1、藥物含量測定方法一、巴比妥類藥物1 、 銀量法 根據巴比妥類藥物在適當的堿性溶液中，易與重金屬離子反應，并可定量的形成鹽的化學性質，可采 用銀量法進行本類藥物及其制劑的含量測定。在滴定過程中，巴比妥類藥物首先形成可溶性的一銀鹽，當被測供試品完全形成一銀鹽后，繼續用硝 酸銀滴定液滴定，稍過量的銀離子就與巴比妥類藥物形成難溶性的二銀鹽沉淀，使溶液變渾濁，以此指定 滴定終點。為了減少誤差，曾用丙酮作為介質來克服滴定過程中溫度變化的影響和改善終點的觀察，結果不能令 人滿意。中國藥典改用甲醇及3%無水碳酸鈉溶劑系統，采用銀 -玻璃電極系統電位法指示終點，使本法獲得顯著改善。測定異戊巴比妥的方法：取本品約

2、 0.2g，精密稱定，加甲醇 40ml使溶解，再加新鮮配制的 3%無水碳 酸鈉溶液15ml，照電位滴定法，用硝酸銀滴定液（0.1mol/L ）滴定，即得。每1ml硝酸銀滴定液（0.1mol/L） 相當于 22.63mg 的 C11H18N 2O 3 。2、酸堿滴定法巴比妥類藥物成弱酸性，可作為一元酸以標準堿液直接滴定。在水 -乙醇混合溶劑中的滴定：由于巴比妥類藥物在水中的溶解度較小， 生成的弱酸鹽易于水解， 影響滴定終點的觀察，故滴定時多在醇溶液或含水的醇溶液中進行。以麝香草酚酞為指示劑，滴定至淡藍色為 終點。測定方法：取本品約 0.5g，精密稱定，加乙醇 20ml溶解后，加麝香草酚酞指示劑6

3、滴，用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L ）滴定，并將測定結果用空白試驗校正，即得。每1ml氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L ）相當于 22.63mg 的 C11H18N2O3。本法操作簡便，但終點較難判斷，采用空白對照可幫助終點的確定。由于操作過程中易吸收空氣中的 二氧化碳，而使終點的淡藍色褪去，采用空白對照亦難以取得滿意的結果，因此可采用電位法指示終點。3、紫外分光光度法巴比妥類藥物在酸性介質中幾乎不電離，無明顯的紫外吸收，但在堿性介質中電離為具有紫外吸收特 征的結構，因此可采用紫外分光光度法測定其含量。本法專屬性強、靈敏度高，被廣泛用于巴比妥類藥物 及其制劑的測定，以及固體制劑的溶出度和含

4、量均勻度的檢查，也常用于體內巴比妥類藥物的檢測。直接測定的紫外分光光度法：本法是將供試品溶解后，根據供試品溶液的pH值，選用其相應的入max處，直接測定對照品溶液和供試品溶液的吸光度，在計算藥物的含量。測定方法：取裝量差異項下的內容物，混合均勻，精密稱取適量（約相當于硫噴妥鈉 0.25g ），置500ml1ml 中約1ml 中約含有1mg硫噴妥相量瓶中，加水使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取適量，用0.4%氫氧化鈉溶液并定量稀釋成每含5卩g的溶液；另取硫酸苯妥對照品，精密稱定，用0.4%氫氧化鈉溶液并定量稀釋制成每5卩g的溶液。照分光光度法，在 304nm的波長處測定吸光度。根據每支的平均裝量

5、計算。每 當于 1.091mg 的 C11H 17N 2NaS 。-3mg *平均裝量/供試品量*100%供試品中硫噴妥鈉的量按下式計算： 硫噴妥鈉（ mg）=1.091*Cs*Au/As*D*10 硫噴妥鈉標示量（ %）=硫噴妥鈉的量（二、芳酸及其酯類藥物pKa 2.98 酸性較強以 ASA 及其制劑為例 苯甲酸 pKa 4.20 水楊酸直接滴定法羧酸鄰位-OH，吸電子基團，使酸性增加；并有氫鍵，更增加了其極性，因此，可采取（一）酸堿滴定法1、直接滴定法 pKa 36 的藥物溶于中性醇 ,可直接用 NaOH 滴定 pKa 69 的藥物要用非水溶液滴定法 乙醇作用：溶解 ASA ；防止 ASA

