1、血藥濃度監(jiān)測方法研究何莎 學(xué)號：201202191501摘要：當前臨床用藥中，需要進行臨床血藥濃度監(jiān)測的藥物有幾十種， 有時用藥冃的也決定了藥物需進行血藥濃度監(jiān)測，血藥濃度監(jiān)測的必耍性 已受到越來越多的重視和強調(diào)。針對血藥濃度監(jiān)測不同方法的研究，本文 分別從高效液相、液質(zhì)聯(lián)用、免疫分析等方面進行概述，探討不同監(jiān)測方 法的異同和優(yōu)劣，為臨床血藥濃度監(jiān)測提供參考。關(guān)鍵詞：血藥濃度監(jiān)測；方法；臨床the research on method of monitoring of blood concentrationabstract:!n the current clinical use, the dr

2、ugs whitch need for monitoring of blood conce ntrati on have a few kin ds, sometimes the purpose also determines the drugs for blood concentration monitoring, the necessity of blood drug concentration monitoring has been more and more attention and emphasis. according to the different methods of res

3、earch on blood concentration monitoring , this paper respectively focus on from the high performance liquid, liquid mass combined, immune analysis, whitch were summarized and discussed the similarities and differences of different monitoring methods, and the advantages and disadvantages, for clinica

4、l blood concentration monitoring to provide referenee.keywords: blood concentration monitoring; methods; clinicalhu s眾所周知，當藥物經(jīng)各種途徑進入體內(nèi)后，血液成為體內(nèi)轉(zhuǎn)運的中樞, 絕大多數(shù)藥物經(jīng)血液循環(huán)到達作用部位或受體部位，并以一定濃度產(chǎn)生藥 效（也包括副作用，甚至毒性作用）。由于藥物進入體內(nèi)到產(chǎn)生藥理作用 是一個十分復(fù)雜的過程，故各種因素都可影響藥理作用的強弱，而探討各 種因素對藥理作用的影響就顯得尤為重耍了1。血藥濃度監(jiān)測是應(yīng)用先進 的微量分析技術(shù)測定血液中的藥物濃度，并

5、在藥物動力學(xué)基礎(chǔ)理論的指導(dǎo)下，求解藥物動力學(xué)的各種 參數(shù)，為臨床醫(yī)師調(diào)整藥物劑量、制定合理的給藥方案提供一定的依據(jù), 同時也有助于解釋為什么某種藥物在常用量時不能產(chǎn)生療效或發(fā)生意外 中毒，從而把經(jīng)驗式臨床用藥提高到科學(xué)性較高的水平，以取得最佳療效 而盡量減少不良反應(yīng)2。在已有的血藥濃度監(jiān)測方法中，高效液相色譜法、 液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法、免疫分析法等分析技術(shù)都有較為成熟的應(yīng)用，本文 將從以上幾個方面分別概述在血藥濃度監(jiān)測中的應(yīng)用，以了解血藥濃度監(jiān) 測方法技術(shù)的優(yōu)勢和特點，并為以后從事臨床藥學(xué)工作提供參考。1高效液相色譜法由于被測機體受體部位的藥物濃度不可能直接測定，但許多藥物的藥 理作用常與血藥濃

6、度密切相關(guān)，血藥濃度的變化可以反映受體部位的濃度 變化，且不同種屬的動物，如血藥濃度相同，則藥理效應(yīng)也極為相似。故 藥物的療效或毒性與血藥濃度的關(guān)系非常密切3-4o因此建立一種快速、 準確、經(jīng)濟的血藥濃度檢測方法是十分必耍的。血藥濃度監(jiān)測與高效液相 色譜相結(jié)合的應(yīng)用已在多種藥物的監(jiān)測中體現(xiàn)。如測定卡馬西平血藥濃度 鑒定動物實驗與人體實驗的不同，在減少樣本量的前提下，通過普通高效 液相色譜實現(xiàn)了對氯法拉濱血漿藥物含量的精確測定，口此方法簡便易行, 既可用于動物實驗，也可用于臨床藥物評價等相關(guān)研究5-8o又如輕 基喜樹堿(10-hy-droxycamptothecin , hcpt)是我國臨床應(yīng)用

