與發(fā)酵有關(guān)的所有設(shè)備和物質(zhì)都要滅菌；發(fā)酵所用的微生物是滅菌后專門接和物質(zhì)都要滅菌；發(fā)酵所用的微生物是滅菌后專門接種的，滅菌必須在接種前，如果接種后再滅菌就會把種的，滅菌必須在接種前，如果接種后再滅菌就會把所接菌種也殺死。所接菌種也殺死。編號編號成分成分含量含量粉狀硫粉狀硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gHH2 2OO100ml100ml例例3 3右表是某微生物右表是某微生物培

39、養(yǎng)基成分，請據(jù)此回答：培養(yǎng)基成分，請據(jù)此回答：（1 1）右表培養(yǎng)基可培）右表培養(yǎng)基可培養(yǎng)的微生物類型養(yǎng)的微生物類型是是 。（2 2）若不慎將過量）若不慎將過量NaClNaCl加入培養(yǎng)基中。加入培養(yǎng)基中。如不想浪費此培養(yǎng)基，如不想浪費此培養(yǎng)基，可再加入可再加入 . .自養(yǎng)型微生物自養(yǎng)型微生物 含碳有機物含碳有機物 （3 3）若除去成分，加入（）若除去成分，加入（CH2OCH2O），該培養(yǎng)基），該培養(yǎng)基可用于培養(yǎng)可用于培養(yǎng) 。（4 4）表中營養(yǎng)成分共有）表中營養(yǎng)成分共有 類。類。（5 5）不論何種培養(yǎng)基，在各種成分都溶化后分裝）不論何種培養(yǎng)基，在各種成分都溶化后分裝前，要進(jìn)行的是前，要進(jìn)行的是 。

40、（6 6）右表中各成分重量確定的原則）右表中各成分重量確定的原則是是 。（7 7）若右表培養(yǎng)基用于菌種鑒定，應(yīng)該增加的成）若右表培養(yǎng)基用于菌種鑒定，應(yīng)該增加的成分是分是 。固氮微生物固氮微生物 3 調(diào)整調(diào)整pHpH 依微生物的生長需要確定依微生物的生長需要確定 瓊脂（或凝固劑）瓊脂（或凝固劑） 2 2、微生物生理學(xué)時期、微生物生理學(xué)時期 建立了一套獨特的研究方法建立了一套獨特的研究方法, ,尋找各種傳染尋找各種傳染病病原菌病病原菌巴斯德在觀察受狂巴斯德在觀察受狂犬病感染的兔脊髓犬病感染的兔脊髓 有機物發(fā)酵和腐敗由微生物引起有機物發(fā)酵和腐敗由微生物引起 解決葡萄酒和啤酒變酸問題解決葡萄酒和啤酒變

41、酸問題創(chuàng)立巴氏消毒法創(chuàng)立巴氏消毒法 解決蠶繭的解決蠶繭的“微粒子病微粒子病”的疾病，挽救了法國蠶絲的疾病，挽救了法國蠶絲業(yè)業(yè) 主張傳染病是由微生物引起的，并可通過接觸、唾主張傳染病是由微生物引起的，并可通過接觸、唾液及糞便傳播液及糞便傳播 19世紀(jì)世紀(jì)70年代，研究炭疽病，拯救了畜牧業(yè)年代，研究炭疽病，拯救了畜牧業(yè) 1881年研制成功減毒活疫苗年研制成功減毒活疫苗開創(chuàng)人類戰(zhàn)勝傳染開創(chuàng)人類戰(zhàn)勝傳染病的新世紀(jì)病的新世紀(jì) 1885年，巴斯德第一次治好了被瘋狗咬傷的年，巴斯德第一次治好了被瘋狗咬傷的9歲男歲男孩梅斯特孩梅斯特奠定了免疫學(xué)基礎(chǔ)奠定了免疫學(xué)基礎(chǔ) 科赫科赫 科赫科赫 1882年發(fā)現(xiàn)引起結(jié)核病

42、的病原年發(fā)現(xiàn)引起結(jié)核病的病原分離出結(jié)分離出結(jié)核桿菌核桿菌 創(chuàng)立了微生物學(xué)檢查方法：固體培養(yǎng)技術(shù)、創(chuàng)立了微生物學(xué)檢查方法：固體培養(yǎng)技術(shù)、染色技術(shù)、實驗動物感染染色技術(shù)、實驗動物感染 發(fā)現(xiàn)炭疽桿菌、霍亂弧菌發(fā)現(xiàn)炭疽桿菌、霍亂弧菌 總結(jié)了著名的總結(jié)了著名的“科赫法則科赫法則” -確立病原微生確立病原微生物物 1905年獲得了諾貝爾醫(yī)學(xué)和生理學(xué)獎年獲得了諾貝爾醫(yī)學(xué)和生理學(xué)獎5、下面是有關(guān)細(xì)菌、下面是有關(guān)細(xì)菌A的四項實驗：的四項實驗：實驗實驗1：將：將A 接種于一般培養(yǎng)基上，結(jié)果出現(xiàn)菌落。接種于一般培養(yǎng)基上，結(jié)果出現(xiàn)菌落。實驗實驗2：用一定劑量的紫外線處理：用一定劑量的紫外線處理A，產(chǎn)生突變種，產(chǎn)生突變種a1。將。將a1接種于