1、核酸擴增技術在血液篩查中的應用研究彭靖常德市中心血站湖南常德415000摘要：目的探究采用核酸擴增技術進行血液篩查的應用價值。方法選取2013年6月一2014年4月在我獻血站進行無償獻血者的血液標木32202例，.且 按篩選方法分為實驗組和對照組。實驗組采用雙試劑酶聯免疫吸附試驗（elisa） 對血液進行篩查，對照組采用核酸擴增技術（nat）對血液進行篩查。將兩組標 木的篩查結果進行統計學比較。結果 實驗組32202例中檢出hbvdna陽性286 例，其陽性檢出率為1.77%,對照組32202例中檢出hbvdna陽性346例，其陽 性檢出率為2.15%o結論nat對hbvdna的陽性檢出率明顯

2、高于elisa,不僅避 免了血液篩查中漏檢情況的出現，很大程度上降低了輸血傳播疾病的風險，而且 保證了臨床上的輸血安全，值得在臨床上推廣應用。關鍵詞：核酸擴增技術；血液篩查；窗口期；輸血安全隨著社會經濟的快速發展，因輸血引起的相關傳染病的預防和控制已經引起 了全社會的高度關注，而預防和控制輸血相關傳染病的源頭就是要對獻血者的血 液標木進行嚴格的篩查。雙試劑酶聯免疫吸附試驗，臨床上簡稱elisa,是在免 疫酶技術基礎上發展而來的一種免疫測定技術，其過程包括抗原（抗休）吸附在 固相載體上為包被，加待測抗體（抗原），再加相應酶標記抗體（抗原），牛成抗 原（抗體）待測抗體（抗原）酶標記抗體（抗原）的復

3、合物，再與該酶的底 物反應牛成有色產物，最終借助分光光度計的光吸收計算抗體（抗原）的量。待 測抗體（抗原）的定量與有色產物的牛成量成正比。核酸擴增技術，臨床上簡稱nat,包括聚合酶鏈反應技術、熒光定量pcr技 術和其他核酸擴增技術（核酸序列依賴性擴增、連接酶鏈反應和分枝dna信號 放大系統），其中最主要且最常用的是聚合酶鏈反應技術，其基木原理類似于dna 的體內復制，首先將待擴增的dna模板加熱至變性解鏈，隨之將反應混合物冷 卻至一定的溫度，且這一溫度可將引物與它的靶序列發生退火，之后再將溫度升 高使退火引物在dna聚合酶的作用下延伸，這個過程就是pcr的一個循環，也 就是說這種循環在適合的條

4、件下是不斷重復的2。1資料與方法1.1研究對象：選取2013年6月一2014年4月在我獻血站進行無償獻血者的血液標本32202 例，其中男性19568例，女性12634例，獻血者的年齡在1947歲，平均年齡 為27.7歲；獻血者的體重在5578kg,平均體重為62.3kg。兩組獻血者在性別、 年齡和體重等方面均無統計學差異（p&gt；0.05）,有可比性。1.2研究方法：實驗組采用雙試劑酶聯免疫吸附試驗（elisa）對血液進行篩查，對照組采 用核酸擴增技術（nat）對血液進行篩查。將兩組標本的篩查結果進行統計學比 較。1.3 試齊實驗組：乙型肝炎病毒表面抗原elisa診斷試劑盒，丙型肝

5、炎病毒抗體elisa 診斷試劑盒，人類免疫缺陷病毒抗體elisa診斷試劑盒，梅毒螺旋體抗體elisa 診斷試劑盒，乙肝肝炎“兩對半”檢測試劑盒。對照組：hbv/hcv/hiv熒光pcr核酸檢測試劑盒。兩組所用的試劑均在有效限期內。1.4儀器：實驗組：xantus全自動加樣儀，fame24/20全自動酶免分析儀，uranus ae 200 全自動酶免分析儀。對照組：hamilton star全自動核酸提取儀、羅氏cobas?s 201核酸血液篩查 系統。1.4檢測方法：實驗組：采用相應的試劑對該組血液標本進行抗-hiv.抗hcv、hbsag和梅 毒螺旋體抗體的elisa監測。對照組：將該組血液標