7、的喜樹堿類 抗腫瘤藥物，具有顯著的廣譜抗腫瘤活性，目前已經(jīng)有文獻38報道檢 測血漿屮hcpt含量的高效液相色譜法,方法采用梯度洗脫和熒光檢測器， 能將hcpt和內(nèi)標與雜質(zhì)實現(xiàn)良好分離，并可去除色譜柱中殘留的脂溶性 雜質(zhì)，是一個選擇性好、靈敏度高的監(jiān)測方法9-10o2液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法由于血液中的藥物不止一種成分，往往包含藥物本身、藥物代謝物、 以及血液屮的其他復(fù)雜成分，因此會對待測藥物的濃度監(jiān)測產(chǎn)生影響，且 有些藥物成分可能在檢測溫度、檢測時間等方面都有嚴格要求，否則會因 為血液的緣故影響檢測效果，因此對血藥濃度監(jiān)測方法提出了更多要求11 o液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)將液相色譜高效的在線分離能力與質(zhì)譜的高選

8、擇性、 高靈敏度的檢測能力相結(jié)合，可以同吋得到化合物的保留時間、分子量及特 征結(jié)構(gòu)碎片等豐富的信息，是組分復(fù)雜樣品和微重樣品分離分析最有力的研究手段12-13o hplc-ms-ms法具有 快速、準確、抽血量小、可批量檢測、樣品清理簡單，靈敏度高，專屬性強, 不易產(chǎn)生交叉反應(yīng)等優(yōu)勢14o如用液質(zhì)聯(lián)用法測定人血漿中的普伐他汀， 采用正離子模式進行檢測，血漿用量為iml,最小檢出濃度為0.957ng.ml-l, 血漿用量為500?l,在節(jié)省血漿用量的同時，又保證了血藥濃度測定結(jié)果 的準確性，因此是一種經(jīng)濟、簡單、高效和靈敏的方法15o但是該類儀 器價格昂貴，且維護費用極高，因此其臨床應(yīng)用嚴重受限。

9、3免疫分析法? ?以地高辛的血藥濃度監(jiān)測為例。地高辛是從毛花洋地黃葉屮提 取的一種二級甘，稱為異疑基洋地黃毒甘，是臨床上治療心臟疾病的強心 昔類藥物之一，廣泛用于急慢性充血性心力衰竭、室上性心動過速、心房 顫動和心房撲動的治療。因其作用機制復(fù)雜，治療指數(shù)低，有效治療范圍窄, 藥動學(xué)和藥效學(xué)個體差異大，有時常規(guī)劑量也能引起中毒，且中毒和劑量 不足的臨床表現(xiàn)類似，不同藥廠生產(chǎn)的地高辛生物利用度也存在差異16, 故監(jiān)測英血藥濃度具有特別重要的意義，為此從靈敏度、線性范圍、交叉反 應(yīng)、精密度等方面綜述地高辛血藥濃度常用免疫檢測方法的各自特點，包 括放射免疫、酶免疫、化學(xué)發(fā)光免疫、熒光免疫法分析法。3.

10、1?放射免疫分析法(radio immunoassay, ria)ria起步最早，是將高靈敏度的放射性核素示蹤技術(shù)與高特異的免疫 化學(xué)技術(shù)相結(jié)合的一種超微量免疫測定方法，即用放射性核素標記抗原后， 使之與受檢標本中的抗原共同競爭抗體，檢測標記抗原抗體復(fù)合物的放射 性強度，據(jù)此確定地高辛濃度1刀。ria法有價格便宜、方法簡單、結(jié)果 可靠、靈敏度較高等優(yōu)點，但也存在著一些缺點，如放射性污染、標記物半 衰期短、批間rsd偏大、檢測時間過長，使地高辛血藥濃度測定結(jié)果在動 態(tài)觀察下可比性下降，也很難適應(yīng)臨床的即時之需。雖既如此,ria法仍以 其經(jīng)濟實用的絕對優(yōu)勢在治療藥物監(jiān)測中占有一席之地18-19 o