6、 在水溶液中滴定過程易水解8中性乙醇：對指示劑(酚酞)而言為中性，可消除滴定誤差滴定方法：取本品約 0.4g,精密稱定，加中性乙醇(對酚酞指示液顯中性) 液3滴，用氫氧化鈉滴定液(C9H 804。丙磺舒(Ch.P. BP. JP等)2、水解后剩余滴定法USP23方法：取本品約冷，以酚酞為指示劑，用20ml溶解后，加酚酞指示0.1mol/L)滴定。每1ml的氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L )相當于18.02mg的苯甲酸(Ch.P等)均采用本法1.5g，精密稱定，準確加 NaOH液(0.5mol/L)50.0ml，水浴上煮沸 15min，放H2SC4液(0.25mol/L)滴定剩余的NaOH，并

7、將滴定結果用空白試驗校正。每1ml的 NaOH 液(0.5ml/L)相當于 45.04mg 的 C9H9O4COOHOCOCH 3 r Ij+2NaOHCOONaOH+ CH 3COONa + H 2O2NaOH + H2SO4A Nc2SO4 + 2H2O3、兩步滴定法用于Aspirin片測定，片劑中有穩定劑CH2COOHHO CHCOOHHOC COOHHOCH COOH水解產物 水楊酸SACH2COOH枸櫞酸Citric acid酒石酸Trataric acidHAc為了避免這些酸類的干擾，采用兩步滴定法第一步：NaOH滴定所有的酸： ASA，CA，TA，SA，HAc 第二步COONa+

8、 NaOHOCOCH3-aCOONa+ NaAc + H 2OOH2NaOH+ H2SC4A NaSQ + 2H2O(二) 雙相滴定法Ch.P 2005用于苯甲酸鈉的測定苯甲酸鈉為芳酸堿金屬鹽，易溶于水；苯甲酸不溶于水，不利于終點 的正確判斷。因此，禾U用苯甲酸能溶于有機溶劑的性質，采用雙相滴定法。滴定方法：取本品約 1.5g，精密稱定，置分液漏斗中，加水25ml、乙醚50ml及甲基橙指示液2滴,用鹽酸滴定液(0.5mol/L )滴定，邊滴邊振搖，至水層顯橙紅色；分取水層，置具塞錐形瓶中，乙醚層用 水5ml洗滌，洗液并入錐形瓶中，加乙醚20ml，繼續用鹽酸滴定液(0.5mol/L )滴定邊滴邊

9、振搖，至水層顯持續的橙紅色。每 1ml鹽酸滴定液(0.5mol/L )相當于72.06mg的C7H5NaO2。(三) 柱分配色譜-紫外分光光度法ASA capsule等制劑除用上述兩步滴定法外，最好用色譜法，可以分離酸性雜質和輔料以及穩定劑等，經分離后同時測定 ASA與SA如USP用柱分配色譜-UV測定ASA Capsule(四) HP LC阿司匹林0.1g),置 100ml 量瓶測定方法：取裝量差異項下內容物，研細，精密稱取適量(約相當于阿司匹林中，用1%冰醋酸無水甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液5ml,置100ml量瓶中,用1%冰醋酸無水甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，精密量