6、本以6例為一組匯集并采用相應的試劑進行hbv dna、 hcv rna和hivjrna的核酸擴增檢測，自動判讀結果。當匯集池中某一項的檢測結果為陰性時，說明該匯集池中6份標本的該項nat 檢測均為陰性；當匯集池中標本的某一項檢測結果為陽性吋，則須將相對應的6 份標本拆分并進行該項單標本檢測，若檢測結果為陰性就說明此標本該項的nat 檢測結果為陰性，若檢測結果為陽性就說明此標本該項的nat檢測結果為陽性。1.5統計學方法:應用spss17.0統計分析軟件對資料進行統計分析，計數資料以率表示，計 量資料以均數±標準差表示。均數間比較應用t檢驗，兩個變量間的關系 比較作相關數據

7、分析，p<0.05,差異顯著，具有統計學意義。2結果2.1兩組血液標本的hbv dna的陽性檢出率對比結果：實驗組32202例中檢出hbv dna陽性286例，其陽性檢出率為0.89%,對照 組32202例中檢出hbv dna陽性346例,其陽性檢出率為1.07%。見表1。表1：兩組血液標本的hbv dna陽性檢出率的對比組別 例數hbvdna陽性檢出例數hbvdna陽性檢出率實驗組 32202 2860.89%對照組 32202 3461.07%p 值p<0.05注：通過對兩組血液標本的hbvdna陽性檢出率的比較，p<0.05,表示差 異顯著，具有

8、統計學意義，說明實驗組的hbv dna陽性檢出率明顯高于對照組。3討論窗口期是指從人體感染hiv后到外周血液中能夠檢測出hiv抗體的這段吋間, 一般為2周3個月，少數人可到4個月或5個月，很少有人能超過6個月，0 前國際上公認的窗口期為6個月。目前我國采供血機構對獻血者血液標本的篩查 的主要模式仍然是elisa。elisa檢測法雖然在-定程度上可以降低輸血傳播疾 病的風險，但由于其的“窗口期”比較長、病毒變異以及免疫靜默感染等因素, 漏檢和輸血安全問題避免不了。nat是美國新研發的一種血液篩查的檢測方法, 這種新型的檢測方法不僅可以直接檢測岀病毒核酸，明顯縮短了現有的elisa檢 測方法的“窗

9、口期”，而且能檢測出病毒變異和免疫靜默感染，大大降低血液的 漏檢率的同時也減少了因輸血而感染傳染病的風險，已經成為發達國家進行血液 篩查的必要手段，也是我國采供血機構追求的目標。本次研究表明，核酸擴增技術(nat)對hbvdna的陽性檢出率明顯高于雙 試劑酶聯免疫吸附試驗(elisa),不僅避免了血液篩查中漏檢情況的出現，很大 程度上降低了輸血傳播疾病的風險，而口保證了臨床上的輸血安全，值得在臨床 上推廣應用。參考文獻：1李麗，王明元，周群剛，等不同方法制備的血小板在保存期內活化狀態 的研究j臨床輸血與檢驗.2010, 12 (1)： 1-3.何亞琴，張建偉，楊愛龍，等核酸檢測技術在常州地區獻血篩查中的應 用卩中國輸血雜志.2011, 24 (7)： 560-562.3黃成垠，蔣昵珍，朱紹汶，等1種血液核酸篩查系統的應用評價j.中國 輸血雜志.2012, 25 (10)： 1010-1011 鄧雪蓮，安萬新，梁曉華，等大連市血液中心血清學監測與核酸檢測并 行的效果觀察j中國輸血雜志.2012, 25 (1)： 38-40.5葉賢林，孫淑君，容瑩，等國產全自動血液病毒核酸篩查系統的建立和 應用研究j中國感染控制雜志.2010,