11、3.2?酶免疫分析法(enzyme immunoassay, eia)eia是在放射免疫分析理論的基礎(chǔ)上，用酶標記抗原或抗體作為示蹤 物的非放射性免疫分析技術(shù)，其靈敏度與ria法接近，具有特異性強、靈敏度高、操作簡便快捷、酶標記物穩(wěn)定、有效期長等優(yōu)點，克服了 ria放射性 危害和標記物半衰期短的缺點20 o3.3?化學(xué)發(fā)光免疫分析法(chemiluminescence immunoassay,clia)clia是化學(xué)發(fā)光法和免疫分析法結(jié)合的產(chǎn)物，同時具有化學(xué)發(fā)光法的 高靈敏度和免疫分析法的高選擇性。它是基于化學(xué)發(fā)光強度和被測物含量 之間的關(guān)系建立的分析方法，具有靈敏度高，特異性強,自動化程度高

12、/吏用 簡便，無放射污染等優(yōu)勢,成為標記免疫分析的一個重要發(fā)展方向，是取代 ria的首選方法之一21-22 o clia主要包括兩種方法：化學(xué)發(fā)光免疫分析法(chemiluminescence immunoassay,clia)和化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法(chemiluminescence enzyme im?munoassay, cleia), clia 是用化學(xué)發(fā)光反應(yīng)試劑標記抗原或抗體，標記后的抗原和抗體與待測物經(jīng)過一系列的免疫 反應(yīng)后，測定產(chǎn)物的發(fā)光強度來確定待測物的含量23。從標記免疫分析角 度z cleia應(yīng)屬于eia分析，只是酶反應(yīng)的底物是發(fā)光劑，操作步驟與eia分析完全相同，即以酶

13、標記生物活性物質(zhì)進行免疫反應(yīng)反應(yīng)復(fù)合物上的標 記酶再作用于發(fā)光底物，測定發(fā)光底物的信號據(jù)此來確定地高辛濃度24 o3.4?熒光免疫分析法(fluorescence immunoassay, fia)自上世紀40年代,coons等采用熒光素標記抗體檢測可溶性肺炎球菌 多糖抗原，首次創(chuàng)造了熒光抗體檢測技術(shù)25o至今，免疫熒光技術(shù)已廣泛 應(yīng)用于微量、超微量物質(zhì)分析測定。用丁地高辛檢測的方法主耍包括兩種: 熒光偏振免疫分析法(fluorescence polarization immuno?assay, fpia), fpia是熒光偏振法和免疫競爭法的結(jié)合，利用被測物質(zhì)中被測對象所具有的偏振光特性進行

14、測量26-27o時間分辨熒光免疫分析法(timeppresolvedfluoimmunoasppsay, trfiajtrfia 是繼放免、酶標、發(fā)光分析之后，超微量標記免疫分析法發(fā)展的一個新里程碑。它利用稀土元素鰲 合物的雙功能基團與抗體形成共轆體，制成標記抗體。標記抗休和待測抗原 結(jié)合形成的復(fù)合物熒光信號極為微弱,加入特殊的增強液，被解離出來的 稀土離了和增強液中的某些成分牛成一種新的螯合物，通過檢測螯合物的 增強熒光信號測得地高辛濃度28-29 o4討論以上介紹的各種血藥濃度檢測方法均以各自獨特的優(yōu)勢被廣泛應(yīng)用， 其中ria以其價格低廉,fpia以其靈敏度高、方法簡便等優(yōu)點在國內(nèi)外應(yīng)用

15、最多，將兩種或兩種以上方法優(yōu)勢互補、有機結(jié)合、綜合利用，將是今后主要 的發(fā)展趨勢。隨著血藥濃度檢測方法的不斷發(fā)展，檢測結(jié)果越來越準確可靠，但血藥濃度檢測結(jié)果不是用藥的唯一指南,使用藥物治療時應(yīng)結(jié)合臨床癥狀及其他檢 測報告等結(jié)果綜合考慮，選擇最佳方案實施個體給藥，以期達到滿意的治療效果。參考文獻1常毅，沈林，郝萬鵬血藥濃度測定及臨床意義j中國醫(yī)藥指南，2008, 11,6(2) ： 102-105.2 葉敏，朱珠治療藥物監(jiān)測研究進展j屮華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2005,28(12) ：1320-1323 3 pu x,sun j,wang 篦et al .development of a chemica