10、取20卩I,注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取阿司匹林對照適量，用 1淋醋酸無水甲醇溶液溶解并定量稀釋成每1mI中約含50卩g的溶液，同法測定。三、芳香胺類藥物1、亞硝酸鈉滴定法原理：H +Ar-NHCOR+H 2OAr-NH 2+RCOOH 2Ar-NH 2+NaNO 2+2HCIAr-N 2+CI-+NaCI+2H 2O條件：（1）加入適量溴化鉀加快反應（3）室溫10C30C終點指示方法：（1）永停法（2）外指示劑法（碘化鉀淀粉）2、非水溶液滴定法注：滴定前滴加醋酸汞溶液，以除去氫鹵酸的干擾鹽酸丁卡因一加醋酐以突出終點；例：鹽酸利多卡因的非水滴定反應過程：CH3（2）加入過量鹽酸 125-6

11、（4）滴定管尖端插入液面下滴定2(NHCOCH2N(C 2H 5)2 HCI +Hg(Ac)22N(C 2H 5)2 HAc +HCIOCH 3冬_ HCOCHCH 33、分光光度法 對乙酰氨基酚在 氨基酚的含量。例：對乙酰氨基酚、片劑、咀嚼片、注射液、栓劑、膠囊、顆粒劑【含量測定】取本品約40mg,精密稱定，置250mI量瓶中，加0.4%氫氧化鈉溶液50mI刻度，搖勻，精密量取 5mI，至100mI量瓶中，加0.4%氫氧化鈉溶液10mI，加水至刻度, 可見分光廣度法（藥典Chp2005版附錄W A）,在257nm的波長處測定吸光度，按數（）為715計算，即得。257nm波長處有最大吸收，中國

12、藥典2005版采用百分吸收系數（法，測定對乙酰溶解后，加水至搖勻，照紫外C8H9NO2的吸收系4、比色法芳伯氨基的重氮化-偶合反應生成有色偶氮染料，專屬性差鹽酸普魯卡因與1,2-萘醌-4-磺酸鈉溶液反應生成棕紅色化合物，適用于鹽酸普魯卡因及其制劑的常規分析5、快速熒光測定400nm、入485nm波長處測定熒光強鹽酸普魯卡因胺結構中的芳伯氨基與熒胺反應，生成熒光物，可在入 度，較重氮化法靈敏、簡便，適用于普魯卡因胺制劑的測定。6、高效液相色譜法 （HP LC ）PABA ),以苯甲酸為內標，可以同時測定鹽酸普魯卡因注射液中的普魯卡因及其降解產物對氨基苯甲酸（ 不需分離提取，準確簡便。色譜條件（色

13、譜柱、流動相、檢測器）測定方法（供試品溶液、對照品溶液的制備，進樣量，計算方法）應用示例：對乙酰氨基酚急性中毒的血藥濃度測定色譜條件：Nova-PackC18 柱(4 卩 m, 150mm x 3.9mm), Nova-PackC18 預柱 柱溫：25C，流動相為甲醇一水二極管陣列檢測器，檢測波長血漿樣品制備：取靜脈血液為待測血漿。吸取上述血漿離心(50:50)流速：0.8ml/min254nm34ml，置含肝素抗凝劑的離心管中，離心分離5min (3000rpm)，上清1ml，加飽和硫酸鋅溶液1ml，沉淀蛋白后，加入乙醚5ml渦旋混合1min ,20min(3000rpm)。精密吸取乙醚液

14、3.0ml于50 C氮氣流吹干，冷至 室溫，以蒸餾水500卩l溶解殘渣，取10卩l進樣。對照品溶液的制備：配制對乙酰氨基酚甲醇溶液( 10mg/ml),并用甲醇逐 級 稀釋成 濃度為 0.01mg/ml5mg/ml的對照品溶液，4 C冰箱存放 備用。四、苯乙胺類藥物1、非水溶液滴定法-弱堿性冰醋酸為溶劑、醋酸汞消除氫鹵酸的干擾、結晶紫為指示劑(鹽酸甲氧明的指示劑為萘酚苯甲醇， 也可電位法指示終點)、若堿性較弱則加醋酐使突躍明顯。2、溴量法 基本原理：Br/ CCH2NHCH3+3Br2 Br_AC-CH2NHCH3+3HB rOhOhHOHO BrBr2+2KI 一 2KBr+I 2l2+2N

