1、 CT LogX0與循環數呈線性關系，通過已知起始拷貝數的標準 品可作出標準曲線，根據未知樣品Ct值，就可以在標準曲線上 計算出未知樣品初始模板量。 該方法的前提條件是目的基因和內參基因的擴增效率相同且都為1，在 試驗開始前必須分別對目的基因和內參基因作標準曲線，看兩者擴增效率的 差別，假如兩者擴增效率之間的差異小于0.1，就可以用該方法分析。而且 在接下來的實驗中，無需再做標準品。 該方法要求嚴格的重復，因為CT值的差異只要有很小的變化，測得的結 果就會有很大的差別。 該方法特別適合于樣品量不大，但是檢測的基因種類很多的情況。 物一般都是引物TM值為60左右，探針的TM值為70左右。 探針中

2、GC含量的差異對定量PCR反應效率的影響 1 ATGAACTACG TTGGACAGTT AGCAGGGCAA GTGTTTGTAA CTGTGAAGGA GCTCTATAAG 61 GGACTAAACC CAGCCACGCT GTCGGGATGT ATCGATATAA TTGTTGTACG TCAGCCAGAT 121 GGGAATCTTC AGTGTTCTCC ATTCCATGTA CGCTTTGGGA AAATGGGAGT TCTGCGTTCC 181 AGGGAGAAAG TGGTTGACAT AGAAATTAAT GGAGAGGCTG TAGATTTGCA CATGAAGCTA 24

3、1 GGAGACAATG GAGAAGCCTT TTTCGTCCAG GAGATGGATA ACAATCAGGA GGTAATTCCT 301 TATCATCTGT CTACGTCCCC CATCCTGTCT GAGGGAACTG CGTTAATGGA AGCTCAGCTG 361 AAGAGAAACT CAATTGACAG GATAAGAAAC CTGGACAGCA GTGTATCTTC ACAAGTACCA 421 CCCCAAGCTC ATGGATCCCA GCCTGGTACT GAAACATCTC CAGCCTGTAG CTCTGTGAAA 481 AAGAGGAGGA AAAAGAG

4、GAG GAAGTCTACC CACAAAATAG ACAGCTTAAA AAGAGAAGAC 541 ATTGGAGATA CATCAGAAGA TGAAGACATG TTTCCTATAG AGATTAGCTC AGAGGAAGAA 601 AAGGAACAAT TGGACAATTC AAGGATTCTT GTTCCAGATG TGTTTGTTGA TGAAGTATCT 661 GATATAAAGG CTCCTGCTGT TTCTGCTTAT TCTCAGTCTT CATCTTACCC TCGTTCGGAT 721 GGAGAATGGT CACCCATTCA AAGTAAGCCC ATAGATTACA CAGGGCAATC CTCTCTTCTC 定量PCR反應體系 普通PCR結果電泳圖 添加熒光基團后PCR結果電泳圖 優化后的Taqman探針體系實驗結果， 定量PCR實驗方案 定量PCR實驗方案 熒光染料法 Taqman探針法 雙標準曲線法 雙標準曲線法 定量PCR實驗方案 同一cDNA樣品的三個重復 通過定量PCR檢測，測得該陰