16、lly stable10-hydroxycamptothecin nanosuspensionsj. int j pharm, 2009, 379 (1)： 167.4 zhao yx , hua hy, chang m , et al preparation and cytotoxic activity ofhydroxycamptothecin nanosuspensionsj int j pharm , 2010, 392 (12)：64.5 王巖，高勇高效液相色譜法測定人血漿中卡馬西平血藥濃度j實 用藥物與臨床，2005, 8 (3)： 16-176 徐國京，祝莉霞，劉有偉兒童急性淋巴

17、細胞白血病新藥氯法拉濱j 藥學(xué)與臨床研究，2009,17(2) :131- 134.7 lech?maranda e, korycka a, robak t. clofara?bine as a novelnu cleosideanalogueapproved to treat patients with haematologicalmalignancies.mechanismof actionand clinical activity j . mini revmedchem,2009, 9( 7) :805- 8128 張春燕，朱寶英，趙立波等高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定人血漿 中氯法拉濱的濃

18、度j中國藥學(xué)雜志,2010,45(19) : 1496-1499.9 吳勝林，王翠蘭，熊英等高效液相色譜法測定血漿中疑基喜樹堿的濃度卩中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2008, 28 (24)： 2 149.10 黃莉莉，陳軍，方蕓等.hplc法測定兔血漿中疑基喜樹堿的濃度j 中國藥 事，2005, 19 (13)： 178.11 李衛(wèi)屮，馬燕液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在醫(yī)藥領(lǐng)域的發(fā)展與應(yīng)用j現(xiàn)代食品與藥品雜質(zhì)，2007,17 (6)： 66-7012 金英液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在藥物分析中的應(yīng)用j河北化工，2009,32(8)：67-68.13 kite g c, howes m j, simmonds m s. metabol

19、omic analysis ofsaponins incrude extracts of quillaja sap on aria by liquid chromatography /mass spectrometry for product authentication jrapidcammun mass spz2004,18 (23):2859-2 870.14 yaom, zhanghh, chongsacho, et al.arapid sensitive lc-ms-ms assayforqua ntitative determi nation of digoxi n in ratp

20、lasma j. jpharmbiomedanaj 2003,32: 1189.15 張敏，譚志榮，陳豪，陳英，郭棟，周宏澈.lgms/ms方法檢測人血漿中普伐他汀的濃度j藥物分析雜志，2009,29 (1)： 58-61.16 李優(yōu)鑫，毛靜遠，李惠芬地高辛血藥濃度檢測方法的分析j沖國中藥雜志,2007,32:285326.17 伊莉.215例地高辛血藥濃度監(jiān)測分析j華夏醫(yī)學(xué),2001, 14( 1):86.18 肖正儒，李愛光229例地高辛血藥濃度監(jiān)測結(jié)果分析j.廣東藥學(xué), 2003,13(6): 25.19 張恒，李紅146例地高辛血藥濃度監(jiān)測分析j中國醫(yī)院藥學(xué)雜志, 2002,22(1)

21、: 2120 劉連生酶免疫分析技術(shù)研究進展j 湖北省衛(wèi)生職工醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2000,13(1):53.21 劉寶洪，王啟哲化學(xué)發(fā)光免疫法和放免分析法測定血清地高辛濃度的比j中國臨床藥學(xué)雜志,2003, 12( 3): 152.22 davida, biddle, pradipdatta, eta.1 faselyelevated serumdigitoxinconcerttrationsdue to cross?reactivityofwater?exteractabledigitoxin?like immunoreactivity ofchin esemedici ne cha n su:elimi nation of in t erf ere nee by use of a chemiluminescent assy j. clinchimacta, 2000, 300(1 2): 151.23 dasguptaa, actor jk, olsenm, et a.i invivo digoxin like immuno reactivityin micea nd in t er