15、a2SO3 2NaI+Na2S4O6測定方法：取本品約0.1g,精密稱定，置碘瓶中，加水20ml使溶解，精密加溴 滴定液(0.1mol/L)50ml , 再加鹽酸5ml,立即密塞，放置15分鐘并時時振搖，注意微開瓶塞，加碘化鉀試液10ml，立即密塞，振搖后，用硫代硫酸鈉滴定液 (0.1mol/L)滴定，至 近終點時，加淀粉指示液，繼續滴定至藍色消失，并將滴 定的結果用空白試驗校正。每1ml溴滴定液(0.1mol/L)相當于3.395mg的C9H13NO2 HCl。3、比色法N=NNHCH 2CH 2NH2NHCH 2CH2NH2o+CH(OH)CH 2NH(CH 3)3CH(OH)CH 2NH

16、(CH 3)3基本原理：注意：由于偶合劑(N-(1-萘基)-乙二胺)與亞硝酸也能顯色干擾測定，所以在重氮化后，應加入氨基磺酸 銨分解剩余的亞硝酸。2HNO 2+2H 2NSO 3NH4 * 2N2 (NH 4)2SO4+H2SO4+H2O4、提取酸堿滴定法原理：溶解性-鹽酸鹽或硫酸鹽可溶于水，游離堿不溶于水，溶于有機溶劑。方法：供試品溶于水或礦酸，加入適量堿性試劑使藥物游離，用適當的有機溶劑提取，將提取液蒸干，殘渣中加中性乙醇溶解，用標準酸滴定液直接滴定(或在提取液中加定量過量的標準酸滴定液，蒸去有機 溶劑后，再用標準堿滴定液回滴定)。例：硫酸苯丙胺7加水溶解7加氫氧化鈉試液8ml 7加氯化鈉

17、使飽和7乙醚多次提取7合并乙醚液7精密加硫酸滴定液(0.05mol/L ) 25ml振搖7低溫蒸去乙醚7放冷至室溫7加甲基紅指示液2滴7用氫氧化鈉(0.1mol/L )滴定。每 1ml 硫酸滴定液(0.05mol/L )相當于 18.42mg 的 C18H26N2.H2SO4。5、火光分光光度法基本原理：腎上腺素含有的鄰苯二酚結構，被弱氧化劑氧化，生成腎上腺素紅，發生轉位為N-甲基-3,5,6-三羥基吲哚(THI)。(Tri- Hydroxyl- Indole-)本法還可用于測定微量兒茶酚胺類藥物。6、高效液相色譜法高效分離，高靈敏度和高選擇性-可用于制劑常規分析，臨床藥物監測和體內藥物動力學

18、研究。例1:重酒石酸去甲腎上腺素注射液分析 色譜條件：色譜柱： ODS流動相：0.14%庚烷基磺酸鈉溶液甲醇 （65:35），用磷酸調pH至3.0 0.1，流速：1.0ml/min 檢測波長：280nm測定方法：精密量取本品適量（約相當于重酒石酸去甲腎上腺素4mg）,置25ml量瓶中，加醋酸溶液（1725）稀釋至刻度，搖勻，取 2卩l注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取重酒石酸去甲腎腺素對照品適量，精密稱定，加醋酸溶液（1725）制成每1ml中含0.16mg的溶液，同法測定。按外標法以峰面積計算，即得。7、衍生化氣相色譜法(fen flurami ne hydrochloride)H HCCN C

