1、-作者xxxx-日期xxxx細胞爬片步驟【精品文檔】細胞爬片步驟PLL配制和處理（Sigma產品，武漢博士德分裝，10ml/瓶。4存放，有效期1年）(1) 儲存液：1:10稀釋液可以保存在4里，三個月內仍然可以使用。稀釋、儲存和吸取多聚賴氨酸要使用塑料制品。工作液：0.1%( w/v)PLL，用移液槍吸取0.3ml PLL3ml無菌去離子水，混勻放于10ml無菌塑料離心管中。封口模密封后4存放。 (2) 無菌處理：PLL不可以高溫消毒，故應過濾除菌分裝于無菌處理的細胞凍存管內，1ml/管，封口模密封，4保存。另外，準備無菌去離子水50ml。多聚賴氨酸PLL包被（1）滅菌的去離子水(三蒸水)1:

2、10稀釋多聚賴氨酸溶液。（2）用之前將稀釋的多聚賴氨酸溶液放在室內，使其溫度維持在18-26。（3）將玻片浸在稀釋的多聚賴氨酸溶液5分鐘。（注意增加時間不會提高包被效果）。（4）將過濾除菌的多聚賴氨酸加入一個消毒好的培養皿(超凈臺內操作)，然后將高壓滅菌的小玻片放到多聚賴氨酸內浸泡5min，無菌晾干即可。（底面貼緊培養皿，存在包被PLL不好的可能，放入培養板孔內注意正反面！）或者：鋪片于培養皿中，移液槍將PLL工作液滴加于玻片上，室溫10分鐘后，用消毒好的紗布條吸取玻片上的PLL液。在超靜臺內風干后使用，或者超靜臺內過夜晾干，次日使用。或者：在60烘箱1小時干燥，或室溫18-26過夜干燥待用。

3、步驟：（1）準備24孔細胞培養板（消毒好的培養皿）（2）多聚賴氨酸PLL包被（3）培養板每孔中滴1滴培養基，然后將玻片置于液滴上，壓緊（通過表面張力的作用將玻片吸附于培養板上）（4）常規細胞消化，離心，重懸，將吹打的細胞懸液分別加到每個孔蓋玻片上，讓其貼壁生長， 可以用移液槍加樣30l于蓋玻片上（5）24孔板做完細胞爬片后，再小心用鑷子將爬片取出，細胞面朝向載玻片，用中性樹膠封片，照相。（主張用20%-50%甘油封片，中性樹膠封的不好容易“花片”）（6）PBS洗滌，以去除血清等物質。（接著做IC）細胞爬片方法與技巧爬片的準備：1、爬片可用一般的蓋玻片，也可用專用爬片；2、應用蓋玻片，可根據自己

4、的需要剪裁成合適的大小，以備置于6孔板、12孔板或24孔板；3、將剪裁好的爬片，置于濃硫酸中浸泡并過夜，第二天先用自來水沖洗20遍，再用三蒸水沖洗3遍（個人認為主要目的是沖洗干凈就可以了），放在飯盒或者培養皿（一定是玻璃的哦，要不然就）中烘干后進行高壓消毒。培養板的準備：1、 泡酸過夜2、 沖洗，烘干（1、2步驟與前大致相同）3、 放入超凈工作臺用紫外線照12小時就可以用了（在照之前可以將爬片一并放入，若細胞貼壁能力不強，可經多聚賴氨酸浸片后放入。貼壁能力強的話，就可以省略了，進行紫外線消毒）注： 此步自己的經驗是爬片可以先浸入消毒后的PBS內，緊接著放入培養板內。目的：浸過PBS的爬片依靠表面的液體，可以用培養板孔底貼和緊密，以利于細胞長到爬片上。（自己剛開始做的時候，經常就是細胞全都長在了爬片與培養板之間，爬片上細胞罕見