19、2H5 I I HOH CH3例：鹽酸芬氟拉明F3C由于結構中的仲胺基極性極強，使得氣相色譜法測定值波動較大，因此將樣品溶解后經堿化乙酸乙酯提取，加入內標，提取液用三氟乙酸酐進行酰化衍生化，將衍生化產物在5%SE-30的色譜柱上分析，用FID檢測器檢測。五、雜環類藥物1、非水溶液滴定法原理：5%醋酸汞的冰醋酸溶液，用高氯酸（O.1mol/L）滴定,一般方法：冰醋酸作為溶劑，若滴定氫鹵酸鹽，則加并用空白試驗校正。 問題討論：適用范圍：Kb 10-8的有機堿鹽酸根影響：高氯酸氫溴酸硫酸鹽酸硝酸滴定劑穩定性：溫度、貯藏條件都有影響 終點指示方法：結晶紫指示劑，電位法 應用實例：游離弱堿性藥物：地西泮

20、、尼克剎米或氯氮卓，基于氮原子的弱堿性可以結晶紫為指示劑，非水溶 液直接滴定，終點顏色綠色藍綠色藍色不等。氫鹵酸鹽類藥物：加入過量的醋酸汞冰醋酸溶液，使其形成難電離的鹵化汞，再用高氯酸滴定，可 用結晶紫、橙黃W作為指示劑，或用電位法指示終點。HS04-硫酸鹽類藥物：硫酸為二元酸，但在非水介質中只顯示一元酸解離為2、鈰量法 原理：氧化-還原 適用范圍：硝苯地平-鄰二氮菲指示劑 吩噻嗪類藥物一自身顏色的變化 oCnQ 諸n+q 仝 cxn+oIII3、比色法（1）酸性染料比色法 原理：在適當的介質中，堿性藥物 （B） 可與氫離子結合成 （BH+） ，而一些酸性染料可解離為 （In-） ，兩者定量

21、結合成有色絡合物 （BH+ In-） 離子對，可被有機溶劑定量提取，在一定波長處測定其吸收，即可算出堿性藥 物的含量。例：硫酸阿托品片的含量測定對照品溶液的制備精密稱取在120C干燥至恒重的硫酸阿托品對照品25mg，置25ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。2.5mg ），供試品溶液的制備 取本品 20片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于硫酸阿托品 置 50ml 量瓶中，加水振搖使硫酸阿托品溶解并稀釋至刻度，用干燥濾紙濾過，收集續濾液，即得。的分液漏斗中，6.0ml 使溶解，測定方法 精密量取對照品溶液與供試品溶液各2m

22、l，分別置預先精密加入氯仿10ml各加溴甲酚綠溶液 取溴甲酚綠50mg與鄰苯二甲酸氫鉀1.021g，加0.2mol/L氫氧化鈉溶液再加水稀釋至100ml，搖勻，必要時濾過2.0ml，振搖提取2min后，靜置使分層，分取澄清的氯仿液， 照分光光度法（附錄W B）,在420nm的波長處分別測定吸收度，計算，并將結果與1.027相乘，即得供試量中含有（C17H23N 03）2- H2SO4 H2O的重量。影響因素：水性最佳pH值：使得BH+和In-最多 酸性染料及其濃度：定量結合，產物溶解性好；可稍過量 有機溶劑的選擇：提取效率高，氯仿最理想 水分的影響：影響結果，脫水劑或濾紙除去水分（ 2）鈀離子

23、比色法原理：吩噻嗪類藥物的二價硫在pH2 0.1緩沖液中可與鈀離子（Pb2+）形成紅色絡合物，10min呈色完全，可穩定2hour，在500nm波長附近有最大吸收，最適宜范圍50卩g 250卩g4、 紫外分光光度法（ 1 ）直接分光光度法 對照品溶液同時測定 百分吸收系數（）例：奧沙西泮含量測定取本品約15mg，精密稱定，置 200ml量瓶中，加乙醇150ml，于溫水浴中加熱，并時時振搖，使奧 沙西泮溶解，放冷，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取 5ml ，置 100ml 量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖 勻，照分光光度法（附錄W A）,在229nm的波長處測定吸收度；另精密稱取奧沙西泮對照品約15

24、mg,同法操作并測定；計算，即得。（ 2） 萃取后分光光度法堿化，有機溶劑萃取游離型堿，使其與制劑輔料分離，再用分光光度法測定（ 3） 萃取雙波長分光光度法堿化，有機溶劑萃取，在 254nm、277nm 波長處測定吸收，用吸收度之差計算含量，以消除抗氧劑的 干擾。（ 4） 二階導數分光光度法5、 氣相色譜法 分離效能好、靈敏度高、選擇性好、用量少、分析速度快 有機堿或其鹽類均可直接 GC 分析，但鹽解離的酸對色譜柱和檢測器會損害，因此一般將生物堿鹽的 水溶液先堿化，用有機溶劑提取游離堿后再分析。6、高效液相色譜法（1）反相高效液相色譜法 用于雜環類藥物分析一般加入掃尾劑二乙胺或三乙胺 例：鹽酸

25、環丙沙星滴眼液色譜條件與系統適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑； 0.05mol/L 枸櫞酸溶液 -乙腈 （82:18）用三乙胺調節pH值至3.5為流動相；檢測波長為277nm o理論板數按鹽酸環丙沙星峰計算應不低于2000,鹽酸環丙沙星峰與相鄰雜質峰的分離度應符合規定。測定法 精密量取本品2ml（約相當于環丙沙星 6mg），置50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密 量取5ml，置50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另精密稱取在105C干燥至恒重的鹽酸環丙沙星對照品適量 （約相當于環丙沙星 20mg），置50ml量瓶中，加水適量使溶解，并稀釋至刻度， 搖勻，精密量

26、取2ml，置50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。分別取供試品溶液與對 照品溶液各10卩l注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算。（2）離子對色譜法原理：將待測組份的反離子加入流動相中，與呈離解狀態的藥物作用，生成可逆的離子對化合物。測定雜環類藥物中吡啶類、喹啉類等藥物時，主要采用烷基磺酸鹽（如戊烷磺酸鈉、庚烷磺酸鈉）或其他 鹽類。BH+C7H15SO2O- pH35 BH +C7H15SO2O-影響條件：流動相一般呈酸性，以利于生物堿的離解；離子對試劑的非極性部分越大，形成的離子對分配系數越 大，保留時間越長（十二烷基磺酸鈉庚烷磺酸鈉戊烷磺酸鈉）六、維生素類藥物 維

27、生素C1、碘量法H(CH3)H（ch3）RC = 0 + NcHSO3RC OHSOsNa2、2,6-二氯靛酚法玫瑰紅有氧化性ClN oh H_去氫 Vit C無色Cl還原型酚亞胺ClH OCl七、甾體激素類藥物1、UV 法C6H5C6H5C6H5一N+NC6H5Cl2e(H)C6H5一NH3CN NN C6H52,3,5-Tri phen yitatrazolium chloride TTCRed tatrazoli ne RT2、異煙肼法甲潛(Formazan)深紅色入max 480490nmO7INH 4-S-酮Ison icoti nicacid Hydrazide3、Kober反應比

28、色法雌激素H2SO4-乙醇.呈黃色Amax465nm共熱氣釋再加熱7紅色Amax515 nm第一步第二步加水硫酸亞鐵銨-加水1溶解+濃H2SO4 + H2O與苯匸混勻12八、抗生素類藥物1碘量法原理：青霉素與頭孢菌素本身不與碘反應，但其堿性降解產物可消耗碘 反應分兩步進行水解反應氧化-還原反應 （無定量關系，受溫度、pH值和時間等因素影響，應嚴格控制反應條件并采用標準品平行 對照測定）迪CHECOOH),4 4U 4Sir,GH3ia I4-空白試驗：因樣品中雜質會消耗碘，故應作空白試驗。I-酸f某些藥物與碘生成復鹽沉淀試驗條件：（12氧化）弱酸性（pH4.5）堿 f 12 7 IO3-+ 溫度（2426 C）,溫度 38 C時未水解的供試品亦消耗碘 反應時間： （20分鐘），20分鐘后，耗碘量隨時間的